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MICROBIOLOGA Y BIOTECNOLOGA
TEMA 6.
BIOTECNOLOGA
CONOCIMIENTOS MNIMOS
BIOTECNOLOGA. Concepto y aplicaciones (vase ingeniera gentica en el apartado 3)
BIOTECNOLOGA APLICADA A LA INDUSTRIA ALIMENTARIA
Fermentacin lctica para la elaboracin de derivados lcteos (queso, yogur, cuajada, etc.)
o
Microorganismos que la llevan a cabo (Ej. Bacterias de los gneros Lactobacillus y Streptococcus,
entre otras.
Balance global de estos procesos (productos iniciales y finales) BIOTECNOLOGA APLICADA A LA INDUSTRIA
FARMACUTICA
Produccin de antibiticos.
o
Ejemplos de especies de bacterias (Streptomyces) y de hongos implicados Penicillium)etc.
o
Produccin industrial de vacunas y sueros y su importancia para disminuir la incidencia de
enfermedades infecciosas.
o
Produccin de otras sustancias:
ADN recombinante
Clonacin acelular
Industria farmacolgica
Industria alimentaria
Clonacin en plantas
Plantas transgnicas
Clonacin en animales
Animales transgnicos
APLICACIONES MDICAS
Vacunas y anticuerpos
BIOTICA
MAPA CONCEPTUAL
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BIOTECNOLOGA
La Biotecnologa es una disciplina que engloba conocimientos de microbiologa, bioqumica, gentica
molecular, ingeniera industrial, inmunologa, farmacologa, ciencias medioambientales e informtica.
Estos
conocimientos se aplican para transformar una sustancia en un producto de inters. Esta transformacin se
realiza por la accin de un ser vivo.
La Biotecnologa manipula y modifica microorganismos o clulas obtenidas de animales y plantas en el
mbito de las industrias que manejan organismos y de los servicios (medicina, derecho) Por tanto, no se incluyen
actividades que manipulen animales o plantas enteras, aunque stas son necesarias posteriormente.
Con la aplicacin de la Biotecnologa no slo se persigue la obtencin de alimentos elaborados. Tambin se
consiguen medicamentos, mejora de especies vegetales y animales, regeneracin de medio ambiente daado e,
incluso, protenas humanas que ayudan a paliar enfermedades como anemia, enanismo o diabetes. La consecucin
de estos logros se est llevando a cabo gracias a la aparicin de las tcnicas de ingeniera gentica que permiten
variar los genes de los seres vivos.
LA INGENIERA GENTICA
Desde siempre, los humanos han intentado mejorar la produccin de un alimento, tanto por la calidad como
por la cantidad. Por ello, se han seleccionado razas o variedades de distintas especies. Estos individuos se han
cruzado de forma inducida con el fin obtener buenos resultados.
Los espectaculares avances conseguidos actualmente en este proceso de seleccin se deben en gran parte
a la capacidad tecnolgica para poder modificar el ADN de los seres vivos.
La Gentica molecular ha sido la pieza central de los estudios de Biologa desde que James Watson y
Francis Crick dieron a conocer la estructura del ADN. A partir de 1970 se desarrolla un conjunto de tcnicas que se
denomina (*) Ingeniera gentica y que consiste en manipular el ADN, obtener fragmentos del mismo,
secuenciarlos e identificar los genes del genoma de un individuo, modificar su secuencia e, incluso, introducir
nuevos genes en el genoma de un ser vivo, obteniendo con ello una nueva variedad biolgica con nuevas
caractersticas.
Como vemos, la ingeniera gentica es una tcnica que introduce genes en el ADN de un individuo que
no los tiene. Para llevar a cabo el proceso, se utiliza enzimas de restriccin quecortanel ADN en puntos
concretos. Cuando se mezclan los ADNs el resultado se conoce como ADN recombinante. Algunas de
las tcnicas que pueden utilizarse son:
Aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo en otro: ADN
recombinante.
Conocer el orden o secuencia de los nucletidos de un gen:
Secuenciacin del ADN.
Aumentar el nmero de copias de un fragmento de ADN que se
quiere estudiar: Reaccin en cadena de polimerasa (PCR)
La ingeniera gentica, conocida tambin como manipulacin gentica, surge en los aos 70 (siglo
XX) cuando se consigue introducir material gentico de una especie en clulas de otra especie muy distinta.
4
En la naturaleza se produce una transferencia de material gentico entre bacterias, fenmeno
llamado transformacin.
La transferencia de forma artificial se realiza mediante la tcnica del ADN recombinante.
CONCEPTO DE CLONACIN
(*) El proceso de clonacin est encaminado a la obtencin de un clon. Un clon es un conjunto
de elementos genticamente iguales. Todos los elementos del clon son iguales entre s e iguales al elemento
precursor. La palabra clon tambin se utiliza para denominar a cada uno de los elementos genticamente
iguales. Cada uno es un clon de los otros, es decir, son clnicos entre s. Los elementos del clon pueden ser
molculas, clulas u organismos completos.
Hay que entender que la clonacin es un proceso natural, ya que, por ejemplo, las clulas somticas
pertenecientes a un mismo tejido son clulas clnicas. Incluso, los hermanos gemelos univitelinos son un
clon.
