Instituto Politcnico

Nacional
Escuela Superior de
Medicina
DEPARTAMENTO DE FORMACIN BSICA
DISCIPLINARIA
ACADEMIA DE BIOQUMICA MDICA

Prctica Dos: Uso y manejo

del equipo de laboratorio.

Presenta
Pelez Navarro Amrica Camila

Docente
Dra. Elsa Calette Jcome

3CM11

Marzo - 2015

PRCTICA DOS: USO Y MANEJO DEL EQUIPO DE LABORATORIO.

1. Qu forma de energa es la electromagntica y que intervalo de energa cubre el
espectro electromagntico?
La energa tiene forma de onda. El espectro electromagntico cubre longitudes de onda muy
variadas. Existen frecuencias de 30 Hz y menores que son relevantes en el estudio de ciertas
nebulosas.1 Por otro lado se conocen frecuencias cercanas a 2,910 27 Hz, que han sido
detectadas provenientes de fuentes astrofsicas. 2 El espectro electromagntico cubre
longitudes de onda muy variadas. Existen frecuencias de 30 Hz y menores que son relevantes
en el estudio de ciertas nebulosas.1 Por otro lado se conocen frecuencias cercanas a
2,91027 Hz, que han sido detectadas provenientes de fuentes astrofsicas. 2
Para su estudio, el espectro electromagntico se divide en segmentos o bandas, aunque esta
divisin es inexacta. Existen ondas que tienen una frecuencia, pero varios usos, por lo que
algunas frecuencias pueden quedar en ocasiones incluidas en dos rangos.
Banda
Rayos gamma
Rayos X
Ultravioleta extremo
Ultravioleta cercano
Luz Visible
Infrarrojo cercano
Infrarrojo medio
Infrarrojo
lejano/submilimtrico
Microondas
Ultra Alta Frecuencia
- Radio
Muy Alta Frecuencia
- Radio
Onda Corta - Radio
Onda Media - Radio
Onda Larga - Radio
Muy Baja Frecuencia
- Radio

Longitud de onda (m)

< 10x1012m
< 10x109m
< 200x109m
< 380x109m
< 780x109m
< 2,5x106m
< 50x106m

Frecuencia (Hz)
> 30,0x1018Hz
> 30,0x1015Hz
> 1,5x1015Hz
> 7,89x1014Hz
> 384x1012Hz
> 120x1012Hz
> 6,00x1012Hz

Energa (J)
> 201015 J
> 201018 J
> 9931021 J
> 5231021 J
> 2551021 J
> 791021 J
> 41021 J

< 1x103m

> 300x109Hz

> 2001024 J

< 102m

> 3x108Hzn. 1

> 21024 J

<1m

> 300x106Hz

> 19.81026 J

< 10 m

> 30x106Hz

> 19.81028 J

< 180 m
< 650 m
< 10x103m

> 1,7x106Hz
> 650x103Hz
> 30x103Hz

> 11.221028 J
> 42.91029 J
> 19.81030 J

> 10x103m

< 30x103Hz

< 19.81030 J

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2. La energa de una radiacin electromagntica cmo es en relacin con su
longitud de onda?
A mayor longitud de onda y menor frecuencia la radiacin ser menor. A menor longitud de
onda y mayor frecuencia la radiacin ser mayor.

3. Dibuja la forma de representar las ondas electromagnticas

4. Cul es y como se llama al intervalo de luz electromagntica la cual es sensible

al ojo humano?
La radiacin ptica es la radiacin electromagntica de longitud de onda comprendida entre
las microondas (1mm) y los rayos X (1nm).
Dentro del espectro de la radiacin ptica, se encuentra una pequea franja comprendida
entre los 400nm y 700nm la cual es perceptible por el ojo humano. A este margen se le
denomina radiacin de espectro de luz visible.

