[NOMBRE DE LA COMPAA]

[Direccin de la compaa]

REORDENAMIENTO
GENETICO DE LAS
INMUNOGLOBULINAS
PRESENTA: Sandra Paulina Culebro Espinoza
PRESENTA: Sandra Paulina Culebro
Espinoza
RM4
INMUNOLOGA I
CATEDRATICO: DR. FRANCISCO LZARO BALDERAS

OBJETIVO
Conocer el proceso histrico que llevo al conocimiento del reordenamiento
gentico de las inmunoglobulinas.
Identificar las caractersticas del reordenamiento gentico en las
inmunoglobulinas.
Conocer los mecanismos del reordenamiento gentico de las inmunoglobulinas.

INDICE

INTRODUCCION...... pg 3
UN POCO DE HISTORIA .... pg 4
ORGANIZACIN MULTIGENICA DE GENES Ig............................................. pg 6
FAMILIA MULTIGENICA DE LA CADENA LAMDA pg 7
FAMILIA MULTIGENICA DE LA CADENA KAPPA.. pg 8
FAMILIA MULTIGENICA DE LA CADENA PESADA ... pg 8
REORDENAMIENTO DE LA CADENA VARIABLE ... pg. 9
El DNA DE LA CADENA LIGERA EXPRESION REORDENAMIENTO VJ .... pg 10
El DNA DE LA CADENA LIGERA EXPRESION REORDENAMIENTO VDJ . pg 10
MECANISMO DE REORDENAMIENTO DE LA CADENA VARIABLE . pg 11
LOS SEGMENTOS GENICOS SE UNEN MEDIANTE RECOMBINASA ..... pg 11
CONCLUSION... Pg 13

INTRODUCCION
2

Una de las caractersticas ms notables del sistema inmunitario de los

vertebrados es su capacidad de reaccionar a un conjunto al parecer ilimitado
de antgenos extraos. A medida que se acumularon datos sobre la secuencia
de la inmunoglobulina (Ig) se encontr que, casi sin excepcin, cada molcula
de anticuerpo estudiada contena una secuencia nica de aminocidos en su
regin variable, pero slo una de un nmero limitado de secuencias invariantes
en su regin constante. La base gentica de esta combinacin de constancia y
enorme variacin en una molcula de protena aislada estriba en la
organizacin de los genes de inmunoglobulina. En el DNA de la lnea germinal,
mltiples segmentos gnicos codifican porciones de una cadena pesada o
ligera de inmunoglobulina aislada. Estos segmentos gnicos se encuentran en
las clulas germinales, pero no pueden transcribirse y traducirse en cadenas
completas mientras no se reordenen como genes funcionales. Durante la
maduracin de la clula B en la mdula sea, algunos de estos segmentos
gnicos son dispuestos de manera aleatoria por un sistema gentico dinmico
capaz de crear ms de 106 combinaciones. Procesos ulteriores incrementan la
diversidad del repertorio de sitios de unin de anticuerpo a un nmero muy
grande, mayor de 108. Durante el desarrollo de la clula B, la maduracin de
una clula B progenitora avanza por una secuencia ordenada de
reordenamientos de los genes que codifican la Ig, junto con modificaciones de
los genes que contribuyen a la diversidad del producto final. Hacia el trmino
de este proceso, una clula B madura inmunocompetente contendr
secuencias codificadoras para una regin variable de cadena pesada y una
regin variable de cadena ligera funcionales. As, una clula B individual surge
con su especificidad ya determinada. Despus de la estimulacin antignica de
una clula B madura en rganos linfoides perifricos, el reordenamiento
adicional de segmentos gnicos en la regin constante puede generar cambios
en el iso- tipo expresado, que producen a su vez cambios en las funciones
biolgicas efectoras de la molcula de inmunoglobulina sin modificar su
especificidad. Por consiguiente, las clulas B maduras contienen DNA
cromosmico que ya no es idntico al DNA de la lnea germinal. Si bien se
concibe el DNA genmico como un plano bsico gentico estable, el linaje de
clulas linfocticas no conserva una copia intacta de este plano bsico. El
reordena- miento genmico es una caracterstica esencial de la diferenciacin
de linfocitos, y no se ha demostrado que ningn otro tipo de clula de los
vertebrados lleve a cabo este proceso. En este captulo se describe primero la
organizacin detallada de los genes de inmunoglobulina, el proceso de
reordenamiento del gen de Ig y los mecanismos por los que el sistema gentico
dinmico de la inmunoglobulina genera ms de 108 diferentes especificidades
antignicas. Acto seguido se analizan el mecanismo del cambio de clase, el
papel del procesamiento diferencial del RNA en la expresin de genes de
inmunoglobulina y la regulacin de la transcripcin de estos genes.
Cualquier modelo viable de los genes de inmunoglobulina tena que tomar en
cuenta las siguientes propiedades de los anticuerpos:
La vasta diversidad de especificidades de anticuerpo
3

