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UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE CIENCIAS
GUA LABORATORIO BIOLOGA DE ORGANISMOS
PRCTICA 1
BIOSEGURIDAD Y MICROSCOPIA
BIOSEGURIDAD
Si bien la palabra seguridad puede evocar trminos como "guardias, alarmas y armas de fuego", la
bioseguridad abarca mucho ms que eso. Se trata de un conjunto de medidas preventivas que tiene
como objetivo proteger la salud y la seguridad de las personas frente a diferentes riesgos
relacionados con agentes biolgicos, fsicos, qumicos y mecnicos. En los laboratorios de ciencias
biolgicas, estas medidas incluyen una serie de prcticas para evitar el uso inadecuado de agentes
patgenos peligrosos y de toxinas, as como para prevenir su propagacin.
Para el trabajo dentro del laboratorio, los estudiantes tienen la obligacin de leer y cumplir el
siguiente declogo, lo cual permitir un mejor desarrollo de las clases y garantizar su seguridad
disminuyendo el riesgo de posibles accidentes.

Nota: En la eventualidad de daos generados a equipos, accesorios, instrumentos de medicin y


vidriera por descuido, mal uso u otra accin diferente al normal funcionamiento, el causante debe
cubrir los costos que impliquen el correspondiente arreglo o reemplazo.

Para separar adecuadamente los residuos generados en laboratorios y talleres de la Universidad de


los Andes, es importante recordar los siguientes criterios:

Con base en la informacin anterior, responda las siguientes preguntas:


1. Qu elementos de proteccin personal deben usarse durante las prcticas de laboratorio en
Biologa de Organismos? En qu casos?
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2. Mencione dos accidentes que podran evitarse si se siguen las medidas de bioseguridad
mencionadas.
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MICROSCOPA
Un microscopio es un instrumento que permite la observacin de objetos muy pequeos que no
pueden ser apreciados a simple vista. Existen varios tipos de microscopios y su clasificacin se basa en
el sistema a travs del cual se genera la imagen. De esa manera, los microscopios que utilizan luz y
lentes convexos para magnificar la muestra de inters se denominan microscopios pticos; aquellos
que utilizan exclusivamente electrones para iluminar los preparados son llamados microscopios
electrnicos y los microscopios de sonda de barrido, por su parte, emplean una sonda para crear un
perfil de la muestra a medida que la escanean.
Esta prctica estar enfocada en los microscopios de tipo ptico, de los cuales evaluaremos las partes
que lo conforman y las funciones bsicas que pueden ajustarse en el instrumento para mejorar las
propiedades pticas segn nuestra necesidad.
A continuacin se presentan algunas de las pautas para utilizar correctamente un microscopio:
Precauciones a tener en cuenta con los microscopios

SIEMPRE verifique el estado fsico del microscopio asignado. Observe cmo estn los lentes, el
sistema que sostiene la muestra, el sistema lumnico y los tornillos que posibilitan el aumento
y la resolucin.
SIEMPRE cargue el microscopio al derecho y utilice una mano para sostener el brazo del
microscopio y la otra como apoyo para la base.
SIEMPRE conecte el microscopio a la toma naranja. Inserte el cable conector en las aberturas
de la mesa que tienen la tapa gris. Antes de desconectar el microscopio asegrese de que est
apagado.

NUNCA deje muestras en la platina del microscopio. Si al utilizar el microscopio usted ensucia
la platina, es importante que la limpie, ya que se puede oxidar.
NUNCA le quite partes al microscopio. Si usted realiza esta accin, deber enfrentar su
correspondiente penalizacin.
Finalmente, al observar una muestra, tenga CUIDADO de no estrellar los objetivos contra la
muestra. Deje siempre LIMPIOS los objetivos y las lminas que use.