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5. Qu pasa cuando una partcula que se encuentra en estado de reposo o
fundamental interacciona con un haz de luz?
Cuando una partcula que se encuentra en estado de reposo o estado fundamental,
interacciona con un haz de luz, absorbe energa, y pasa a estado excitado. En la partcula se
producen cambios que dependes de las caractersticas de la propia partcula y de la energa
de la luz que interacciona. La partcula en estado excitado tiende a regresar espontneamente
a su estado fundamental, desprendiendo la energa absorbida en forma de calor.

6. A que se le conoce espectro de absorcin y cul es su utilidad practica?

El grfico de la cantidad de radiacin absorbida respecto a la longitud de onda para un
compuesto particular se conoce como espectro de absorcin. El espectro de absorcin
normalizado es caracterstico para cada compuesto particular, no cambia con la concentracin
y es como la "huella digital" qumica del compuesto.
Su utilidad se basa en conocer no slo la composicin qumica de una muestra dada, sino
tambin las concentraciones relativas de varios compuestos de una mezcla. Para hacer esto
debe construirse una escala, o curva de calibracin, usando varias concentraciones conocidas
para cada compuesto de inters. El grfico que resulta de la concentracin respecto a la
absorbancia se hace a mano o usando un software de ajuste de curvas apropiado, que usa
una frmula matemtica para determinar la concentracin en la muestra.

7. En qu consiste la espectrofotometra de absorcin?

Es una tcnica analtica que permite determinar la concentracin de un compuesto en
solucin. Se basa en que las molculas absorben las radiaciones electromagnticas y a su
vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para hacer
este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y medir la cantidad de luz absorbida por
la misma.
Se pueden identificar y cuantificar biomolculas en solucin y en muestras biolgicas, con el
empleo de reactivos especficos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman un
producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.

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8. Cmo se le conoce a la representacin del cromgeno a distintas longitudes de
onda?
Curva de calibracin: representacin grfica en un eje de coordenadas de absorbancia
(ordenadas) frente a concentracin (abscisas). Para construir la curva de calibracin (que
debe ser una recta) se ensayan varias soluciones de concentraciones conocidas y se
determinan sus absorbancias, luego se representan grficamente sus concentraciones frente
a sus absorbancias.
La concentracin de la muestra a analizar se obtiene por interpolacin de su absorbancia en
la curva de calibracin.
Linealidad: en las determinaciones fotomtricas se debe conocer la linealidad, que es el
intervalo de concentraciones del cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre
concentracin y absorbancia.
9. Qu pasa cuando un haz de luz lo incide sobre una cubeta de agua con una
solucin coloreada absorbe luz de longitud de onda determinada?
Se mide primero la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al que se le asigna el
valor de cero mediante el ajuste del mando, de forma que la intensidad incidente y transmitida
sean iguales (Io = It), y por tanto la absorbancia es cero. A continuacin se pone en la celdilla
la cubeta con la muestra y se lee la absorbancia de sta.
A partir de una solucin diluida de un compuesto, cuya absorbancia mxima entra dentro del
rango de medida del espectrofotmetro, se ver el valor de absorbancia a diferentes
longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solucin de la muestra
a caracterizar. A partir del espectro de absorcin se obtendr el valor de al que el
compuesto presenta la mayor absorbancia (max). Dicho se utilizar a la hora de hacer
determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto.
10. Cmo se define la transmitancia y la absorbancia?

La transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la cantidad de luz

transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad
de luz que incidi sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: % T =

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It/Io x 100. La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de intensidad
incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relacin entre %T y la concentracin
no es lineal, pero asume una relacin logartmica inversa.

La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que nos

indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T,
en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. Cuando la intensidad incidente y
transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100% e indica que la muestra
no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0.