 La presencia en las cadenas pesadas y ligeras de la Ig de una regin variable

en el extremo amino terminal y una regin constante en el extremo carboxilo
terminal
La existencia de isotipos con la misma especificidad antignica, que resultan
de la asociacin de una regin variable dada con diferentes regiones
constantes de cadena pesada

DESARROLLO

I.

Un poco de historia

Las teoras de la lnea germinal sostenan que el genoma, al que contribuan las
clulas germinales, vulo y espermatozoide, contena un gran repertorio de
genes de inmunoglobulina; por consiguiente, estas teoras no incluan
mecanismos genticos especiales para explicar la diversidad de anticuerpos.
En cambio, las teoras de la variacin somtica sostenan que el genoma posea
una cantidad relativamente pequea de genes de inmunoglobulina, a partir de
los cuales se generaba un gran nmero de especificidades de anticuerpo en las
clulas somticas por mutacin o recombinacin.
A medida que se determinaron las secuencias de aminocidos de ms y ms
inmunoglobulinas, result obvio que deban existir mecanismos no slo para
crear la diversidad de anticuerpos sino tambin para conservar la constancia.
Ya fuera que la diversidad se generara por la lnea germinal o por mecanismos
somticos, persista una paradoja: cmo podra conservarse la estabilidad en
la regin constante (C) mientras algn tipo de mecanismo diversificador
generaba la regin variable (V)?

Dreyer y Bennett propusieron un revolucionario modelo de dos genes-un

polipptido.
En un intento de desarrollar un modelo gentico que conciliara los hechos
conocidos sobre la estructura de las inmunoglobuinas, W. Dreyer y J. Bennett
sugirieron, en su artculo terico clsico de 1965, que dos genes separados
codificaban una misma cadena pesada o ligera de inmunoglobulina, un gen
para la regin V (regin variable) y el otro para la regin C (regin constante).
Sealaron que estos dos genes de alguna manera deban reunirse a nivel del
DNA para formar un mensaje continuo que pudiera transcribirse y traducirse a
una cadena pesada o ligera de Ig nica. En ese tiempo era generalmente
aceptado que un gen codificaba un polipptido, de modo que su propuesta
result revolucionaria. Ms an, propusieron que en la lnea germinal haba
cientos o miles de genes de regin V, en tanto que slo era necesario que
existieran copias nicas de genes de clase y subclase de la regin C.
4

El valor de este tipo de modelo de recombinacin (que fusionaba elementos de

la lnea germinal y teoras de la variacin somtica) resida en que era capaz de
explicar aquellas inmunoglobulinas en las que una regin V individual se
combinaba con varias regiones C. Al postular un gen de regin constante nico
para cada clase y subclase de inmunoglobulina, el modelo tambin pudo
explicar la conservacin de funciones efectoras biolgicas necesarias al tiempo
que permita la diversificacin evolutiva de genes de la regin variable. Al
principio, el apoyo para la hiptesis de Dreyer y Bennett fue indirecto. Estudios
pioneros de cintica de hibridacin del DNA mediante una sonda radiactiva de
DNA de regin constante indicaron que la sonda se hibridaba con tan slo uno
o dos genes, lo que confirmaba la prediccin del modelo, que indicaba que
nicamente existan una o dos copias de cada clase y subclase de la regin
constante. Sin embargo, la prueba indirecta no fue suficiente para vencer la
obstinada resistencia de la comunidad cientfica sobre la hiptesis de Dreyer y
Bennett. La sugerencia de que dos genes codificaban un polipptido individual
contradeca el principio prevaleciente de un gen-un polipptido y no tena
precedente en ningn sistema biolgico conocido.