El proceso de clonacin es importante en Biotecnologa, (*) debido a la capacidad que ofrece para multiplicar
molculas de ADN o ARN, clulas e, incluso, individuos completos. As, podemos distinguir distintos tipos de
clonacin, atendiendo a la finalidad perseguida:
Clonacin de clulas
No hay que confundirla con la clonacin celular. En este proceso se pueden clonar
clulas aisladas o tejidos u rganos. Puede utilizarse para terapias gnicas, por ejemplo, en enfermos
diabticos.
Clonacin de
organismos
completos,
tanto plantas
como
animales
Se
suele utilizar en
procesos
de
mejora gentica
de especies.
ADN RECOMBINANTE O
CLONACIN CELULAR
La tcnica del
ADN recombinante se
utiliza en estudios sobre
la regulacin de la
expresin gnica, en la
regulacin
de
la
produccin comercial de
sntesis
de protenas
como la insulina o la
hormona
del
crecimiento,
en
el
desarrollo
de
organismos transgnicos
y en la amplificacin del
ADN,
es
decir,
en
obtener un gran nmero
de copias de un gen
determinado. En este
ltimo caso, existe una
tcnica
mejor,
denominada
con
las
siglas PCR.
(*) La tcnica
permite
obtener
fragmentos
de
ADN
pequeos y manejables,
con un gen o genes que
se desee, en cantidades
ilimitadas. Se introduce
el
gen
o
material
seleccionado en el interior de un vector
ste,
su
vez,
dentro
de
una
clula,
denominada
clula
Preparar cortes de ADN cortados en pequeos fragmentos por enzimas de restriccin y obtener clones de
ellos
Preparacin de un vector de clonacin
Formacin del ADN recombinante
Introduccin del ADN recombinante en una clula anfitriona
Propagacin del cultivo
Deteccin y seleccin de clones recombinantes
1.
6
(*) Las enzimas de restriccin son enzimas muy especficas, que reconocen una
secuencia corta de ADN duplex rompiendo las dos hebras en los "sitios de reconocimiento" o de
restriccin.
(*) Reconocen secuencias palindrmicas del ADN (=Se leen igual en sentido 5 3 en las
dos hebras) y las cortan por un lugar determinado. Por ejemplo, la enzima EcoRI de la bacteria
Escherichia coli reconoce la secuencia GAATTC en las dos hebras y rompe entre G y A. Como las dos
cadenas se han roto en el mismo punto, los extremos que quedan a cada lado del corte son
complementarios (segmentos cohesivos o pegajosos) Estos segmentos pueden unirse a otros
segmentos de ADN de otro organismo (cortados por la misma enzima de restriccin), ya que se
adhieren a fragmentos de ADN con secuencias de bases complementarias.
Algunas de estas enzimas tambin pueden cortar dejando extremos romos.
La transformacin de bacterias con ADN extrao se produce en muy pocas clulas (baja eficacia)
en condiciones de laboratorio. Por ello, se emplean vectores genticos que funcionan como taxistas
que transportan a un cliente: el ADN recombinante. El vector es el portador de la secuencia de ADN que
se desea clonar. Un vector debe presentar las siguientes caractersticas:
Una pequea secuencia de ADN fcil de aislar, como, por ejemplo, un plsmido (=Fragmento
extra de ADN bicatenario circular, que existe en algunas especies de bacterias)
Una vez que el ADN ha sido introducido en el vector se denomina ADN inserto, o simplemente,
inserto.
Los tipos de vectores que se utilizan suelen ser plsmidos, virus, cromosomas creados de forma
artificial y quimeras (=molcula creada en el laboratorio, formada por combinacin de ADN de un
plsmido y ADN de un virus bacterifago)
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Fig. Enzimas de restriccin
(*) Para la clonacin (replicacin del ADN recombinante) se necesita la maquinaria celular. Por ello,
hay que introducir el ADN recombinante en una clula anfitriona (=o clula receptora, o clula
hospedadora) Clula en la que se introduce un vector que contiene el ADN inserto.
Los tipos de clulas anfitrionas son:
Clulas bacterianas: son las ms utilizadas, ya que tienen una alta velocidad de replicacin,
un bajo coste de mantenimiento de las colonias y son fcilmente manipulables. En ellas, se
realiza la introduccin del vector por:
o
o
Clulas eucariotas: aunque las clulas eucariotas son, en general, difciles de mantener
se usan levaduras y clulas tumorales:
o
Levaduras: se utilizan en procesos relacionados con la investigacin de la expresin
y la regulacin gnica y la sntesis de protenas eucariotas.
o Clulas tumorales: apropiadas en procesos de clonacin, ya que la velocidad
de replicacin es muy alta y se mantienen los caracteres sin producirse cambios,
pues son muy estables.
(*) Los mtodos para la introduccin del ADN recombinante facilitan la entrada de grandes
fragmentos de ADN, puesto que la membrana celular es selectiva y no permite la penetracin de
grandes molculas.
5.
En los procesos de clonacin se utiliza un gran nmero de clulas. Al final del proceso se
hace necesario separar las clulas que contienen ADN recombinante de las que no lo contienen.
