DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE CIDO RICO

I.

Marco terico.

EL cido rico se produce por la descomposicin de las purinas, sustancias qumicas que entran al
torrente sanguneo durante la digestin de los alimentos o debido a la descomposicin normal de
algunas clulas del cuerpo. Los riones filtran la mayor parte del cido rico presente en la sangre y lo
eliminan del organismo a travs de la orina. Parte del cido rico tambin se expulsa del organismo
en las heces.
Si el cuerpo produce demasiado cido rico o si no logra eliminar cantidades suficientes, es posible
que se acumule en el organismo. El exceso de cido rico tambin puede formar cristales o clculos
en los riones y esto puede provocar lesiones. . Cuando se incrementa la destruccin de los tejidos
(como en diversos tipos de cncer) el cido rico aparece elevado en sangre, aunque la causa ms
comn de su elevacin es la gota, por lo general frente a una ingesta excesiva de carne, no se llega a
eliminar en su totalidad, y se acumula en las inmediaciones del cartlago produciendo fuertes dolores.
Se sospecha que hay niveles elevados de cido rico en el torrente sanguneo porque el cuerpo est
descomponiendo clulas con demasiada rapidez o no est expulsando el cido rico como debiera.
Algunos nios que padecen leucemia u otros tipos de cncer pueden presentar niveles elevados de
cido rico (hiperuricemia).
El anlisis de cido rico en sangre tambin ayuda a los mdicos a controlar a los nios que reciben
tratamientos de quimioterapia o de radiacin. Estos tratamientos pueden incrementar la cantidad de
cido rico presente en la sangre, por lo tanto el anlisis ayuda a asegurarse de que los niveles no
sean demasiado elevados.
Excepcionalmente, el exceso de cido rico en los nios puede provocar gota, una inflamacin
sumamente dolorosa provocada por la acumulacin de cristales de cido rico en el lquido sinovial (el
lquido presente en las articulaciones). La gota afecta con ms frecuencia las articulaciones de los
tobillos, los pies y los dedos del pie.
El anlisis de cido rico en sangre tambin se puede realizar en nios que presentan sntomas de
insuficiencia renal. El ayuno prolongado y algunas afecciones mdicas pueden ir acompaados de
niveles bajos de cido rico en la sangre (hipouricemia).
Niveles normales de cido rico
Existen unos valores entre los que debemos mantener nuestros niveles de cido rico para as evitar
las negativas consecuencias que conlleva el cido rico alto. De esta forma, el valor normal de cido
rico debe mantenerse entre:

Mujeres: de 2,4 a 5,7 mg/dl

Hombres: de 3,4 a 7,0 mg/dl

Para comprobar cul es nuestro nivel de cido rico en la sangre, se realiza un anlisis por separado
o en una peticin general del anlisis bioqumico de sangre. Los resultados del laboratorio mostrarn
la cantidad o concentracin de este qumico en sangre.
Reducir el nivel de cido rico
Las personas con niveles de cido rico superiores al valor normal debern visitar al mdico para que
se les administre el tratamiento ms adecuado; asimismo, ser fundamental mantener una dieta
adecuada para evitar aquellos alimentos que agravan la situacin. Para ello, ser fundamental saber qu
alimentos son buenos para bajar el cido rico y otras medidas fundamentales para tener claro cmo bajar el
cido rico.

Su importancia radica no tanto para medir la funcin renal, sino que su utilidad es para identificar a
personas con riesgo de padecer gota, de produccin de clculos de cido rico, y para el seguimiento
del tratamiento. Se encuentra en sangre y orina como el producto de desecho final del metabolismo
de
las
purinas
dietticas
y
endgenas.
Aunque los valores elevados de cido rico se asocian tradicionalmente con gota, se ha notado que
es muy comn en pacientes hospitalizados con azoemia por enfermedad renal. Es ms comn
encontrar valores aumentados que disminuidos. Los valores disminuidos tienen poco significado
clnico aunque puede bajar antes de un ataque agudo de gota.
Los desrdenes que transcurren con cido rico elevado pueden deberse a tres razones:

Aumento de ingesta de purinas. Esta condicin raramente produce estados hiperuricmicos,

pero es importante en personas con gota u otros estados hiperuricemiantes

Excrecin disminuida. En estado de disfuncin renal aumenta al igual que la creatinina y el

nitrgeno ureico, pero es poco sensible, por lo que no se utiliza para el diagnstico de disfuncin
renal.