La bomba de Tonegawa:
los genes de la inmunoglobulina se reordenan En 1976, S. Tonegawa y N.
Hozumi encontraron la primera prueba directa indicativa de que genes
separados codifi caban las regiones V y C de las inmunoglobulinas y que los
genes se reordenaban en el curso de la diferenciacin de la clula B. Tonegawa y Hozumi seleccionaron DNA de clulas embrionarias y clulas de
mieloma adultas (clulas en etapas muy diferentes de desarrollo), y utilizaron
varias endonucleasas de restriccin para generar fragmentos de DNA. Despus
separaron estos fragmentos por tamao y analizaron su capacidad de hibridarse con una sonda de mRNA radiomarcada. Dos fragmentos de restriccin
separados procedentes del DNA embrionario se hibri- daron con el mRNA, en
tanto que slo un fragmento de restriccin aislado procedente del DNA del
mieloma adulto lo hizo con la misma sonda. Tonegawa y Hozumi sugirieron
que, durante la diferenciacin de los linfocitos desde la etapa embrionaria
hasta la etapa de clula plasmtica del todo diferenciada (represen- tada en su
sistema por las clulas de mieloma), los genes V y C experimentan
reordenamiento.
En el embrin, los genes V y C estn separados por un segmento grande de
DNA que con- tiene un sitio de endonucleasa de restriccin; durante la
diferenciacin, los genes V y C se acercan entre s y se elimina la secuencia
intermedia de DNA. Este trabajo cambi el campo de la inmunologa, y en
1987, Tonegawa recibi el premio Nobel. En los experimentos pioneros de
Tonegawa y Hozumi se empleaba un procedimiento tedioso y tardado que ms
adelante se sustituy por el mtodo mucho ms potente del anlisis
Southernblot. Este mtodo, en la actualidad de uso universal para investigar el
reordenamiento de los genes de inmunoglobulina, elimina la necesidad de eluir
5

los fragmentos de restriccin de DNA separados de cortes de gel antes del

anlisis mediante hibridacin con una sonda de segmento gnico de
inmunoglobulina. La fi gura 5-2 muestra la deteccin del reordenamiento en el
locus de la cadena ligera comparando los fragmentos producidos por digestin
de DNA de una clona de clulas de linaje B con el patrn que se obtiene por
digestin de clulas no B (p. ej., semen o clulas hepticas). El reordenamiento
de un gen V elimina una seccin extensa de DNA de la lnea germinal y por
tanto crea diferencias entre loci de Ig reordenados y no reordenados en la
distribucin y el nmero de sitios de restriccin. Esto genera diferentes
patrones de restriccin por loci reordenados y no reordenados. La aplicacin
extensa de este mtodo demostr que el modelo de dos genes de Dreyer y
Bennett un gen que codifi ca la regin variable y otro la regin constante se
aplicaba tanto a los genes de cadena pesada como a los de cadena ligera.

II.

Organizacin multignica de genes de inmunoglobulina

A medida que se llev a cabo la clonacin y secuenciacin del DNA de cadenas

ligeras y pesadas, se descubri una compleji- dad an mayor que la anticipada
por Dreyer y Bennett. Familias multignicas separadas situadas en diferentes
cromosomas codifi can las cadenas ligeras y las cadenas pesadas.En el DNA de
la lnea germinal, cada una de estas familias multignicas contiene varias
secuencias de codificacin llamadas segmentos gnicos, separadas por
regiones que no codifi - can. Durante la maduracin de la clula B estos
segmentos se reordenan y se acercan entre s para formar genes de
inmunoglobulina funcionales.
Cada familia multignica tiene caractersticas distintas
Las familias de las cadenas ligeras lambda y kappa contienen segmentos
gnicos V, J y C; los segmentos VJ reordenados codifican la regin variable de
las cadenas ligeras. La familia de la cadena pesa- da posee segmentos gnicos
V, D, J y C; los segmentos gnicos VDJ reordenados codifican la regin variable
de la cadena pesa- da. En cada familia de genes los segmentos gnicos C
codifican las regiones constantes. A cada segmento gnico V lo precede en su
extremo 5 un exn pequeo que codifica un pptido seal o lder (L) corto, el
cual gua la cadena pesada o ligera a travs del retculo endoplsmico. El
pptido seal se escinde (separa) de las cadenas ligera y pesada nacientes
antes del ensamblaje de la molcula de inmunoglobulina terminada. As, los
aminocidos codificados por esta secuencia lder no aparecen en la molcula
de inmunoglobulina terminada.
III.

