PREPARO DE AMOSTRAS

Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

Instituto Internacional de Cromatografia
ISSN 1984-4433

Extrao em Fase Slida: Fundamentos Tericos e

Novas Estratgias para Preparao de
Fases Slidas
Isabel Cristina Sales Fontes Jardim
Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica
13083-970 Campinas (SP)

Resumo
A extrao em fase slida (EFS), atualmente, uma das tcnicas mais utilizadas para extrao e/ou
concentrao de amostras complexas, permitindo que analitos em concentraes muito baixas sejam
detectados por mtodos como cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), cromatografia gasosa (CG)
e eletroforese capilar (EC). Este artigo tem o objetivo de discutir os fundamentos da EFS e apresentar novas
estratgias de preparo de fases slidas, desenvolvidas no
Palavras-chave
Laboratrio de Pesquisas em Cromatografia Lquida (LabCrom)
do Instituto de Qumica da Unicamp, e suas aplicaes. A fase
Extrao em fase slida, fase
slida preparada pela deposio de um polmero sobre suporte
slida ou sorvente, preparao de
de slica seguida de imobilizao usando radiao gama ou microamostra, cartuchos de extrao
ondas ou tratamento trmico. O mtodo desenvolvido uma
em fase slida preparados no
aplicao da qumica verde, uma vez que no h resduos txicos
laboratrio
aps o preparo.

Abstract
Solid phase extraction (SPE) is nowadays a much used technique for extraction and/or concentration
of complex samples, so that the analytes present in low concentration become detectable by methods such
as high-performance liquid chromatography (HPLC), gas chromatography (GC) and capillary electrophoresis (CE). This article aims to discuss the fundamental aspects of SPE and presents new strategies for preparation and application of the solid phases developed by the Laboratory for Research in Lquid
Chromatography (LabCrom) of the Institute of Chemistry of UniKeywords
camp. The solid phases are prepared by depositing a polymer on
the silica support followed by immobilization using gamma irraSolid phase extraction, solid
diation, microwave radiation or thermal treatment. The method is
phase or sorbent, sample preparaan application of green chemistry, since there are no toxic resition, lab-made solid-phase exdues after the preparation.
traction cartridges

*e-mail: icsfj@iqm.unicamp.br

13

Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

1 Introduo
Na maioria das anlises qumicas, sobretudo nas anlises de resduos, nas quais os analitos
se encontram em nvel de traos, g kg-1 a
ng kg-1,1 devido s concentraes serem muito
baixas, os analitos apresentarem propriedades qumicas distintas e a matriz ser complexa, faz-se
necessria a realizao de uma etapa prvia de
preparo de amostra. Os principais objetivos do
preparo de amostra so promover a extrao e,
muitas vezes, a concentrao dos analitos de interesse e a remoo, tanto quanto possvel, dos interferentes. Essa a etapa mais onerosa e demorada envolvida no processo analtico, consumindo
cerca de 80% do tempo total de anlise, e pode
introduzir erros, principalmente devido perda do
analito e contaminao da amostra.2-4
Se os interferentes no forem eliminados,
o resultado poder ser falso. Em se tratando de
determinaes realizadas por meio do emprego de
tcnicas cromatogrficas, como a cromatografia
gasosa (CG), cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) ou eletroforese capilar (CE), o preparo de amostra, alm de evitar que interferentes da
matriz coeluam com os compostos de interesse,
importante na remoo de interferentes para garantir a longevidade das colunas analticas ou dos
capilares e evitar limpezas constantes no sistema
de injeo.5
A escolha adequada de uma tcnica de
preparo de amostra um fator chave na obteno
de resultados confiveis e exatos, portanto as selees da tcnica e das condies experimentais
devem ser conduzidas cuidadosamente. Tal escolha depende da natureza da amostra, da matriz,
das caractersticas do analito e da tcnica analtica
que ser empregada na determinao, requerendo
praticamente um desenvolvimento caso a caso.6
Considerando a matriz, devem ser analisados o
seu estado fsico (slido, lquido ou gasoso), o
tamanho da amostra pH, os contedos de matria
orgnica, gordura, pigmentos, protenas, etc. e o
pH. Quanto ao analito, devem-se analisar as suas
propriedades fsicas, suas propriedades qumicas
(massa molar, carga, polaridade, volatilidade,
pKa), propriedades que permitam a sua deteco
(absoro UV-Vis, fluorescncia, eletroatividade)
e sua concentrao.
A escolha e a otimizao de um mtodo
adequado de preparo de amostra no so fceis,
principalmente com matrizes altamente complexas
como os fluidos biolgicos (plasma, soro, sangue
14

total, liquor, urina, etc.) ou outras matrizes naturais como alimentos, extratos de plantas e amostras provenientes do meio ambiente. Idealmente, o
mtodo de preparo de amostra deve ser to simples quanto possvel, no somente porque reduz o
tempo de anlise, mas tambm porque um nmero
grande de etapas aumenta a possibilidade de introduo de erros; seletivo, ou seja, conter o menor
nmero possvel de interferentes, proporcionando
maior detectabilidade; rpido; empregar instrumentao de baixo custo; permitir a automao;
incluir, quando necessrio, uma etapa de concentrao do analito a fim de obter uma concentrao
adequada para atingir o nvel de deteco do instrumento utilizado e consumir quantidades mnimas de reagentes e solventes, atendendo a Qumica Verde. Esse termo foi usado a primeira vez em
1991 por Anastas7 em um programa especial lanado pela Agncia de Proteo Ambiental dos
Estados Unidos (US Environmental Protection
Agency - EPA). Qumica Verde uma abordagem
s snteses, aos processamentos e aos usos de produtos qumicos que reduzem os riscos impostos
populao e ao meio ambiente como um todo.8

