Rgulation de l'activit enzymatique.

Les organismes doivent tre capables de moduler l'activit enzymatique

cellulaire de faon pouvoir s'adapter aux changements mtaboliques. De cette
faon, les enzymes peuvent coordonner les voies mtaboliques, en rponse
l'environnement. Les deux moyens principaux sont :
1 - Le contrle de la quantit d'enzyme. La quantit d'enzyme dans une
cellule est dpendante du taux de synthse de l'enzyme et de son taux de
dgradation. Des systmes complexes de rgulation de la transcription et/ou de la
traduction des gnes codant pour des enzymes ont t dvelopps durant
l'volution et modulent la quantit d'enzyme en rponse des conditions
physiologiques changeantes. Par exemple, l'enzyme qui permet l'hydrolyse du
lactose n'est synthtise que lorsque le milieu de culture contient du lactose.
2 - Le contrle de l'activit enzymatique. L'activit catalytique des enzymes
peut tre directement modifie par des altrations structurales et
conformationnelles. Ainsi, la modulation de l'affinit de l'enzyme pour son substrat
permettra de changer le taux de catalyse. L'affinit d'association peut tre change
par la prsence de protines ou de sous-units rgulatrices, par une modification
covalente (en gnral une phosphorylation), une activation protolytique et/ou une
rgulation allostrique.
Dans la rgulation allostrique, un mtabolite de la voie ractionnelle peut se
fixer de faon non-covalente l'enzyme et ainsi moduler son activit catalytique.
Ainsi, dans ces systmes multi-enzymatiques, le produit final de la chane de
ractions sert d'inhibiteur spcifique une enzyme du dbut de la chane.
Le taux de catalyse dans la cascade est dtermin par la concentration du
produit final, dans un phnomne appel rtro-inhibition. L'enzyme ainsi module
est appele enzyme allostrique. L'enzyme allostrique possde un site actif et un
site modulateur sur lequel vient se fixer l'effecteur. Les enzymes allostriques sont
en gnral complexes, formes de plusieurs sous-units, rgulatrices et catalytiques.
Substrat

Sous
unit

Changement conformationnel
Effecteur

Site actif
Interaction

Site
modulateur

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Rgulation de lactivit enzymatique

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Exemple, laspartate transcarbamoylase (ATCase)

L'ATCase catalyse la formation de N-carbamoyl aspartate partir de
carbamoyle phosphate et d'aspartate.

intermdiaire ttradrique
Analogue de
ltat de
transition
ACTase catalyse la raction entre le phosphate de carbamoyle (CP) et de L-aspartate
afin de former la N-carbamoyl-L-aspartate (CA) et du phosphate inorganique (Pi).
Vraisemblablement, la raction se droule via un intermdiaire ttradrique.
Lanalogue deux substrats N-phosphonactyl-L-aspartate (PALA), possdant un
grand nombre de loci de liaison de l'intermdiaire ttradrique, est un puissant
inhibiteur de l'enzyme.
C'est la premire tape dans la cascade de synthse du nuclotide cytidine
triphosphate (CTP). L'ATCase est constitue de 6 sous-units rgulatrices et de 6
sous-units catalytiques.

Degr de cooprativit

L'analyse cintique de l'activit

enzymatique a montr 3 caractristiques :
1) La cooprativit positive du
substrat, c'est--dire que la fixation d'un
premier substrat dans un des 6 sites actifs
de l'enzyme facilite la fixation du substrat
dans les 5 autres sites actifs. Ceci gnre
une courbe sigmode voir la cintique
de la page suivante. Ainsi, une faible
augmentation dans la concentration du
substrat provoque une forte augmentation
du taux de catalyse. Plus la cooprativit
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M-M

Vmax

Michaelis

10%
90%

n=2

n=3

n=4

0.22

0.47

0.61

0.69

18.0

4.25

2.62

2.06

Rgulation de lactivit enzymatique

[S]
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est importante (n >1), plus restreinte en gamme de concentration S sera la rponse

cintique (10% 90% en Vmax)