Familia multignica de la cadena lambda

La primera prueba de que en realidad dos segmentos gnicos codificaban la

regin variable de la cadena ligera se obtuvo cuando Tonegawa clon el DNA
de la lnea germinal que codifica la regin variable de la cadena ligera de ratn
6

y determin su secuencia de nucletidos completa. Cuando se compar la

secuencia nucleotdica con la secuencia de aminocidos conocida de la regin
variable de la cadena se advirti una discrepancia inusitada. Aunque los
primeros 97 aminocidos de la regin variable de la cadena correspondieron a
la secuencia nucleotdica del codn, los 13 aminocidos restantes carboxilo
terminal de la regin variable de la protena no coincidieron. Result que a
muchos pares de bases (pb) de distancia, un segmento gnico separado de 39
pb llamado J (del ingls joining, unin) codifi caba los 13 aminocidos restantes
de la regin variable de la cadena. En consecuencia, un gen de la regin
variable funcional contiene dos segmentos de codificacin un segmento V 5y
otro J 3 separados por una secuencia de DNA no codificadora en el DNA de la
lnea germinal no reordenado. La familia multignica en la lnea germinal del
ratn con- tiene dos segmentos gnicos funcionales V, tres J y dos C. Adems
de las versiones funcionales de estos genes, algunas formas son seudogenes,
genes defectuosos incapaces de codificar protena; tales genes se indican con
la letra griega. Como hecho interesante, el compaero de la regin constante
de J4, C4, es un gen por completo funcional. El segmento V y los tres
segmentos gnicos funcionales J codifican la regin variable de la cadena
ligera, y cada uno de los tres segmentos gnicos C funcionales codifica la
regin constante de uno de los tres subtipos de cadena (1, 2 y 3). En el ser
humano el locus es ms complejo. Existen 30 segmentos gnicos funcionales V
y cuatro J; hay siete segmentos C, de los cuales slo cuatro son funcionales.
Adems de los segmentos gnicos funcionales, el complejo humano contiene
muchos seudogenes V y J.
IV.

Familia multignica de la cadena kappa.

En el ratn, la familia multignica de la cadena contiene alrededor de 75

segmentos gnicos V, cada uno de ellos con una secuencia lder adyacente a
una corta distancia corriente arriba (es decir, en el lado 5). Existen cinco
segmentos gnicos J (uno de los cuales es un seudogn no funcional) y un
segmento gnico C nico. Al igual que en la familia multignica, los segmentos
gnicos V y J codifican la regin variable de la cadena ligera, y el segmento
gnico C codifca la regin constante. Debido a que slo hay un segmento
gnico C, no hay subtipos de cadenas ligeras. La comparacin de las partes a y
b de la fi gura 5-3 muestra que el ordenamiento de los segmentos gnicos es
muy distinto en las familias gnicas. La familia multignica de la cadena del ser
humano, que tiene una organizacin similar a la del ratn, contiene unos 40
segmentos gnicos V, cinco J y uno C.
V.

Familia multignica de la cadena pesada

La organizacin de los genes de la cadena pesada de la inmunoglobulina es

similar a la de los genes de las cadenas ligeras, pero ms compleja. Un
segmento gnico adicional codifica parte de la regin variable de la cadena
pesada. Leroy Hood y colaboradores propusieron por primera vez la existencia
de este segmento gnico; esos investigadores compararon la secuencia de
aminocidos de la regin variable de la cadena pesada con las secuencias de
7