2 Extrao em Fase Slida: Fundamentos

Tericos
A extrao em fase slida (EFS) foi introduzida em 19769 para suprir as desvantagens apresentadas pela extrao lquido-lquido e, hoje,
consiste no mtodo mais popular de preparo de
amostra, sendo utilizada pela maioria dos cromatografistas em anlises de rotina. Possui um vasto
campo de aplicao como anlises de frmacos,
alimentos e meio ambiente e nas reas de bioqumica e de qumica orgnica. Essa tcnica foi revisada por Hennion10 e por Fontanas et al.11
As vantagens apresentadas pela EFS em
comparao com a extrao lquido-lquido clssica so: menor consumo de solvente orgnico, no
formao de emulses, facilidade de automao,
altas porcentagens de recuperao do analito, volumes reduzidos de resduos txicos, capacidade
de aumentar seletivamente a concentrao do analito e disponibilidade comercial de muitos equipamentos e sorventes para EFS.6 A EFS apresenta
como desvantagens o tempo elevado de anlise, os
altos custos dos cartuchos e dos dispositivos comerciais multivias (manifolds) e, eventualmente, a
dificuldade em selecionar o sorvente adequado pawww. s c i en ti a ch ro ma to g r ap h i c a. co m

Extrao em Fase Slida

ra a aplicao desejada. Alm disso, os cartuchos

so utilizados uma nica vez e, geralmente, h
baixa reprodutibilidade de lote para lote de cartucho.12
Os principais objetivos da EFS so a remoo de interferentes da matriz, a concentrao e
o isolamento dos analitos. O fator de concentrao
obtido pela razo entre o volume inicial de
amostra aplicado no cartucho e o volume final de
soluo concentrada. A concentrao pode ser
aumentada por um fator de 100 a 5000, tornando
possvel a anlise qualitativa e quantitativa a nvel
de traos.
As fases slidas, ou sorventes empregados
em EFS, so similares quelas utilizadas em cromatografia lquida em coluna, consequentemente,
os mecanismos de separao tambm so similares. Os principais mecanismos so: adsoro, partio (fase normal e reversa), troca inica e excluso. Esses mecanismos esto associados a processos qumicos, fsicos e mecnicos que atuam durante a separao. Dentre as principais foras qumicas e fsicas atuantes entre as molculas do analito e do sorvente, destacam-se as ligaes de hidrognio, interaes dipolo-dipolo, dipolo-dipolo
induzido, dipolo induzido-dipolo induzido e interaes inicas.5
Na maioria das aplicaes, os dispositivos
de EFS mais empregados so os cartuchos nas
formas de seringa ou barril, que sero descritos
detalhadamente na prxima seco. Outro tipo de
dispositivo o disco de extrao, nos quais as partculas ativas so imobilizadas em uma matriz
inerte e estvel de microfibras de politetrafluoretileno (PTFE) ou vidro. Um disco tpico tem 47 mm
de dimetro interno e 0,5 mm de espessura, contendo 500 mg de sorvente. Os dimetros disponveis variam de 4 a 90 mm e so definidos segundo
o volume da amostra. Os discos possuem vantagens, como ter leito mais homogneo, requisitar
presses menores durante a aplicao da amostra e
na eluio, com ausncia de caminhos preferenciais e possibilidade de utilizar vazes mais altas e
menores volumes de eluentes na remoo dos analitos. Outros formatos tm surgido recentemente
com o intuito de melhorar o desempenho da EFS,
principalmente facilitando a automao e diminuindo o tempo de anlise, o que permite reduo
de custos por anlise, maior flexibilidade, etc..
Uma dessas variaes consiste em utilizar uma
mistura de cartucho e disco. Nesse caso, o disco
colocado dentro de um cartucho de EFS, e o procedimento de anlise similar quele usado para
discos, possibilitando o uso dos dispositivos e sis-