La deteccin y la seleccin de colonias se realizan en los medios de cultivo. En los procesos
de clonacin se obtienen clulas anfitrionas que no han incluido el vector y clulas recombinantes (=
que han incluido el vector con el ADN para recombinar)
Los mtodos para detectar y seleccionar
son:
(*) Mtodo de hibridacin: se utiliza una sonda marcada (= Hebra sencilla de ARN o ADN que
buscar al gen determinado o a una secuencia de bases complementaria de la que se busca, a la
que previamente se la ha marcado con istopos radioactivos) que hibrida con el ADN
recombinante o con el ARN mensajero que se transcribe a partir de l.
Mtodo inmunolgico: se detecta la protena codificada en el ADN recombinante mediante
anticuerpos especficos.
Mtodos genticos: Los vectores de clonacin deben llevar genes llamados marcadores, que
sirven para identificar las clulas que contienen dicho vector. Puede ser:
o
Secuencia reconocida
Fragmentos de restriccin
EcoR1
(Escherichia coli)
...G-A-A-T-T-C...
...G-T-T-A-A-G...
A-A-T-T-C...
G... G...
...C-T-T-A-A
SELECCIN DE TRANSFORMANTES
(*) La multiplicacin de las clulas que contienen el ADN recombinante (ADNr), ya sea en
un plsmido o en un csmido, o en su propio ADN (si se us un virus vector), produce una
clonacin de ste, es decir, la produccin de mltiples copias idnticas de ADNr que lleva el gen
extrao, una copia en cada clula. Pero cada clon de clulas tendr un fragmento de ADN extrao
distinto. Al conjunto de estas copias de ADNr diferentes se denomina biblioteca genmica. Lo que se
tiene que hacer ahora es seleccionar el clon de clulas (=colonia crecida en agar) en cuyo interior
est contenido el fragmento de ADN con el gen que interesa. Esto se consigue mediante la
obtencin de una molcula de ADN complementario (ADNc) a partir de su propio ARNm
procedente del gen extrao que se ha expresado.
DETERMINACIN DE LA SECUENCIA DE NUCLETIDOS
Otra tcnica de la ingeniera gentica es la de determinar la secuencia de nucletidos de un
ADN:
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La tcnica de la secuenciacin
Consiste en la sntesis de ADN mediante la ADN polimerasa, a partir de la unin con el
primer o cebador. La diferencia con una sntesis de ADN normal es que adems de los
nuclesidos trifosfato normales (dNTP) se aaden una pequea cantidad de unos
didesoxinucletidos trifosfato (ddNTP).
Estos ddNTP son molculas que parecen
nucletidos normales excepto por carecer de un grupo hidroxilo (-OH) en posicin 3'. Se
aaden a una cadena de ADN en crecimiento, pero finalizan o interrumpen la sntesis de ADN
porque no se pueden aadir ms nucletidos para ampliar la cadena debido a esa carencia.
En la reaccin se mezcla la cadena sencilla del ADN que se quiere secuenciar junto
con el primer o cebador, la ADN polimerasa, los nuclesidos normales y una pequea cantidad
de uno de estos ddNTP marcados (con istopos o colorantes fluorescentes) La sntesis de ADN
se inicia con el cebador y finaliza cuando se incorpora un ddNTP en lugar de un dNTP normal. El
resultado es una serie de fragmentos de longitudes diferentes. Se producen cuatro reacciones,
cada una de ellas con un ddNTP diferente:
La reaccin con ddATP produce fragmentos con A terminal. La reaccin con
ddCTP produce fragmentos con C terminal. La reaccin con ddGTP produce
fragmentos con G terminal. La reaccin con ddTTP produce fragmentos con T
terminal.
Los fragmentos se someten a electroforesis (= Separacin de molculas en una
disolucin en presencia de un campo elctrico en gel de agarosa, para separar unos
fragmentos de otros segn su tamao. Los fragmentos ms pequeos, presentan un
desplazamiento ms veloz y dan lugar a bandas ms desplazadas.
La tcnica es conocida como de Sanger o del didesoxi.
Es necesario preparar cuatro reacciones de secuenciacin, cada una con un didesoxinucletido
distinto. Los fragmentos que resultan se separan por tamao mediante electroforesis, se
autorradiografan dichos fragmentos de ADN, los cuales segn su longitud se situarn en distintos sitios
en una placa de gel y de ah se deduce la secuencia de nucletidos.
Fig. Tcnica de Sanger
LA CLONACIN ACELULAR. PCR
La clonacin acelular o amplificacin del ADN es un tipo de clonacin de molculas de ADN o ARN sin
la intervencin de
una clula.
Mediante esta
tcnica se
amplifica un gen o
fragmento de ADN,
es decir, que se
produce un gran
nmero de copias.
Tambin puede
realizarse una
amplificacin de
ARN utilizando un
ADN
complementario de
ARN. Para este
proceso se
necesita la accin
de la enzima transcriptasa inversa.
La amplificacin se hace por la tcnica de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa o PCR
(Polimerase Chaine Reaction) Las aplicaciones de esta tcnica son, por ejemplo, la clonacin de ADN, la
bsqueda de mutaciones, el diagnstico de enfermedades, estudios evolutivos, resolucin de problemas
forenses, etc.