nucletidos de VH y JH. Se encontr que el segmento gnico VH codifica los

aminocidos 1 a 94 y el segmento gnico JH los aminocidos 98 a 113;
empero, ninguno de estos segmentos gnicos llevaba informacin para
codificar los aminocidos 95 a 97. Cuando se determin la secuencia de
nucletidos para un DNA de mieloma reordenado y se compar con la
secuencia de DNA de la lnea germinal, se reconoci una secuencia de
nucletidos adicional entre los segmentos gnicos VH y JH. Esta secuencia de
nucletidos correspondi a los aminocidos 95 a 97 de la cadena pesada. A
partir de estos resultados, Hood y colaboradores propusieron que para codificar
la regin variable completa de las cadenas pesadas, un tercer segmento gnico
de la lnea germinal debe unirse con los segmentos gnicos VH y JH. Este
segmento gnico, que codifica aminocidos dentro de la tercera regin determinante de complementariedad (CDR3), se design D por diversidad, en
virtud de su contribucin a la generacin de la diversidad de anticuerpos.
Tonegawa y colaboradores localizaron segmentos gnicos D dentro del DNA de
la lnea germinal del ratn con una sonda de cDNA complementaria a la regin
D, que se hibrid con una extensin del DNA situada entre los segmentos
gnicos VH y JH. Mediante secuenciacin directa del DNA se demostr que la
familia multignica de cadena pesada en el cromosoma huma- no 14 contiene
39 segmentos gnicos VH localizados corriente arriba de un grupo de 23
segmentos gnicos DH funcionales. Tal y como sucede con los genes de cadena
ligera, a cada segmento gnico VH lo precede una secuencia lder a una
distancia corta corriente arriba. Corriente abajo de los segmentos gnicos DH
se encuentran seis segmentos gnicos funcionales JH seguidos por una serie de
segmentos gnicos CH. Cada segmento gnico CH codifica la regin constante
de un isotipo de cadena pesada de inmunoglobulina. Los segmentos gnicos
CH consisten en exones de codificacin e intrones que no codifican. Cada exn
codifica un dominio separado de la regin constante de la cadena pesada. En el
ratn se encuentra una organizacin similar del gen de cadena pesada. La
conservacin de funciones biolgicas efectoras importantes de la molcula de
anticuerpo se debe al nmero limitado de genes de regin constante de la
cadena pesada.). Este ordenamiento secuencial no es fortuito: suele
relacionarse con la expresin secuencial de las clases de inmunoglobulina en el
curso del desarrollo de la clula B y la respuesta inicial de IgM de la clula B a
su primer encuentro con un antgeno.

VI.

Reordenamientos gnicos de regin variable

En las secciones previas se demostr que los genes funcionales que codifican
las cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina se ensamblan mediante
fenmenos de recombinacin a nivel del DNA. Estos fenmenos, y los
acontecimientos paralelos que incluyen los genes del receptor de clula T, son
los nicos reordenamientos de DNA especficos de sitio conocidos en vertebrados. Los reordenamientos gnicos de la regin variable ocurren en una
secuencia ordenada durante la maduracin de la clula B en la mdula sea.
Primero se reordenan los genes de la regin variable de la cadena pesada y
8

luego los genes de la regin variable de la cadena ligera. Al final de este

proceso, cada clula B contiene una nica secuencia funcional de DNA de
regin variable para su cadena pesada y otra para su cadena ligera. El proceso
de reordenamiento del gen de la regin variable produce clulas B maduras
inmunocompetentes; cada una de estas clulas tiene la funcin de producir
anticuerpo con un sitio de unin codificado por la secuencia particular de sus
genes V reordenados. Como se describe ms adelante en este captulo, los
reordenamientos de los genes de la regin constante de la cadena pesada (un
proceso llamado cambio o conmutacin de clase) inducen ms cambios en la
clase de inmunoglobulina (isotipo) expresada por una clula B, pero estos
cambios no afectan la especificidad antignica de las clulas. Las etapas del
reordenamiento del gen de regin variable tienen una secuencia ordenada,
pero para los fines de esta exposicin pueden considerarse fenmenos
aleatorios cuyo resultado es la determinacin al azar de la especificidad de la
clula B. En esta seccin se describen el orden, el mecanismo y las
consecuencias de estos reordenamientos.

VII.

