Nama Kelompok :

MUH. SAIFUL ASRAT

(F1F1 12 110)

I MADE SATRIA BINAWA A.

(F1F1 12 135)
HALAMAN 68

in the terget tissue). The first step in this process is the construction of a library
(fragments of DNA) of genetic material from an appropriate cell. For example, if
a particular receptor for human diabetes is the great, then an appropriate cell from
which to make a library might be a human pancreatic cell (secretion of insulin).
Genomic DNA consists of the complete DNA from a cell severed in random pieces
with restriction endonucleases. Though the complete genetic code of the organism
is contained in this library (the genome), the gene of interest may be difficult to
isolate.
There are several practical reasons for making another type of library a
complementary DNA (cDNA) library from the host cell genetic material.
Discussion of these types of libraries requires discussion of the process of DNA
transcription. Protein synthesis occurs when the genetic code of a portion of the
DNA helix is used by the anzyme RNA polymerase to make a corresponding
coded molecule called ribonucleic acid (RNA). Because the code comes from a
particular gene coding for a specific protein and the RNA transcribes this code and
carries it to a large and complex subcellular molecular machine known as a
ribosome for translation into a protein sequence, the RNA is referred to as
messenger RNA (mRNA). Of note is the fact that for every protein synthesized in
the cell (including receptors), there is a correspondingly unique mRNA. In highly
differentiated cells, the mRNA for a particular protein may represent up to 10% or
more of the total RNA, while rare messages may exist in a ratio of only 1 in 1
million.
Only a fraction of the total genome is transcribed into RNA. However,
there are advantages to cloning a cDNA library for the isolation of particular
receptor. First, mRNA exists for proteins actively synthesized by the cell.
Therefore, if the receptor of interest is known to exist naturally in the cell.
Therefore,if the receptor of interest is known to exist naturally in the cellfrom
which the library is to be made, then the mRNA for that protein may exist in high
quantiues ( greater than the single gene in the genome). Also ,there are practical
considerations, such as ease of practical considerations, such as ease of
parifacation and isolation of Mrna, that favor cDNA library production .
A copy of the piece oh DNA from wich the mRna was transcribed can be
made from the mRNA was transcribed can be made from the mRNA. First, a

single strand of DNA is made from the mPNA by the enzyme reverse trancriptase.
The resulting single- standed DNA forms a hairpin structure, thereby providing a
primer for the synthesis of a comple mentary starnd of DNA to be made by DNA
polymerase. Another method of making cDNA from mRNA is with the enzyme R
Nase H,from E. coli, wich recognizes RNA DNA hybrids and digets the RNA
into short pieces. These pieces remain hybridized to the first DNA strand and
serve as hybrids for E. coli DNA polymerase I, which synthesizes double
stranded DNA from the original DNA template . The result of either of these
proccsses is a piece of double- stranded cDNA containing the genetic material to
produce the protein of interest.
Terjemahan :
dalam jaringan terget). Langkah pertama dalam proses ini adalah pembangunan
(fragmen DNA) dari materi genetik dari sel yang tepat. Sebagai contoh, jika
reseptor tertentu untuk diabetes manusia adalah besar, maka sel yang sesuai dari
yang untuk membuat fragmen mungkin sel pankreas (sekresi insulin) pada
manusia. Genomic DNA terdiri dari DNA yang lengkap dari sel terputus dalam
potongan acak dengan endonuklease restriksi. Meskipun kode genetik lengkap
organisme yang terkandung di fragmen ini (genom), gen yang diinginkan
mungkin sulit untuk mengisolasi. Ada beberapa alasan praktis untuk membuat
jenis lain dari perpustakaan DNA komplementer fragmen (cDNA) - dari materi
genetik sel inang. Diskusi jenis perpustakaan membutuhkan pembahasan proses
transkripsi DNA. Sintesis protein terjadi ketika kode genetik sebagian dari heliks
DNA yang digunakan oleh polimerase enzim RNA untuk membuat molekul kode
yang sesuai disebut asam ribonukleat (RNA). Karena kode berasal dari gen
tertentu untuk protein tertentu dan RNA mentranskripsi kode ini dan
membawanya ke mesin molekul subselular yang besar dan kompleks yang dikenal
sebagai ribosom untuk diterjemahkan ke dalam urutan protein, RNA ini disebut
sebagai utusan RNA ( mRNA). Dari catatan adalah fakta bahwa untuk setiap
protein disintesis dalam sel (termasuk reseptor), ada mRNA. Dalam sel yang
sangat dibedakan, mRNA untuk protein tertentu dapat mewakili sampai 10% atau
lebih dari total RNA, sedangkan pesan yang jarang mungkin ada dalam rasio
hanya 1 dalam 1 juta.
Hanya sebagian kecil dari total genom ditranskripsi menjadi RNA.
Namun, ada keuntungan untuk kloning fragmen cDNA untuk isolasi reseptor
tertentu. Pertama, mRNA ada untuk protein aktif disintesis oleh sel. Oleh karena
itu, jika reseptor yang menarik diketahui ada secara alami dalam sel. Oleh karena
itu, jika reseptor yang menarik diketahui ada secara alami di cellfrom yang
perpustakaan harus dibuat, maka mRNA untuk protein yang mungkin ada dalam

jumlah tinggi (lebih besar dari gen tunggal dalam genom). Juga, ada pertimbangan
praktis, seperti kemudahan pertimbangan praktis, seperti kemudahan perifikasi
dan isolasi mRNA, yang mendukung produksi perpustakaan cDNA.
Salinan potongan DNA diman mRNA yang ditranskripsikan dapat dibuat
dari mRNA transkripsi dapat dibuat dari mRNA. Pertama, untai tunggal DNA
dibuat dari mPNA oleh enzim membalikkan trancriptase. Sehingga DNA standed
The single membentuk struktur jepit rambut, sehingga memberikan primer untuk
sintesis Starnd mentary comple DNA yang akan dilakukan oleh polimerase DNA.
Metode lain pembuatan cDNA dari mRNA adalah dengan enzim R Nase H, dari
E. coli, mengakui hibrida RNA-DNA dan digets RNA menjadi potonganpotongan pendek. Potongan-potongan ini tetap hibridisasi ke untai DNA pertama
dan berfungsi sebagai hibrida untuk E. coli DNA polimerase I, yang mensintesis
DNA -stranded ganda dari template DNA asli. Hasil baik dari proses ini adalah
bagian dari ganda cDNA terdampar mengandung materi genetik untuk
menghasilkan protein yang menarik.