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MÉTODOS HISTOLÓGICOS

GISELA GARCÍA CRESPO.


Profª Titular
Facultad de Ciencias Veterinarias

Histo

Creado por Ysrael Villamarín


Dibujo: Jan Acevedo
MÉTODOS HISTOLÓGICOS

• Los métodos o técnicas histológicas se


puede definir como: la serie de
procedimientos especiales a los que se
somete el material que se va a estudiar
bajo el microscopio (Histológicamente)
METODOS HISTOLÓGICOS
• DIRECTOS( En
vivo)
• INDIRECTOS
(Postmorten)
• COLORACIÓN
MÉTODOS DIRECTOS

• ESTUDIO DONDE SE EMPLEAN


PROCEDIMINETOS QUE NO AFECTAN
LA BIOLOGÍA CELULAR, O PERMITEN
OBSERVAR LOS CAMBIOS QUE SUFRE
ANTE DETERMINADOS
PROCEDIMIENTOS.
METODOS INDIRECTOS
• PROCEDIMIENTOS QUE REQUIEREN
MAYOR TIEMPO PARA PODERLOS
EJECUTAR, A VECES REQUIEREN DE
UNA FIJACIÓN PREVIA.
• SON PROCEDIMIENTOS MEDIATOS O
POSTMORTEN.
Entre estos procedimientos contamos...
METODOS HISTOLÓGICOS
• CULTIVOS CELULARES
Se cultivan células fuera del organismo que
les dio origen.
Requiere un medio apropiado: aséptico (sin
agentes nocivos), temperatura, pH, humedad,
nutrientes, etc.
Ej: HeLa, linfocitos, etc.
CULTIVOS CELULARES
CULTIVOS CELULARES
CULTIVOS CELULARES
METODOS HISTOLÓGICOS

• AUTORRADIOGRAFIA:Técnica por la
cual un objeto radiactivo produce una
imagen de sí mismo sobre una película
fotográfica. La imagen se denomina
autorradiografía
Autorradiografía
METODOS HISTOLÓGICOS
• CENTRIFUGACIÓN -
ULTRACENTRIFUGACIÓN
Se obtienen células o componentes
subcelulares específicos de acuerdo a su
gradiente de sedimentación Ej.: glóbulos
rojos, glóbulos blancos; mitocondrias,
retículo endoplasmático, etc.
METODOS HISTOLÓGICOS
• INJERTOS O TRANSPLANTES
– Homo-injertos: se realizan en la misma
especie
• Auto-transplantes ( el mismo individuo)
• Alo-injertos (diferentes individuos)
– Isotransplante
Homotransplante
Alotransplante
METODOS HISTOLÓGICOS

– Hetero-injertos o xeno-injertos: se efectúan


entre especies diferentes
Xenotransplante o
heterotransplante
Xenotransplante o
heterotransplante
METODOS HISTOLÓGICOS
• Disociación

• Escisiones

• Iluminación especial
METODOS HISTOLÓGICOS
• Disociación
• Escisiones
METODOS HISTOLÓGICOS
• Maceraciones

• Inyecciones
METODOS HISTOLÓGICOS
• Reconstrucciones
METODOS HISTOLÓGICOS
• Fotografías
• Videos
• Dibujos
METODOS HISTOLÓGICOS

• DIRECTOS
• INDIRECTOS
• COLORACIÓN
METODO DE COLORACIÓN
• SE BUSCA CONTRASTAR COMPONENTES
CELULARES O EXTRACELULARES A TRAVÉS
DE SUSTANCIAS CROMÓGENAS.
TEORÍAS DE LA
COLORACIÓN
FÍSICA
QUÍMICA
FÍSICO-QUÍMICA
CLASIFICACIÓN DE LOS
COLORANTES
CLASIFICACIÓN
POR SU ORIGEN
• NATURALES
• ARTIFICIALES
CLASIFICACIÓN DE LOS
COLORANTES
CLASIFICACIÓN
POR SU ORIGEN
• NATURALES
COLORANTES
NATURALES
VEGETALES
• hematoxilina, azafrán,
orceína.
COLORANTES

ANIMALES
• carmín (cochinilla)
COLORANTES

ARTIFICIALES
PIGMENTOS
• rojo rutenio, verde
brillante, azul de Prusia.
• Derivados de la anilina
• (destilación de la hulla)
Colorantes. Clasificación
química

• Colorantes Básicos
• Colorantes Ácidos
• Colorantes Neutros
...
Procesamiento Histológico
Fases o procesos:

• Toma de la muestra
• Fijación
• Repicado
• Inclusión de la muestra
• Corte al micrótomo
• Coloración
• Montaje
Procesamiento Histológico
• Toma de la muestra
– Identificación
• Especie
• Raza
• Número
• Etc.
Procesamiento Histológico