PARTES DEL MICROSCOPIO


Un microscopio est compuesto por varios elementos que cumplen diferentes funciones, a saber:
o Un sistema de iluminacin, que permite enfocar y controlar la cantidad de luz que recae en la
muestra
o Un sistema ptico, que posibilita la observacin y la magnificacin de la muestra
o Un sistema mecnico, que sirve de unin y soporte a los sistemas anteriores
En seguida se presentan detalles de cada una de las partes que conforman los sistemas:
Sistema de iluminacin: Proporciona la luz necesaria para observar el objeto en cuestin. Es posible
modificar la cantidad y calidad de luz que llega a la muestra. Este sistema est integrado por:
a) Fuente de luz: Es la estructura encargada de suministrar luz al sistema y generalmente se
encuentra en la base del microscopio, debajo de la platina. La luz que emite es recibida por el
condensador. La luz emitida por la fuente puede ser regulada al mover hacia la izquierda
(disminuir) o derecha (aumentar) el tornillo rojo ubicado en la base.
b) Condensador: Est conformado por un conjunto de lentes y su funcin es enfocar la luz en la
muestra a observar.
c) Diafragma: Ubicado encima del condensador, ofrece la posibilidad de controlar el ngulo de
luz que llega a la muestra al ampliar o reducir el campo donde incide en la muestra segn la
necesidad.
Sistema ptico: Permite observar en detalle la muestra de inters. Es posible ajustar la magnificacin
y la resolucin de la imagen por medio de los siguientes componentes:
a) Oculares: Generalmente dos, son estructuras que llevan los rayos de luz desde los objetivos
hasta nuestros ojos. Ofrece un aumento de 10X (diez veces el tamao original del objeto) y
est montado sobre una torreta mvil que se ajusta para generar una sola imagen a partir del
campo visual de cada ojo. La magnificacin total del microscopio corresponde al producto de
la magnificacin del ocular y la magnificacin ofrecida por los objetivos.
b) Revlver: Localizado en la parte inferior del tubo ptico (donde se encuentran los oculares), es
la estructura que contiene los lentes objetivos. En los microscopios que usaremos en el
laboratorio hay cuatro lentes objetivos, cada uno con una magnificacin diferente.
c) Lentes objetivos: Son las estructuras que proporcionan aumento y resolucin. Existen varios
tipos de lentes, los cuales se clasificacin en funcin de la magnificacin. En general, stos se
catalogan en objetivos de bajo poder, mediano poder, alto poder y lentes de inmersin.
Alrededor de la parte final de cada objetivo hay un anillo de color en el cual se especifica la
capacidad de aumento que puede ofrecer cada lente.

En la siguiente figura se presentan algunas de las caractersticas que pueden identificarse para
cada lente:

Fig 1: Nomenclatura general presente en los lentes objetivos de un microscopio ptico que
indica alguna de sus propiedades pticas. A. Magnificacin ofrecida por el lente, B. Nmero de
apertura (NA), C. Longitud del tubo del lente objetivo, D. Grosor mximo de la laminilla que
debe ser usada para ver el espcimen.
Algunos trminos importantes para describir las propiedades de los lentes son:
Magnificacin:
Nmero de veces que se multiplica el tamao del objeto (visualmente hablando). La magnificacin
est indicada en la parte superior izquierda del lente (Fig 1. A.). En los objetivos de bajo poder, el
lente est rodeado por un anillo rojo y la magnificacin es de 4X; los de mediano poder ofrecen una
magnificacin de 10X y tienen anillo amarillo; los de alto poder estn en un rango de 40X a 45X y
tienen un anillo de color azul cielo; los de inmersin permiten un aumento de 100X y se indican por
medio de un anillo blanco. IMPORTANTE, si ustedes quieren ver algn preparado con el lente de
inmersin es necesario que le pidan a su instructor el aceite de inmersin, ya que el coeficiente de
refraccin del aire no es suficiente para concentrar la luz en la muestra.
Resolucin:
La resolucin se refiere al poder que tiene un instrumento para diferenciar dos objetos cercanos
ubicados a corta distancia (Figura 2). Los lentes contribuyen al poder de resolucin global del
microscopio, aunque tambin hay otras partes del microscopio ptico que influencian dicha
capacidad (ms adelante mencionaremos algunas de stas). La resolucin se relaciona con el nmero
de apertura (NA; Figura 1B).
Nmero de apertura (NA):
Es una medida que indica la capacidad del lente objetivo de recibir la luz proveniente de la muestra e
indirectamente se refiere al poder del lente de percibir detalles finos (resolucin). Comnmente el
valor de NA est ubicado en la parte superior derecha del lente y tiene valores que van desde 0 hasta
1; en los objetivos de inmersin este valor puede ser mayor a 1 (Por qu?).

La relacin entre la resolucin y el nmero de apertura se expresa a travs de la siguiente ecuacin:

Donde R es el poder de resolucin, n es el ndice de refraccin del medio que est entre la muestra y
el objetivo (el del aire es = 1), la longitud de onda de la luz utilizada y el ngulo de apertura del
cono (ver Figura 2). La expresin 2[ sin 12] equivaldra al NA y reemplazando en la ecuacin original
obtendramos:

El nmero de apertura es un nmero puro (sin unidades) y en la ecuacin slo el trmino est
expresado en unidades (nanmetros). La expresin matemtica revela tambin una relacin inversa
entre el nmero de apertura y R. TENGAN EN CUENTA que entre ms pequeo sea el valor de R
(debido a que NA es grande), ms poder de resolucin ofrecer el lente.

