Anlisis Instrumental

Introduccin a la
cromatografa

Marisela Garca
Angeles Peralta

Introduccin a la Cromatografa

CROMATOGRAFA
La cromatografa describe un procedimiento qumico en el que se separa una
mezcla en su sus componentes individuales mediante una fase mvil y una fase
estacionaria. La fase estacionaria consta, segn el procedimiento, de materia
slida o un lquido, y la fase mvil de un lquido o gas. Los procedimientos ms
importantes son la cromatografa en papel, cromatografa en capa fina, la
cromatografa en columna, la cromatografa de gases y cromatografa de lquidos
entre otras. Las aplicaciones prcticas de la cromatografa se encuentran en la
produccin, donde se usa la cromatografa para la limpieza y aislamiento de
sustancias. Por otro lado, en la analtica qumica se usa la cromatografa para
separar mezclas y su posterior identificacin y cuantificacin. La cromatografa
juega un papel importante en muchos sectores, como la qumica orgnica, la
bioqumica, la qumica inorgnica, la qumica ambiental, la qumica alimenticia, la
farmacutica entre otras.
El anlisis instrumental nos proporciona las herramientas para obtener informacin
cualitativa y cuantitativa de una muestra, para una identificacin, control, seleccin
e investigacin de procesos. Tambin permite adquirir los conocimientos bsicos
de los mtodos de separacin previos para el anlisis, estos conocimientos son
elementales para cualquier profesionista de la qumica.
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de
especies qumicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La
cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los
componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y
otra mvil.

CLASIFICACIN
Por la naturaleza de sus fases:
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Si la fase mvil es un gas se llama cromatografa de gases, si la fase mvil es un
lquido se llama cromatografa de lquidos. Con respecto a la fase estacionaria,
si es un slido se llama cromatografa de adsorcin y se es un lquido
cromatografa de particin.
Cromatografa de particin
La separacin se basa en la distinta solubilidad de las sustancias en dos fases
diferentes. Esta diferencia de solubilidad se expresa mediante coeficientes de
reparto. El soporte slido por lo general es gel de slice, sobre cuya superficie
se ha anclado una fase lquida con la incorporacin de una cadena
hidrocarbonada larga, mediante la transformacin de los grupos silanol (Si-OH)
de la gel de slice en grupos siloxano (Si-O-Si-R), lo que proporciona una fase
lquida estacionaria trmicamente estable y difcil de hidrolizar en condiciones
normales. La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los
componentes de la mezcla en las fases estacionaria y mvil. Puede ser de dos
tipos:

Cromatografa de particin lquido-lquido: La fase fija es la fase acuosa

sujeta en un slido y la fase mvil es un solvente lquido (CLL).

Cromatografa de particin gas-lquido: la fase fija es un lquido orgnico no
voltil sujeta a un slido y la mvil un gas inerte (CGL)

Cromatografa de adsorcin
En ella las propiedades responsables de la separacin son las fuerzas de
adsorcin. Si una mezcla de sustancias disuelta en una fase se pone en
contacto con otra fase, las sustancias se concentrarn ms o menos en la
superficie de la otra fase; esto se llama adsorcin. El grado de adsorcin vara
segn la naturaleza y superficie especfica de los adsorbentes y naturaleza de
los solutos. La fase estacionaria es un slido polar capaz de adsorber a los
componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar. Segn las
fases que intervienen puede ser:

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Cromatografa de adsorcin gas-slido: la fase fija es un slido y la

mvil, un gas (CGS).

Cromatografa de adsorcin lquido-slido: la fase fija es un slido y la
mvil, un lquido (CLS).

Parmetros cromatogrficos

1. Tiempo muerto
Tiempo desde la inyeccin hasta el mximo del pico de un compuesto que
no se retiene en la fase estacionaria de la columna

2. Tiempo de retencin

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Tiempo de retencin

t r , de un componente es el tiempo que transcurre

desde la inyeccin de un compuesto que se retiene en la columna hasta

que ese componente llega al detector.
3. Tiempo de retencin corregido.
Es la diferencia entre el tiempo que tarda un soluto en atravesar toda la
columna y el que emplea un disolvente no retenido, el tiempo que tarda el
compuesto retenido en la fase estacionaria de la columna.
t r =t rt m

4. Factor de capacidad.
Para cada pico de un cromatograma se define el factor de capacidad, k,
como:
k =

t r t m
tm

Mide la solubilidad del compuesto en la fase estacionaria de la columna.

Cuanto ms tiempo permanece un componente en la columna, mayor es su
factor de capacidad.
5. Numero de platos tericos.
Nmero de equilibrios de la muestra entre la fase mvil y la fase
estacionaria. Mide la eficiencia, a mayor nmero de platos tericos mayor
eficiencia.

N=

16 t 2r
t 2r
=

w2

( )

Donde t es el tiempo de retencin del pico y w es la anchura en la base.

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6. Altura equivalente de cada plato terico.

H=

L
N

7. Selectividad o retencin relativa.

Si hay dos componentes, 1 y 2, la retencin relativa, , es el cociente de
sus tiempos de retencin corregidos:

t r 2
t r 1

Donde

t r 2> t r 1

y por lo tanto

1. Cuanto mayor es la retencin

relativa mayor es la separacin entre los dos componentes.

8. Factor de asimetra (T o As)
As=

La forma adecuada del pico es una forma gaussiana para una mejor
separacin como se muestra en la siguiente figura

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Anlisis Cualitativo y cuantitativo por cromatografa Anlisis

Cualitativo
La nica informacin cualitativa que pueden ofrecer estos sistemas es el tiempo
de retencin del analito, el cual, solo puede ser usada controlando bien las
condiciones cromatogrficas como: flujo, temperatura, tipo de fase estacionaria en
el caso de gases o composicin qumica de la fase mvil adems de las otras
variables mencionadas anteriormente para el caso de cromatografa de liquida,
adems de que se debe tener conocimiento de los posibles compuestos de la
muestra y una amplia variedad de patrones para realizar comparaciones. Sin
embargo, se puede dar el caso que dos compuestos tengan el mismo tiempo de
retencin, lo que imposibilita su identificacin. Por supuesto que, a partir de
cromatogramas obtenidos con diferentes fases mviles (para cromatografa
liquida) y estacionarias y a diversas temperaturas de elusin (para cromatografa
gaseosa), se puede obtener datos adicionales.

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