Deteco de Brucelose e Leptospirose em sunos selvagens em New

South Wales
C Ridoutt,a A Lee,a B Moloney,b PD Massey,c N Charmand and D Jordane*

Objectivo Determinar a presena e estimar a prevalncia de Brucella

suis, Leptospira interrogans sorovar Pomona (tratado aqui como L. pomona) e
Leptospira borgpetersenii sorovar Hardjo (tratado aqui como L. hardjo) em sunos
selvagens abatidos em New South Wales (NSW), Australia.
Mtodos: Durante 2012 e 2013, 239 amostras de soro foram coletadas de
sunos selvagens mortos como pragas ou em jogo em NSW. Todos os soros foram
submetidos ao teste de rosa-bengala para B. suis e os positivos foram sujeitos ao teste de
fixao do complemento (CFT). Foram feitas tentativas para detectar B. suis por cultura
e PCR em amostras positivas no TFC. Todos os soros foram testados separadamente
quanto presena de anticorpos para L. Pomona e L. hardjo usando o teste de
aglutinao microscpica.
Resultados: De 238 amostras testadas, 7 foram positivos (4 com ttulos no
CFT 32) para B. suis anticorpos (3% de soroprevalncia). No entanto, B. suis no foi
detectada em cultura ou por PCR. Dos 239 soros testados para anticorpos Pomona L.,
126 amostras foram positivas (53%) e 9 (4%) foram positivas para L. hardjo.
Concluses: Os resultados so a primeira evidncia concreta da infeco
por B. suis em sunos selvagens no norte de NSW, fornecendo uma explicao plausvel
para recentes casos humanos e caninos de brucelose relacionados com caa destes
animais. O aumento da soroprevalncia de L. pomona ocorreu em anos precedidos de
inundaes e pragas de roedores, o que sugere um potencial de infeco zoontica
muito maior do que se pensava anteriormente. Orientao para a comunidade deve se
concentrar em estimular a adoo de melhores prticas de higiene durante a caa porco
e considerao de vacinar os animais contra leptospirose.
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Keywords dogs; feral pigs; leptospirosis; swine brucellosis; zoonotic

disease
Abbreviations CFT, complement fixation test; MAT, microscopic
agglutination test; NSW, New South Wales; RBT, rose-bengal test
Bactrias do gnero Brucella e Leptospira so agentes zoonticos que
infectam sunos e possuem distribuio quase global. A Brucelose suna causada por
cocobacilus aerbios Gram-negativos da espcie B. suis e sorovares 1, 2 e 3. Os seres
humanos normalmente adquirem a infeco de B. suis acidentalmente via ingesto ou
contaminao de feridas cutneas. A doena resultante pode ser grave e prolongada.
Sunos selvagens so um importante reservatrio de B. suis em partes da Europa,
Amrica do Norte, Amrica do Sul, sia e frica; A B. suis tambm tem sido relatada
em sunos selvagens no norte da Austrlia, em particular, Queenslandia. Assumiu-se que
New South Wales (NSW) est livre de infeco por B. suis, apesar de no haver grandes
obstculos para incurses de sunos selvagens em grande parte da fronteira comum com
Queenslandia. Em 2008, cerca de 200 amostras de soro de sunos selvagens no noroeste
da NSW foram testados, mas considerado negativo para anticorpos anti B. suis. No
entanto, em 2012 e 2013, as notificaes de requisito do NSW Doenas Animais e
Pragas Animais (Surtos de Emergncia) da lei de 1991 foram feitas para um dos autores
(AL) com base na deteco de altos ttulos de anticorpos B. suis em seis ces de caa no
norte da NSW em cinco ocasies distintas. Trs destes ces apresentaram aos
veterinrios com sintomas de orquite. Ao longo do perodo de 1991 a 2012, houve uma
mdia anual de 34 notificaes de brucelose humana na Austrlia, com um leque de 16
54 notificaes por ano. Desde 1991, 83% das notificaes da doena humana foram
relatados de Queensland, onde a caa de sunos selvagens o fator de risco mais comum
para infeco. Para o perodo 2009-10, os dados das espcies estavam disponveis para
menos de 30% das notificaes. Destes, 22 de 27 notificaes correspondiam B. suis;
o restante dos casos correspondiam infeco por B. melitensis adquirida no exterior.
Ambos sunos, selvagens e domsticos, so bem conhecidos fontes
potenciais de Leptospira spp. aos seres humanos e animais de fazenda, com L.pomona
sendo o sorovar dominantemente transmitido, os roedores pode desempenhar um papelchave na propagao da infeco. As leptospiras podem ser transmitidas entre animais
(incluindo os humanos) pelo contato com a urina infectada, sangue e fluidos de parto ou