Incremento en la produccin. Aqu entra la gota como enfermedad y los sndromes gotosos o
gota secundarias provocados por aumento de lisis celular. En este caso, est aumentada su
concentracin en orina y hay riesgo de produccin de clculos.
Causas de niveles aumentados
a. Gota,
si
la
funcin
renal
2. Funcin
renal
3. Padecimientos que aumentan el desdoblamiento o destruccin celular

es

normal
inadecuada

b) Leucemias, Mielomas multiples, policitemia vera

c) Tratamiento de enfermedad neoplsica
d) Ayuno o desnutricin prolongada
e) Diurticos (aumento
en
5. Dieta rica en purinas (hgado, frijol seco, algunos pescados y carnes)

orina)

II.

Competencia.

Determinar cido rico en el suero sanguneo y orina.

III.

Material y Equipos.
III.1.

a
b
c
d
e
f

Equipos y materiales.

Espectrofotmetro.
Centrifuga.
Jeringas descartable x 5 mL; ligadura y algodn.
Tubos de prueba de 13 x 100 mm.
Micropipetas de 0 a 50 uL., pipetas de 1, 5 y 10 ml.
Gradillas, baguetas.

Micropipetas
Centrfuga

Espectrofotmetro

Centrfuga

Micropipetas

Jeringa descartable y
ligadura

III.2.

Gradilla y tubos de
ensayo

Reactivos.

a.

Reactivo enzimtico

b.

Standard de rea solucin de rea 10 mg / dL.

c. Algodn y alcohol 96 %

Bagueta

IV.

Procedimiento Experimental

IV.1.

EXTRACCIN DE SANGRE
VENOSA PARA LA
DETERMINACIN DE CIDO RICO EN SUERO

1. Preparar materiales para la extraccin de sangre:

2.
3.
4.
5.

Tubo de ensayo
Jeringa de 5cc
Alcohol 96
Algodn
Ligadura

Preparacin del paciente o donador.

Inspeccin y seleccin de la zona de puncin.
Desinfeccin de la zona de puncin.
Extraccin de sangre venosa.

Extraer
muestr
a
de
sangre.

Centrifugar
a 45 rpm
durante 5
minutos.

Centrifugar
a 45 rpm
durante 5
minutos.

Para extraer
el suero o
plasma
sanguneo.

Para
extraer el
suero o
plasma
sanguneo.

Extracci
n de
suero
sanguneo
.

Una
vez
extrado la
sangre
venosa,
traspasarl
o
a
un
tubo
de
13x100
mL
y
llevarlo a
centrifugar

I.1.

DETERMINACIN DE URICO
PLASMA Y ORINA.

EN

En una gradilla disponer 4 tubos de prueba de 13 x

100 mL., marcarlos con las letras
B (blanco)S (standard); P1 (Problema 1) y P2 (Problema 2)y proceder como sigue:
BLANCO

STANDARD

MUESTRA

(mL)

..........

..............

P1
(AC.RIC
O EN
PLASMA)
0,01

STANDARD

(mL)

..........

0,01

............

REACTIVO
ENZIMATICO

(mL)

1,00

1,00

1,00

P2
(AC.RIC
O
ENORINA)
0,01
..............
1,00

Mezclar y dejar 10 minutos a temperatura ambiente a 37 C. leer las

absorbancias en el espectrofotmetro a 540 nm.

a Luego se procedi a tomar

aproximadamente 4mL de sangre de

una muestra desconocida, se

centrifug y del plasma se tom 0,01

mL y se coloc en el tubo P1.

Centrifugar
b Se procedi a tomar 1mL de orina de una muestra desconocida
y se diluy en 20mL de agua

destilada;

luego

en el tubo P2.

de

esa

a 45 rpm
durante 5
minutos.

disolucin se tom 0,01mL y se coloc

Para
extraer el
suero o
plasma
sanguneo.

Luego se procedi como indica la tabla a continuacin:

BLANCO

Agregar al tubo
del BLANCO 1,00
mL del reactivo
enzimtico.

STANDA
RD

Agregar al tubo
del STANDARD:
0,01 mL del
standard
+
1,00 mL del
reactivo

P1

Agregar al tubo
del P1:
0,01 mL de
AC.RICO EN
PLASMA
+
1,00 mL del
reactivo

P
2

Agregar al tubo
del P2:
0,01 mL de
AC.RICO EN
ORINA DILUIDA
+
1,00 mL del
reactivo

Mezclar suavemente y dejar a 37C por 10 minutos.

 se mezcl y se dej en reposo a temperatura ambiente por 10 minutos a 37C y despus

se procede a leer en el espectrofotmetro a 540nm, el contenido de los tubos 1, 2, 3 y 4 y
Anotar las absorbancias.

