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LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA:
normas gerais, instrues de trabalho e
Procedimentos Operacionais Padres (POP)
Laboratrio de Microbiologia:
normas gerais, instrues de trabalho e
Procedimentos Operacionais Padres
1 edio
Lajeado, 2013
S182
Dados das
autoras
FABOLA DRESCH
Graduanda do curso de Biomedicina, Centro
Universitrio UNIVATES. Funcionria-tcnica do
Laboratrio Didtico de Microbiologia do Centro
Universitrio UNIVATES.
Apresentao
AGRADECIMENTO
Sumrio
1 -
2 -
3 -
4 -
NORMAS DE SEGURANA........................................9
LIMPEZA DO LABORATRIO...................................11
DESCARTE DE MATERIAL E DE AMOSTRAS...........12
USO E LIMPEZA DO APARELHO DE OSMOSE
REVERSA...................................................................13
5 - USO E LIMPEZA DAS BALANAS ELETRNICAS...14
6 - USO E LIMPEZA DO BANHO-MARIA......................16
7 - USO E LIMPEZA DA CAPELA DE FLUXO
LAMINAR..................................................................18
8 - LAVAGEM, PREPARO E ESTERILIZAO DE
MATERIAIS PARA ANLISES MICROBIOLGICAS...19
9 - USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS
BACTERIOLGICAS..................................................23
10 - USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS DE
ESTERILIZAO E SECAGEM...................................25
11 - USO E LIMPEZA DO FORNO DE MICRO-ONDAS...27
12 - USO E LIMPEZA DAS GELADEIRAS.........................29
13 - USO E LIMPEZA DO HOMOGENEIZADOR DE
AMOSTRAS (STOMACHER).....................................30
14 - USO E LIMPEZA DA INCUBADORA PARA
BOLORES E LEVEDURAS..........................................31
15 - USO E LIMPEZA DA AUTOCLAVE............................33
16 - USO E LIMPEZA DO AGITADOR DE TUBOS...........36
17 - USO E LIMPEZA DO CONTADOR DE COLNIAS....37
18 - USO E LIMPEZA DO ESTERILIZADOR A VCUO....38
19 - PESAGEM DE AMOSTRAS.......................................39
20 - PREPARO DA SUSPENSO INICIAL E DILUIES
DECIMAIS DE AMOSTRAS.......................................40
1-20
NORMAS GERAIS
Instruo de Trabalho
1- NORMAS DE
SEGURANA
1 - NORMAS DE
SEGURANA
10
2- LIMPEZA DO
LABORATRIO
11
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
4.4 Lmpadas
3 MATERIAIS
Luvas de borracha, lcool 70% e hipoclorito de
sdio.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Bancadas
Bancadas, na superfcie das quais so realizadas as
anlises microbiolgicas, devem ser limpas com lcool
70% antes de iniciar a anlise e ao trmino da mesma.
4.2. Piso
O piso do laboratrio de microbiologia limpo
e desinfetado diariamente com 5 mL de soluo de
hipoclorito de sdio a 2% , em um litro de gua.
5 REFERNCIAS
Mtodos de Anlises Microbiolgicas para alimentos
LARA.
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de
alimentos ITAL
4.3 Funcionrios
Os usurios do laboratrio usam jaleco e touca
durante os procedimentos.
6 REGISTROS
No aplicvel.
3- DESCARTE DE
MATERIAL E DE
AMOSTRAS
12
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
3 MATERIAIS
Autoclave, caixa coletora para vidraria danificada,
saco para esterilizao, saco de lixo comum, caixa
coletora para material txico e perfuro-cortantes.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descarte de Amostras
As amostras so descartadas quando do trmino
da anlise. As amostras processadas so armazenadas
em sacos adequados e destinados esterilizao em
autoclave a 121 +/- 1C por 20 min.
Posteriormente o material encaminhado ao
destino estabelecido para lixo orgnico na Instituio.
