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Mtodos de coleta, preparo,

e colorao de material em
citologia crvico-vaginal.
Citologia normal da crvice
uterina
Jacqueline Plewka
UNIOESTE PR
DEZ/2011

EXAME DE PAPANICOLAOU

COLETA
CITOLOGIA CONVENCIONAL (esfoliativa, abrasiva)
CITOLOGIA EM MEIO LQUIDO

CONFECO DO ESFREGAO

FIXAO

COLORAO DE PAPANICOLAOU

MONTAGEM DAS LMINAS

ESCRUTNIO DAS LMINAS

INTERPRETAO/RESULTADOS

Anatomia do Aparelho Reprodutor


Feminino

Fonte: McCkee, 1997.

Nulpara: 6 a 7 cm e 4 cm
Multpara: 7 a 8 cm e 5 cm
Espessura: 25 a 30 cm
Peso varia de 40 a 50 gramas nulparas e
de 60 a 70 gramas nas multparas

Colo Uterino

www.fcm.unicamp.br/departamentos/anatomia/lamgin1.html

Epitlio Escamoso Estratificado

Epitlio Escamoso Estratificado

Fonte:www.screening.iarc.fr/atlashisto

Epitlio Cilndrico Endocervical

Fonte:www.screening.iarc.fr/atlashisto

www.fcm.unicamp.br/departamentos/anatomia/lamgin1.html

Juno Escamo Colunar - JEC

Fonte: Longatto, 2000.

www.fcm.unicamp.br/departamentos/anatomia/lamgin1.html

Localizao da JEC conforme a idade,


estado hormonal (gravidez, ACO)

PUBERDADE

FASE FRTIL

MENOPAUSA

METAPLASIA

Reprogramao gentica das clulas tronco em tecido


epitelial ou de clulas mesenquimais do tecido conetivo

Processo reversvel

Colo uterino: substituio fisiolgica do epitlio colunar


evertido na ectocrvice epitlio escamoso recm-formado
de clulas subcolunares de reserva (ZT)

Se a causa persistir, pode progredir para metaplasia atpica.

Epitlio normal

Epitlio metaplsico

Clula escamosa Basal

Clulas parabasais: pequenas, redondas e ovais, cianoflicas, com ncleo vesicular de


10 a 12 m, cromatina finamente distribuda de forma homognea

Clulas Escamosas Parabasais

Medem 15 a 20 m de dimetro, citoplasma basfilo, redondo ou oval com


pequenos vacolos. O ncleo 10 a 12 m, R N/C, so vesiculados e contm
grnulos de cromocentro

Clulas Escamosas Intermedirias

Medem 30 a 40 m de dimetro, citoplasma cianoflico (basfilo), poligonal, pode conter


dobras e rico em glicognio. Ncleo possui 10 a 12 m, vesicular, oval com cromatina
finamente granulosa. Os cromocentro e a cromatina sexual podem ser visualizados.

Clulas Escamosas Superficiais

Medem 40 a 60 m, so poligonais com citoplasma predom. eosinfilo ou


levemente cianoflico, com ncleo picntico 5 a 8 m e muito denso. O citoplasma
contm filamentos de queratina ( tonofibrilas) que confere certa rigidez a clula

METAPLSICAS

- Clulas de maturao hbrida, de tamanho e forma variveis:


redondas, ovais ou com finas projees
- Ncleo com cromatina finamente granular, membrana fina e
delicada e pequeno nuclolo, semelhante ao ncleo das clulas
endocervicais
- O citoplasma denso cianoflico

CLULAS METAPLSICAS

Clulas Glandulares Endocervicais

Alongadas, com 8 a 20 m em seu maior dimetro, com citoplasma cianoflico


claro, ncleo excntrico e vesicular, com cromatina regularmente distribuda e
nuclolo pequeno, redondo, avermelhado e refringente

Clulas Endometriais

Citoplasma cianoflico claro escasso pouco definido 4 a 16 m s vezes


vacuolizado, ncleo 8 m redondo ou oval, usualmente excntrico e vesicular, com
cromatina finamente granular e regularmente distribuda, podendo haver
micronuclolo. Observa-se superposio de ncleos

LEUCCITOS:

Citologia em Meio Lquido

METODOLOGIAS DE COLETA

CITOLOGIA CONVENCIONAL

CITOLOGIA EM MEIO LQUIDO

Quais os
cuidados que
devo ter antes de
fazer o exame?