El DNA de la cadena ligera experimenta reordenamientos VJ

La expresin de las cadenas ligeras requiere el reordenamiento de los

segmentos gnicos V y J de la regin variable. En el ser humano, cualesquiera
de los genes Vfuncionales se combina con cualesquiera de las cuatro
combinaciones J-Cfuncionales. En el ratn, los acontecimientos son un poco
ms complicados. El reordenamiento de DNA puede unir el segmento gnico
V1 con el J1 o el J3, o bien el segmento gnico V2 puede unirse con el
segmento gnico J2. En el DNA de la cadena ligera del ser humano o el ratn,
cualesquiera de los segmentos gnicos V puede unirse con cualesquiera de los
segmentos gnicos J funcionales. Los genes reordenados contienen las
regiones siguientes en orden desde el extremo 5 al 3: un exn lder (L) corto,
una secuencia no codificadora (intrn), un segmento gnico VJ unido, un
segundo intrn y la regin constante. Corriente arriba de cada segmento lder
est una secuencia promotora. A la secuencia de la cadena ligera reordenada
la transcribe la polimerasa de RNA desde el exn L a travs del segmento C
hasta la seal de detencin (alto o stop), lo que da por resultado un transcrito
primario de RNA de cadena ligera. Los intrones en el transcrito primario son
eliminados por enzimas de procesamiento del RNA, y los RNA mensajeros de
cadena ligera resultantes salen a continuacin del ncleo. El mRNA de cadena
ligera se une a ribosomas y se traduce en la protena.
VIII.

El DNA de cadena pesada experimenta reordenamientos VDJ

La generacin de un gen de cadena pesada de inmunoglobulina funcional

requiere dos fenmenos de reordenamiento separa- dos dentro de la regin
variable. El primero un segmento gnico DH se une a un segmento JH; a
continuacin, el segmento DHJH resultante se une a un segmento VH para
crear una unidad VHDHJH que codifica la totalidad de la regin variable. En el
DNA de cadena pesada, el reordenamiento de la regin variable produce un
9

gen reordenado que consta de las siguientes secuencias, a partir del extremo
5: un exn L corto, un intrn, un segmento VDJ unido, otro intrn y una serie de
segmentos gnicos C. Tal y como se observa con los genes de cadena ligera, a
una distancia corta corriente arriba de cada secuencia lder de la cadena
pesada se halla una secuencia promotora. Una vez que termina el
reordenamiento del gen de cadena pesada, la polimerasa de RNA puede unirse
a la secuencia promotora y transcribir la totalidad del gen de cadena pesada,
incluidos los intrones. Al inicio se transcriben los segmentos gnicos C y C. La
poliadenilacin diferencial y el empalme de RNA eliminan los intrones y procesa
el transcrito primario para generar mRNA, incluyendo el transcrito C.. A
continuacin se traducen estos dos mRNA y se escinde el pptido lder del
polipptido naciente que resulta, lo que crea cadenas terminadas. La
produccin de dos diferentes mRNA de cadena pesada permite que la clula B
madura, inmunocompetente, exprese IgM e IgD con idntica especificidad de
antgeno en su superficie.

IX.

Mecanismo de los reordenamientos de DNA de regin variable

Una vez expuestos los resultados de los reordenamientos de la regin variable,

se examina ahora con detalle el modo en que sucede este proceso durante la
maduracin de las clulas B.
Secuencias seal dirigen la recombinacin El descubrimiento de dos secuencias
relacionadas de manera estrecha conservadas en el DNA de la lnea germinal
de la regin variable inici el camino para comprender de modo ms amplio el
mecanismo de los reordenamientos gnicos. Estudios de secuenciacin del
DNA revelaron la presencia de secuencias seal de recombinacin (RSS, del
ingls recombination signal sequences) nicas, que fl anquean cada segmento
gnico V, D y J de la lnea germinal. Una RSS se ubica en el lado 3 de cada
segmento gnico V, en el lado 5 de cada segmento gnico J y a ambos lados de
cada segmento gnico D. Estas secuencias funcionan como seales para el
proceso de recombinacin que reordena los genes. Cada RSS contiene un
heptmero palindrmico conservado y una secuencia nonmera rica en AT
conservada, separada por una secuencia intermedia de 12 a 23 pares de bases
(pb) (fi g. 5-6a). Las secuencias intermedias de 12 y 23 pb corresponden,
respectivamente, a uno y dos giros de la hlice de DNA; por ello las secuencias
se denominan secuencias seal de recombinacin de un giro y secuencias
seal de dos giros. La secuencia seal V tiene un espaciador de un giro, y la
secuencia seal J, uno de dos giros. En el DNA de la cadena ligera este orden
se invierte; es decir, la secuencia seal V tiene un espaciador de dos giros y la
secuencia de J uno de un giro. En el DNA de cadena pesada, las secuencias
seal de los segmentos gnicos VH y JH tienen espaciadores de dos giros y las
seales a cada lado del gen DH poseen espaciadores de un giro (fi g. 5-6b). Las
secuencias seal que tienen un espaciador de un giro slo pueden unirse a
secuencias que poseen un espaciador de dos giros (la llamada regla de unin
un giro-dos giros). Esta regla de unin asegura, por ejemplo, que un segmento
10

