Instituto Tecnolgico

Superior del Sur del Estado

de Yucatn

Materia:

Microbiologa
Docente:

MC. Damaris Ortegn Rivero.

Contenido: Informe Tcnico:

Diferentes tcnicas de tincin

para microorganismos
Carrera:

Ingeniera Bioqumica

Semestre y grupo:

Alumna:

Matricula:

6 AV

Melina Guadalupe Ruiz Dzul.

121T0020

NDICE
Pgina

Introduccin ................................................................................................... 3

Tincin Simple

Tincin Diferencial

Tincin de Gram...........................................................................4
Tincin de cido-Alcohol resistencia............................................ 6

Tincin Especial

Tincin negativa para cpsulas...................................................7

Tincin para endosporas..............................................................8
Tincin para flagelos....................................................................9

Conclusin.............................................................................................9
Fuentes de informacin........................................................................10

INTRODUCCIN
El imperceptible tamao de las bacterias y otros microorganismos
as como la dificultad para observarlas en detalle con el microscopio
ptico por causa de la falta de contraste que existe entre estos, debido a
que son usualmente transparentes en el medio que les rodea; hizo que
se crearan mtodos para poder apreciarlas, siendo uno de los mtodos
ms sencillos el de fijacin y tincin.
El trmino tincin significa dar color a los microorganismos con un
colorante que muestre ciertas estructuras. Sin embargo, antes de teir a
los microorganismos hay que fijarlos al portaobjetos, esto les provoca la
muerte, aunque preserva diversas partes del microbio en su estado
natural. En general es necesario que las clulas se unan (fijen) al
portaobjetos antes de la tincin. El mtodo ms frecuente es fijacin al
calor.
Al fijar una muestra se extiende una capa delgada del material que
contiene los microorganismos sobre la superficie del portaobjetos, dicha
capa es conocida como extendido, la cual se deja al aire para secar. En
la mayor parte de procedimientos de tincin el portaobjetos se fija
pasndolo varias veces a la llama de un mechero Bunsen cubriendo el
lado del extendido con alcohol metlico durante un minuto. El colorante
se aplica, se lava con agua y se seca con papel absorbente.
Los colorantes son sales con un ion coloreado. Pueden ser catinicos o
aninicos. Cuando el in coloreado es el catin se denominan colorantes
bsicos o catinicos. Tien estructuras que poseen cargas negativas; en
este grupo se incluyen la mayora de los colorantes ms comunes (azul
de metileno, cristal violeta, safranina, fuchina, etc.). Cuando el ion
coloreado es el anin se denominan colorantes cidos o aninicos (por
ejemplo la eosina). Tien estructuras cargadas positivamente. Algunos
colorantes (como la tinta china) no poseen carga y suelen utilizarse para
realizar tinciones negativas como la observacin de cpsulas.
En este trabajo conoceremos las diferentes tcnicas de tincin para ms
adelante poder aplicarlas en un laboratorio y obtener mejor vista de los
microbios o microorganismos para saber los grupos en los que estn
clasificadas las bacterias.

Tincin simple
Es una solucin acuosa o alcohlica, utiliza un solo colorante el cual es
bsico. El colorante se aplica al extendido fijado durante un tiempo y
luego se lava, seguidamente el portaobjetos se seca y se examina.
En algunas ocasiones se agrega una sustancia qumica a la solucin,
este aditivo es llamado mordiente, la funcin de este, es aumentar la
cercana de una muestra biolgica por un colorante, otra es cubrir una
estructura para darle mayor volumen y facilitar la observacin despus
del teido.
Las tinciones ms utilizadas en un laboratorio son el azul de metileno, la
carbolfucsina, el cristal violeta y la safranina.
Este tipo de tincin proporciona informacin sobre la forma, agrupacin
y tamao celular.

Tincin diferencial
Este tipo de tincin reacciona de manera diferente con las distintas
clases de bacterias, utiliza ms de un colorante y permite separar y
establecer una distincin entre ellas de acuerdo a su comportamiento
tintorial.

Tincin de Gram
Esta tincin fue desarrollada por el bacterilogo dans Hans
Christian Gram en 1884. Es uno de los procedimientos de tincin
ms tiles porque permite clasificar las bacterias en dos grandes
grupos: grampositivas y gramnegativas. En este procedimiento:
El colorante y el yodo se combinan en el citoplasma de cada
bacteria y lo colorean de violeta obscuro o prpura. Las bacterias
que conservan este color despus de haberles agregado el alcohol
para decolorarlas se clasifican como grampositivas; las bacterias
que pierden el color violeta oscuro despus de la decoloracin se
clasifican como gramnegativas. Como puede observarse en la
siguiente figura:

(a) Procedimiento de la Tincin de Gram.

En sntesis, las clulas grampositivas

retienen el colorante y permanecen de color
violeta. Las clulas gramnegativas no
retienen el colorante; son incoloras hasta
que se les tie con un colorante de contraste
rojo.

(b) Microfotografa de
las bacterias teidas con
Gram. Los bacilos y los
cocos (de color violeta)
son grampositivos y los
vibriones
(de
color
rosado)
son
gramnegativos.