Identificao dos esfregaos e


informes clnicos
Realizada no momento da coleta

Dados clnicos:
Idade, data de nascimento
DUM, estado gestacional, menopausa
Uso de contraceptivos hormonais, terapia de reposio
hormonal, uso DIU
Radioterapia, quimioterapia, cirurgia ginecolgica
Resultado exame anterior
Histria de cncer
Sinais clnicos

Instrumentos para a coleta: Esptulas

Salazay

Instrumentos para a coleta: Escovas

Escova endocervical - cytobrush

Cervex Broom

Escova endocervical - cnica

Coleta Trplice - VCE

V
- fundo de saco posterior (muco, clulas de
descamao, leuccitos, restos celulares)
- parede lateral superior da vagina( clulas para
avaliao hormonal)

C - ectocrvice e JEC
E - mucosa endocervical

Coleta Dupla

MS 1996

Ectocrvice e JEC

Endocrvice

Coleta Espculo Vaginal

Fonte: www.inca.gov.br.

Espculo
inserido lateralizado apoiado na frcula vaginal;
lubrificado com SF 0,9%;
ligeiramente aberto;
deve ser rodado;
deve atingir o fundo da vagina;
abrir o espculo

Observar
paredes vaginais;
contedo vaginal;
caractersticas do colo uterino:
-Colorao e presena de secrees
- presena de leses;
- juno stio externo com JEC

Ectocrvice e JEC

Endocrvice

Teste de Shiller

Teste cido actico 5%

Aspecto

Superfcie

cido Actico

Lugol

CONFECCO DOS ESFREGAOS

Modo regular

Boa espessura

Rapidamente para evitar dessecao

Confeco do Esfregao na
Citologia Convencional

Coleta Citologia em Meio Lquido

Fonte: www.digene.com.br

Metodologia de preparo citologia em


meio lquido

DNA Citoliq (DIGENE-Brasil) citopreparao


atravs de filtros

Thin Prep (Cyty Corp., USA) citopreparao


atravs de vcuos

Autocyte (Tripath, USA) citocentrifugao

Outros

COLETA - Base lquida x Convencional


Os problemas do preparado convencional
Esfregao no
representativo
sobre a lmina

Amostra cervical

Amostras no-representativas
no reflete a condio atual
da paciente
Perdas de clulas importantes
para diagnstico por
Sobreposio, m fixao,
Artefactos de colorao

Mais 80% da amostra


coletada descartada

Fixador

COLETA - Base lquida x Convencional

O princpio da citologia em base lqida


Esfregao 100%
representativo
Amostra cervical

Incremento na deteco
precoce de clulas anormais

Amostra preservada

Diagnstico em camada
celular mais
homognea e dispersa

Processo de filtragem,
imprint (clulas randomizadas)
Citocentrfuga (Sistema AutoCyte)

AUTOCYTE - COLETOR

Materiais para coleta em Base Lquida pelo Sistema AutoCyte

Soluo 10 ml
1 escova (cerdas plsticas)

DNA Citoliq

Thin Prep

Fixao

Objetivo: preservar as caractersticas


citomorfolgicas

Reagem quimicamente com macromolculas


como: cidos nuclicos, polissacardeos, lipdeos
e protenas, promovendo sua estabilizao
molecular

Desidratam os componentes moleculares


protoplasmticos

Fixao

Funo:

- penetrar rapidamente nas clulas;


- manter integridade morfolgica;
- inativar enzimas autolticas;
- contribuir p/ a adeso clulas em lmina;
- impedir degradao bacteriana;
- facilitar o processo de colorao;

Tipos de fixao

mida lcool etlico 95%

mida com subsequente secagem ao ar

Cobertura soluo de polietilenoglicol

ETANOL 95%
- reduz a constante isoeltrica das
protenas;
- causa precipitao em seus pontos
isoeltricos;
- alteram a estrutura terciria das
protenas
ruptura das pontes
hidrofbicas;
- removem histonas.

REMOO
250 ml de Glicerina Liquida
250 ml de gua
Mergulhar as lminas por 8 minutos
Lavar as laminas em uma cuba com lcool 50%, para
tirar o excesso da Glicerina;
Passar por 4 cubas de lcool absoluto, sendo que na
4 cuba deve-se deixar as laminas por 12 minutos;

Colorao de Papanicolaou
Regressiva: ginecolgicas
- HE Harris, excesso soluo HCL

Progressiva: no ginecolgicas (urina e


preparaes gstricas) e amostras com
pouca aderncia

HE Mayer, Gill e Gill-Baker-May


hidrxido de amnio, carbonato de ltio

Colorao de Papanicolaou
Etanol a 95%

10 mergulhos

Etanol a 80%

10 mergulhos

Etanol a 70%

10 mergulhos

Etanol a 50%

10 mergulhos

gua destilada

10 mergulhos

Hematoxilina de Harris

6 min

gua corrente

6 min

HCL 0,25%

2 a 6 mergulhos

gua destilada

10 mergulhos

Etanol a 50%

10 mergulhos

Etanol a 70%

10 mergulhos

Etanol a 80%

10 mergulhos

Etanol a 95%

10 mergulhos

OG

1min 30 seg

Etanol 95%

10 mergulhos

Etanol 95%

10 mergulhos

EA (36,50, 65)