aborto, sendo a porta de entrada as superfcies mucosas ou abrases cutneas. As

leptospiras tambm so disceminadas atravs de gua contaminada, alimentos,
pastagens e do solo e atravs de aerossois, quando os animais urinam. Em animais, o
aumento na soroprevalncia de Leptospira spp. em rebanho tm sido associadas
liberao de leptospiras do vertissolo argiloso para o lenol fretico aps fortes chuvas.
As leptospiras podem infectar bovinos suscetveis e / ou hospedeiros de
manuteno, como sunos selvagens. Muitos animais infectados com Leptospira spp.
so assintomticos e fornecer o reservatrio de contgio para posterior transmisso. Em
NSW, a soroprevalncias de 8,5%, 13,9% e 20% para L. pomona foram detectados em
suinos selvagens. No sul de Queensland, a verdadeira prevalncia de Leptospira spp. de
49%, foram estimados e nos nveis de Queensland do Norte so descritos a variar entre
0% e 33%, dependendo do ano.
O potencial de sunos selvagens para atuar como um vetor para doenas do
gado que na Austrlia (especialmente infeces virais exticas) bem reconhecida. No
entanto, o papel que os sunos selvagens desempenham na transmisso de zoonoses para
os seres humanos na Austrlia tem recebido menos ateno, provavelmente por causa da
dificuldade de estudar diretamente a este grupo de hospedeiros. Alm disso, os
caminhos para a transferncia de contgio entre os sunos selvagens para os seres
humanos tm sido geralmente reservada s situaes de "nicho", como dentro de jogo
indstria da carne de suno. Agora isso est mudando com a crescente popularidade da
caa recreativa de sunos selvagens, uso de sunos selvagens como fonte de alimento e
crescimento no tamanho e na distribuio da populao de sunos selvagens. A fim de
evitar infeces humanas e proteger animais domsticos a partir desses patgenos, as
autoridades de sade e agricultura exigem uma compreenso da prevalncia da infeco
na populao de sunos selvagens. O objetivo deste estudo foi, portanto, para descrever
a presena e estimar a prevalncia de B. suis, L. pomona e L. hardjo em populaes de
porcos selvagens encontrados em vrias regies do NSW.
Materiais e metodos
Colheita de soro
As amostras de soro foram coletadas de sunos selvagens localizadas em seis
regies amostrais em todo NSW durante o perodo de maio de 2012 a junho de 2013. De
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acordo com a Canon e Roe, quando a prevalncia da doena em uma grande populao
de animais de 1%, aproximadamente, 300 devem ser colhidas amostras para ter 95%
de certeza de detectar a doena. Neste levantamento, os constrangimentos prticos sobre
o nmero de animais disponveis para abate e amostragem significa que apenas 239
animais puderam ser avaliados no perodo de estudo (Figura 1). Um mtodo baseiaintencional e convenincia foi utilizado para obter amostras. A amostragem aleatria
no era vivel por causa dos nmeros e distribuio de sunos selvagens em todo NSW
desconhecidos. Caadores de porcos selvagens (amadores e profissionais), guardas
florestais da Pecuria de sade e autoridades de pragas e guardas do NSW Parques
Nacionais e Vida Selvagem de servio foram as fontes de amostras de sunos selvagens.
Obteno de amostras por esta abordagem tinha a desvantagem de no necessariamente
verdadeiramente refletindo o estado de infeco de todos os sunos selvagens em NSW,
embora tivesse o forte vantagem de alvejar o subconjunto da populao de sunos
selvagens que representa o maior risco para os seres humanos. A partir de cada animal,
uma amostra de sangue coagulado foi depositado num tubo liso 10 mL de uma inciso
abaixo do membro anterior ou na veia jugular. As amostras foram inicialmente mantidos
temperatura ambiente at a formao de cogulos, seguido de refrigerao a 4 C e,
em seguida, a apresentao em recipientes refrigerados para o Laboratrio de
Diagnstico Veterinrio Estado em Elizabeth Institute Agricultura Macarthur, Menangle,
NSW. As amostras foram centrifugadas durante aproximadamente 10 min a 3000 rpm
chegada e anlises ocorreu dentro de 48 h.
Testes sorolgicos
Todas as amostras de soros foram inicialmente testados para anticorpos por
meio do teste de rosa de bengala (RBT), com apenas os soros positivos testados usando
o teste de fixao de complemento (CFT), seguindo tcnicas de diagnstico padro
australiano. RBT um teste direto para Brucella, porem como B. abortus e B. melitensis
no ocorrem na populao animal australiana, ele serve como um teste de triagem til
para B. suis quando juntamente com o CFT. Os soros foram classificados como positivo
para o RBT se rendendo um 1 ttulo e foram classificados positivo para CFT se
rendendo um ttulo 8. S foram classificados como positivos para B. suis se ambos os
testes foram positivos. A sensibilidade e especificidade de RBT tm sido relatados como
79,1% e 81,2%, respectivamente.