• Toma de la muestra
– Tamaño
Procesamiento Histológico

• Toma de la muestra
– Tamaño: 0,5 a 1 cm
FIJACIÓN

PRINCIPIO DE LA FIJACIÓN
CARACTERÍSTICAS DE UN BUEN
FIJADOR
FIJACIÓN
Formol al 10 %

Inmersión o perfusión
Procesamiento Histológico
• Toma de la muestra
– Identificación
Repicar la muestra
Procesamiento Histológico
• TOMA DE LA MUESTRA (0,5-1 CM)
• FIJACIÓN: 40-60 VECES EL VOLUMEN
• LAVADO EN AGUA CORRIENTE

¿cómo cortar tan delgado?


¿ 5 micrómetros?
¡¡¡ parafina !!! ... Pero y el agua?
¡¡¡ No son miscibles!!!
Procesamiento Histológico
• DESHIDRATACIÓN EN ALCOHOLES
CRECIENTES (50º- 100º)
• ACLARAMIENTO EN XILOL
• INCLUSIÓN EN PARAFINA

• CONFECCIÓN DE LOS BLOQUES


Inclusión en parafina
• Procesamiento de la
muestra
– Lavado
– Deshidratación
– Aclaramiento (xilol)
– Inclusión en parafina
Inclusión
• Confección del
bloque
– Identificación
Inclusión
• Confección del
bloque
Corte al microtomo

• 5 micrómetros
– Deslizamiento
– Rotación
MICROTOMO DE
DESLIZAMIENTO
Procesamiento Histológico

Microtomos de deslizamiento
Corte al microtomo
• 5 micrómetros
– Microtomos de rotación
Procesamiento Histológico

• Recolección de los
cortes
– Pescado (baño
María)
Procesamiento Histológico
• Recolección de los cortes
• Desparafinación
– Estufa
– Xilol

¿ y el agua ? ...

• Hidratación(alcoholes decrecientes)
• Coloración
COLORACIÓN
HEMATOXILINA Y EOSINA
COLORACIÓN
HEMATOXILINA Y EOSINA
• Coloración
– Desparafinación (xilol)
– Hidratación
– Coloración Hematoxilina
– Coloración Eosina
HEMATOXILINA & EOSINA
RESUMEN:
• CORTE AL MICROTOMO
• RECOLECCIÓN (BAÑO DE MARÍA)
• DESPARAFINACIÓN (XILOL)
• HIDRATACIÓN ALCOHOLES DECRECIENTES
(100º A-AGUA)
• COLORACION HEMATOXILINA( núcleo- ácidos)
HEMATOXILINA & EOSINA

• LAVADO AGUA CORRIENTE


• COLORACIÓN EOSINA
• LAVADO CON AGUA
• DESHIDRATACIÓN
• ACLARAMIENTO
• MONTAJE
Tipos de coloración ( acorde
color producido )
Tipos de coloración ( acorde
color producido )

• Ortocromática

• METACROMÁTICA

• Impregnación
Tipos de coloración ( acorde
color producido )

• Retrógrada

• Progresiva

• VITAL (in vivo, in vitro)

• Histoquímica
MÉTODOS HISTOQUÍMICOS
Para carbohidratos: PAS, PAS-D
Lípidos.: SUDÁN, ACEITE ROJO
Ácidos nucléicos: FEULGEN
Pigmentos y minerales: VON KOSSA (Ca.)
EnzimaS : FOSFATASA (alcalina , ácida), ESTERASAS
MÉTODOS HISTOQUÍMICOS

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LOS TEJIDOS


MÉTODOS INMUNOHISTOQUÍMICOS
ENZIMAS (P-AP), FLUORESCENCIA
OTRAS COLORACIONES

• PARA TEJIDO CONJUNTIVO


• FIBRAS RETICULARES
• IMPREGNACIONES ARGÉNTICAS Y
ÁUREAS
• CELULAS CROMAFINES
• HONGOS
• BACTERIAS
Coloración H & E
COLORACIÓN H & E
HISTOQUÍMICA: Azul Alciano
HISTOQUÍMICA: PAS
COLORACIONES ESPECIALES:
TRICRÓMICAS
COLORACIÓN FIBRAS
ELÁSTICAS
FIBRAS ELÁSTICAS
IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA
METACROMASIA: AZUL DE
TOLUIDINA
TRICRÓMICA
CME “DR. HUMBERTO
FERNÁNDEZ MORÁN”

PANTALLA FLUORESCENTE
RESULTADO

Transmisión Barrido
GRACIAS POR SU ATENCIÓN