Isabel Jardim

temas de automao empregados para cartuchos

convencionais.13 Ainda um outro formato, particularmente interessante quando anlises rpidas
so desejadas, uma vez que permite o uso de vazes bastante elevadas, o cartucho contendo uma
camada fina de partculas (as mesmas usadas em
EFS convencional).13
Os avanos mais recentes em termos da
tcnica de EFS seguem a tendncia no campo de
preparo de amostra no sentido de reduo de reagentes, solventes, quantidade de amostra e tempo
de anlise. Nesse contexto, tem-se a extrao em
fase slida miniaturizada que utiliza placas que
contm 96 reservatrios (ou mais), cada um com
uma coluna de EFS recheada com um disco ou
com uma camada fina ou fazendo uso de ponteiras
plsticas de pipetas contendo discos de EFS.13,14
As placas so de grande utilidade para a indstria
farmacutica e de biotecnologia, pois permitem a
anlise de um grande nmero de amostras simultaneamente, porm h grande facilidade de contaminao da amostra. As ponteiras de pipetas tm
como principal vantagem a dificuldade de contaminao, uma vez que so descartveis e tambm
permitem um fluxo bidirecional do solvente e dispensam o uso de dispositivo a vcuo.13
A EFS pode ser conduzida nos modos off
-line e on-line. No modo off-line, o processamento
das amostras e a separao cromatogrfica ou eletrofortica so conduzidos separadamente. Aps a
etapa de pr-tratamento, a amostra introduzida
de modo convencional no sistema cromatogrfico.
O modo off-line o mais utilizado em EFS. Atualmente, existem equipamentos comerciais para extraes mltiplas. Alguns deles fazem o processo
de extrao mecanicamente, porm a transferncia
da amostra para o injetor cromatogrfico manual , como nos sistemas manifolds (sistema mecanizado). No sistema on-line, o mesmo equipamento
incorpora os dispositivos para extrao, clean-up e
eluio da amostra e o cromatgrafo (sendo o cromatgrafo a lquido o mais comum), resultando
em uma operao sequencial e automatizada. Os
sistemas on-line so extremamente convenientes
para rotina analtica.

3 Procedimento de Extrao em Fase

Slida
A EFS uma tcnica de separao lquido
-slido extensamente usada para extrair analitos
semivolteis e no volteis de amostras lquidas,
15

Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

mas tambm pode ser usada para amostras slidas

pr-extradas com solventes.12 A EFS, na sua forma mais comum, emprega fases slidas (FS) tambm denominadas de sorventes, recheadas em cartuchos, nas formas de barril ou seringa, e os mecanismos de reteno so idnticos queles envolvidos em cromatografia lquida em coluna.5,14 Um
cartucho tpico formado por um tubo de polipropileno contendo cerca de 50 a 500 mg de sorvente,
com 40 a 60 m de tamanho de partcula, fixado
no tubo por meio de dois filtros de tamanho de
poros de 20 m. A amostra, contendo o analito de
interesse, colocada no topo do cartucho e aspirada com pequeno vcuo ou pressionada levemente
com uma seringa ou gs, de forma a penetrar no
cartucho. Contudo, no fcil controlar a vazo e
deve-se tomar cuidado para impedir que o material contido no cartucho seque antes da aplicao da
amostra, pois pode ocorrer o problema de formao de caminhos preferenciais. Em geral, a EFS
pode ser usada para trs importantes propsitos:
extrao e/ou concentrao do analito, isolamento
da matriz e estocagem da amostra. Assim, o primeiro propsito refere-se aos analitos que ficam
retidos na FS para posterior eluio, e o segundo,
aos que so eludos diretamente, enquanto as
substncias interferentes ficam retidas, sendo que,
nesse caso, tem-se o clean-up da amostra e no a
concentrao do analito.
Em geral, os procedimentos de extrao
em fase slida contm quatro etapas: 1) condicionamento do sorvente com solvente adequado para
ajustar as foras do solvente de eluio com o solvente da amostra; 2) introduo da amostra, quando ocorre a reteno do analito e s vezes de alguns interferentes; 3) limpeza da coluna para retirar os interferentes menos retidos que o analito,
etapa esta conhecida como lavagem com solvente
ou clean-up; 4) eluio do analito.5,15 O solvente
empregado no condicionamento depender do
sorvente a ser ativado e da matriz a ser processada, optando-se por um solvente com caractersticas similares ao solvente no qual a amostra est
dissolvida. O volume de amostra utilizado pode
variar de alguns L a mL. Para que se obtenha a
eficincia mxima de extrao, necessrio determinar o volume de breakthrough, VB, ou seja, o
volume mximo de amostra que deve ser processado para que se obtenha a maior recuperao
possvel do analito. A velocidade de aplicao da
amostra pode ser crtica em alguns casos, sendo
determinada pela velocidade desejada para anlise. Idealmente, essa etapa deve ser lenta, com va16

zo menor que 2 mL min-1. Na etapa de clean-up,

deve-se utilizar um solvente que tenha fora suficiente para arrastar os interferentes, porm no os
analitos. O solvente ideal o prprio solvente da
amostra, desde que ele no remova os analitos de
interesse. Geralmente, a soluo para a eluio
dos interferentes contm menos solvente orgnico,
menor concentrao salina ou encontra-se em um
pH ideal para eluio apenas dos interferentes.
Para eluir o analito de interesse, deve-se utilizar
um volume pequeno de eluente, de forma que a
soluo eluda j se encontre em concentrao
apropriada para anlise; se isso no for possvel,
utilizar um solvente voltil para eluio, de modo
que ele possa ser facilmente evaporado e o extrato
ressuspendido em um volume pequeno de fase
mvel. O eluente deve eluir os analitos de interesse, mas no permitir a eluio dos interferentes
que no tenham sido eliminados na etapa anterior,
por estarem muito retidos no sorvente. O solvente
de eluio deve ter maior fora de eluio que o
solvente usado na etapa anterior, clean-up, o que
obtido aumentando-se a quantidade de solvente
orgnico ou a concentrao salina ou ainda alterando-se o pH da soluo de eluio. Na prtica,
observa-se que, de forma anloga extrao lquido-lquido, o uso de duas alquotas do eluente, em
vez de uma nica em volume maior, aumenta a
eficincia de extrao.5 Na Figura 1, podem ser
visualizadas as principais etapas envolvidas na
EFS quando o objetivo isolar e/ou concentrar o
(s) analito(s) de interesse.