As alquotas de amostras utilizadas para as diluies
nos processos analticos so autoclavadas da mesma
forma e tambm encaminhadas ao lixo orgnico da
Instituio.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
13
4- USO E
LIMPEZA DO
5 REFERNCIAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
APARELHO
DE OSMOSE
REVERSA
6 REGISTROS
3 MATERIAIS
A osmose reversa um processo de separao em
que um solvente separado de um soluto de baixa
massa molecular por uma membrana permevel ao
solvente e impermevel ao soluto.
A membrana permitir apenas a passagem
de solvente (gua pura), retendo os solutos (sais
dissolvidos e contaminantes). Isso ocorre quando se
aplica uma grande presso sobre este meio aquoso, o
que contraria o fluxo natural da osmose.
Pr-filtros, filtro de carvo ativado, coluna de osmose
reversa, coluna de resina mista e filtro absoluto.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao da osmose reversa
O equipamento de osmose reversa no laboratrio
de Microbiologia serve para a obteno de gua a ser
No aplicvel.
5- USO E
LIMPEZA DAS
BALANAS
ELETRNICAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
Manual de Instrues da Balana Eletrnica.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%, esponjas e panos de
limpeza adequados.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descrio dos componentes
Prato da balana; entrada da fonte de alimentao;
ps niveladores; tecla liga/desliga; tecla calibrao/
pesagem; nvel da balana; tecla tara; display.
14
15
LIMPEZA DAS
BALANAS
ELETRNICAS
5- USO E
5 REFERNCIAS
4.4 Limpeza
6 REGISTROS
No aplicvel.
16
6- USO E
LIMPEZA DO
BANHO-MARIA
4.2 Caractersticas
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
3 MATERIAIS
Termmetro, gua destilada, sabo neutro, lcool
70%, esponja e panos adequados.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descrio dos componentes
Termostato automtico: de 20 C a 120 C.
Lmpada piloto: quando acesa indica que o banhomaria est ligado; ao atingir a temperatura desejada, a
luz se apagar.
Chave liga-desliga: com chave reversvel, que
seleciona a voltagem 110 ou 220 volts.
para
verificao
da
6- USO E
LIMPEZA DO
BANHO-MARIA
17
4.5 Limpeza
A limpeza feita semanalmente com gua e
detergente neutro.
Aps a limpeza, feita a desinfeco com lcool
70%.
5 REFERNCIAS
Manual de utilizao do banho-maria.
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de
alimentos ITAL.
6 REGISTROS
No aplicvel.
18
4.2 Limpeza
7- USO E
LIMPEZA
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
DA CAPELA
DE FLUXO
LAMINAR
3 MATERIAIS
Lmpada UV, detergente neutro, cido peractico
0,2 % ou lcool 70%.
4 PROCEDIMENTOS
4.1 Utilizao da capela de fluxo laminar
Antes de iniciar os trabalhos, fazer a desinfeco
com lcool 70%, de toda a parte interna do fluxo;
Ligar o aparelho;
Ligar a lmpada germicida e esperar 15 minutos, no
mnimo, para deslig-la;
Colocar todo o material necessrio para o
procedimento evitando o afastamento do fluxo laminar;
Manipular rapidamente as amostras, mas com
segurana para evitar erros e desperdcios. O descarte
de pipetas e outros materiais deve ser feito em
utenslio prprio que permanece prximo cabine do
fluxo laminar.
5 REFERNCIAS
Manual de Mtodos de Anlises Microbiolgicas em
Alimentos ITAL
BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas
aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo:
Melhoramentos, 1975.
LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de
Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000,
129 p.
6 REGISTROS
No aplicvel.