La coloracin de una bacteria mediante la tincin de Gram puede

proporcionar informacin valiosa para el tratamiento de ciertas
enfermedades. Las bacterias grampositivas suelen ser destruidas
con facilidad por las penicilinas y las cefalosporinas. Las bacterias
gramnegativas por lo general son ms resistentes porque los
antibiticos no pueden atravesar la capa de lipopolisacrido. La
resistencia a estos antibiticos entre las bacterias grampositivas y
gramnegativas se debe a la inactivacin bacteriana de los
antibiticos.

cido-alcohol resistencia

Esta tincin diferencial (que diferencia bacterias en grupos

distintivos), se fija de modo firme slo a las bacterias que poseen
ceras en las paredes de sus clulas.
En el procedimiento de esta tincin se aplica el colorante rojo
carbolfucsina a un extendido fijado y se calienta suavemente el
portaobjetos durante varios minutos. (El calentamiento aumenta la
penetracin y la retencin del colorante). Luego se enfra el
portaobjetos y se lava con agua. Seguidamente el extendido se
trata con cido-alcohol, un decolorante que elimina el color rojo de
las bacterias que no son cido-alcohol resistentes.
Los microorganismos cido-alcohol resistentes retiene el color rojo
porque la carbolfucsina es ms soluble en los lpidos de la pared
celular que en los cido-alcohol resistentes. Como se muestra en
la figura:

Bacterias
cidoalcohol
resistentes.
Las
bacterias del gnero
Mycobacterium
especie leprae que
infectaron este tejido
se tieron de rojo
con una tincin de
cido-alcohol
resistencia.
Las
clulas que no son
cido-alcohol
resistentes se tien
con el colorante de
contraste azul de
metileno.

Este tipo de tincin se utiliza para identificar

a todas las bacterias del gnero Mycobacterium, que comprende
dos patgenos importantes: Mycobacterium tuberculosis, el
agente causal de la tuberculosis, y Mycobacterium leprae, el
agente causal de la lepra. Esta tincin tambin se utiliza para
identificar las cepas patgenas del gnero Nocardia.

Tincin especial

Este tipo de tincin se utiliza para teir selectivamente ciertas

estructuras o formas celulares de los microorganismos, como
endosporas y flagelos, y para detectar la presencia de cpsulas.

Tincin negativa para cpsulas

Es la ms difcil de otros tipos de procedimiento de tincin porque
los materiales
capsulares son hidrosolubles y pueden
desprenderse o eliminarse durante los lavados rigurosos. Para
demostrar la presencia de cpsulas el microbilogo puede mezclar
las bacterias en una solucin que contenga una suspensin
coloidal fina de partculas coloreadas (por lo general tinta china o
nigrosina) que proporcione un fondo que contraste y luego teir
las bacterias con un colorante simple, como la safranina. Como se
muestra en la figura siguiente:

(a) La tincin de la
cpsula proporciona un
fondo que contrasta de
modo que las cpsulas
de
estas
bacterias
(Klebsiella pneumoniae)
se ven como reas
claras alrededor de las
clulas teidas

En microbiologa mdica la demostracin de la presencia de una

cpsula es un medio para determinar la virulencia del
microorganismo, es decir el grado hasta el cual un patgeno
puede causar enfermedad.

Tincin para endosporas

Una endospora es una estructura especial, resistente y latente que

se forma dentro de una clula y que protege a una bacteria de las
condiciones ambientales adversas.
Las endosporas no se tien con los mtodos comunes, como la
tincin simple y la tincin de Gram, porque estos colorantes no
atraviesan sus paredes.
La ms utilizada para este fin es la tincin de Schaeffer-Fulton para
endosporas. Se aplica el colorante primario verde de malaquita a
un extendido fijado con calor y se calienta hasta la emisin e
vapores durante alrededor de cinco minutos. El calor ayuda a que
el colorante atraviese la pared de la endospora, luego se lava el
preparado con agua durante cerca de treinta segundos para
eliminar el verde de malaquita e todas las partes de las clulas
salvo las endosporas. Despus se aplica sobre el extendido
safranina, un colorante de contraste, para teir la por porciones de
las clulas distintas de las endosporas.
En un extendido preparado de modo adecuado las endosporas
aparecen verdes dentro de las clulas rojas o rosadas.

(b) Con la tincin para endosporas de Schaeffer-Fulton las

endosporas se visualizan como valos verdes en estas
clulas bastoniformes de Bacillus cereus.

Tincin para flagelos

Los flagelos bacterianos son estructuras de locomocin demasiado
pequeas para ser vistas en un microscopio ptico sin tincin.
Para este tipo de tincin, hay un procedimiento tedioso y delicado
que se basa en el empleo de un mordiente y el colorante
carbolfucsina para aumentar los dimetros de los flagelos hasta
que se tornen visibles con el microscopio ptico.
Como ayuda diagnstica adicional los microbilogos utilizan la
cantidad y la disposicin de los flagelos.

(c) Los flagelos aparecen como extensiones ondulantes de los

extremos de estas clulas de la bacteria Spirillum volutans. En
relacin con el cuerpo de la clula, los flagelos son mucho ms
gruesos que lo normal debido a la acumulacin de capas
colorantes por el tratamiento de la muestra con un mordiente.

Conclusin
Las tinciones utilizadas en el laboratorio de microbiologa permiten el
diagnstico oportuno y sugerente de los agentes infecciosos, por lo que
juegan un papel importante en la decisin del tratamiento inicial de las
enfermedades infecciosas. Se debe practicar la tincin adecuada de
acuerdo con el agente infeccioso en sospecha y el tipo de muestra
clnica. Las tinciones son herramientas elementales, vigentes y de uso
universal que contribuyen al diagnstico microbiolgico.

Fuentes de Informacin

Tortora, G. J., Funke, B. R. y Case, C. L. 2007. Introduccin a la

Microbiologa, 9 Ed. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires.
Argentina.
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biot
ecnologia/practico4.pdf
http://acuanatura.galeon.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecni
casdetincion.pdf
http://webs.uvigo.es/mmegias/descargas/tecnicas-tincion.pdf
http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/tinciones#