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13/3/2015 Cours equation henri michaelis menten briggs haldane constante catalytique vmax km lineweaver Burk Dixon Hanes Woolf Enzymologie Enseigne…

L'équation de Henri - Michaelis - Menten / L'équation de Briggs - Haldane

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6. L'hypothèse de l'état stationnaire de la
concentration du complexe ES : l'équation
1. L'enregistrement de la cinétique de la de Briggs ­ Haldane (1925)
réaction enzymatique
7. La signification des paramètres cinétiques
2. Vitesse d'apparition du produit : 
     a. La constante de vitesse k2 ou constante
3. La mesure de la vitesse initiale de la catalytique kcat 
réaction enzymatique      b. La constante de vitesse k­2 
 
4. Conditions de concentrations en substrat      c. La vitesse maximale de la réaction
pour les mesures de cinétiques enzymatiques Vmax 
: [S0] >> [E0]      d. La constante de dissociation KS et la
constante de Michaelis KM 
5. L'hypothèse du quasi équilibre : l'équation      e. Le rapport (kcat / KM) ou constante de
de Henri, Michaelis et Menten (1913)  spécificité 

8. Les représentations graphiques

1. L'enregistrement de la cinétique de la réaction enzymatique

L'enzymologie est une discipline qui paraît bien souvent théorique et, en effet, des modèles sont
développés pour rendre compte de la complexité et de la diversité des réactions enzymatiques.

Cependant, les équations qui sont manipulées s'appliquent à l'analyse de données
expérimentales : les valeurs des vitesses d'une réaction enzymatique mesurées dans diverses
conditions (de concentrations de substrat, en présence de molécules qui augmentent ou
diminuent la vitesse, à différents pH, ...).

La cinétique d'une réaction enzymatique est la variation en fonction du temps de la concentration


de molécules (substrats et produits de la réaction).

L'enregistrement de cette cinétique implique que ces molécules possèdent des propriétés
physico­chimiques qui permettent de les détecter de manière quantitative :

mesure de l'absorbance (relation de Beer-Lambert)
mesure de l'émission de fluorescence
comptage du nombre de désintégrations après marquage radioactif
...

2. Vitesse globale d'apparition du produit

Considérons le mécanisme le plus simple pour décrire :
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la fixation du substrat sur l'enzyme libre
la formation du complexe ES non covalent (complexe k1  k2 
de Michaelis - Menten). E + S <====> ES <====> E + P
la formation du produit P avec relarguage de k­1 k­2
l'enzyme libre

Par définition la vitesse de la réaction est la variation de la    d[S] 
  d[P] 
concentration du substrat ou celle du produit en fonction du temps.  v  =   ­­­­­­­­ ­­­­­­­­­ 
­ ­   = 
Le signe moins indique que l'entité disparaît.     dt
    dt

Au début de la réaction enzymatique, il n'y a que le substrat et pas de produit.

Il est préférable, du point de vue de la précision, de mesurer la vitesse d'apparition du produit


que celle de la disparition du substrat. En effet, on mesure plus précisément une faible
augmentation de la concentration du produit (puisque l'on part de zéro), qu'une faible
diminution de la concentration du substrat (qui est "énorme" au début de la réaction).

  d[P] 
L'équation de la vitesse globale liée à la concentration du produit
­­­­­­­­ (k2 . [ES]) ­ (k­2
est la somme des vitesses de formation et de disparition du produit  v   =
­  =  . [E] [P])
:
   dt

3. La mesure de la vitesse initiale de la réaction enzymatique

Rappelons que Henri, Michaelis et Menten ont développé leur théorie à une époque (1913) où


l'on ne disposait pas de moyens de calcul susceptibles d'approcher facilement les solutions de
cette équation différentielle.

Pour simplifier l'équation globale, il est nécessaire de faire une première approximation (tout
à fait justifiée) : on considère qu'il existe un temps suffisamment court pendant lequel la
quantité, donc la concentration, du produit formé est négligeable. Remarque : négligeable ne
signifie pas nulle, sinon on n'aurait aucun signal détécté pour enregistrer la cinétique.