El mtodo es sencillo, fiable y rpido. Para que se produzca la amplificacin, en la mezcla de
reaccin deben encontrarse los siguientes componentes (*):
Fragmento de ADN que se desea amplificar. Puede provenir de distintos rganos, o de
extracto de tejidos, o de sangre, o de mezcla de distintos fragmentos de ADN, etc.
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Los cuatro tipos de desoxirribonucletidos.
Dos oligonucletidos de cadena sencilla que actuarn como cebadores.
Una ADN-polimerasa termoestable, ya que debe actuar a altas temperaturas (unos 75 C) y
debe mantener su estructura estable a temperaturas de 95 C.
La amplificacin dura unas dos horas y es un proceso cclico ( entre 20 y 40 ciclos) Cada ciclo
dura entre un minuto y medio y cinco minutos. Cuantos ms ciclos se realicen, ms se amplificar el ADN.
Cada ciclo consta de tres etapas que son (*):
a)
b)
c)
Desnaturalizacin: consiste en separar las dos hebras de ADN. Para ello, esta etapa se realiza a
una temperatura superior a la temperatura de fusin (=valor de temperatura a la que el ADN
tiene separadas sus hebras un 50%) Es una fase corta que dura unos segundos.
Hibridacin, o templado: se induce a un enfriamiento brusco de la mezcla, lo que genera la unin
de los cebadores con las hebras de ADN. Esta fase dura segundos.
Replicacin, o elongacin, o polimerizacin: es la fase en la que el ADN se amplifica. Dura entre
uno y tres segundos, a una temperatura de unos 75 C. La replicacin de esa secuencia
se realiza en sentido 5' 3'. Termina cuando lee toda la hebra molde, o hasta que empieza el
siguiente ciclo.
SECUENCIACIN
La tcnica de la clonacin de ADN ha permitido obtener gran cantidad de este cido nucleido
para que pueda realizarse su secuenciacin y conocer la composicin qumica de cada gen, conocimiento
que se considera de incalculable valor. Esto ha posibilitado la obtencin de secuencias de genomas
completos (son cada vez ms los organismos y virus que son secuenciados, incluida la especie humana)
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(*) Los organismos transgnicos estn genticamente modificados, pero con genes
pertenecientes a otros organismos muy distintos a ellos (distinta especie) Por ejemplo, un organismo
genticamente modificado podra ser una rata con genes de otra rata. Un organismo transgnico
sera una merluza modificada con genes de un salmn.
Los organismos genticamente
animal y vegetal, ya que acortan los
seleccin de individuos. Tambin, se ha
organismos que, de otro modo no se
incorporacin de ADN de otra especie.
Las aplicaciones de los organismos genticamente modificados son muy variadas. Se pueden
destacar las siguientes:
En investigacin: para el estudio de la expresin de genes y la creacin de genotecas.
En medicina: para la obtencin de frmacos o protenas cuya sntesis es difcil conseguir
"in vitro". Tambin, para la obtencin de tejidos u rganos, o la reparacin de anomalas
genticas
en humanos.
En agricultura y ganadera: para la mejora (no de forma tradicional) de plantas y animales.
En la industria alimentaria: para la mejora de procesos biotecnolgicos de elaboracin de
alimentos (pan, vino, cerveza, yogur, etc.) y para la creacin de alimentos nuevos.
La creacin y utilizacin de organismos genticamente modificados tiene muchas trabas legales,
debido al rechazo social existente. Los alimentos manufacturados a partir de este tipo de organismos
slo se aceptan para el consumo humano si no queda protena o ADN del organismo
genticamente modificado. Si esto no se cumple, debe ponerlo en la etiqueta. Por ejemplo, en la
fabricacin del pan utilizamos levadura. Cando el pan se cuece la levadura queda destruida. Esa levadura
destruida puede ser natural o genticamente modificada, pero nunca lo sabremos.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE LOS MICROORGANISMOS
Existen en la naturaleza unos centenares de especies de microorganismos(bacterias, levaduras,
mohos, algas unicelulares) que producen sustancias que presentan algn inters para la especie
humana. Los productos que tienen un inters comercial se pueden agrupar en tres clases (*):
a)
b)
c)
Fg. Algunos de los principales productos industriales obtenidos con la ayuda de los
microorganismos
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LA BIOTECNOLOGA EN LA AGRICULTURA Y LA GANADERA
Desde que el hombre reuni rebaos y sembr vegetales para su alimentacin ha estado
buscando los mejores animales y vegetales para su produccin. Ha cruzado individuos con distintas
caractersticas para intentar crear descendientes mejores que sus antecesores. Sin embargo, estos
cruzamientos no aseguran un resultado positivo. Mediante la Biotecnologa se pueden (*) seleccionar
genes concretos e introducirlos en una clula, obteniendo un organismo nuevo al que llamamos
organismo genticamente modificado, que poseer las caractersticas que le hemos insertado.
