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INTRODUCCION:
Los distintos tipos de mtodos de pruebas bioqumicas permiten determinar las
caractersticas metablicas de las bacterias objeto de identificacin. Algunas de
estas pruebas son tcnicas rpidas, ya que evalan la presencia de una enzima
preformada y su lectura vara entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras
pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microrganismo con una
incubacin previa de 18 a 48h; a este grupo pertenecen la mayora de las pruebas
que detectan componentes metablicos o aquellas que determinan la sensibilidad
de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de
identificacin que contienen el sustrato a metabolizar.
En el laboratorio disponemos de numerosas tcnicas para la caracterizacin
bioqumica de una especie.
En general el microrganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia
nutritiva especfica o sustrato y despus de la incubacin del cultivo se examina
para ver los cambios qumicos que hayan ocurrido.
II. OBJETIVOS:
1. Demostrar la accin de los microrganismos sobre diferentes substratos.
2. Identificar los microrganismos por la accin enzimtica que ejercen sobre dichos
substratos.
III. MATERIALES:
- Caldo peptonado o caldo
triptosa en tubos de 5 ml
- Citrato Simons en tubos plano
inclinado.
- Triple sugariron (TSI) en tubos
plano semi-inclinado
- Mechero de alcohol
- Asa de siembra
- Lpiz de cera
- Cepas puras de bacterias
coliformes
- Reactivos de kovacs
- Test de identificacin de
enterobacterias
- (coliformes)
IV.
PROCEDIMIENTOS:
4.1. Prueba de indol (metabolismo del triptfano)
1. Sembrar en el tubo con caldo nutritivo las cepas puras en estudio.
2. Dejar incubar a 37 C por 24 horas.
3. Proceder a la prueba de confirmacin aadiendo a cada tubo unas gotas
del reactivo de kovacs, (2 a 4 gotas).
4. Hacer la lectura de inmediato, que consiste en observar la formacin de un
anillo rojo grosella, lo cual es indol positivo y si se mantiene transparente,
se anotara como indol negativo.
4.2. Prueba del TSI (metabolismo de los aminocidos azufrados y del carbono,
glucosa, sacarosa lactosa)
1. Sembrar por picadura profunda y por estras las bacterias en estudio en
tubos con TSI (o kliger).
2. Incubar a 37 C por 24 horas.
3. Observaar el cambio de color del medio.
La degradacin del azcar se comprueba por el cambio de color del medio
de rojo naranja a amarillo. La formacin de grietas o cavidades es por
formacin de gas (CO2), en el proceso de degradacin de los azucares. La
presencia de un color pardo oscuro, demuestra la formacin de H2O como
el producto de metabolismo de aminocidos.
4.3. Prueba del citrato Simons (metabolismo del cido ctrico)
1. Sembrar por estras en el tubo con el medio de citrato Simons en plano
inclinado.
2. Llevar a la estufa a 37 C por 24 horas.
3. Observar el cambio de color del medio e interprete.
4. El indicador azul de bromotimol, virara el medio del verde inicial al azul
Prusia y la reaccin ser indicada como citrato positivo.
V.
REBICION BIBLIOGRAFICA:
4. Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:
1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a
amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de
glucosa, el medio permanecer de color rojo.
2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su
superficie volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del
medio continuar de color rojo.
3. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se
presentar un ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el
consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa
(fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es
fermentadora de glucosa.
4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es
productora de gas.
Bacterias existentes
VI.
RESULTADOS:
Primera parte
Preparacin de medios
cepas de bacterias
TSI: menor
inclinacin
C.SIMONS: mayor
inclinacin
MEDIO DIFERENCIAL
INDOL
TSI
MUESTRA DE SUELO
LECTURAS
(+) positivo
Cambio de color claro a uno ms oscuro
observndose un anillo cremoso en la parte
superior .Los organismos mviles migraron de la
lnea de siembra y se difunden en el medio
provoca una turbiedad.
Azul (+)
VII.
BIBLIOGRAFIA
VIII.
http://www.seimc.org/
http://www Wikipedia, la enciclopedia libre.htm
microbitos.files.wordpress.com/2010/06/atlasmicrobiologia1.pdf
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-imvic.htm
ANEXOS:
TSI
Caldo pectonado
Observaciones finales
Citrato simn