Puisque le terme [P] est négligeable, le terme (k-2 . [E] [P]) l'est aussi. Remarque : celà ne


signifie pas que la constante de vitesse k-2 est nulle ou négligeable (on ne sait rien à priori sur
sa valeur).

  d[P] 
L'équation de la vitesse globale de formation du vi     ­­­­­­­­
k2 . [ES]          (rel. 1)
produit est simplifiée : =  ­  = 
   dt

Du point de vue expérimental :

on trace la tangente à l'origine de la cinétique : cette tangente correspond à la portion de


la cinétique que l'on estime linéaire. Cette estimation visuelle dépend de l'expérimentateur.
la pente de la tangente à l'origine de la cinétique (d[P] / dt) s'appelle la vitesse initiale de
la réaction enzymatique, vi.

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4. Conditions de concentrations en substrat pour les mesures de cinétiques enzymatiques : [S0] >>
[E0]

Une condition supplémentaire pour aboutir à l'équation de Henri, Michaelis et Menten est


d'effectuer des mesures de cinétiques avec une concentration initiale du substrat [S0] beaucoup
plus grande que la concentration initiale de l'enzyme [E0] et ce, pour toutes les concentrations
en substrat étudiées.

Ainsi, avant la réaction enzymatique, le milieu réactionnel contient une concentration initiale
connue de substrat [S0] et on déclanche la réaction en ajoutant l'enzyme à une concentration
initiale connue [E0].

Mais dès l'addition de l'enzyme, le milieu réactionnel contient :

l'enzyme libre (qui n'a pas réagi avec le substrat) à une concentration inconnue [E]
le substrat libre à une concentration inconnue [S]
le complexe enzyme ­ substrat à une concentration inconnue [ES]
et le produit dont la concentration [P] (déterminée à tous moments) est négligeable
puisque l'on enregistre la cinétique en condition de vitesse initiale

En ce qui concerne le substrat, la loi de conservation des espèces [S0] = [S] + [ES] +
moléculaires s'écrit : [P]
La concentration du produit étant négligeable : [S0] = [S] + [ES]
Puisque : [S0] >> [E0], la concentration maximale du complexe enzyme ­
[ES]max = [E0]
substrat [ES] est limitée par la concentration initiale de l'enzyme :
En conséquence : [S0] >> [ES]

Finalement, on peut considérer à tous moments de la réaction que l'on a [S ] # [S]     (rel. 2)
0
:

5. L'hypothèse du quasi équilibre : l'équation de Henri, Michaelis et Menten (1913)

Voir une traduction de leur article original (1913)

Henri V. (1903) "Lois générales de l'action des diastases" Hermann, Paris


Michaelis L. & Menten M. L. (1913) "Die Kinetik der Invertinwirkung" Biochem. Z. 49, 333 - 369

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Maud Menten (1879 ­ 1960)

Leonor Michaelis (1875 1949)

Ces auteurs ont fait l'hypothèse que dès l'addition de l'enzyme, il k1 
s'établit un équilibre rapide entre les formes libres de l'enzyme et du
E + S <====>  ES
substrat (E et S) et le complexe enzyme-substrat (ES), appelé
k­1
complexe de Michaelis ­ Menten :
    [E] .     k  
1
On définit la constante de dissociation KS (constante macroscopique) [S] 
  ­­­­­­    K
   ­­­­­­­­­ S
qui lie la concentration des composés impliqués dans cet équilibre : ­   = 
­­­   = 
    k­1
       [ES] 
   [E] . [S] 
Ce qui permet d'exprimer la concentration de [ES] qui est
[ES]   =   ­­­­­­­­­­­­ 
inconnue à tout moment de la réaction :         KS

   [E] . [S0] 
Qui peut être exprimée en fonction de [S0] (rel. 2): [ES]   =   ­­­­­­­­­­­­­­  (rel. 3) 
        KS
     [S0]  
( k2 . [E] )  
Les relations (1) et (3) permettent d'écrire :    vi    = ( ­­­­­­­­­ )   (rel. 4) 
.       K S
Pour l'enzyme, la loi de conservation des espèces  [E0]      [E]   +  
moléculaires s'écrit : = [ES]
   [E] . [S0]  
En remplaçant [ES] par son expression en fonction  [E0]   
      [E]     + ( ­­­­­­­­­­­­­­ )  
de [E] (rel. 3) : =         KS
             [S0]  
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===>  [E0]          [E]      . ( 1  +  ­­­­­­­­ ) 