Agricultura
En agricultura estas tcnicas pueden constituir toda una revolucin, ya que las clulas vegetales son
fcilmente manipulables. Los genes seleccionados se introducen en la clula vegetal mediante
microinyeccin o biobalstica: Se trata de disparar bolitas de oro que llevan fragmentos de ADN
adheridos, con una especie de pistola, sobre una poblacin de clulas. Las bolitas que queden en el
citoplasma pueden transferir el ADN que transportan a algn cromosoma de la clula bombardeada. Se
induce la divisin celular y, en poco tiempo, podemos tener un nuevo plantn, un organismo
genticamente modificado. Con este sistema se han obtenido interesantes variedades, como por ejemplo:
Transgnicos de maz:
o
Variedad resistente a las heladas.
o
Variedad resistente al taladro del maz: se ha introducido el gen de una toxina
bacteriana que provoca la muerte en la larva de la especie de insecto que provoca el
taladro del maz.
o
Variedad resistente a herbicidas.
Transgnicos de la patata: se aaden genes de amaranta a la patata, con lo que sta puede
formar protenas ricas en aminocidos esenciales. As aumenta el valor nutritivo de la patata.
Transgnicos de arroz: se aade un gen precursor del beta-caroteno para obtener vitamina A.
Con estas variedades y con otras muchas podran combatirse casos de hambruna endmica en
distintas zonas del Planeta.
Las aplicaciones agrcolas van desde el mejoramiento de procesos bsicos como la fotosntesis y la
fijacin de nitrgeno atmosfrico por parte de las plantas, hasta la resistencia a herbicidas, agentes
patgenos y factores de estrs (salinidad del suelo, sequa, etc.), as como la obtencin de productos
agrcolas de mejor calidad y caractersticas nuevas.
Produccin de insecticidas biolgicos
Para la resistencia a los insectos se utilizan cepas que producen, por ejemplo, toxinas
dainas para sus larvas, de modo que no pueden desarrollarse sobre las plantas tansgnicas con dicho
gen.
Ganadera
(*) La creacin de animales transgnicos es un proceso ms complicado que con vegetales. Las
clulas animales no son totipotentes (=Clulas embrionarias cuando an tienen capacidad para
desarrollarse en cualquier tipo de clula, en condiciones adecuadas) Los mejores resultados se
han obtenido con peces, como el salmn, la carpa y la lubina. A individuos de estas especies se les ha
aadido el gen de la hormona del crecimiento, lo que produce un aumento de tamao del pez en
muy poco tiempo. En el salmn se ha introducido otro gen, "el anticongelante". As puede ser criado en
aguas muy fras.
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BIOTECNOLOGA Y MEDICINA
Medicina
Hasta pocas recientes, los medicamentos han sido extrados de vegetales mediante tcnicas y
procedimientos que han servido de base de trabajo para la industria farmacutica. Con esta antigua
biotecnologa se identific gran cantidad de extractos vegetales que permitan paliar distintas dolencias.
Desde que Fleming, en 1929, descubri la penicilina, se han utilizado muchos microorganismos,
aparte de Penicillium notatum. Las cepas de microorganismos productores se han ido seleccionando y,
en la actualidad, pueden crearse nuevas cepas, gracias a la Ingeniera Gentica. No slo se producen
antibiticos, tambin vacunas, medicamentos, etc.
La clonacin ha permitido avances muy importantes en el campo de la Medicina. Estos
avances se han producido en la prevencin y el diagnstico de enfermedades, identificando genes
mutados que provocan diversas enfermedades. Tambin se ha avanzado mucho en el tratamiento de
enfermedades.
La prevencin y el diagnstico se corresponden con la investigacin clnica, siendo necesario
tcnicas de clonacin y creacin de sondas de ADN. El tratamiento requiere, en muchas ocasiones, la
creacin de organismos genticamente modificados.
En la industria farmacutica
La industria farmacutica invierte gran cantidad de recursos en la obtencin de bacterias,
levaduras o mohos genticamente modificados, capaces de producir antibiticos u otro tipo de
molculas.
(*) En 1978 se consigui introducir en la bacteria Escherichia coli el gen que codifica para la
sntesis de la insulina. Esta bacteria produce insulina humana, comercializada con el nombre de
Humulina. Al administrarse al paciente diabtico no provoca problemas de rechazo, tal y como ocurra
anteriormente con la inyeccin de insulina animal.
(*) En 1985 se introdujo, tambin en la bacteria Escherichia coli, el gen que produce la
hormona del crecimiento (somatotropina)
(*) En 1952 se describieron y distinguieron los dos tipos de hemofilia: la de tipo A o clsica, y la
de tipo B o enfermedad de Christmas que se producen, respectivamente, al faltar los factores VIII y IX de
coagulacin. Al principio el tratamiento de dichas enfermedades se bas en las transfusiones de sangre o
plasma. Posteriormente, se utilizaron los factores antihemoflicos purificados a partir del plasma humano,
y hoy da se utilizan los factores recombinantes obtenidos por ingeniera gentica en clulas
modificadas de mamfero.
En otros trabajos se han creado vacas u ovejas genticamente modificadas, que producen
enzimas humanas (granjas farmacuticas)
Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen en la actualidad por ingeniera gentica.