8- LAVAGEM,
PREPARO E
ESTERILIZAO
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
19
4 PROCEDIMENTOS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
3 MATERIAIS
lcool 70%, algodo hidrfilo, algodo hidrfobo,
autoclave, balana analtica, bastes de vidro,
destilador, deionizador para gua, ou aparelho de
osmose reversa, escovetes de diversos tamanhos,
esponjas de ao e de fibra sinttica, esptulas de ao
inoxidvel, estufa de esterilizao e secagem, equipada
com termmetro, papel alumnio ou papel Kraft, luvas
de amianto, luvas de borracha, provetas graduadas de
1000 mL, 500 mL, 250 mL e 100 mL de borossilicato
ou vidro neutro, tesoura, pina de ao inoxidvel,
indicadores de esterilizao (fita ou ampola com
suspenso de Bacillus stearothermophilus e Bacillus
subtillus), bico de Bunsen, trip, tela de amianto,
bqueres de borossilicato ou vidro neutro, estiletes,
fita adesiva tipo crepe ou barbante, gaze.
4.1.1 Lavagem
Lavar com gua e detergente, utilizando esponja e
escovete. Caso os materiais apresentem incrustaes
ou resduos gordurosos, proceder imerso destes
em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente
neutro.
Enxaguar dez vezes com gua corrente, enchendo e
esvaziando totalmente a vidraria.
Utilizar no ltimo enxgue, gua destilada ou
deionizada.
Deixar drenar a gua das vidrarias e secar em estufa
a 100 C.
20
8- LAVAGEM,
PREPARO E
ESTERILIZAO
4.3.2 Esterilizao
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
8- LAVAGEM,
PREPARO E
ESTERILIZAO
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
4.5.2 Tampas
Imergir em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e
detergente neutro por no mnimo 24 horas.
21
4.5.3 Esterilizao
Esse procedimento necessrio para tubos
utilizados para conter meios de cultura j estreis ou
para solues em ensaios complementares especficos.
8- LAVAGEM,
PREPARO E
ESTERILIZAO
DE MATERIAIS
PARA ANLISES
MICROBIOLGICAS
4.6.2 Esterilizao
22
5 REFERNCIAS
6 REGISTROS
No aplicvel.
4.7.2 Esterilizao
Embrulhar individualmente os bastes em papel
Kraft ou papel alumnio.
Esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min, ou em
estufa a 180 C, por 2 horas.
Identificar o material com data de esterilizao e
prova de esterilizao.
23
9- USO E
LIMPEZA DAS
ESTUFAS
BACTERIOLGICAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
3 MATERIAIS
Termmetro de mxima e mnima, detergente
neutro, lcool 70%, esponjas e panos de limpeza
adequados.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descrio dos componentes
Respiro: serve para expelir o excesso de calor e
manter a uniformidade da temperatura. Antes de ligar
necessrio remover a tampa plstica.
Lmpada piloto: quando acesa indica que a estufa
est ligada, ao atingir a temperatura desejada a luz se
apagar.
Regular o
programada.
termostato
para
temperatura
9- USO E
LIMPEZA DAS
ESTUFAS
BACTERIOLGICAS
4.4 Limpeza
A limpeza feita semanalmente.
Passar um pano umedecido com lcool 70%.
Se houver alguma sujeira, como pingos de amostras
incubadas, passar esponja com detergente neutro.
Retirar toda a espuma com um pano enxaguado
vrias vezes em gua limpa.
Aps a limpeza passar um pano umedecido com
lcool 70%.
5 REFERNCIAS
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de
alimentos ITAL.
24
6 REGISTROS
No aplicvel.
25
10- USO E
LIMPEZA DAS
ESTUFAS DE
ESTERILIZAO
E SECAGEM
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
Manual de Instrues da Estufa de Esterilizao e
Secagem.
3 MATERIAIS
Termmetro de mxima com trava, papel de
embrulho, Bacillus subtilis, fita adesiva, detergente
neutro, lcool 70%, esponja e panos de limpeza
adequados.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descrio dos componentes
Respiro: serve para expelir o excesso de calor e
manter a uniformidade da temperatura. Antes de ligar
necessrio remover a tampa plstica.