=               KS

        [E0]  
­­­­­­­­­­­­­­­­­­­ 
===> [E]   =              [S0]  
( 1  +  ­­­­­­­­ ) 
              KS

      [S0]  
  ( ­­­­­­­­ ) 
        KS 
En remplaçant [E] par cette nouvelle expression dans    vi     ( k2 . [E0]
­­­­­­­­­­­­­­­­­­­ 
la relation (4) : = )  .             [S0]  
( 1  +  ­­­­­­­­ ) 
              KS
       [S0]  
   vi     ( k2 . [E0]
En multipliant numérateur et dénominateur par KS : ( ­­­­­­­­­­­­­­ ) 
= )  .    KS + [S0]
[S0]  
Quand la concentration initiale du substrat est très
grande, c'est­à­dire quand [S0] >> KS, le terme ( ­­­­­­­­­­­­­­­ )  tend vers 1.
KS + [S0]

La vitesse initiale mesurée pour cette concentration initiale de substrat tend vers une valeur
maximale :      Vmax = k2 . [E0]

             [S0]  
On aboutit à la relation de Henri ­ vi    =     Vmax      .     ( ­­­­­­­­­­­­­­­ )  
Michaelis et Menten :
        KS + [S0]

Terme catalytique  fonction de saturation 
 
(asymptote)         (hyperbole)

6. L'hypothèse de l'état stationnaire de la concentration du complexe ES : l'équation de Briggs -


Haldane (1925)
Ces auteurs ont développé une équation plus générale. Ils
ont montré qu'il ne s'établit pas forcément un équilibre
rapide pour toutes les enzymes entre les formes libres de
l'enzyme et du substrat (E et S) et le complexe enzyme­ k1  k2 
substrat (ES). E + S <====> ES <====>E + P
k­1 k­2
Après un certain délai, appelé état pré-stationnaire, c'est la
concentration du complexe ES qui est constante : cette
concentration est dite à l'état stationnaire.

Celà signifie que si [ES] = constante, les vitesses globales :
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de formation du complexe ES à partir du substrat et à partir du produit :             
            (k1 . [E] . [S0]) + (k­2 . [E] [P])

de disparition du complexe ES pour reformer le substrat ou former le produit :              
 (k­1 . [ES]) + (k2 . [ES])

sont égales.

On a vu que si les mesures de cinétiques sont faites en condition de vitesse initiale, le terme (k­
2 . [E] [P]) est négligeable.
En conséquence, l'égalité des vitesses de formation et de disparition s'écrit :               k1 . [E] .
[S0]       =        (k­1 + k2) [ES]
      k­1 + k2 
===> [E] . [S0]    = ( ­­­­­­­­­­­­­­­­ ) . [ES]  (rel. 5) 
           k1

La loi de conservationdes espèces moléculaires [E0] ­ [ES]
[E]          =
appliquée à l'enzyme permet d'écrire :
       k­1 + k2 
En remplaçant [E] par cette nouvelle expression ([E0] ­ [ES]) .
( ­­­­­­­­­­­­­­­­­ ) . [ES]  (rel. 6)
dans la relation (5) : [S0] =
           k1

               k­1 + k2 
On définit une nouvelle constante macroscopique, la KM   =   ­­­­­­­­­­­­­­­­­ 
constante de Michaelis-Menten : 
             k1

([E0] . [S0]) ­
La relation (6) s'écrit : KM . [ES]
([ES]. [S0])  =

[ES] . (KM +
===>  [E0] . [S0]
[S0])      =

                   [S0]  
===>        [ES]          =  [E0] . ( ­­­­­­­­­­­­­­­­­ ) 
               KM + [S0]

                             [S0]  
En multipliant les deux termes de
k2 . [ES]          = (k2 . [E0]) . ( ­­­­­­­­­­­­­­­­­­ ) 
l'égalité par k2 :
                         KM + [S0]

vi = k2 . [ES]   (rel. 1)
Puisque :
Vmax = k2. [E0]

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On aboutit à la relation de Briggs - vi    =     Vmax                  [S0]  


Haldane : .     ( ­­­­­­­­­­­­­­­­­ )  
         KM + [S0]

Terme
fonction de saturation
  catalytique 
      (hyperbole)
(asymptote)

7. La signification des paramètres cinétiques

a. La constante de vitesse k2 ou constante catalytique kcat

k2 est une constante de vitesse du premier ordre (réaction monomoléculaire) dont l'unité est :
s-1. C'est donc l'inverse d'un temps ou une fréquence : la fréquence à laquelle l'enzyme
accomplit l'acte catalytique (ou "turn-over").

C'est la raison pour laquelle cette constante est appelée constante catalytique ou kcat.