Figura 2. Esquema bsico que muestra cmo la luz recorre el sistema ptico y lumnico del
microscopio. La letra corresponde a la apertura angular.
Sistema mecnico: El sistema mecnico del microscopio ptico es el que une y soporta el sistema
lumnico y ptico. De este sistema hacen parte las estructuras donde se ubican los ejemplares a
estudiar y los mecanismos con los cuales se controlan la cantidad/calidad de luz y la resolucin. Tales
estructuras son:
a) rea ocular: Est conformada por los oculares, los tubos pticos y la torreta. En el interior de
sta hay un conjunto de lentes que dirigen los rayos de luz de la imagen virtual creada por los
lentes del objetivo hacia el observador. La distancia entre el conjunto de partes y la muestra a
observar puede ser modificada utilizando los tornillos de enfoque (localizados en la base),
obteniendo como resultado final un cambio en la resolucin del sistema. Ms adelante
haremos nfasis en los tornillos de enfoque.

b) Brazo: Es el punto de unin entre el rea ocular, la platina y la base. En esta estructura se
encuentran tambin los tornillos de enfoque. Por lo general, los microscopios pticos tienen
cuatro tornillos; dos macromtricos y dos micromtricos, en los costados laterales inferiores
del brazo. Los tornillos macromtricos (los grandes) posibilitan un enfoque grueso (es decir,
generan grandes cambios de distancia entre el rea ocular y el espcimen); en cambio, los
tornillos micromtricos (los pequeos, ubicados encima de los tornillos macromtricos) dan un
enfoque fino (el cambio de distancia es mucho menor). Este ltimo es ideal para enfocar la
muestra de manera ptima.
c) Platina: Es una lmina plana con una abertura en el centro, acompaada de pinzas para
sostener la preparacin que se va a observar y una estructura que permite el movimiento de la
platina hacia los costados (el carro). Hay dos tornillos ubicados en la parte inferior derecha de
la platina, los cuales permiten desplazarla en el eje horizontal.
d) Base: Como su nombre lo indica, es el sistema que soporta todas las estructuras del
microscopio. En sta se encuentra el tornillo que controla la cantidad de luz que deseamos
que llegue a la muestra y el botn para encender la fuente de luz.
EJERCICIO EN LABORATORIO: MICROSCOPA
Siga las instrucciones y resuelva las siguientes preguntas:
1. Utilice la gua y la informacin que se present durante la sesin terica del laboratorio para
identificar y localizar cada parte del microscopio en el siguiente diagrama y escribir el nombre
de cada una en el espacio correspondiente.

2. A medida que aumenta la magnificacin, tambin lo hace la resolucin, pero la relacin no es


lineal: La resolucin siempre aumenta en menor medida que la magnificacin. Por qu razn
aumentar la magnificacin sin un incremento en la resolucin no sera ventajoso para estudiar
especmenes?
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Siga cuidadosamente el procedimiento que se describe a continuacin y responda las preguntas
correspondientes. Tenga presente que para un desempeo ptimo del microscopio, usted deber
ajustar la iluminacin y el enfoque apropiadamente.
En una lmina limpia ponga una letra y despus ubique el preparado en la platina. Para fijar la letra
puede usar una gota de agua y una laminilla, si es necesario. Utilice los diferentes tipos de lentes
objetivos para ver la muestra. Para desplazar los objetivos gire hacia la derecha o a la izquierda el
revlver; hecho esto, un click le indicar que ha cambiado de lente objetivo. Recuerde que para usar
el objetivo de inmersin, necesita aceite de inmersin.
En esta instancia es importante recordar qu estructuras controlan los parmetros lumnicos, pticos
y mecnicos del microscopio y cmo los cambios en stos afectan la calidad de la observacin.
3. Qu estructura permite modificar la distancia entre los objetivos y la platina? De qu
sistema del microscopio hace parte dicha estructura?
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4. Defina qu es contraste y mencione que posibles sistemas y estructuras modifican esta
propiedad.
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5. En qu beneficiara cambiar el contraste de observacin al estudiar un espcimen?
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6. En qu posicin se muestra la letra e vista a travs del microscopio?

Por qu sucede esto? Por que qu no lo vemos as al observarlo a simple vista?