1min 30 seg

Etanol a absoluto

10 mergulhos

Etanol a absoluto

10 mergulhos

Etanol absoluto

10 mergulhos

Etanol/xilol 1:1

10 mergulhos

Xilol

10 mergulhos

Xilol

10 mergulhos

Hematoxilina Harris

pH cido (2,95)
Agente oxidante: xido de mercrio (hematoxilina
hematena)
Mordante: sulfato de potssio e alumnio (induo da cor)
Solvente: lcool (agente nivelador, reduz a oxidao)
Acidificante: cido actico glacial (seletividade ao material
nuclear e estabilizao oxidao)
pH 8,0: carbonato de ltio, gua

CORANTE DE HEMATOXILINA DE HARRIS


Hematoxilina de Harris
Hematoxilina de Harris Merck cristalizada CI 75.290 pureza 95%

5g
(5,263g)

Almen de.potssio AlK(SO4) 2

100 g

Sulfato de Potssio e Alumnio ou Sulfato de Amnio e Alumnio

xido de mercrio HgO

2,5 g

Metanol ou alcol etlico

50 ml

gua destilada

1000 ml qsp

cido actico glacial (opcional)


4 ml a cada 100 ml
Dissolver a hematoxilina em metanol (56 C ou banho maria);
Dissolver o AlK(SO4) 2 em gua destilada, levando fervura;
Adicionar a hematoxilina dissolvida soluo de almen de potssio em gua e levar
para ferver novamente
Afastar o frasco do calor, resfriar o frasco e adicionar HgO;
Homogenizar at aparecer a cor prpura;
Esfriar a soluo em gua fria - choque trmico
Filtrar em Watman 1 e estocar em frasco mbar;
Amadurecer 1 semana, antes do uso adicionar o cido actico, filtrar antes do uso

Orange G

Corante Monocromtico - contracorantes


Cora queratina em tom laranja
Corante cido
Solvel em etanol
Mordante: cido fosfotngstico

CORANTE ORANGE G -6
Soluo estoque:
Orange-G
Orange G Merck CI 16.230 pureza 80%

5g
(6,25g)

gua destilada

50 ml

Deixar amadurecer por vrios dias em temperatura ambiente.


Soluo de uso:
Soluo aquosa Orange-G

50 ml

cool etlico 95%

950 ml

cido fosfotngstico

0,15 g

Dissolver o Orange G na gua destilada. Misturar a soluo aquosa OG no lcool


etlico e acrescentar o cido fosfotngico
Estocar em frasco escuro ermeticamente fechado;
Filtrar em Whatman 1;
Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.

EA - 36

Verde brilhante ou Ligth green: corante cido,


cora clulas metabolicamente ativas

Mais fotossensvel da bateria

Eosina amarelada: corante cido, cora o


citoplasma de clulas escamosas superficias,
nuclolos, hemcias e clios

Marron Bismarck: corante cido, diferencia a


colorao em presena de cido fosfotngstico

Soluo uso (estoque) Vesuvina ou Bismarck Brown


Merck CI 21.000 pureza 50%
Frmula: 1g vesuvina (2 g Merck)
10 ml de gua destilada

100 ml

Soluo estoque 1g de vesuvina em gua qsp 10 ml;

Dissolver 5 ml da soluo estoque em em 95 ml de etanol 95%;


Filtrar em Whatman 1 ;
Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.
Soluo uso Light Green ou Verde Brilhante
450 ml
Merck CI 42.095
Frmula: 2g ligth green (3,07 g)
100 ml de gua
Etanol 95% qsp 1000 ml
Soluo estoque: dissolver 2 g de light green em 100 ml de gua destilada
Soluo uso: dissolver 50 ml de soluo estoque em 1000 ml de etanol 95% qsp
Filtrar em Whatman 1
Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.

Soluo uso de Li2 CO 3


1,5 g de Li2 CO 3 em gua destilada 100 ml qsp
Filtrar em Whatman 1 antes de usar

30 gotas

Soluo uso de eosina amarelada


Eosina Amarelada
Merck pureza 88% CI 4.5380
Frmula: 5g eosina amarelada (5,681 g)
1000 ml de etanol a 95% qsp
Soluo estoque: dissolver 5 g de eosina amarelada em 1000 ml etanol 95%
Filtrar em Whatman 1
Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso

450 ml

Soluo EA 36

450 ml de soluo uso Light Green;


100 ml de soluo uso Marron Bismark;
30 gotas soluo uso de Li2 CO 3
450 ml de soluo estoque de eosina amarelada
Filtrar em Whatman 1 ;
Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.