11. Finalidad del uso de las soluciones de referencia o blanco y patrn o estndar.
Todo mtodo espectrofotomtrico se basa en la comparacin de la absorbancia de una
sustancia de concentracin desconocida con la de una solucin de la misma sustancia cuya
concentracin se conoce y a la cual se denomina solucin patrn o estndar.
La absorbancia de una solucin es la resultante de la absorbancia del soluto cuya
concentracin se desea conocer y la de otros componentes del sistema (solventes, reactivos)
que absorben tambin a esa longitud de onda. Estos compuestos se denominan
interferencias. Se debe descartar la absorbancia de las interferencias, para ello es necesario
hacer siempre una muestra que contenga todos los componentes del sistema menos aquel
que se desea medir. Esta muestra se llama blanco y la absorbancia de ste debe restarse a
las muestras problema y a los patrones, o bien, con el blanco se calibra el instrumento a
absorbancia igual a 0, o sea 100% de transmisin.
12. Explica el fundamento de la ley de Beer como base del anlisis cuantitativo de
las determinaciones espectrofotomtricas.
La ley establece una relacin lineal entre la absorbancia y la concentracin. Es un medio
matemtico de expresar cmo la materia absorbe la luz. Esta ley afirma que la cantidad de luz
que sale de una muestra es disminuida por tres fenmenos fsicos:
1. La cantidad de material de absorcin en su trayectoria (concentracin).
2. La distancia que la luz debe atravesar a travs de la muestra (distancia de la trayectoria
ptica).

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3. La probabilidad de que el fotn de esa amplitud particular de onda sea absorbido por el
material (absorbencia o coeficiente de extincin).
Esta relacin puede ser expresada como:
A = dc

Donde:
A=

Absorbencia

Coeficiente molar de extincin

d=

Distancia en cm

c=
Concentracin molar
Los valores cuantitativos se aplican generalmente cuando se quiere comparar entre muestras
incgnitas o contra una muestra estndar.
13. Con base a la relacin lineal entre absorbancia y concentracin, Cmo podemos
conocer la concentracin de una solucin problema?
Para medir la concentracin de una sustancia se elige por lo general, la regin de mxima
absorcin del espectro, denominada longitud de onda analtica. Normalmente la concentracin
se estima, a partir de la ecuacin de la curva de calibrado.

A = a l c + Ao
Donde, A es la variable dependiente (y), la pendiente es igual a (a l), c es la variable
controlada (x) y Ao es el intercepto.
Las unidades del coeficiente de extincin dependen de las unidades de concentracin y de
longitud del paso de luz. Generalmente la unidad de longitud es el centmetro y la longitud del
paso de luz es 1,0 cm. Si las unidades de concentracin son moles L-1 o milimoles L-1, se
hace referencia al coeficiente de extincin molar ( o milimolar, respectivamente. Si la
concentracin est expresada en g/100 mL (% peso / volumen) se obtiene el coeficiente de
extincin especfico (E1%).

A =

+ Ao

Cuando la concentracin de la sustancia y la longitud del paso de la luz se hacen iguales a la

unidad, la absorbancia corresponde al coeficiente de extincin. Si se midiera la absorbancia
de una solucin 1,0 M de una sustancia colocada en una celda de 1,0 cm se obtendra el
coeficiente de extincin molar (). Si la concentracin fuera 1,0 g/100 mL se obtendra el
coeficiente de extincin especfico (E1%). Estos coeficientes son una propiedad especfica de
las partculas absorbentes y su valor es referido a un determinado solvente y a una
determinada longitud de onda.

PRCTICA DOS: USO Y MANEJO DEL EQUIPO DE LABORATORIO.