Lmpada piloto: quando acesa indica que a estufa
est ligada, ao atingir a temperatura desejada a luz se
apagar.
termostato
para
temperatura
10- USO E
LIMPEZA DAS
ESTUFAS DE
ESTERILIZAO
E SECAGEM
26
4.5 Limpeza
5 REFERNCIAS
Mtodos de Anlises Microbiolgicas para alimentos
LARA.
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de
alimentos ITAL
6 REGISTROS
No aplicvel.
11- USO E
LIMPEZA DO
FORNO DE
MICRO-ONDAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
Manual de Instrues de uso do forno micro-ondas.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Instrues de uso
Verifique se est corretamente ligado e sem nenhum
material entre a porta e o gabinete;
Verifique se o prato giratrio e seu suporte esto
bem encaixados toda a vez que ligar o forno;
Nunca ligue o forno vazio, pois isso pode provocar
fascas em seu interior;
Mantenha a tampa do guia de ondas sempre limpa:
resduos nesse local impedem a passagem das microondas, podendo provocar choque eltrico;
Se o material ou recipiente que esto dentro do
forno faiscarem durante a operao, mantenha a porta
27
11- USO E
LIMPEZA DO
FORNO DE
MICRO-ONDAS
5 REFERNCIAS
BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas
aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo:
Melhoramentos, 1975.
LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de
Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000.
6 REGISTROS
No aplicvel.
28
29
12- USO E
LIMPEZA DAS
GELADEIRAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
Manual de Instrues Geladeira / Freezer Consul.
Regular o
programada;
termostato
para
temperatura
3 MATERIAIS
Termmetro, detergente neutro e lcool 70%.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Finalidades
As geladeiras do Laboratrio de Microbiologia
apresentam duas finalidades:
As geladeiras 1 e 2 so utilizadas para estocagem
de material de laboratrio tais como meios de cultura,
reagentes e outros materiais pertinentes s anlises.
A geladeira 3, utilizada para armazenamento de
material contaminado e cepas.
5 REFERNCIAS
Mtodo de Anlises Microbiolgica para Alimentos
LARA.
6 REGISTROS APLICVEIS
No aplicvel.
13- USO E
LIMPEZA DO
HOMOGENEIZADOR
DE AMOSTRAS
(STOMACHER)
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
Manual de Instrues do Bag Mixer 400.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%, esponjas e panos de
limpeza adequados.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Descrio dos componentes
Boto do timer
Alavanca para a abertura e fechamento da porta
Conjunto de ps homogeneizadoras.
30
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
14- USO E
LIMPEZA DA
INCUBADORA
PARA BOLORES
E LEVEDURAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
31
3 MATERIAIS
4 PROCEDIMENTO
4.2 Limpeza
5 REFERNCIAS
14- USO E
LIMPEZA DA
INCUBADORA
PARA BOLORES
E LEVEDURAS
6 REGISTROS
No aplicvel.
32
15- USO E
LIMPEZA DA
AUTOCLAVE
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
Manual de Instrues da autoclave Phoenix.
3 MATERIAIS
33
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao da autoclave
15- USO E
LIMPEZA DA
AUTOCLAVE
34
15- USO E
LIMPEZA DA
AUTOCLAVE
4.3 Limpeza
Autoclaves de esterilizao de meios de cultura e
vidraria
A limpeza feita semanalmente com gua e
detergente neutro.
35
5 REFERNCIAS
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de
alimentos ITAL.
BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas
aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo:
Melhoramentos, 1975.
LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de
Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000.
6 REGISTROS
No aplicvel.
16- USO E
LIMPEZA DO
AGITADOR DE
TUBOS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
No aplicvel.
3 MATERIAIS
lcool 70% e algodo.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao do agitador de tubos
O aparelho deve ser ligado na corrente eltrica.