Figura 1 - Etapas da EFS no modo de concentrao ou

isolamento do(s) analito(s) de interesse.

4 Fases Slidas ou Sorventes

Em geral, os materiais usados como fase
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Extrao em Fase Slida

Isabel Jardim

empregados em CLAE. A maioria dos sorventes

disponveis comercialmente baseia-se em grupos
orgnicos, como C18, C8, C2, cicloexil, fenil,
cianopropil, aminopropil (NH2), ligados quimicamente slica.
Outros sorventes incluem as fases polimricas, como o metacrilato entrecruzado, o copolmero poliestireno divinilbenzeno, que se destaca
pela rea superficial especfica elevada (700 a
1200 m2 g-1), estabilidade na faixa de pH 1 14 e
maior capacidade de reteno de compostos polares que as fases C18. As fases slidas de carbono
grafitizado caracterizam-se como materiais com
resistncia mecnica baixa, entretanto so altamente homogneos, com rea superficial especfica baixa (100 200 m2 g-1), possuem estrutura
cristalina e tm capacidade de atuar em EFS como
fases reversas, com retenes superiores s obtidas com fases C18. Os sorventes de modo misto
contm em sua estrutura tanto cadeias alquilas
(fase reversa) como ligantes trocadores inicos.
Essas fases slidas realizam, em uma nica etapa,
a extrao e o clean-up de matrizes biolgicas. Os
analitos ionizados sofrem uma interao forte com
os stios inicos, possibilitando que a etapa de
limpeza seja eficiente e sem grandes perdas. Em
um segundo momento, troca-se o solvente, com
um pH que permita o rompimento das interaes
inicas entre o analito e o sorvente. Como fases
mais seletivas, tm-se os imunossorventes, as fases de polmeros impressos molecularmente, conhecidos como MIP, e as fases de acesso restrito
(RAM). Os imunossorventes baseiam-se nas reaes especficas entre antgeno e anticorpo, em
um suporte slido, como agarose ou slica, usando
o mesmo princpio da cromatografia por afinida-

de. Os MIP so obtidos por meio da preparao de

polmeros com stios de reconhecimento sintticos
e tm uma seletividade pr-determinada para um
ou mais analitos. Tais stios de reconhecimento
so obtidos pelo arranjo de monmeros funcionais
polimerizveis ao redor das molculas do analito.
Dessa forma, so formados complexos, por meio
da interao molecular, entre o analito e o monmero precursor. Os complexos so fixados por
meio de reaes de entrecruzamento de polmeros.
A remoo do analito da matriz polimrica forma
lacunas (stios de reconhecimento) que iro exibir
afinidade pelo analito. O potencial desse tipo de
material alto por oferecer resistncia mecnica
temperatura e presso e por ser inerte em condies extremas de cidos, bases, ons metlicos e
solventes orgnicos.15
Os sorventes base de slica apresentam
como desvantagem o fato de serem instveis no
intervalo 8 < pH < 2 e tambm por conterem os
grupos silanis residuais que podem reter irreversivelmente compostos bsicos.12
A seleo da fase slida em EFS segue, na
maioria das vezes, as mesmas regras utilizadas
para a escolha da fase estacionria em CLAE. O
primeiro critrio a ser considerado refere-se estrutura qumica do analito, s propriedades do sorvente e composio da matriz da amostra. Isso
definir o mecanismo a ser empregado e, consequentemente, ajudar na seleo da fase slida.
Uma fase slida com seletividade tima, ou seja,
com capacidade de discriminar entre o analito e os
outros componentes, encontrada analisando os
grupos funcionais do analito que no esto presentes na matriz da amostra e em outros interferentes.
A Tabela 1 apresenta um guia geral para escolha

Tabela 1 - Guia geral para seleo de fase slida e eluente, empregando amostras orgnicas contendo analitos com
massas molares inferiores a aproximadamente 2000 daltons.16
Mecanismo

Sorvente

Tipo de Analito

Tipo de Matriz

apolar (fase reversa)

partio e adsoro

C18, C8, C2, cicloexil,

fenil, cianopropil, polimrico

grupos funcionais
apolares como
alquilas e aromticos

solues polares
(tampo aquoso)