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7. De acuerdo con el aumento al que realiz la observacin, cul es el tamao aparente de la
e?
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OBSERVACIN DE LMINAS:
El microscopio es una herramienta muy til para la observacin de diferentes tipos de muestras, entre
ellas tejidos, organismos completos, clulas o propiedades especficas de algn material. En la
siguiente seccin se observarn varias muestras y a partir de ello se respondern las siguientes
preguntas:
1. Observe cada una de las lminas demostrativas, haga un esquema de la imagen observada y
especifique el tipo de muestra.

Aumento:
Tipo de muestra:

Aumento:
Tipo de muestra:

Aumento:
Tipo de muestra:

2. Si suponemos que el tamao real de la muestra Amoeba proteus es de 50 m, cul sera su


tamao aparente pasando por los lentes de 5X, 10X y 40X?
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Para resolver las prximas preguntas necesitar preparar dos muestras. Siga minuciosamente las
indicaciones que se presentan a continuacin.
Muestra de agua: Deposite una pequea gota de agua de charco en el centro de una lmina limpia.
Despus cubra la muestra con la laminilla, poniendo primero uno de los extremos de la laminilla en el

borde de la gota de agua, bajndola paulatinamente para evitar la formacin de burbujas. Si alguna
porcin del preparado no es cubierta con la laminilla, retrela cuidadosamente con un pedazo de
papel para evitar contaminar la platina y tener una mejor rea de observacin. Primero observe la
gota de agua con el lente de menor magnificacin y posteriormente con los dems, hasta llegar al
lente de mayor aumento. PRECAUCIN, tenga cuidado de no estrellar el objetivo con la muestra o
montaje.
Muestra de material vegetal: Con ayuda de una cuchilla y con mucho cuidado realice cortes tan finos
como sea posible al material vegetal; ubquelos en el centro de la lmina colocando sobre la muestra
una pequea gota de agua limpia. Ubique la laminilla y realice la observacin como se describi
anteriormente. Esquematice lo observado y especifique el aumento empleado.

Aumento:

Aumento:

1. Mencione tres razones por las cuales debe ubicarse una laminilla sobre un montaje hmedo
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2. Qu nueva informacin o detalles puede notar cuando cambia de aumento para la observacin
de los organismos (en la muestra de agua) y de las clulas (en el material vegetal)?
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3. Cul es el aumento total que se obtiene al observar un objeto en el microscopio con cada uno
de los siguientes objetivos?
a) 4X ________
b) 10X _______
c) 43X_______

4. Defina con sus propias palabras los siguientes trminos:


a) Poder de resolucin
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b) Magnificacin
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5. Qu parte del microscopio determina, en ltimas, el poder de resolucin del mismo?
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6. Considere que usted est interesado en comprar un lente objetivo que ofrezca un buen poder
de resolucin y el vendedor, que nada sabe de microscopa, le muestra los siguientes objetivos:
Cul escogera usted? ________________
Por qu? __________________________
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ESTEREOSCOPIO
Los estereoscopios permiten visualizar objetos y organismos muy pequeos para ser estudiados a
simple vista, pero muy grandes para ser estudiados bajo un microscopio. Su magnificacin suele
oscilar entre 5x hasta ms de 60x. Una ventaja destacable que ofrece es que la muestra se puede
observar en 3D. Adicionalmente, no se requiere hacer cortes o preparados ya que, a diferencia de lo
que sucede en el microscopio, no es necesario que la luz atraviese la muestra para poder observarla.
Este tipo de equipos permite establecer distancias entre la muestra y el objetivo que van desde un par
de centmetros a decenas de ellos, lo que lo hace muy til en botnica, mineraloga, microelectrnica,
medicina y biologa. Es fundamental en aplicaciones que requieren manipular la muestra, donde la
visin estereoscpica es esencial.

A continuacin se muestra una imagen en la que estn sealadas las partes del estereoscopio.
Observe atentamente las diferencias entre este instrumento y un microscopio y trate de especular
sobre la razn de stas.
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Elija 3 muestras de su inters para observar bajo el estereoscopio. Manipule la muestra aprovechando
las ventajas del equipo y tratando de observar detalles que no pueden ser apreciados a simple vista.
Selelos en su dibujo.

Aumento:
Tipo de muestra:

Aumento:
Tipo de muestra:

Aumento:
Tipo de muestra:

Calcule el tamao aparente de cada una de las 3 muestras observadas, de la misma manera que lo
hizo con las muestras vistas a travs del microscopio.