Observe que o anticorpo CFT para Brucella geralmente considerado como

sendo mais altamente especfica para a infeco com este organismo (sensibilidade:
49,1%, especificidade de 90,8%). Usando os dois testes custo-efetivo e melhora a
preciso global, combinando a maior sensibilidade de um teste (RBT) com a maior
especificidade do outro (CFT). Observe que o anticorpo CFT para Brucella geralmente
considerado como sendo mais altamente especfica para a infeco com este organismo
(sensibilidade: 49,1%, especificidade de 90,8%). Usando os dois testes econmico e
melhora a preciso global, combinando a maior sensibilidade de um teste (RBT) com a
maior especificidade do outro (CFT) .Duas testes separados de aglutinao
microscpica (MAT) foram usados para detectar anticorpos de L. pomona e L. hardjo.23
Em cada caso, os soros foram consideradas positivas se rendendo um 50 MAT titre,
com poos de diluio incrementando por duas vezes em cada tempo: 100, 200, 400,
800, 1600 e 3200. Estes ensaios MAT foram avaliados como com uma sensibilidade de
0,93 e uma especificidade de 0,97.24
Cultura e ananlise por PCR

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Os soros que testou positivo para ambos RBT e CFT foram submetidas a cultura e PCR para
deteco de B. suis. Para a cultura, cada amostra de soro foi inoculada numa placa de agar de sangue de
ovelha a 5% e uma Thayer-Martin (MTM) placa de gar modificado, com ambas as placas foram
incubadas a 37 C em uma atmosfera de 5-10% de CO2. As placas foram examinadas diariamente para o
crescimento durante 7 dias. Para a identificao de PCR, estirpes padro de B. ovis serviu como um
controlo positivo. Os iniciadores do gene alvo bcsp31, que est presente em todos Brucella spp.
Analise estatistica
Descriptive statistics and exact binomial 95% confidence intervals were generated for B. suis
and L. hardjo, because of the sparseness of positive titres in the data. For L. pomona, it was possible to
use mixed effects logistic modelling to estimate the prevalence of infection and corresponding 95%
confidence intervals and in doing so account for the effect of clustering on estimates. The latter model
consisted of region as fixed effect and culling locations within regions as random effect. All analysis was
performed in Stata version 12.1 (Stata Corporation, College Station, TX, USA).
Resultados
Em geral, os anticorpos B. suis foram detectados em 7 de 238 amostras, dando uma
seroprevalncia em todo o levantamento de 2,9%. Positivo B. suis ttulos foram distribudos de forma
desigual entre as regies analisadas, com todos os positivos estando presente no norte da NSW (Figura 1,
Tabela 1). Uma amostra de alta B.suis ttulo veio de um porco com orquite da regio de amostragem 1 e o
restante eram de amostragem regio 3. A distribuio da dimenso de ttulos positivos para B. suis
mostrado na Figura 2a. Organismos Brucella suis no foram cultivadas em sangue ou detectado por
anlise de PCR.
Ttulos de anticorpos elevados para L. pomona foram detectados em todas as regies, com
uma seroprevalncia de todo o levantamento de 53% (Tabela 1). Ttulos MAT 800 foram registrados
para> 60% das amostras positivas L. pomona (Figura 2b). A soroprevalncia de L. pomona foi elevada
nas regies do norte de amostragem (regies 1, 2 e 3), assim como a regio de amostragem 5, e baixa em
regies de amostragem 4 e 6 (Tabela 1). De 239 amostras, 9 foram positivas para L. hardjo, com o