A chave liga/desliga deve ser posicionada na opo
LIGA.
Deve-se selecionar a agitao desejada (contnua ou
no).
Para agitar o tubo, basta, segurando firme, posicionlo sobre o suporte, na parte superior do aparelho e
pressionar para que seu funcionamento inicie.
36
4.2 Limpeza
Antes e depois do uso, o agitador deve ser limpo
com algodo embebido em lcool 70%.
5 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
17- USO E
LIMPEZA DO
CONTADOR DE
COLNIAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
No aplicvel.
3 MATERIAIS
Placa de petri com cultura e caneta para retroprojetor.
lcool 70% e algodo.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Utilizao do contador de colnias
Ligar o aparelho na corrente eltrica.
Lig-lo no boto liga/desliga este procedimento
acender a lmpada.
Colocar a placa com a cultura sobre a base
quadriculada.
Contar as colnias existentes.
Caso, o nmero de colnias seja muito elevado,
pode-se contar um quadrante e multiplicar por 20. Esta
37
4.3 Limpeza
Depois do uso, o equipamento deve ser limpo com
algodo embebido em lcool 70%.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
1 OBJETIVO
18- USO E
LIMPEZA DO
ESTERILIZADOR
A VCUO
2 CAMPO DE APLICAO
O contador de colnias um utenslio que auxilia na
contagem das colnias de micro-organismos cultivadas
nas placas de petri, atravs de sua observao na lupa,
e com iluminao.
5.2 Limpeza
Depois do uso, o agitador deve ser limpo com
algodo embebido em lcool 70%.
6 REFERNCIAS
3 REFERNCIAS NORMATIVAS
No aplicvel.
No aplicvel.
7 REGISTROS
4 MATERIAIS
Placa de petri com cultura e caneta para retroprojetor.
lcool 70% e algodo.
5 PROCEDIMENTO
5.1 Utilizao do contador de colnias
Ligar o aparelho na corrente eltrica.
Lig-lo no boto liga/desliga este procedimento
acender a lmpada.
Colocar a placa com a cultura sobre a base
quadriculada.
Contar as colnias existentes.
38
No aplicvel.
19- PESAGEM
DE AMOSTRAS
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
ISO 6887-1 : 2011.
3 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
lcool 70%;
Algodo;
Colher estril, pina estril, cabo e lmina de bisturi
estreis (de acordo com a amostra a ser pesada);
Bolsa plstica estril;
Balana de preciso;
Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Desinfetar com algodo e lcool 70% e ligar a
balana conforme IT MIC004;
4.2 Ligar a chama, ou utilizar a capela de fluxo laminar,
seguindo a IT MIC006;
39
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
20- PREPARO
DA SUSPENSO
INICIAL E
DILUIES
DECIMAIS DE
AMOSTRAS
40
1 OBJETIVO
5 PROCEDIMENTO
2 CAMPO DE APLICAO
3 REFERNCIAS NORMATIVAS
4 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
lcool 70%;
Algodo;
Tubos de ensaio ou frascos com diluente apropriado,
na quantidade necessria para a amostra (9 partes de
diluente para uma parte de amostra);
6 REFERNCIAS
No aplicvel.
ponteiras de 1 mL;
Micropipetador de 1 mL;
Agitador de tubos;
Homogeneizador de amostras (Stomacher);
Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar.
7 REGISTROS
No aplicvel.
1-13
NORMAS GERAIS
Procedimento Operacional Padro
41
1-PREPARAO
E
CONSERVAO
DE MEIOS DE
CULTURA
42
1-PREPARAO
E
CONSERVAO
DE MEIOS DE
CULTURA
RECOMENDAES GERAIS
Evitar usar meios vencidos (liofilizados e prontos
para uso); se usar, certificar-se com o controle de
crescimento de que realmente est funcionando.
No usar meios prontos para uso em tubos ou placas
que estejam ressecados.