L'unité officielle d'activité enzymatique est le katal (kat) : c'est la quantité d'enzyme qui
catalyse la transformation de 1 mole de substrat par seconde.

b. La constante de vitesse k-2

La constante de vitesse k-2 traduit la possibilité physique d'une même enzyme à catalyser la
réaction réverse. Ce n'est pas systématiquement le cas.

Exemples d'enzymes qui catalysent une réaction dans les deux sens :

La thermolysine (EC 3.4.24.27) est une metalloprotéase qui catalyse l'hydrolyse de la
liaison peptidique impliquant des acides aminés hydrophobes : Leu / Ile / Phe / Trp / Tyr
et Val. La coupure se fait avant ces acides aminés. Elle est aussi utilisée pour son
aptitude à catalyser la réaction réverse : la formation de la liaison peptidique.
Cycle de Calvin : la phosphorylation par l'ATP du 3­phosphoglycérate en 1,3­
diphosphoglycérate par la 3­phosphoglycérate kinase (47 kDa). Cette enzyme catalyse la
réaction réverse dans la glycolyse.
Les enzymes qui catalysent les réactions au voisinage de l'équilibre dans la glycolyse
sont les mêmes dans la néoglucogénèse.

A l'inverse, si la réaction est très exergonique (ΔG < 0), la cellule met en place des réactions
différentes catalysées par des enzymes différentes pour les réverser. Exemples des enzymes de
la glycolyse vs. celle de la néoglucogénèse:

glycolyse néoglucogénèse

glucose-6- glucose­6­phosphate + H2O ­
hexokinase glucose + ATP ­­­> glucose­
phosphatase
E.C. 2.7.1.1 6­phosphate + ADP ­­> glucose + Pi
EC 3.1.3.9

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fructose­1,6­bisphosphate +
fructose­6­phosphate + ATP fructose-1,6- H2O ­­­> fructose­6­
phosphofructokinase
­­­> fructose­1,6­ bisphosphatase phosphate + Pi
E.C. 2.7.1.11
bisphosphate + ADP EC 3.1.3.11

pyruvate pyruvate + HCO3­ + ATP ­­­
carboxylase
> oxaloacétate + ADP + Pi
EC 6.4.1.1
pyruvate kinase phosphoénolpyruvate +
E.C. 2.7.1.40 ADP ­­­> pyruvate + ATP PEP oxaloacétate + GTP ­­­>
carboxykinase phosphoénolpyruvate + GDP
EC 4.1.1.32 + CO2

c. La vitesse maximale de la réaction Vmax

La vitesse maximale d'une réaction enzymatique est une vitesse initiale théorique : c'est


l'asymptote de l'hyperbole obtenue lorsque l'on reporte : vi = f([S0]), que l'on appelle la courbe
de saturation.

Elle ne peut donc être physiquement mesurée puisqu'elle correspond à une concentration de
substrat infinie. Sa valeur ne peut­être qu'approchée :

dans un premier temps par la mesure d'activité en présence de concentrations très
grandes de substrat ([S0] >> KM).
dans un second temps, par extrapolation des donnéees expérimentales à une
concentration infinie à l'aide de représentations graphiques comme celle, par exemple,
dite des double inverse ou représentation de Lineweaver & Burk. Il existe d'autres
représentations qui permettent de tracer une droite au lieu d'une hyperbole.

Remarque 1 : on appelle courbe de saturation la représentation vi = f([S0]) parce que plus la
concentration initiale du substrat est élevée, plus il y a de molécules d'enzyme qui fixent une
molécule de substrat : l'enzyme est saturée par le substrat.

Remarque 2 : quelle que soit la concentration du substrat, [S0] >> [E0]. En conséqeunce, même
si elle n'est pas saturante, la concentration du substrat est toujours en excès.

Remarque 3 : Vmax peut être calculée à l'aide de la relation : Vmax = kcat . [E0]. Cependant, il
faut connaître la valeur de kcat qui ne peut­être déterminée que si l'on a estimé une valeur de
...Vmax !

d. La constante de dissociation KS et la constante de Michaelis KM

                 k­1 
dans la relation de Henri - Michaelis et Menten, K =   ­­­­­­­­­­­ 
S   
la constante est :
                 k1
                  k­1 + kcat 
dans la relation de Briggs - Haldane, la KM   =   ­­­­­­­­­­­­­­­­­­ 
constante est : 
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                        k1

Cette différence traduit deux mécanismes très différents :
Dans l'hypothèse du quasi-équilibre, la valeur de la constante de vitesse kcat est très inférieure à
k­1. Le complexe ES se dissocie donc plus fréquemment en relarguant le substrat libre qu'il ne
subit l'acte catalytique.