Leer absorbancia a 540 nm.

V.

RESULTADOS

MUESTRAS
Blanco
Estndar

ABSORBANCIAS a 600
Mezclar y dejar reposar
nm
por 10 minutos.
0
Luego
llevar
al
0,592 A
espectrofotmetro
Con una lectura de =
540nm

M. Problema
1
M. Problema
2

0,196 A
0,149 A

Hallando Factor de Estndar o Calibrador:

Factor de Estndar =

[] St
|.|St

Factor de Estndar=

10 mg/dL
=16,89
0,592

Hallando concentracin de rea en orina (g/24h):

[]rea (mg/ dL)=16,89 x 0,149=2.516 mg/dL
Donde:

2.516 x Factor de disoluci n=[] AC .RICO mg/ dL

Factor de disolucin es 20

2.516 x 20=50,32mg /dL rea

50.32 mg
X

100mL (1dL)
1200mL

Se multiplic por 1200 para

hallar el valor en 24 horas

X = 604,08 mg/24h
Hallando concentracin de cido rico en plasma (mg/dL):
[]rea (mg/ dL)=16,89 x 0.196=3.310 mg/dL AC .RICO

FUNDAMENTOS DEL METODO

El cido rico es oxidado por la enzima especfica uricasagenerndose alantona y H2O2, el cual en
una reaccin mediadapor la enzima POD, reacciona con el Ac. 3-5-Dicloro-2-Hidroxi-Bencensulfnico
y 4-AAP producindose un compuestocoloreado con un mximo de absorcin a 540 nm., en
cantidadproporcional a la cantidad de cido rico presente en la muestra

VI.

CONCLUSIONES

RANGOS DE REFERENCIA:
SUERO O PLASMA
: AC.RICO
Mujeres : 2,6-6,0 mg/dl
ORINA

: AC.RICO

: Hombres: 3,5-7,2 mg/dl

: Orina: 250 a 750 mg/24 h

Se concluye mediante la prctica experimental para la determinacin de AC.RICOen plasma y

AC.RICO en orina que el valor que el donante del sexo femenino presenta en rea en orina es

604,08 mg/24hdemostrndose queest dentro de los rangos de referencia (250 a 750 mg/24
horas) y el otro valor de urea en plasma tambin del mismo donante femenino fue de
3.310 mg /dL AC . RICO

estando dentro de los rangos de referencia (Mujeres

: 2,6-6,0

mg/dl) lo cual nos dice que estn bien los niveles de AC.RICO.
Esta prctica result muy gratificante, porque no slo se comprendi y aprendi a realizar ste
tipo de anlisis, sino tambin porque se hall un resultado conforme.

VII.

CUESTIONARIO

1) Explique a que se debe la coloracin azul que se obtiene al final de la reaccin, ocurrida
en la determinacin de cido rico.
El mtodo qumico clsico para la determinacin de cido rico se basa en la reduccin del cido fosfotungstico por el
cido rico para formar un complejo defosfotungstato azul. El mtodo no es especfico para cido rico debido a que
otros agentes reductores presentes en el suero o plasma tambin producen un complejo de fosfotungstatoazul.En
1980, Fossati y col. (3) describieron un procedimiento para el anlisis de cido rico utilizando uricasa, la cual produce
perxido de hidrgeno a partir de cido rico. El perxido de hidrgeno reacciona entonces con un compuesto fenlico
para producir un colorante rojo que puede medirse espectrofotomtricamente en el rango visible. El procedimiento es
ms especfico y el compuesto fenlicosulfonato de 3,5-dicloro-2-hidroxibenceno (DHBS) aumenta la sensibilidad
debido al alto coeficiente de absorbancia del colorante quinoneimina producido. Este procedimiento de cido rico es
una modificacin del de Fossati