43
2- CONTAGEM
TOTAL DE
MICRORGANISMOS
EM GUA
UTILIZANDO
O MEIO GAR
NUTRIENTE
44
4 REAGENTES E MATERIAIS:
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES:
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo de amostra
3 EQUIPAMENTOS:
Balana semianaltica; agitador de tubos; bico de
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de
0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 22 C +/- 1 C, e a
36 C +/- 1 C.
5.3 Incubao
Incubar a metade das placas de petri invertidas a 36
+/-1 C, durante 44 +/- 4 horas, e a outra parte a 22+/-1
C, durante 68 +/- 4horas.
2- CONTAGEM
TOTAL DE
MICRORGANISMOS
EM GUA
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Norma ISO 6222:1999.
UTILIZANDO
O MEIO GAR
NUTRIENTE
7 REGISTROS
No aplicvel.
45
3- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
ATIVIDADE DE
GUA MENOR
OU IGUAL A
0,95
46
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Conceitos
Colnia
Leveduras
Microrganismos aerbicos mesoflicos, os quais,
a 25C em meio gar micolgico sob as condies
estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem
colnias redondas, foscas ou no, sobre a superfcie do
meio, geralmente possuindo borda regular e superfcie
medianamente convexa.
Bolores
3 EQUIPAMENTOS
Balana semianaltica; agitador de tubos; bico de
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador
de 0,1 a 1 mL; incubadora a 25 C +/- 1 C.
3- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
7 REGISTROS
5.4 Incubao
GUA MENOR
0,95
devem
ser
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
ATIVIDADE DE
OU IGUAL A
contados
47
4- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
ATIVIDADE DE
GUA MAIOR
QUE 0,95
48
4 REAGENTES E MATERIAIS:
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
anlises microbiolgicas.
ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral
para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e
diluies decimais para anlises microbiolgicas.
ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de
produtos de alimentao animal Orientaes gerais
na preparao e produo de meios de cultura.
IT MIC018 e IT MIC019.
3 EQUIPAMENTOS:
Balana semianaltica; agitador de tubos; bico de
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de
0,1 a 1 mL; incubadora a 25 C +/- 1 C.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Conceitos
Colnia
Acmulo de massa microbiana localizada e visvel
desenvolvida sobre ou dentro de meio nutriente slido
a partir de uma partcula vivel.
Leveduras
Microrganismos aerbicos mesoflicos, os quais,
a 25 C em meio gar micolgico sob as condies
estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem
colnias redondas, foscas ou no, sobre a superfcie do
meio, geralmente possuindo borda regular e superfcie
medianamente convexa.
Bolores
Microrganismos filamentosos, mesoflicos e
aerbicos, os quais, em meio gar micolgico sob as
condies estabelecidas nesta parte da ISO 21527,
desenvolvem propgulos/gametngios ou colnias,
achatados ou aveludados, geralmente com corpos de
frutificao ou esporos coloridos.
4- CONTAGEM
DE BOLORES E
LEVEDURAS EM
PRODUTOS COM
ATIVIDADE DE
GUA MAIOR
QUE 0,95
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA:
7 REGISTROS:
ser
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
5.4 Incubao
Bolores e leveduras
separadamente.
contados
49
5- CONTAGEM DE
Enterobacteriaceae
50
4 REAGENTES E MATERIAIS:
de
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo de amostra
3 EQUIPAMENTOS
5.3 Incubao
5- CONTAGEM DE
Enterobacteriaceae
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Norma ISO 21528-2:2004.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
51
6- CONTAGEM
PADRO DE
MICRORGANISMOS
MESFILOS
AERBIOS
ESTRITOS E
FACULTATIVOS
VIVEIS
52
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
anlises microbiolgicas.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo de amostra
Pesar a amostra, e efetuar sua suspenso inicial e
suas diluies decimais conforme necessidade.
5.3 Incubao
IT MIC018 e IT MIC019.