Tambin se utilizan organismos genticamente modificados para obtener tejidos compatibles
con
los humanos. Estos tejidos animales son utilizados en los xenotrasplantes.
(*) Los ltimos avances de estas tcnicas corresponden a la terapia gnica. Desde 1990 se han
desarrollado tcnicas de modificacin gentica, trabajando con las clulas de los propios pacientes. Estas
terapias son individualizadas. Se puede reemplazar, sustituir, inhibir o introducir un gen, dependiendo de
cada paciente.
La insercin gnica consiste en introducir una copia del gen normal para que sustituya al
gen mutante no activo, del enfermo.
Con la ciruga gnica se extrae el gen defectuoso o se repara.
15
Que
Que
Que
Que
16
BIOTECNOLOGA E INDUSTRIA ALIMENTARIA
(*) Una de las industrias que ms recursos invierten en Biotecnologa es la industria alimentaria.
Mediante Biotecnologa se elaboran alimentos, aditivos, colorantes, vitaminas, etc. Todo ello se produce
por la accin de microorganismos sobre una materia prima. Los microorganismos ms utilizados son las
levaduras y las bacterias. Las levaduras ms frecuentes pertenecen a los gneros Saccharomyces,
Candida, etc. Y las bacterias ms representativas son de los gneros Lactobacillus, Streptococcus,
Lactococcus y Acetobacter. Todos los microorganismos utilizados pertenecen a cepas industriales.
ALCOHLICA
MICROORGANISMO
SUSTRATO
Levadur
as
(Saccharomyce
s)
Almidn,
glucosa
Bacteri
as
Lactosa
(glucosa+g
alactosa)
LCTICA
(Streptococcus
y
Lactobacillu
PRODUCTOS
FINALES
Etanol y CO2
cido lctico
ALIMENTO
OBTENIDO
Pan, vino,
cerveza,
etc.
Yogur,
queso, etc.
BALANCE
ENERGTI
2 ATPs
por
molcula
de
glucosa
2 ATPs
por
molcula
de
glucosa
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La contaminacin del medio ambiente se produce de forma natural, por emisiones de gases o
slidos de los volcanes. La actividad vital de los organismos del planeta tambin supone la emisin
de gases (CO2) o sustancias lquidas o slidas que se acumulan en el medio que les rodea. (*)
Un contaminante es una sustancia producida y eliminada a la naturaleza, como resultado de la
actividad humana, y que tiene efectos nocivos o sobre los organismos vivos.
(*) Hay dos grandes grupos de contaminantes:
a)
b)
Los que son biodegradables, como las aguas residuales, que pueden reconvertirse en
productos no nocivos con un tratamiento adecuado.
Y los no biodegradables, como son los metales pesados (p.ej. el plomo, utilizados en
diferentes industrias, El DDT y otros productos como los pesticidas, etc., que se van acumulando
en el medio ambiente y pueden pasar a la cadena alimentaria.
Otros contaminante son el ruido, el calor o los residuos radioactivos.
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Depuracin
de aguas residuales
Las aguas residuales generadas en las poblaciones urbanas deben regresar al medio
ambiente, ya sea a travs del cauce de un ro, un lago o el mar. Estas aguas no deben provocar una
contaminacin en estos ecosistemas. Por ello, el agua residual se trata en plantas de depuracin de agua
para rebajar la cantidad de contaminantes.
El sistema para la depuracin del agua se divide en varias fases:
El agua que sale de este tratamiento entra en el tanque de decantacin en el que, por
sedimentacin, se depositan en el fondo materiales inorgnicos y orgnicos insolubles. Una
vez que sale el agua de este tanque en el que permanece, al menos dos das, ha perdido el
95% de la materia orgnica que llevaba dispersa y es vertida al medio ambiente.
(*) Los restos depositados en el tanque de decantacin se trasladan a los digestores de cieno
(lodo), donde las bacterias fermentadoras y bacterias metangenas, en un ambiente anaerobio,
producen el denominado biogas, que puede utilizarse como fuente de energa.
Vertidos de petrleo
Otro problema grave de contaminacin del medio ambiente por la actividad humana es el
producido por el vertido de petrleo o sus derivados. (*) Algunas bacterias y mohos son capaces de
degradar de forma natural los hidrocarburos. Estos microorganismos pueden utilizarse para limpiar
fondos marinos, playas o agua. Sin embargo, estos microorganismos son seres vivos, por lo que
necesitan unas determinadas condiciones de vida. La variacin en la temperatura del agua, las corrientes
marinas, las diferencias de concentraciones salinas del mar o la necesidad de nutrientes concretos son
factores limitantes para su desarrollo.
En los laboratorios de clonacin se intenta crear cepas que puedan trabajar a temperaturas muy
bajas o que sus necesidades nutricionales se adapten al medio marino en el que van a desarrollar.
Residuos generados por explotaciones mineras
La explotacin minera provoca grandes problemas de contaminacin del suelo o de
aguas subterrneas por metales pesados. Tambin, y de forma natural, existen microorganismos y
plantas capaces de acumular o transformar estos metales pesados, recuperando el medio ambiente
daado. El
problema de algunos de estos microorganismos consiste en que necesitan oxgeno para llevar a cabo
su metabolismo, por lo que hay que bombear oxgeno al suelo para poder descontaminarlo.