Slica, diol, ciano,

aminopropil, diamino

grupos funcionais polares como aminas e

hidroxilas

solventes apolares,
leos

solventes apolares
como hexano e diclorometano

troca catinica

forte (cido sulfnico)

ou fraco (cido carboxlico)

aquosa, fora inica

baixa

tampo como acetato,

citrato e fosfato

troca aninica

forte (tetra alquilamnio) ou fraco (amino)

grupos funcionais carregados positivamente

como aminas
grupos funcionais carregados negativamente
como cidos orgnicos

aquosa, fora inica

baixa

tampo como fosfato e

acetato

polar
(fase normal) partio
e
adsoro

Eluente do Analito
solventes polares
como metanol, acetonitrila e gua com
pH ajustado

17

Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

de uma fase slida apropriada para analitos orgnicos com massas molares inferiores a aproximadamente 2000 daltons. 16
Para facilitar essa seleo, na Figura 216
encontra-se um esquema geral da seleo das fases slidas e solventes para eluio de amostras
contendo analitos com massas molares inferiores a
2000 daltons, para evitar efeitos de excluso que
possam bloquear os poros das fases slidas. Os
solventes recomendados para eluio devem ser
considerados como uma primeira aproximao. A
aplicabilidade de outros solventes ou misturas de
solventes determinada pela polaridade requerida
para a separao. Inicialmente, as amostras so
divididas em dois grandes grupos: as solveis em
gua e as solveis em solvente orgnico. As
amostras solveis em gua so primeiramente divididas em inicas e no inicas. As amostras no
inicas solveis em gua so classificadas de
acordo com a sua polaridade: apolar, moderadamente polar e polar. No caso de analitos apolares
a escolha inicial de uma fase slida recai nas fases
reversas como C18, C8, C4, C2, cicloexil, fenil,
cianopropil, e o solvente de eluio do analito deve apresentar caractersticas mais polares que a
fase slida, como acetonitrila, lcoois, diclorometano, etc.. Para analitos moderadamente polares, a
fase slida inicialmente escolhida deve ser polar,
como a slica, e o solvente de eluio do analito
deve ser menos polar, clorofrmio, diclorometano,
acetato de etila, lcoois e gua. Em se tratando de
analitos polares, a fase slida selecionada ser do
tipo fase normal, em que a FS mais polar que o
solvente de eluio, como cianopropil, diol, aminopropil, diaminopropil e o solvente de eluio do
analito menos polar, como clorofrmio, diclorometano, etc..5 As amostras inicas solveis em
gua so classificadas em catinicas e aninicas.
Os analitos carregados positivamente so extrados em FS trocadores catinicos fortes (cido sulfnico) ou fracos (cido carboxlico). Os analitos
carregados negativamente so extrados em FS
trocadores aninicos fortes (tetra alquilamnio) ou
fracos (amino). Os solventes de eluio para troca
inica so, geralmente, solues cidas, alcalinas
ou tampo.
Os analitos solveis em solvente orgnico
tambm so classificados de acordo com a sua
polaridade e seguem os mesmos critrios usados
na seleo da FS para amostras solveis em solventes aquosos.5

18

5 Desenvolvimento de Novas Fases Slidas

ou Sorventes
A maioria das fases slidas empregadas
do tipo C18, quimicamente ligado, preparado a
partir da reao da slica com um reagente organossilano que ser responsvel pelas caractersticas da fase slida. Apesar das inmeras vantagens
que a consolidaram mundialmente na preparao
de fases estacionrias quimicamente ligadas para
CLAE e tambm como fase slida para EFS, esse
tipo de reao apresenta desvantagens com relao
ao custo dos reagentes organoclorossilanos, ao
procedimento trabalhoso de sntese que envolve
grandes quantidades de solventes txicos, atmosfera inerte, temperatura elevada e tempo longo de
sntese.
Algumas alternativas promissoras para
preparao de sorventes para EFS tm sido estudadas no meu grupo de pesquisa, baseadas no sucesso e na experincia adquirida em mais de uma
dcada, no Laboratrio de Pesquisas em Cromatografia Lquida (LabCrom) do Instituto de Qumica
da Unicamp, na preparao de fases estacionrias
para CLAE, que consistem na soro de polissiloxanos sobre slica. A descrio detalhada das
fases estacionrias para CLAE pode ser encontrada nas revises publicadas por Faria et al.17,18 e
Collins et al.19
Nos estudos realizados por Jardim e colaboradores20-30, visando novas estratgias na preparao de sorventes, a reao qumica foi substituda pela deposio de um polmero sobre suporte
de slica seguido de imobilizao por radiao
gama, micro-ondas ou tratamento trmico.
A preparao da fase slida lab-made
consiste na ativao do suporte de slica irregular,
de tamanho de partculas de 0,040-0,063 mm (200
-400 mesh) e tamanho de poro de 10 nm, em estufa sob temperaturas de 120 a 140 oC por 12 a 24 h.
Uma quantidade adequada de slica e de polmero
so suspendidos separadamente em solventes como n-pentano, clorofrmio ou diclorometano, dependendo da solubilidade do polmero, na proporo de 12 mL de solvente para 1 g de FS. A suspenso de slica adicionada de polmero, lentamente, e essa mistura permanece sob agitao por
3h temperatura ambiente, a fim de que o polmero se distribua uniformemente sobre o suporte.
Aps essa etapa, o solvente evaporado lentamente exausto, temperatura ambiente.
Aps o preparo, o polmero imobilizado
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Extrao em Fase Slida