VL slo se una a un segmento JL y no a otro segmento VL; asimismo, garantiza

que los segmentos VH, DH y JH se unan en un orden apropiado y que
segmentos del mismo tipo no se unan entre s.
X.

Los segmentos gnicos se unen mediante recombinasas

La recombinacin V(D)J, que se lleva a cabo en las uniones entre RSS y

secuencias de codificacin, son catalizadas por enzimas que se denominan en
conjunto recombinasa V(D)J. La identificacin de las enzimas que catalizan la
recombinacin de los segmentos gnicos V, D y J se inici a fi nes de la dcada
de 1980 y an se encuentra en curso. En 1990 David Schatz, Marjorie Oettinger
y David Baltimore publicaron por primera vez la identificacin de dos genes
activadores de la recombina- cin, designados RAG-1 y RAG-2, cuyas protenas
codificadas actan de forma sinrgica y son necesarias para mediar la unin
V(D)J. Las protenas RAG-1 y RAG-2 son los nicos productos gnicos
especfIcos linfoides que se ha demostrado que participan en el
reordenamiento V(D)J. La recombinacin de segmentos gnicos de la regin
variable consiste en las etapas siguientes, catalizadas por un sistema de
enzimas recombinasa:
1. Reconocimiento de secuencias seal de recombinacin (RSS) por enzimas
recombinasa, seguida por sinapsis en la que se colocan en proximidad dos
secuencias seal y las secuencias de codifi cacin adyacentes (segmentos
gnicos).
2. Escisin de una cadena de DNA por RAG-1 y RAG-2 en las uniones de las
secuencias seal y las secuencias de codificacin.
3. Una reaccin catalizada por RAG-1 y RAG-2 en la que el grupo OH 3 libre en
la cadena de DNA cortada ataca el enlace fosfodister que une la cadena
opuesta a la secuencia seal, lo que produce de manera simultnea una
estructura en horquilla en el extremo cortado de la secuencia de codificacin y
una rotura a ras de la doble cadena fosforilada 5 en la secuencia seal.
4. Corte de la horquilla con objeto de generar sitios para la adicin de
nucletidos de regin P, seguido del recorte de algunos cuantos nucletidos de
la secuencia de codificacin por una endonucleasa de cadena nica.
5. Adicin hasta de 15 nucletidos, llamados nucletidos de regin N, en los
extremos cortados de las secuencias de codificacin V, D y J de la cadena
pesada por la enzima transferasa de desoxinucleotidilo terminal. 6. Reparacin
y ligadura para unir secuencias de codificacin y para enlazar las secuencias
seal, catalizadas por enzimas reparadoras de roturas de doble cadena normal
(DSBR). La recombinacin tiene como consecuencia la formacin de una unin
codificadora (o de codificacin), situada entre las secuencias de codificacin, y
una unin seal, entre las secuencias seal de recombinacin (RSS). La
orientacin transcripcional de los segmentos gnicos por unir determina el
destino de la unin seal y el DNA intermedio. Cuando los dos segmentos
gnicos se encuentran en la misma orientacin transcripcional, la unin da
lugar a la eliminacin de la unin seal y el DNA intermedio como un producto
11

de escisin circular. Con menos frecuencia, los dos segmentos gnicos tienen
orientaciones opuestas. En este caso, se observa la unin por inversin del
DNA, cuyo efecto es la retencin tanto de la unin codificadora como de la
unin seal (y el DNA intermedio) en el cromosoma. En el locus humano,
alrededor de la mitad de los segmentos gnicos V estn invertidos con
respecto a J y, por consiguiente, su unin ocurre por inversin.