2) Enumere las causas de un incremento elevado de cido rico, no debidas a una

patologa.1. Sobrepeso
El aumento de peso se asocia directamente al aumento de los niveles de cido rico. La obesidad favorece que
aumente la produccin y tambin disminuye la excrecin. Por el contrario, disminuir el peso favorece la disminucin del
cido rico
2. Cerveza y otros licores
Antes de dejar de comerse la ensalada, lo primero que debe de hacer es dejar las latas de cerveza. El consumo de
cerveza y otros licores, es lo que tiene mayor efecto en los niveles de cido rico.
Con solo el equivalente a una cerveza de 350 ml o 30 ml de otros licores, el riesgo de aumentarse el cido rico se
puede hasta casi duplicar. As que definitivamente si ha presentado el cido rico alto, decirle adis la cerveza y otros
licores debe ser lo primero en su lista. Sin embargo, no necesita abstenerse por completo del alcohol. El vino no tiene
ningn efecto en los niveles de cido rico, as que una buena estrategia puede ser cambiar la cerveza por una copa
de vino. Por supuesto, con moderacin, lo cual equivale a una copa de vino al da para mujeres y dos copas para los
hombres (1 copa = 150 ml).
3. Carnes rojas, pescado y mariscos.
La cantidad de protena total de la dieta no tiene efecto en los niveles de cido rico, pero s la fuente de protena. La
carne roja y el pescado son los nicos que s van a favorecer el aumento. Reducir el consumo de stos es una de las
principales acciones a tomar para prevenir la hiperuricemia y gota. La carne roja adems es la principal fuente de grasa
saturada en la dieta, la cual se asocia a resistencia a insulina y enfermedad del corazn, por lo que definitivamente es
mejor que la eviten, en especial los embutidos derivados del cerdo (jamn, mortadela, salchichn, tocineta, etc.).El
pescado es la mejor fuente en la dieta de omega - 3, los cidos grasos protectores del corazn, pero
desafortunadamente si usted tiene el cido rico alto ms bien puede resultar contraproducente. Lo que se
recomienda es que en lugar de consumir pescado, consuma suplementos de los aceites de pescado y aumente sus
fuentes vegetales de omega - 3. Para proteccin se recomienda un suplemento que le aporte 1 gramo de omega - 3 al
da. La mayora de los suplementos en el mercado aportan por cpsula 300 mg de omega - 3 y 1 gramo total de
aceite, por lo que debera de consumir 3 cpsulas al da. Las mejores fuentes vegetales de omega - 3 son la linaza y
las nueces. Estas ltimas tambin han demostrado beneficios en ayudar a controlar los niveles de azcar en sangre,
eso s deben consumirse con moderacin, ya que son altas en caloras, unas dos cucharadas al da es lo que se
recomienda. De linaza tambin se recomienda el consumo de dos cucharadas al da de la semilla molida, ya que as
es como el cuerpo mejor la aprovecha.
4. Fructosa

El siguiente culpable de aumentar el cido rico es la fructuosa. La fructosa es el azcar principal de las frutas, pero no
son precisamente las frutas las que contribuyen al aumento de los niveles de cido rico. El principal problema son los
alimentos que traen adicionada la fructosa, los cuales de hecho se han sealado
3) Cmo debe proceder para determinar cido rico en casos desueros lipmicos?
El cido rico es oxidado por la uricasa en alanto El cido rico es oxidado por lauricasa en alantona y perxido de
hidrgeno. DHBS+4 amino antipirina + perxido de hidrgeno, en presencia de peroxidasa forma un compuesto
coloreado que se mide a 520 nm. La intensidad del color es directamente proporcional a la cantidad de cido rico en
la muestra.
INSTRUMENTOS
Use un espectrofotmetro o colormetro calibrado a 520 nm. (Intervalo aceptable500-540 nm.) Para su uso en
instrumentos automatizados consulte el manual de aplicaciones

SUBSTANCIAS INTERFERENTES
: Las muestras lipmicas requieren blanco de suero, la bilirrubina y el cido ascrbico pueden causar niveles bajos
falsos.
MATERIAL PROPORCIONADO
: Reactivo de uricasa y uricasa cido rico calibrador.
CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de onda 520 nm.

Seleccin de filtros 500-550 nm.
Tipo de reaccin Punto final
Temperatura de incubacin 37C.
Tiempo de incubacin 5 minutos
Volumen de la muestra 0.025 ml
Volumen del reactivo 1.0 ml
Volumen total 1.025 ml
Normal bajo 1.5 mg/dl
Normal alto 7.0 mg/dl
Valor de calibrador 5.0 mg/d

PROCEDIMIENTO

Coloque 1.0 ml. del reactivo de Uricasa dentro de los tubos etiquetados como:
Blanco de reactivos, calibrador, control, muestra 1, etc.
Precaliente tubos a 37C. Por 5 minutos.
Aada 0.025 ml. de muestra a los tubos respectivos.
Incube los tubos a 37C. Por 5 minutos.
Ajuste el instrumento a cero de absorbancia a 520 nm usando blanco de reactivos.