L'affinité est l'aptitude qu'ont deux molécules à s'associer et KS est une constante de
dissociation donc l'inverse d'une constante d'association. En conséquence, KS traduit
véritablement l'affinité d'une enzyme pour un substrat.

Voir un complément sur le quasi-équilibre

Dans l'hypothèse de l'état stationnaire, le complexe ES se dissocie aussi souvent en E et S qu'il


est transformé en produit.

k­1 et kcat sont des constantes de vitesse du premier ordre (réaction monomoléculaire)
dont l'unité est : s­1
k1 est une constante de vitesse du second ordre (réaction bimoléculaire) dont les unités
sont : [mol . L­1 . s­1] ou [M . s­1] 
En conséquence, les unités de KM sont : ( s­1 + s­1 ) / ( M . s­1 ) = ( s­1 ) / ( M . s­1 ) = M

KM est donc la concentration en substrat pour laquelle la vitesse initiale mesurée est égale à la
moitié de la vitesse initiale maximale Vmax.

Voir un complément sur l'état pré - stationnaire

e. Le rapport (kcat / KM) ou constante de spécificité

1er cas : une enzyme qui fixerait "facilement" un substrat même pour de faibles
concentrations (KM faible) pourrait catalyser très lentement la réaction (kcat faible).

2ème cas : inversement, une enzyme qui ne serait saturée qu'à de fortes concentrations de
substrat (KM élevé) pourrait accomplir trés souvent l'acte catalytique (kcat élevée).

On voit donc que l'un ou l'autre de ces deux paramètres ne permettent pas de caractériser
l'efficacité réelle d'une enzyme. Il faut à la fois une fixation du substrat à de faibles
concentrations et une catalyse fréquente : c'est donc le rapport (kcat / KM) qui reflète l'efficacité
d'une enzyme à catalyser une réaction*.

   kcat                  k  
cat
On remarque que la valeur maximale ­­­­­­­­­ k  . ( ­­­­­­­­­­­­­­­­­ )  
du rapport (kcat / KM) : 1
­­ = 
   KM             k­1 + kcat
      kcat 
est obtenue quand : ­­­­­­­­­­­­­­­  =   1 
   k­1 + kcat

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La limite du rapport (kcat / KM) est donc la constante de vitesse d'association [enzyme ­
substrat], k1.

La constante k1 a elle­même pour limite la vitesse de diffusion des macromolécules dans le


milieu réactionnel (108 ­ 109 M.s­1).  C'est le cas, par exemple, de la triose phosphate isomérase
de la glycolyse.

Enzyme KM (M) kcat (s-1) kcat / KM (M-1. s-1)

Chymotrypsine 1.5 × 10­2 0.14 9.3

Pepsine 3.0 × 10­4 0.50 1.7 × 103

Tyrosyl-tRNA synthétase 9.0 × 10­4 7.6 8.4 × 103

Ribonucléase 7.9 × 10­3 7.9 × 102 1.0 × 105

Anhydrase carbonique 2.6 × 10­2 4.0 × 105 1.5 × 107

Fumarase 5.0 × 10­6 8.0 × 102 1.6 × 108

*Pour tenir compte de l'ajustement de la conformation de l'enzyme induit par la fixation du


substrat, certains auteurs expriment la constante de spécificité de la façon suivante : K1 . k2,
soit le produit de la constante de vitesse du deuxième ordre (fixation du substrat et formation
de ES) par la probabilité que, une fois fixé, le substrat le reste et forme le produit.

Johnson K.A. (2008) "Role of induced fit in enzyme specificity: a molecular forward/reverse switch"
J Biol Chem. 283, 26297-26301

8. Les représentations graphiques

Il est évident qu'au 21ème siècle, les programmes de calculs permettent d'analyser
directement les données en enzymologie. Cependant, les représentations graphiques sont
importantes du point de vue didactique. Elles sont faciles à faire avec un crayon, une règle et
une feuille de papier.

Le principe de ces représentations graphiques est de transformer l'équation de Briggs -
Haldane (ou de Henri, Michaelis et Menten), pour 1 ou plusieurs substrats, en présence ou non
d'inhibiteurs, afin d'obtenir l'équation d'une droite.

a. Représentation de Hans Lineweaver & Dean Burk (1934) dite des doubles inverses.