En los laboratorios de clonacin se est trabajando con cepas descontaminadoras, que puedan
concentrar metales pesados o que aceleren el ritmo de descontaminacin. Entre las plantas con actividad
fitorremediadora se encuentran las crucferas del gnero Brassica, capaces de acumular
metales pesados y arsnico. Estas plantas son objeto de estudio y seleccin en los laboratorios de
clonacin.
Diversos tipos de industrias utilizan microorganismos para la obtencin de sustancias de inters
como aminocidos (cido glutmico en forma de glutamato monosdico usado como potenciador de
sabores y aromas); cidos orgnicos como ctrico, actico (utilizado en la fabricacin de acetatos,
pelculas fotogrficas, etc.); butanol (empleado en la fabricacin de plastificantes), etanol (como
combustible), enzimas como proteasas (usadas en detergentes), etc.
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En las industrias mineras se utilizan microorganismos para extraer por biolixiviacin (=Lavado
de minerales en presencia de bacterias que separan y concentran elementos metlicos y no metlicos de
inters) metales preciosos, metales pesados, uranio y petrleo.
BIOTECNOLOGA Y BIOTICA
En 1971, V. R. Potter utiliz por primera vez la palabra (*) biotica (=Control sobre los
descubrimientos y aplicaciones de la ingeniera gentica) A ella se refiri como el dilogo entre la cultura
cientfica y la humanstica. En la biotica se unen los valores ticos de la sociedad y los hechos
biolgicos conseguidos por los cientficos. Aunque la ciencia es imparable, en 1974 se acord la
interrupcin de los trabajos realizados con ADN recombinante. Fue la primera respuesta biotica. Con
esta interrupcin los cientficos se plantearon hasta dnde podan o queran llegar en el estudio con
el ADN. En 1975 se convoc la Conferencia de Asilomar. En ella se pusieron las bases para el trabajo
de la manipulacin gentica.
Da a da, la Ciencia y la Tecnologa avanzan y se adelantan a las normas jurdicas. Una vez
conseguido un avance cientfico, su aplicacin es inmediata. La Sociedad, a travs de los medios de
informacin, examina ese avance y lo critica, lo apoya o lo rechaza. Sin embargo, en Biotecnologa, se
puede (o se debe) actuar as? (*) Al crear un organismo transgnico se introduce un gen que no ha
evolucionado con el resto del genoma y se desconocen las consecuencias que esto puede derivar.
Basndose en esta ltima idea, en 1992, en la Convencin para la Biodiversidad se
establecieron una serie de reglas de valor universal que se pueden resumir en lo siguiente:
(*) "Slo puede realizarse una accin (en la naturaleza) si se ha demostrado la
ausencia total de riesgos".
En 1993, el Comit Internacional de Biotica de la UNESCO estableci unas normas para evitar que la
Biotecnologa atente contra la dignidad humana. Pero, cmo puede la Biotecnologa atentar contra la
biodiversidad o contra la dignidad humana?
(*) Los organismos genticamente modificados se crean para resistir plagas,
herbicidas o condiciones extremas. Por esto, son ms fuertes que otras especies
naturales. Al competir unas y otras por los recursos podra ocurrir que
desaparecieran las especies naturales.
La Biotecnologa puede ayudar a curar enfermedades, pero para ello hay que trabajar con el
ADN humano, secuenciarlo y conocer su funcin. Supongamos que se recoge ADN de una poblacin y se
detecta en algn individuo genes relacionados con el desarrollo de un cncer. Si esos datos se hacen
pblicos, esa persona tendra muy difcil cosas tales como conseguir un trabajo duradero, obtener un
seguro de vida o, simplemente, formar una familia.
Con los datos que se obtuvieran de la secuenciacin de ADN se podra elegir el tipo de hijo
que se desea, no slo que careciera de taras genticas, sino que se podra escoger el color de ojos, de la
piel, complexin, etc.
La legislacin actual impide que los seres humanos sean considerados objetos de
compra-venta, pero las compaas biotecnolgicas pueden patentar parte de un ser
humano, como son los genes, las clulas y los tejidos, as como la posibilidad de patentar
los procesos para la creacin de estas partes. Podra parecer que los intereses de
mercado estn por encima del individuo o de la Humanidad.
Slo teniendo valores ticos firmes e informacin veraz se puede controlar la
aplicacin de los avances biotecnolgicos.
IDEAS FUNDAMENTALES
i
c
a
.
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3 La clonacin es el proceso seguido para obtener un clon. La clonacin puede ser de molculas,
de clulas o de organismos completos.
4 Un clon es un conjunto de elementos genticamente iguales. Todos los elementos de ese conjunto
son clones entre s.
GLOSARIO
A-H
ADN complementario. Molcula de ADN obtenida a partir de ARNm mediante la
enzima transcriptasa inversa.
Anticuerpo monoclonal. Anticuerpo fabricado por un clon de un hibridoma.
Biblioteca genmica. Conjunto de fragmentos distintos de ADN que s clonan dentro de bacterias
transformadas al dividirse stas.