3 EQUIPAMENTOS
Balana
de
preciso;
Equipamento
de
homogeneizao; bico de Bunsen ou capela de
fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa
bacteriolgica a 36 +/- 1 C.
6- CONTAGEM
PADRO DE
MICRORGANISMOS
MESFILOS
AERBIOS
ESTRITOS E
FACULTATIVOS
VIVEIS
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA:
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento.
IN No 62, 26 de agosto de 2003.
7 REGISTROS:
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
53
7- CONTAGEM
TOTAL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
54
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
anlises microbiolgicas.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo de amostra
Pesar a amostra, e efetuar sua suspenso inicial e
suas diluies decimais conforme necessidade.
5.3 Incubao
IT MIC018 e IT MIC019.
3 EQUIPAMENTOS
Balana
de
preciso;
Equipamento
de
homogeneizao; bico de Bunsen ou capela de
fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa
bacteriolgica a 36 +/- 1 C; banho-maria a 45 C.
7- CONTAGEM
TOTAL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
55
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA:
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento.
IN No 62, 26 de agosto de 2003.
7 REGISTROS:
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
8- NMERO MAIS
PROVVEL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
EM GUA
56
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Preparo de amostra
3 EQUIPAMENTOS
Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar;
micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a
36 +/- 1 C; banho-maria a 45 C.
8- NMERO MAIS
PROVVEL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
EM GUA
5.2 Inoculao
57
5.4.1Confirmao de totais
5.3 Incubao
Incubar os tubos a 36 +/- 1 C, por 24 a 48 horas.
5.4 Leitura
A positividade para coliformes totais dada pela
formao de gs (pelo menos 1/10) nos tubos de
Durham e por efervescncia sob gentil agitao da
amostra.
Anotar o nmero de tubos positivos para cada srie.
8- NMERO MAIS
PROVVEL DE
COLIFORMES
TOTAIS E
TERMOTOLERANTES
EM GUA
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento.
IN No 62, 26 de agosto de 2003.
BAM. Bacteriological Analytical Manual. [Online].
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
58
9- CONTAGEM DE
Staphylococcus
aureus EM
GAR BAIRDPARKER
59
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
anlises microbiolgicas.
ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral
para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e
diluies decimais para anlises microbiolgicas.
ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de
produtos de alimentao animal Orientaes gerais
na preparao e produo de meios de cultura.
IT MIC018 e IT MIC019.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; agitador de tubos; bico de
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de
0,1 a 1 mL; estufa a 35C +/- 1 C.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo de amostra
Pesar a amostra e/ou efetuar sua suspenso inicial e
suas diluies decimais conforme necessidade.
5.3 Incubao
Incubar as placas invertidas a 35 C por 24 +/2horas.
Olhar as placas e marcar, no fundo das mesmas
quaisquer colnias atpicas presentes.
Reincubar por mais 24 +/- 2 horas, e marcar as
colnias tpicas e atpicas.
9- CONTAGEM DE
Staphylococcus
aureus EM
GAR BAIRDPARKER
5.4 Confirmao
Selecionar 5 colnias tpicas e 5 atpicas para semear
em tubos contendo caldo BHI, e incubar a 35 ou 37 C
por 24 +/- 2horas.
Adicionar, em tubos estreis, 0,1 mL da cultura a 0,3
mL de coaguplasma e incubar a 35 ou 37 C, por 4 a
6 horas. Verificar os tubos, inclinando-os para ver se
houve coagulao.
60
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
9- CONTAGEM DE
Staphylococcus
7 REGISTROS
No aplicvel.
aureus EM
GAR BAIRDPARKER
8 ANEXOS
No aplicvel.
61
10- DETECO
E ENUMERAO
DE Listeria
monocytogenes
62
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
anlises microbiolgicas.
ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral
para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e
diluies decimais para anlises microbiolgicas.
ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de
produtos de alimentao animal Orientaes gerais
na preparao e produo de meios de cultura.