CONCLUSION

Las inmunoglobulinas funcionales se producen durante la maduracin de los

linfocitos B en un proceso en el que los segmentos se reordenan, de modo que

12

se colocan adyacentes un segmento de cada tipo de los que intervienen en la

codificacin de cada tipo de cadena:
V+J de cadenas L (lambda o kappa) determinan la regin VL de la cadena
ligera.
V+D+J de cadenas H determinan la regin VH de la cadena pesada.
En cada caso, el segmento C, se coloca cercano al conjunto ya reordenado de
V+J o V+D+J para determinar la correspondiente regin constante.
El pequeo segmento L acompaa en 5 a cada segmento V. Determina un
pptido lder corto que sirve para guiar a la cadena polipeptdica en formacin
hacia el retculo endoplsmico rugoso. Durante el proceso de secrecin este
pptido se elimina, por lo que no participa de la Ig madura.
La recombinacin la lleva a cabo el complejo recombinasa VDJ, que es comn
para el reordenamiento de los genes del TcR. En la mayora de los linfocitos B
en desarrollo, la recombinacin se inicia en la cadena pesada de las Ig.
RECOMBINACIN DE GENES DE CADENAS PESADAS
El reordenamiento tiene lugar con un orden preciso. El primer reordenamiento
une un segmento gnico D con un J, posteriormente se une a uno de los genes
V formando un complejo VDJ. Los genes de la regin C estn separados por un
intrn de VDJ, y los RNAhn tienen la misma organizacin. El procesamiento
posterior del RNAhn une VDJ con los genes C para formar el RNAm funcional de
la cadena pesada mu. Los genes VDJ corresponden con la regin VH y los genes
C con CH.
El RNA primario ser procesado por medio de una poliadenilacin y corteempalme diferenciales, que producen dos tipos de ARN mensajeros:
ARNm para cadenas mu: incluye los segmentos L-V-D-J-Cm -poliA
ARNm para cadenas delta: incluye los segmentos L-V-D-J-Cd -poliA.
Ambos tipos de ARNm son iguales en lo que respecta a L-V-D-J (la porcin que
al ser traducida crear la parte de unin al Ag), pero que van a determinar dos
isotipos diferentes de anticuerpos. Cada ARNm es traducido y procesado
(eliminacin del pptido lder), generndose, respectivamente, cadenas
pesadas de tipo mu y delta, pero con la misma especificidad. Cuando dichas
cadenas se combinen independientemente con cadenas ligeras, se obtendrn
IgM e IgD de la membrana del linfocito B maduro. La cadena mu o delta
sintetizada en un LB en desarrollo regula la recombinacin somtica de dos
formas:
a) La protena mu generada inhibe irreversiblemente el reordenamiento en el
otro cromosoma, explicando as la exclusin allica. Los genes de las cadenas
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pesadas del cromosoma allico sufrirn reordenamiento slo si el primer

reordenamiento ha sido improductivo.
b) La produccin de una protena mu en un linfocito pre-B y expresin en
membrana, estimula el reordenamiento de las cadenas ligeras.
RECOMBINACIN DE GENES DE CADENAS LIGERAS.
La siguiente recombinacin somtica del DNA afecta a los loci de las cadenas
ligeras (kappa primero y luego lambda). La expresin completa de Ig conduce a
la generacin de LB en los que cesa la recombinacin VDJ y las clulas migran
hacia la periferia. El mecanismo seguido es similar al de las cadenas pesadas:
un segmento V se une a otro J, formando un complejo VJ que est separado por
un intrn de la regin C. El RNAhn mantiene el mismo orden y la eliminacin
posterior del intrn acerca VJ a C en el RNAm. La cadena ligera formada se une
a la cadena mu existente para formar IgM de membrana (LB inmaduro).El
ARNm se une a ribosomas en la superficie del retculo endoplsmico rugoso,
con lo que comienza su traduccin. Lo primero que surge es la parte
correspondiente al pptido lder, que empuja a la cadena polipeptdica en
crecimiento al lumen (interior) del RER; finalmente, la cadena proteica se
escinde a nivel del pptido lder, quedando la cadena ligera en el interior del
RER.

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