Positivos agrupados em regies de amostragem 1 e 3 (Tabela 1). Os ttulos para anticorpos L. hardjo
foram muito menores do que os de L. pomona (Figura 2 c).
Discusso
Os resultados fornecem bons indcios sobre a infeco por B. suis em sunos selvagens na
NSW porturia, ainda que em nveis baixos. Vrios ttulos elevados para Brucella CFT> 32 (Figura 2a)
so considerados como tendo um alto valor preditivo para a presena de Brucella na populao, devido
alta especificidade do ensaio CFT.26 A cultura e a PCR de B. suis foram tentadas para se obter provas
conclusivas da presena do patgeno, mas no foram obtidos resultados positivos, o que pode ser devido
utilizao apenas de amostras de soro positivos para o cultivo (no de sangue total), e porque os suinos
em estudo no estavam em um estado de bacteremia no momento da amostragem. O ltimo consistente
com a patognese da infeco por Brucella em que os animais s exprimem uma breve bacteremia
transitria aps a infeco.27
As amostras positivas para B. suis tambm ajudam a entender melhor a distribuio dos casos
em ces utilizados na caa, pois estes ocorreram na mesma regio em que a maioria dos doropositivos
foram detectados neste estudo. Alem disso, a regio de amostragem com maior numero de de
soropositivos para B. suis est geograficamente conectado fronteira da queenslandia, onde h dcadas
que se tem conhecimento da ocorrncia da infeco em sunos selvagens. 4,5 Grande parte dessa fronteira
entre NSW e Queensland est aberta ao transito de sunos selvagens, seja pelo contrabando por caadores
ou pelo livre transito pela fronteira. Embora os dados para a prevalncia de anticorpo B. suis indiquem
uma baixa probabilidade de exposio humana, o risco para a sade deve ser considerado alto devido
gravidade e a prolongada durao da doena em seres humanos.2
A soroprevalncia de L. pomona observada neste estudo muito maior do que os
anteriormente registrados na Austrlia. Uma seroprevalncia estimada de 8,5% foi registrada no noroeste
NSW 5, em comparao com os 53% em todas as regies em estudo. Alm disso, foram registrados um
grande nmero de ttulos elevados (MAT 800), sugerindo infeco atual ou recente com L. pomona em
larga escala.15 A seca prolongada seguida de alta pluviosidade e as inundaes nos poucos anos antes do
estudo poderia ser responsvel por esses resultados.

13,28

A inundao foi mais pronunciado no norte da

NSW onde a soroprevalncia de L. pomona foi muito maior do que em outras regies. Em geral, as

condies mais midas, promover a disseminao e sobrevivncia das leptospiras. Alm disso, os
roedores so mais abundantes em boas estaes, pode atuar como hospedeiros de diferentes sorotipos de
Leptospira e potencialmente exacerbar a disseminao de contgio atravs da contaminao do meio
ambiente com a urina e fezes.29
A proporo de ttulos positivos para L. hardjo na amostra foi baixa em comparao com L.
pomona, indicando que os sunos selvagens podem ter um papel limitado como hospedeiros acidentais de
este sorotipo nas regies de NSW pesquisadas.

15

No entanto, a preveno da transmmisso de todos

sorovares de Leptospira spp. de sunos selvagens aos animais domsticos requer a considerao, dado o
potencial de perdas econmicas.30 Vacinas muito eficazes esto disponveis

31

e so, provavelmente, a

medida de preveno mais vivel custo-efetivamente.

Em resumo, este trabalho fornece fortes evidncias de que B.suis persiste na populao de
sunos selvagens de NSW, embora a baixa prevalncia em animais de tiro para o alimento ou destrudos
como pragas. A infeco com L. pomona era muito comum. Conclui-se que as pessoas que tm contato
com os sunos selvagens na NSW esto em risco de adquirir a doena zoontica, representando uma
consequncia grave para o bem-estar. Os indivduos em risco de exposio a sunos selvagens durante a
caa e abate deve, portanto, adoptar medidas de higiene pessoal que impeam o contacto com os agentes
infecciosos identificadas neste trabalho. 32 Algumas medidas incluem mas no se limitam ao uso de luvas
e cobertura de quaisquer cortes expostas. Veterinrios tambm precisa considerar a possibilidade de que
os ces de caa-de porco podem adquirir a infeco por B. suis e que os porcos selvagens que podem
transmitir Leptospira spp. para animais domsticos.