IT MIC018 e IT MIC019.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo da amostra
Pesar a alquota de amostra representativa para o
produto em uma saqueta estril.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Homogeneizador de amostras
(stomacher); agitador de tubos; bico de Bunsen ou
capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL;
estufa bacteriolgica a 36 C +/- 1 C, e a 41,5 C +/- 1
C; banho-maria a 37 +/- 1C.
10- DETECO
E ENUMERAO
DE Listeria
monocytogenes
63
5.4 Isolamento
10- DETECO
E ENUMERAO
DE Listeria
monocytogenes
64
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
10- DETECO
E ENUMERAO
7 REGISTROS
No aplicvel.
DE Listeria
monocytogenes
8 ANEXOS
No aplicvel.
65
11- Deteco de
Salmonella
66
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
anlises microbiolgicas.
ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral
para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e
diluies decimais para anlises microbiolgicas.
ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de
produtos de alimentao animal Orientaes gerais
na preparao e produo de meios de cultura.
IT MIC018 e IT MIC019.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Homogeneizador de amostras
(stomacher); agitador de tubos; bico de Bunsen ou
capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL;
estufa bacteriolgica a 36 C +/- 1 C, e a 41,5 C +/- 1
C; banho-maria a 37 +/- 1C.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo de amostra
Pesar a alquota de amostra representativa para o
produto em uma saqueta estril.
5.4 Isolamento
11- Deteco de
Salmonella
67
Interpretao:
a) fundo:
5.5 Seleo
Selecionar, de cada meio seletivo, pelo menos uma
colnia tpica ou suspeita, e, em seguida, mais quatro
colnias, caso a primeira seja negativa.
Estriar as colnias selecionadas em placas contendo
gar nutriente, de forma a se formarem colnias
isoladas e incubar, as placas invertidas a 37+/- 1 C, por
24+/- 3 horas.
11- Deteco de
Salmonella
68
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Norma ISO 6579:2002.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
12- CONTAGEM
DE Bacillus
cereus POR
INCUBAO A
30 C
69
4 REAGENTES E MATERIAIS
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo da amostra
5.2 Inoculao
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; agitador de tubos; bico de
Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador
de 0,1 a 1 mL; estufa a 30C +/- 1 C; banho-maria a
aproximadamente 80 C; microscpio.
DE Bacillus
cereus POR
12- CONTAGEM
INCUBAO A
30 C
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Norma ISO 7932:2004.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
70
13- CONTAGEM
DE Clostridium
perfringens
71
4 REAGENTES E MATERIAIS:
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Preparao de amostras-teste,
suspenso inicial e diluies decimais para anlises
microbiolgicas.
ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos
de alimentao animal Orientaes gerais para
anlises microbiolgicas.
ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral
para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e
diluies decimais para anlises microbiolgicas.
ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de
produtos de alimentao animal Orientaes gerais
na preparao e produo de meios de cultura.
IT MIC018 e IT MIC019.
3 EQUIPAMENTOS
Balana
de
preciso;
Equipamento
homogeneizao; banho maria a 46 C;
de
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO
5.1 Pesagem e preparo da amostra
Pesar a amostra, e efetuar sua suspenso inicial e
suas diluies decimais conforme necessidade.
5.2 Inoculao
Dispensar em duplicata, 1 mL de amostra em placas
de petri identificadas.
Verter cerca de 15 mL de gar SC sobre a amostra,
homogeneizar e esperar solidificar. Verter mais 5 a 10
mL de gar como cobertura.
5.3 Incubao
Incubar as placas de petri invertidas em jarras de
anaerobiose a 37 +/-1 C, durante 20 +/- 2 horas.
13- CONTAGEM
DE Clostridium
perfringens
colnias
presumidamente
de
C.
5.5 Confirmao
Selecionar 5 colnias de cada amostra para
confirmao.
72
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Norma ISO 7937:2004.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.