Lea y registre los valores de absorbancia para cada muestra. NOTA: Para instrumentos de lectura directa
ajuste a cero con el blanco de reactivo y con el calibrador ajuste la mezcla del valor del calibrador. Lea las
concentraciones del problema directamente

ESTABILIDAD DE LA REACCION FINAL:

Leer las muestras 10 minutos despus de desarrollado el color.
CALIBRACION:
El calibrador del cido rico Uricasa es proporcionado. Consulte los valores asignados en la etiqueta. No es necesario
hacer curva de calibracin, la linealidad del procedimiento se extiende hasta 25 mg/dl. Valores por arriba de 25 mg/dl
debern ser diluidos (1:1) con solucin salina y reensayados; el resultado se multiplica por 2.
4) Por qu no utiliza la longitud de onda de 650nn para leer la reaccin coloreada?
Si se van a hacer lecturas por encima de 650 nm. Cambiar el fototubo azul en el interior por el rojo e
insertar el filtro rojo.
Las reas del espectro electromagntico utilizadas generalmente en el laboratorio clnico son: el
ultravioleta (UV) y las regiones visibles. La regin visible est definida como la regin entre 380 y 780
nm, mientras que el espectro ultravioleta definido para el laboratorio de qumica clnica cae entre 180 y
380 nm. La luz solar o la luz emitida por un filamento de tungsteno es una mezcla de energa radiante
de diferentes longitudes de onda que el ojo reconoce como blanco. La desintegracin de la regin
visible en color absorbido y color reflejado se ilustra en la tabla 1.
El color que las sustancias adquieren se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la
luz blanca que incide sobre ellas y, slo vemos aquellas longitudes de onda que no fueron absorbidas.
Tabla1: Color absorbido y color observado o complementario para diversas longitudes de onda del
espectro visible
Longitud de la

Color absorbido

absorcion
380 420
420 440
440 470

Color observado
O complementario

Violeta
Azul Violeta
Azul

470 500

Verde Azuloso

500 520

Verde

Amarillo Verdoso
Amarillo
Naranja
Rojo
Prpura

520 550

Verde Amarillento

Violeta

550 580

Amarillo

Azul Violeta

580 620

Naranja

Azul

620 680

Rojo

680 780

Purpura

Verde Azuloso
Verde

Si una solucin absorbe energa radiante (luz) entre 440 y 470 nm (azul), transmitir todos los dems
colores y aparecer naranja al ojo. Por lo tanto el naranja es el color complementario del color azul. Si
se enfoca la luz blanca sobre una solucin que absorbe energa entre 500 y 520 nm (verde), la luz
transmitida y por consiguiente la solucinaparecer color prpura (azul y rojo). Si se dirige una luz roja
sobre una solucin de color rojo, la luz roja ser transmitida porque esta solucin no puede absorber
la luz roja. Por otra parte, si la luz verde se hace incidir sobre una solucin de color rojo, no hay luz
transmitida, puesto que la solucin absorbe toda la luz excepto la roja. El ojo humano responde a la
energa radiante entre 380 y 780 nm, pero los instrumentos del laboratorio permiten mediciones del
espectro tanto de longitudes de onda corta como la UV y longitudes de onda larga, como el infrarrojo.
5) Cmo procedera para determinar cido rico utilizando UV.
El mtodo de absorcin UV de los cidos nucleicos. Introducido por Casperson en 1936.Se
fundamenta en el hecho de que las bases puricas y pirimidinicas, como consecuencia de los dobles
enlaces conjugados de sus anillos, absorben luz ultravioleta en una regin que corresponde a los
260nm. Esta absorcin, depende en parte del PH debido a las reacciones de ionizacin de las bases.
Este comportamiento de luz UV es extrapolable al ADN y al ARN.
Las protenas y algunas otras sustancias como: las bases puricas (cido rico, guanina, etc.) y
algunos derivados pirimidinicos pueden tambin absorber la luz ultravioleta en la misma longitud de
onda, pero este hecho no debe ser causa de confusin, ya que dicha absorcin es dbil.
El ARN y el ADN absorben en la misma longitud de onda, por lo que los valores espectrofotomtricos
obtenidos suministran la cuanta global de los cidos nucleicos. Mediante extracciones apropiadas del
ARN y el ADN se conseguir discernir la cantidad de un cido.

VIII.

REFERENCIA BIBLIOGRFICA
Devlin TM. Bioqumica. 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
Lehninger. Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona. Omega. 2006.
Mathews CK, Van Holde KE. Bioqumica. 3a ed. Madrid. Addison Wesley. 2002
http://www.valoresnormales.com/perfil-y-funcion-renal-orina

 http://es.scribd.com/doc/39103754/Acido-Urico-LS