Lineweaver & Burk (1934) "The Determination of Enzyme Dissociation Constants" J. Am. Chem. Soc.
56, 658 - 666

    vi 
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L'équation de Briggs - Haldane (ou de Henri, Michaelis ­­­­­­­­­          [S0]  


et Menten) s'écrit : =   ­­­­­­­­­­­­­­­­  
 Vmax   KM +  [S0]
 Vmax 
  KM +  [S0]  
­­­­­­­­­  
En inversant :  ­­­­­­­­­­­­­­­­  
=  
      [S0]
    vi
 Vmax 
  KM   +  1  
­­­­­­­­­  
Soit : ­­­­­­­­­­­­­­  
=  
    vi         1

 1    KM   +  1  
Et en divisant les deux membres de l'égalité par Vmax
­­­­   =   ­­­­­­­­­­­­­­  
:  v      Vmax
i

 1    KM              1                 1 
On obtient l'équation d'une droite : ­­­­   =   ­­­­­­­­   .   ­­­­­­­­   +   ­­­­­­­­­  
 vi Vmax               [S0]               Vmax

 1          1  
Si l'on représente :  ­­­­   =   f (­­­­­­­­­)  
 vi       [S0]

                                                           KM 
On obtient une droite de pente : ­­­­­­­­­­­­  
                                                         Vmax
                                                                                             
                                                          1     1
dont l'ordonnée à l'origine est :  ­­­­­­­­­et le point d'intersection avec l'axe des abcisses est :  ­   ­­­
­­   ­­­­­­­­  
                                                       Vmax                                                                                          
       KM

avantage : les variables reportées sur les axes sont indépendantes.

inconvénient : la déviation par rapport à la linéarité est plus prononcée que pour les
autres représentations surtout pour les faibles concentrations en substrat.

                               vi  
b. Représentation de George Eadie & Baren Hofstee :
vi    =    ­ KM  .   ­­­­­­­­­­    +    Vmax
     vi = f (vi / [S0])
                              [S0]

avantage : les points du graphique ont un poids équivalent quelle que soit la gamme de
concentrations ou de vitesses initiales.

inconvénient : les variables reportées sur les axes ne sont pas indépendantes. Toute erreur


expérimentales sur la détermination de vi est reportée sur l'axe des abcisses.

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Cette représentation est aussi appelée représentation de Woolf–Eadie–Augustinsson–Hofstee.

c. Représentation de Charles Hanes & Barnet Woolf :     [S0]                    [S0]                 KM  


     [S0] / vi = f ([S0])
­­­­­­­­­­­­     =    ­­­­­­­­­­­­   +   ­­­­­­­­­­­
­  
Inconvénient : les variables reportées sur les axes ne      v                       V
sont pas indépendantes. i max              Vmax

d. Représentation de George Eadie & George Scatchard


:      vi / [S0] = f (vi)     vi                     vi                Vmax 
­­­­­­­­­­     =    ­­­­­­­­­­   +   ­­­­­­­­­­­  
Inconvénient : les variables reportées sur les axes ne    [S0]                  KM                KM
sont pas indépendantes.

e. Représentation de Robert
Eisenthal & Athel Cornish-
Bowden : graphe linéaire direct
(1974)

L'axe des abcisses correspond
à KM et l'axe des ordonnées
correspond à Vmax.

on reporte la valeur
"négative" de chaque
concentration en
substrat sur l'axe des
abcisses
on reporte la valeur
correspondante de
chaque vitesse initiale
mesurée sur l'axe des
ordonnées
on trace les droites
passant par ces couples Source : Eisenthal & Cornish-Bowden (1974)
de valeurs
"The direct linear plot. A new graphical procedure for estimating
Leur point de concourrance a enzyme kinetic parameters" Biochem. J. 13, 715 - 720
pour coordonnées KM et
Vmax, respectivement.

avantage : permet de déterminer les meilleures valeurs estimées des paramètres
cinétiques.

inconvénient : pas très adaptée dans le cas de plusieurs substrats.

f.Représentation de Dixon (en présence d'inhibiteurs) : 1 / vi = f ([I0]) pour chaque
concentration en substrat.

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Elle est utilisée quand l'interaction entre l'enzyme et l'inhibiteur est plus complexe qu'une
inhibition compétitive ou une inhibition non­compétitive classiques.

Dixon, M. (1953) "The determination of enzyme inhibitor constants" Biochem J. 55, 170 - 171

         

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