Isabel Jardim

Figura 2 Guia para seleo de fases slidas e solventes de eluio de analitos com massas molares inferiores a 2000
daltons.16

19

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por meio de radiao gama, tratamento trmico ou

radiao micro-ondas para aumentar a estabilidade
do polmero sobre o suporte, em doses ou temperaturas e tempos pr-determinados.
Os materiais imobilizados so submetidos
ao processo de extrao com solventes, a fim de
eliminar o polmero que no tenha ficado aderido
ao suporte cromatogrfico. Para confeco dos
cartuchos, 500 mg da FS preparada so colocadas
em seringas de polipropileno de 5 mL e so retidos por dois filtros de polietileno de porosidade de
20 m. As etapas de EFS, condicionamento, aplicao da amostra, clean up e eluio do analito
so realizadas usando um manifold a vcuo de 12
vias, com solventes apropriados.
As FS so caracterizadas por termogravimetria, espectroscopia de absoro na regio do
infravermelho e anlise de teor de carbono. O desempenho da FS avaliado por meio da extrao
de amostras, gua Milli-Q e outras, fortificadas
com padres de agrotxicos ou de hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA). Para avaliar a
eficincia da extrao, calculam-se a porcentagem
de recuperao (R) e a estimativa de desviopadro relativo (CV). Na Tabela 2, encontra-se
um resumo das caractersticas e aplicaes de to-

das as fases lab-made preparadas no LabCrom.

6 Consideraes Finais
A EFS continua sendo o mtodo mais
popular empregado em anlises de rotina para extrair e concentrar vrios analitos presentes em
amostras complexas.
O procedimento de deposio de um polmero sobre suporte de slica seguido de imobilizao por radiao gama, tratamento trmico ou
radiao micro-ondas consiste em uma estratgia
promissora para preparao de novos sorventes
para EFS em substituio aos materiais quimicamente ligados, uma vez que simples, demanda
poucas etapas, utiliza reagentes menos txicos e
disponveis comercialmente, reprodutvel, seu
custo final significativamente menor que os
cartuchos adquiridos comercialmente e, em comum com outros procedimentos de EFS, reduzem
os resduos txicos gerados.

Tabela 2 Caractersticas e aplicaes das fases slidas lab-made preparadas no LabCrom

PMODS poli (metiloctadecilsiloxano)
PMS poli(metilsiloxano) PMOS poli(metiloctilsiloxano)
PMTDS poli(metiltetradecilsiloxano)
PDMFS poli (dimetilsiloxano-co-metilfenilsiloxano) PMTFS poli(metil-3,3,3-trifluorpropilsiloxano) F=vazo

FS/polmero Imobilizao

C18/
PMODS

20

irradiao gama (60 e 80

kGy)

Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS

12

Recuperaco

Aplicao

CV (%)

Referncia

< 16

Queiroz et
al.20

(%)

Cond.: 10 mL
de MeOH + 3 determinao
mL de H2O por CLAE dos
agrotxicos
Milli-Q
benomil, tebutiurom, simazina, atrazina,
diurom e
ametrina em
Eluio: 1
mL de MeOH gua Milli-Q
fortificada

73 - 103

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Isabel Jardim

Tabela 2 (continuao)
FS/polmero Imobilizao

Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS
Cond.: 10 mL
de MeOH + 5
mL de H2O
Milli-Q

C18/
PMODS

tratamento
trmico-TT
(120 oC por 4
h)

15

Lavagem: 5
mL de H2O

Aplicao

Recuperaco

CV (%)

Referncia

< 1,8

Pozzebon et
al.21

< 1,2

Maltez et
al. 22

(%)

determinao
por CLAE dos
agrotxicos
diurom e linurom em urina

85 - 103

Eluio: 3
mL de
CH2Cl2

C18/
PMODS

tratamento
trmico (120
o
C por 4 h)

NH2 /PMS
aminopropil

C18/PMODS

15

NH2 - 12

tratamento
trmico (120
o
C por 4 h)

C18 - 15

98,7 (amostra
de gua de
lago)
concentrao de
Pb em gua de
lago e em
amostras biolgicas usando
colunas de enEluio: etariquecimento
nol F= 1,0
em sistema de
mL/min
97,9
injeo em
(amostras
fluxo e determibiolgicas)
nao por
espectroscopia
de absoro
atmica

NH2

NH2

NH2

Cond.: 2 mL
de CH2Cl2

(55 - 143)

(1,4 - 19)

C18

C18

(8,0 - 103)

(0 - 27)

Eluio: 2 x 3
mL
determinao
CH2CI2:MeOH por CLAE dos
95:5,v/v
agrotxicos
benomil, tebuC18
tiurom, simazina, atrazina,
Cond.: 5 mL diurom e amede MeOH + 5 trina em uva
mL de H2O
Milli-Q