Courbes sigmodes
Vmax

Courbe
Hyperbolique

Vitesse

90%

10%

n = 1 monomre
n = 2 sous-units
n = 3 sous-units
n = 4 sous-units

KM
0

10

[S]
La courbe hyperbolique correspond celle de la cintique michaelienne (n=1)
tandis que les courbes sigmodes montrent la cintique correspondante lenzyme
sous forme de dimre (n=2), trimre (n=3), et ttramre (n=4).
2) Une rgulation allostrique (rtroinhibition) par le nuclotide CTP. CTP
rduit le taux de catalyse.
3) Une rgulation positive par le
nuclotide ATP, qui augmente le taux de
catalyse.
Il
semble
que
lATP
comptitionne avec le CTP pour se fixer au
site modulateur.
L'interaction allostrique change la
conformation des sites de liaison du substrat.
Selon la thorie de l'allostrie, chaque sousunit catalytique peut exister sous une
forme T (basse affinit pour le substrat) ou
sous forme R (haute affinit pour les
substrats ou des analogues comme phosphonoacetamide (PAM) et malonate (MAL)).
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Lors de la transition T R, la sparation entre les trimres catalytiques et

par les sous-units rgulatrices est de 12 et 4 respectivement le long de l'axe 3
et elle est couple une lgre rorientation des trimres et des sous units
rgulatrices.
- NB : la transition T R conserve la symtrie D3 du complexe
Le CTP maintiendrait les sous-units l'tat T (inhibition), alors que l'ATP
les maintiendrait l'tat R (stimulation) - voir la cintique rsultante de lATCase
en prsence de lATP, du CTP, et sans effecteur allostrique ci-bas.

Les deux tats sont dus une transition de la structure quaternaire de

l'enzyme qui modifie la structure du site actif et ainsi change la capacit de liaison
du substrat et sa catalyse.
Les changements tertiaires (dans une sous-unit) et quaternaires (entre les
sous-units) manifests ne sont pas indpendants; ils sont fortement coupls d
des contacts troits entre sous-units.
Ltat T et R reprsentent un quilibre contrl par la force de la liaison de
chacun des ligands. Voir la comptition de liaison entre les analogues de substrat,
phosphonoacetamide et malonate (ltat R de prfrence), et linhibiteur CTP
(ltat T de prfrence) en prsence dATCase.
Deux modles expliquent cette transition : le modle concert (ou
symtrique) et le modle squentiel.

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Dans le modle concert, toutes les sous-units d'une enzyme doivent

conserver la symtrie molculaire et par consquent elles sont toutes en mme
temps au mme tat T ou R, un moment prcis. L'enzyme globale existe donc
sous forme T ou R, puisque cest seulement dans cette configuration qu'il y a la
conservation de symtrie par toutes les sous-units. Ainsi, la fixation du substrat
dans un premier site actif provoque une transition telle que toutes les sous-units
de l'enzyme deviennent sous forme R et ceci reprsente ltat de comptence
catalytique. Leffecteur se lie ltat T ou R de prfrence et ainsi exerant son
rle dinhibiteur ou dactivateur.

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Dans le modle squentiel, chaque sous-unit la possibilit d'tre sous

forme R ou T, indpendamment des autres sous-units. L'enzyme est constitue
d'un mlange de sous-units sous forme T et R. La liaison d'un premier substrat
change la structure de la sous-unit laquelle il sest fix (R), alors que les autres
sous units acquirent une affinit intermdiaire entre celles observes l'tat T et
R.
La liaison du ligand induit donc progressivement des changements
conformationnels dans les sous-units, les changements les plus importants se
produisant au niveau des sous-units qui ont li le ligand. Le couplage entre les
sous-units nest pas ncessairement assez fort pour prserver la symtrie de
loligomre comme cest le cas dans le modle symtrique.

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