Biolixiviacin. Lavado de minerales en presencia de bacterias que separan y concentran elementos
metlicos y no metlicos de inters.
Biorremediacin. Proceso que tiene como fin remediar un problema ambiental mediante el empleo de
organismos vivos.
Biotecnologa. Ciencia que estudia las tcnicas que utilizan clulas vivas para la obtencin de
organismos, servicios, instrumentos y productos tiles. Comprende las tcnicas de fermentacin
industrial, la ingeniera gentica, la clonacin, etc.
Clonacin. 1.Produccin de individuos genticamente idnticos. 2. Multiplicacin asexuada de
microorganismos o de poblaciones celulares con un mismo patrimonio gentico. 3.Proceso de
replicacin de molculas de ADN para obtener un gran nmero de ellas idnticas.
Clonacin humana. Proceso para obtener individuos genticamente idnticos o poblaciones celulares
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Csmido. Molcula circular de ADN fabricada artificialmente y que funciona como un vector gnico al
contener genes extraos que se desean insertar en bacterias receptoras.
Genoma. Conjunto de todos los genes que contiene un juego completo de cromosomas, en un ncleo
haploide.
Hibridoma. Clula hbrida inmortal productora de anticuerpos monoclonales, obtenida de una clula
plasmtica productora de anticuerpos y una clula tumoral de mieloma
Huella gentica. Resultado de aplicar la tcnica del perfilado de ADN para detectar secuencias
especficas de cada persona llamadas minisatlites.
I-S
Ingeniera gentica. Conjunto de tcnicas con las que se consigue transferir genes de unas especies a
otras o entre individuos de la misma especie.
Mapa de restriccin. Mapa de una parte del material gentico de una especie obtenido por
comparacin de fragmentos de restriccin resultantes de la aplicacin de varias enzimas
restrictasas. Refleja la disposicin de secuencias completas de nucletidos especficas de la regin
analizada.
Micropropagacin. Tcnica de obtencin de poblaciones celulares clnicas en plantas a partir de las
cuales obtener nuevos individuos.
Minisatlites. Regiones del ADN que presentan secuencias de nucletidos repetidas en tndem (unas a
continuacin de otras) Su deteccin sirve para obtener la huella gentica de una persona.
Plsmido. Molcula de ADN circular presente en algunas bacterias independientemente del cromosoma
bacteriano, es empleado como vector gnico para transferir genes extraos entre bacterias.
Prueba del ADN. Tcnica consistente en la deteccin de minisatlites en el ADN de las personas para
su identificacin, puesto que con ella se obtiene la huella gentica.
Reprogramacin. Proceso de diferenciacin celular invertida por el que una clula especializada es
capaz de comportarse como embrionaria.
Restrictasas. Clase de enzimas que cortan el ADN por sitios especficos. Se usan para obtener
fragmentos de ADN con distintos fines: mapas de restriccin, pruebas del ADN, obtencin de ADN
recombinante, etc.
Subunidades. Parte de un microorganismo patgeno con poder inmunizante. Puede ser la protena de la
cpsida de un virus, una sustancia txica bacteriana o un polisacrido de la cpsula bacteriana.
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T-V
Tcnica del ADN recombinante. Tcnica por la cual se obtiene una molcula de ADN con uno o ms
genes extraos que se desean insertar en una clula receptora.
Terapia gnica. Modalidad de curacin de enfermedades genticas producidas por un solo gen
defectuoso, o curacin de enfermedades con introduccin de genes extraos que proporcionen
caracteres saludables.
Transfeccin.
eucariotas.
Tranferencia
de
material
gentico
extrao
clulas
somticas
Transferencia nuclear. Transporte artificial de un ncleo de una clula a la que se le ha extrado a otra
clula receptora a la que se le ha extirpado su ncleo previamente.
Transferencia de Southern. Tcnica para el anlisis de clones de ADN por hibridacin con fragmentos
de restriccin con el fin de localizar los genes que interesen.
Transformacin. Transferencia natural o artificial de ADN extrao entre bacterias usando vectores
gnicos que la facilitan.
Transformacin biolstica. Tcnica consistente en bombardear una poblacin celular de origen animal
o vegetal con partculas de oro que llevan adheridas molculas de ADN con genes que interesa transferir.
Transgnesis. Inoculacin de material gentico extrao a todas las clulas de un organismo eucariota
manipulando las clulas reproductoras o los zigotos
Virus vector. Clase de virus que se emplea para transferir ADN extrao entre bacterias o a clulas
eucariotas.
NOTA
El desarrollo del tema Biotecnologa del bloque de Microbiologa y Biotecnologa
del temario de Biologa de 2 de Bachillerato, se basa, a su vez, en el contenido de la pgina web
del MECD (Ministerio de Educacin, Ciencia y Deportes): PROYECTO BIOSFERA (Iris.cnice.mecd,es),
ampliado adems con otras fuentes de consulta editorial.
AGRADECIMIENTOS
A los 18 alumnos correctores de Biologa de 2-A de Bachillerato del curso 20042005, por su gran
ayuda a la hora de
mejorar,
en
lo posible, el contenido de estos
apuntes.