Melo et al.
23

Eluio: 10
mL de
CH2Cl2
21

Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

Tabela 2 (continuao)
FS/polmero Imobilizao

Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS

NH2 PMS
aminopropil

Idem ref.23

14 (TT)

tratamento
trmico (120 C
C8/PMOS por 4 h) ou radiao gama (60
e 80 kGy)

18 (60 kGy)

17 ( 80
kGy)

tratamento
C8/PMOS trmico (120 C
por 8 h)

14

CV (%)

Referncia

(%)

NH2

C18/PMODS idntico ref.23

22

Recuperaco

Aplicao

Cond.: 2 mL determinao
de CH2Cl2 por CLAE dos
agrotxicos
Eluio: 2 x 3 benomil, tebumL
tiurom, simaziCH2CI2:MeOH na, atrazina,
99:1,v/v
diurom e ametrina em tomaC18 (Idem
tes
ref.23)

NH2

NH2

(45 - 99)

(7,6 - 36)

Melo et al. 25

C18

C18

(6,0 - 70)

(7,3 - 52)

Cond.: 10 mL
88-120 (TT)
de MeOH + 3
82-115 (60 5-13 (TT)
mL de H2O
determinao
kGy)
Milli-Q
por CLAE dos
agrotxicos
Eluio: 2 x benomil, tebu85- 114 (80 0-16 (60
0,5 mL de tiurom, simaziQueiroz et
kGy)
kGy)
MeOH
na, atrazina,
al.26
diurom e ametrina em gua
0-13 (80
Milli-Q fortifikGy)
cada

Cond.: 3 mL
de acetato de
etila + 3 mL
de H2O MilliQ + 3 mL de
H2O Milli-Q
pH 2,5

determinao
por CLAE dos
agrotxicos
imazetapir, nicosulfurom,
diurom, linurom, clorimurom-etil em
Eluio: 5
mL ACN + 2 gua Milli-Q
mL acetato de fortificada
etila

72 - 111

< 15

Vigna et
al.27

www. s c i en ti a ch ro ma to g r ap h i c a. co m

Extrao em Fase Slida

Isabel Jardim

Tabela 2 (continuao)
FS/polmero Imobilizao

C14/
PMTDS

Fenil/
PDMFS

tratamento
trmico (110 C

Porcentagem de Procedimento
Carbono da FS(%)
de EFS

8,3

por 13 h)

tratamento
trmico (150 C
por 4,5 h)

tratamento
trmico (220
C por 12 h) ou
Fluorado/
radiao micro
PMTFS
-ondas (1000
W, 150 C por
30 min)

7,7

Aplicao

Cond.: 3 mL
de acetato de
etila + 3 mL determinao
de H2O deio- por CLAE dos
agrotxicos
nizada + 3
mL de H2O imazetapir, imazaquim, metsulpH 3,0
furom-metil,
bentazona,
Famostra > 5
clorimurommL/min
etil, tebuconazol em gua
Eluio: 5 x 1 superficiais
mL acetato de
etila
Cond.: 2 x 6
mL de hexano + 6 mL de
MeOH + 6
mL H2O deionizada
determinao
por CLAE dos
Famostra > 10 hidrocarbonetos
policclicos
mL/min
aromticos
(HPA), antraceno,fenantreno,
fluoranteno,
Eluio: 2 x 3 pireno em gua
mL acetato de Milli-Q fortifietila + 3 mL
cada
de hexano + 2
x 3 mL acetato de etila

Recuperaco

CV (%)

Referncia

74 - 99

< 10

Faria et al.28

59 - 75

1,4 - 16,9

Marques et
al.29

(%)

Cond.: 5 mL
de CH2CI2 +
5 mL de H2O
deionizada Determinao
por CLAE dos
agrotxicos
simazina, fluFamostra = 8
mL/min dioxonil, fenari- 96,2 - 100,5
mol e diflubenzurom em gua
Eluio: 5 x 1 Milli-Q fortificada
mL CH2CI2 +
5 x 1 mL
MeOH

Bodemeier
et al.30

23

Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

Entre as tcnicas de imobilizao empregadas, a trmica considerada mais simples

que a radiao gama devido facilidade
de obteno do equipamento (estufa), que comum em todos os laboratrios, seguido da radiao por micro-ondas. Os cartuchos confeccionados apresentam bom desempenho, fornecendo
porcentagens de recuperao e coeficiente de variao geralmente dentro do intervalo citado na
literatura, que de 70-120% e CV 20%, respectivamente31 e permitem a concentrao dos analitos, agrotxicos e HPA, de forma que eles alcancem os limites mximos de resduos estabelecidos pelas agncias reguladoras. Alm disso, as
FS preparadas so bastante seletivas, podendo ser
aplicadas em diversos tipos de amostra, como ambientais, fluidos biolgicos, alimentos, frmacos e
produtos naturais.

Rodriguez-Delgado, A. Cifuentes. J. Chromatogr.