Colorao de Papanicolaou
Colorao Nuclear Plida:
- contaminao com fixador de cobertura
- remoo incompleta do HCL
- concentrao HCL
- artefato de fixao (dessecao)
- validade corante
- reas espessas no esfregao

Colorao Nuclear Forte:


concentrao lcool (fixao)
tempo na descolorao (HCL)

Colorao de Papanicolaou
Colorao citoplasmtica plida:
tempo no lcool
Ausncia diferenciao:
flora cocide
mal fixao
Citoplasma cinza ou prpura
tempo HE
falha em remover o excesso de HE

COLORAO DE SHORR
lcool etlico 70%

10 mergulhos

Hematoxilina de Harris

1 a 3 minutos

Lavar em gua corrente

5 minutos

Diferenciar soluo aquosa de HCL a 1%

mergulhos rpidos

lcool 70%

10 mergulhos

lcool 80%

10 mergulhos

lcool 90%

10 mergulhos

Shorr

3 a 10 segundos

lcool 70%

10 mergulhos

lcool 80%

10 mergulhos

lcool 95%

10 mergulhos

Xilol

10 mergulhos

Xilol

10 mergulhos

Corante de Shorr
lcool etlico a 50%

100 ml

Biebricht scarlat (solvel em gua) 0,5 g


Orange G

0,25g

Verde Luz C

0,075 g

cido fosfotngstico

0,5 g

cido fosfomolbdico

0,5 g

cido actico glacial

1 ml

Misturar todos os componentes e dissolver em lcool. Acondicionar a


soluo filtrada em frasco escuro, bem vedado

Remover colorao

Xilol
Etanol absoluto (3) 1 min
Etanol 95% (2) 1 min
gua corrente 1min
Soluo aquosa de HCL 0,2 ou 0,5% (etanol
70%) 5 min a 1 h
gua corrente por 10 a 15 min

Montagem das Lminas:


Entellan
Meio Lquido

Convencional

Miscvel com o agente


clareador e ter ndice
refrativo que mantenha o
sistema transparente;
pH neutro.

Fonte: www.digene.com.br

Avaliao da citologia crvico-vaginal

Escrutnio das Lminas

M.O - 100x , 400x e 1000 x

Interpretao/Resultados: Segundo
Sistema Bethesda 2001
Tamanho das clulas

Observar:
Tipos celulares
Alteraes celulares
Organismos
Efeitos citopticos de
organismos
Anormalidades epiteliais

Tamanho dos ncleos


Relao ncleo/citoplasma
Cor do ncleo
Estrutura da cromatina
Cor do citoplasma
Aspecto do citoplasma
Forma da clula
Forma do ncleo

Critrios de malignidade

Agrupamentos celulares
Morfologia de organismos

Nomenclatura Brasileira para laudos


citopatolgicos cervicais, 2006
TIPOS DA AMOSTRA
Citologia:
Convencional
Em meio lquido

AVALIAO PR-ANALTICA
Amostra rejeitada por:
Ausncia ou erro de identificao da lmina e/ou do frasco;
Identificao da lmina e/ou do frasco no coincidente com a
do formulrio;
Lmina danificada ou ausente;
Causas alheias ao laboratrio (especificar);
Outras causas (especificar).

Nomenclatura Brasileira para laudos


citopatolgicos cervicais, 2006
ADEQUABILIDADE DA AMOSTRA
Satisfatria
Insatisfatria para avaliao onctica devido ao:
Material acelular ou hipocelular (< 10% do esfregao)
Leitura prejudicada (> 75% do esfregao) por presena de:
sangue;
picitos;
artefatos de dessecamento;
contaminantes externos;
intensa superposio celular;
outros (especifi car).
Epitlios representados na amostra:
Escamoso
Glandular
Metaplsico

Sistema Bethesda 2001

Tipo de amostra

Adequao da amostra

Satisfatria para avaliao: indicar a presena de


componente endocervical/ZT ou outros agentes
indicadores de qualidade;

por ex. se est parcialmente obscurecida por leuccitos ou hemcias

Adequao da amostra

Insatisfatria para avaliao:

Amostra rejeitada/no processada (indicar razes)

Amostra processada e examinada, mas


insatisfatria p/ avaliao de anormalidades
epiteliais (indicar razes)

Aspergillosis sporangium - rompimento


de um dos conidisporos com liberao
de condios. (Papanicolaou 400x)

Balantidium coli

Enterobius vermicularis

BIBLIOGRAFIA
-BIBBO, M. Comprehensive
Saunders, 1997.

Cytopathology. New York:

-GOMPEL, C. & KOSS, L. G. Citologia Ginecolgica e suas


Bases Anatomoclnicas. So Paulo: Manole, 1997.
--MCKEE, G.T. Citopatologia. So Paulo: Artes Mdicas, 1997.