UNIVERSIDADE FEDERAL DE CINCIAS DA SADE DE PORTO ALEGRE

RELATRIO DE AULA PRTICA

BIOQUMICA I

DETERMINAO DO PONTO ISOELTRICO DA CASENA

Introduo:

A protena pode apresentar carga eltrica positiva, negativa ou nula, o resultado ir

depender do pH no qual ele est sendo submetido. A estrutura proteica e os fatores de
solubilidade se modificam com as variaes do pH na soluo.
O ponto isoeltrico da casena 4,7, ou seja, o ponto de pH que ela precipita. O
ponto isoeltrico quando a protena possui um equilbrio entre as cargas positivas e
negativas apresentando solubilidade mnima, pois a carga efetiva da molcula nula e
com isso a repulso entre as molculas diminui. E com isso, formam-se grumos que
tendem a precipitar.
O objetivo deste experimento foi identificar o ponto isoeltrico da casena atravs do
valor do pH de cada tubo e sua turbidez a partir da adio de diferentes volumes de
cido.

Materiais e Mtodos:

Procedimento 1: Extrao da Casena (J realizado pela tcnica do laboratrio)

Procedimento 2: Preparao de uma Soluo de Casena

Em um Erlenmeyer, foi colocado aproximadamente 1g da casena extrada no
procedimento 1. Aps, foi adicionado 50mL de gua destilada e a casena foi
ressuspendida. A essa soluo, adicionou-se 25mL de uma soluo de hidrxido de
sdio 1 M que foi agitada lentamente at a completa dissoluo da casena.
Posteriormente, foi adicionada soluo anterior, 25 mL de uma soluo de hidrxido
de sdio 1 M, que consequentemente foi agitada lentamente. Por fim, o pH da soluo
foi ajustado utilizando soluo cida (cido actico) ou bsica (hidrxido de sdio), at
que o valor se encontrasse prximo da neutralidade.

Procedimento 3: Determinao do Ponto Isoeltrico da Casena

Primeiramente, 9 tubos foram numerados e, aps isto, houve a distribuio de
volumes de reagentes de acordo com a tabela 1. Ao trmino da distribuio dos
reagentes, foi adicionado 0,5 mL da soluo de casena obtida no procedimento 2.

Cada tubo foi agitado lentamente para dessa forma, evitar a formao de espuma.
Aps a agitao, verificou-se o grau de turbidez e o valor de pH de cada tubo.

Tabela 1: Distribuio dos Reagentes

Tubos
Reagentes (mL)
H2O destilada
c. actico 0,01 M
c. actico 0,1 M
c. actico 1 M
c. actico 2 M

4,0
0,5
-

4,4
0,1
-

4,3
0,2
-

3,7
0,8
-

3,5
1,0
-

2,5
2,0
-

0,5
3,0
-

2,0
2,7

1,2
3,5

Resultados e Discusso:
Os resultados encontrados a partir do experimento em questo relacionam-se com o
grau de turbidez e valor de pH observados. O grau de turbidez foi classificado
utilizando os seguintes cdigos:

Cdigo
0
x
xx
xxx
xxxx

Grau de turbidez
Ausncia de Turbidez
Mnima Turbidez
Turbidez Moderada
Mdia Turbidez
Alta Turbidez

Os resultados obtidos encontram-se na tabela abaixo:

Tubos
pH
Turbidez

1
5,18
0

2
5,38
0

3
4,75
xx

4
4,29
xxxx

5
3,03
xxx

6
2,63
x

7
2,39
0

8
2,13
0

9
1,95
0

Baseando-se nos resultados supracitados, observa-se que o tubo 4 obteve a maior

turbidez dentre os outros estudados. Pode se dizer que os tubos de 1 a 3 esto
desprotonados. J os tubos de 5 a 9 esto protonados.
Sabe-se que no ponto isoeltrico a carga da casena nula (zwitterion). Essa
caracterstica permite que as foras de repulso entre as molculas da protena e as
foras de interao entre as molculas da casena com as molculas do solvente
sejam muito pequenas. Dessa forma, a separao do sistema ocorre mais facilmente,
o que acarreta na formao de aglomerados que tendem a ficar cada vez maiores e
que, consequentemente, precipitam.
De acordo com a maior turbidez do tubo de nmero 4, sabe-se que o ponto isoeltrico
da casena encontra-se quando o pH est em torno de 4,29.
Concluso:

A solubilidade das protenas varia de acordo com o pH. O ponto isoeltrico difere
para cada protena e ocorre no momento em que a estrutura apresenta menor
solubilidade com a gua. Logo, analisando os resultados obtidos neste experimento e
relacionando-os com os dados de outros trabalhos, conclui-se que o ponto isoeltrico
da casena est entre pH 4,0 e 5,0.

Bibliografia:
Extrao, purificao e determinao do ponto isoeltrico da casena do leite.
Disponvel em <http://www.abq.org.br/cbq/2012/trabalhos/14/557-14229.html> Acesso
em 20 Agosto 2014
Casena. Disponvel em <http://pt.m.wikipedia.org/wiki/Case%C3%ADna> Acesso em
20 Agosto 2014
LEHNINGER, A.L. Lehninger. Princpios de Bioqumica. Traduzido por Arnaldo Antonio
Simes e Wilson Roberto Navega Lodi. 2 ed. So Paulo: Editora Sarvier, 1995, p. 99143.

QUESTIONRIO

1. A protena possui a propriedade de apresentar aglomerados ou precipitados. A

carga eltrica nula no seu ponto isoeltrico. Isso permite a identificao do seu ponto
isoeltrico, pois h uma menor interao entre as molculas da prpria protena ou
ento das molculas da protena com as molculas do solvente.
2. Logo de inicio, o tubo do ponto isoeltrico teve maior turbidez, depois de um
determinado tempo fiou pouco turvo e em seguida houve um aumento novamente da
turbidez, logo aps a turbidez voltou a diminuir.
3. a) A casena solvel no leite humano com pH de aproximadamente 6,6.
b) Se acidificssemos o pH do leite at um valor de pH que coincida com o ponto
isoeltrico da casena ela formaria aglomerados e precipitaria no leite.
4. Existem bactrias no leite que realizam o processo de fermentao ltica,
transformando o acar do leite em cido ltico. Isto leva um abaixamento no pH do
meio, ou seja, a um aumento na acidez do leite. O objetivo de se adicionar soda
custica ao leite neutralizar esse cido, pois a soda custica tem a capacidade de
tirar a acidez evitando que a mesma se eleve tanto a ponto de coalhar o leite,
deixando-o imprprio para uso comercial.