A, 1153, 214 (2007).
7. P.T. Anastas. Crit. Rev. Anal. Chem. 29, 167
(1999).
8. M. Tobiszewski, A. Mechlinska, B. Zygmunt, J.
Namiesnik. Trends Anal. Chem., 28, 943 (2009).
9. K.Yoshimura, H.Waki, S. Ohashi. Talanta, 23, 449
(1976).
10. M.C. Hennion. J. Chromatogr. A, 856, 3 (1999).
11. N. Fontanals, R.M. Marce, F. Borrull. Trends Anal.
Chem., 24, 394 (2005).
12. L. Novkov, H. Vlckov. Anal. Chim. Acta, 656, 8
(2009).
13. F.M. Lanas. Sci. Chromatogr., 0, 17 (2008).
14. T. Hytylinen. LCGC, 12, 6 (2009).

7 Agradecimentos

15. S.C.N. Queiroz, C.H. Collins, I.C.S.F. Jardim.

Quim. Nova, 24, no 1, 68 (2001).

A todos os alunos que contriburam para o

desenvolvimento das novas fases slidas.
FAPESP e ao CNPq pelo suporte financeiro.
Liane Maldaner, Milena P. Segato, Rafael T.
Marques e Carol H. Collins pelas discusses e
sugestes.

16. Guide to Sample Preparation. Supplement to

LCGC. Outubro de 2008.

Referncias Bibliogrficas
1. H.F. DeBrabander, H. Noppe, K. Verheyden, J.V.
Bussche, K. Wille, L. Okerman, L. Vanhaecke, W.
Reybroeck, S. Ooghe, S. Croubels. J. Chromatogr.
A, 1216, 7964 (2009).
2. A. Hercegov, M. Dmtrov, E. Matisov. J.
Chromatogr. A, 1153, 54 (2007).
3. Y. Chen, Z. Guo, X. Wang, C. Qiu. J. Chromatogr.
A, 1184, 191 (2008).
4. O.D. Prestes, C.A. Friggi, M.B. Adaime, R. Zanella. Quim. Nova, 32, no 6, 1620 (2009).
5. F.M. Lanas. Extrao em Fase Slida (SPE). Rima, So Carlos (2004).

17. A.M. Faria, C. H. Collins, I.C.S.F. Jardim, J. Braz.

Chem. Soc., 20, no 8, 1385 (2009).
18. A.M. Faria, I.C.S.F. Jardim; K. E. Collins, C. H.
Collins. J. Sep. Sci., 29, 782 (2006).
19. C.H. Collins, C. R. Silva, A.M. Faria, A. M.; K.E.
Collins, I.C.S.F. Jardim. J. Braz. Chem. Soc., 20,
604 (2009).
20. S.C.N. Queiroz, L.F.C. Melo, I.C.S.F. Jardim. J.
Chromatogr. A, 948, 171 (2002).
21. J.M. Pozzebon, S.C.N. Queiroz, L.F.C. Melo, M.A.
Kapor, I.C.S.F. Jardim. J. Chromatogr. A, 987, 381
(2003).
22. H.F. Maltez, L.F.C. Melo, S.C.N. Queiroz, I.C.S.F.
Jardim, A.J. Curtius, E. Carasek. Microchim. Acta,
144, 17 (2004).
23. L.F.C. Melo, C.H. Collins, I.C.S.F. Jardim. J. Chromatogr. A, 1032, 51 (2004).
24. I.C.S.F. Jardim, K.E. Collins, C.H. Collins.
Microchem. J., 77, 191 (2004).

6. J. Hernndez-Borges, T.M. BorgesMiguel, M..

24

www. s c i en ti a ch ro ma to g r ap h i c a. co m

Extrao em Fase Slida

25. L.F.C. Melo, C.H. Collins, I.C.S.F. Jardim. J. Chromatogr. A, 1073, 75 (2005).
26. S.C.N. Queiroz, L.F.C. Melo, I.C.S.F. Jardim.
Quim. Nova, 29, no 4, 637 (2006).
27. C.R.M. Vigna, L.S.R. Morais, C.H. Collins,
I.C.S.F. Jardim. J. Chromatogr. A, 1114, 211 (2006).
28. A.M. Faria, L. Maldaner, C.C. Santana, I.C.S.F.
Jardim, C.H. Collins. Anal. Chim. Acta, 582, 34 (2007).
29. R.T. Marques, L. Maldaner, I.C.S.F. Jardim,
Preparao de cartuchos recheados com sorvente do
tipo fenil para extrao em fase slida de hidrocarbonetos policclicos aromticos. Trabalho apresentado
no 15o Encontro Nacional de Qumica Analtica e 3o
Congresso Iberoamericano de Qumica Analtica,

Isabel Jardim
(2009).
30. A.P. Bodemeier, L. Maldaner, I.C.S.F. Jardim, Influncia da carga do polmero fluorado no preparo de
cartuchos para extrao em fase slida. Trabalho
apresentado no 15o Encontro Nacional de Qumica
Analtica e 3o Congresso Iberoamericano de Qumica
Analtica, (2009).
31. Comission of the European Communities
(SANCO), 2003, Document n SANCO/2007/3131.
Method Validation and Quality Control Procedures for
Pesticide Residues Analysis in Food and Feed, Bruxelas, Blgica, 2007, http://ec.europa.eu/food/plant/
protection/resources/qualcontrol_en.pdf, acessado em
jan/2010.

25