Cuando se conoce por bibliografa el coeficiente de extincin de un compuesto (E1%), o ste
es estimado experimentalmente, midiendo la absorbancia (AX) de una muestra del
compuesto de concentracin desconocida (cx) se puede calcular su concentracin.
A X Ao

cx

En esta forma se obtiene la concentracin (cf) de la muestra problema en la cubeta, para

obtener la concentracin original (ci) se debe considerar las diluciones correspondientes al
ensayo usado para cuantificar.
vi * ci v f * c f
O bien se puede recurrir a la Frmula del Estndar, donde la concentracin desconocida
puede determinarse sobre la base de un slo estndar, de acuerdo a la siguiente ecuacin:
vi
vi
AS cmp mp AMP CS s
vf
vf
As y Amp son las absorbancias del estndar y muestra problema, respectivamente.
Vi corresponde al volumen de la solucin estndar o de la muestra problema ocupado en el
ensayo para cuantificar.
Vf corresponde al volumen final del ensayo ocupado para cuantificar.
Cs y Cmp corresponden a las concentraciones de las soluciones estndar y muestra
problema respectivamente. Ambas concentraciones se refieren a las originales sin la dilucin
propia del ensayo ocupado para cuantificar.
14. Qu es una curva de calibracin y en qu consiste el mtodo de trabajo con una
de ellas?
Es una curva de referencia que se construye con las cantidades conocidas de una sustancia;
en funcin a la concentracin de un analito, que se utiliza para determinar la cantidad de esta
sustancia presente en una muestra incgnita. Se necesita seleccionar un modelo para poder
estimar los parmetros que nos permitan establecer una linealidad en la curva y a su vez
obtener resultados que sean directamente proporcionales a la concentracin de un compuesto
en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo. En resumen se trata de
comparar una propiedad del analito con los estndares de concentracin conocidos de este
mismo. Para elaborar una curva de calibracin es necesario un modelo de lnea recta que
consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a:
N: Una serie de puntos experimentales.
X: Variable independiente, concentracin del analito, los puntos se definen por esta.

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Y: Variable dependiente, respuesta instrumental.

b: Ordenada al origen.
m: Pendiente.
Ecuacin: y = mx + b
r2: Coeficiente de determinacin
Para tener una buena exactitud y
confiabilidad estadstica se utiliza
se utiliza el mtodo de los mnimos
cuadrados. Este mtodo tiene como
objetivo encontrar una recta del
calibrado que haga que la
sumatoria de los cuadrados de las
distancias verticales (residual) entre
cada punto experimental y la recta
de calibrado sea mnima o igual a

cero.

Las frmulas para determinar ciertos elementos son las siguientes:

Pendiente:
Ordenada al origen:

Coeficiente de determinacin:

Los parmetros que se determinan a partir de las curvas de calibracin obtenidas con
cualquiera de ellas son:
Linealidad: Es una caracterstica cualitativa de la grfica. Para ello se debe identificar
la pendiente, ordenada al origen y el coeficiente de determinacin(r2 > 0.98)
Sensibilidad: Se encarga de medir su capacidad para discriminar entre pequeas
diferencias en la concentracin del analito. Los factores que limitan la sensibilidad son:
la pendiente de la curva de calibracin y la precisin del sistema de medida.

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Lmite de deteccin: Es la mnima concentracin del analito detectable por el mtodo

utilizado para medirlo en la solucin.
Lmite de cuantificacin: Se refiere a la mnima concentracin del analito que puede
ser determinada con una exactitud y precisin aceptables.
Intervalo analtico: Intervalo de la concentracin en el que el analito puede ser
determinado por la curva de calibracin.

15. Por qu en las determinaciones fotomtricas se debe conocer la linealidad?

Porque por medio de la linealidad fotomtrica se conoce el rango de absorbancias dentro del
cual el espectrofotmetro produce respuestas proporcionales a los cambios de concentracin
de una sustancia. Es importante conocer la relacin entre la absorbancia y la concentracin
de una sustancia para poder determinar un problema en la concentracin.

Bibliografa

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de la calidad entre laboratorios. XXV. Efecto de la linealidad fotomtrica sobre la calidad
analtica.III. Laborat-acta.
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ANALTICOS. Mxico: Departamento de Qumica UNAM.
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D Skoog, D. West y F. Holler, 1995, Qumica Analtica, 6 Edicin.
Harris, Daniel C.(2001). Anlisis Qumico Cuantitativo. Espaa. Editorial Reverte.