UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE

SAN MARCOS
(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA
:

Farmacia y Bioqumica

CURSO:

Qumica orgnica

TEMA:

Cromatografa en capa fina de cido acetil saliclico

PROFESOR:

Dr. Cesar Fuertes Ruiton

INTEGRANTES:

Cadillo Espinoza Katherine Yuliana

Conislla Vigo Alberto No
De la Cruz Tito Fiorella
Quispe Hilario Gisell
Valverde Pingo Exer Leonel

AO:

Primero

SEMESTRE:

2012-II

Lima, Octubre del 2012.

INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica que permite separar los componentes de una
mezcla.
Esta separacin se logra utilizando un sistema bifsico: fase estacionaria
donde se retienen los compuestos a separar y fase mvil que desplaza de
forma diferencial los compuestos a travs de la fase estacionara.
Dependiendo de la naturaleza de las fases, se pueden distinguir distintos tipos
de cromatografa:
Cromatografa slido-lquido: la fase estacionaria es un slido y la
mvil un lquido.
Cromatografa lquido-lquido: ambas fases son lquidos y en la
estacionaria el lquido se ancla a un soporte slido.
Cromatografa lquido-gas: la fase estacionaria es un lquido no voltil
sobre soporte slido y la fase mvil un gas.
Cromatografa slido-gas: la fase estacionaria es un slido y la mvil
un gas.
La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaria y la fase mvil
atraviesa el sistema desplazndo los componentes de la mezcla a distintas
velocidades que dependen de la afinidad de los mismos por cada una de las
fases. Se denomina elucin a la migracin de los componentes de la mezcla a
lo largo de la fase estacionaria impulsados por la mvil.

Existen otras clasificaciones para los distintos tipos de cromatografa:

A) En funcin de la interaccin que se establece entre los componentes de la
mezcla y las fases mvil y estacionaria:
Cromatografa de adsorcin: se producen interacciones de tipo polar
siendo la fase estacionaria un slido.
Cromatografa de particin: la separacin se basa en las diferencias
de solubilidad de los componentes de la mezcla entre las dos fases

siendo ambas lquidas. Cuando la estacionaria es menos polar que la

mvil se denomina cromatografa en fase inversa.
Cromatografa de intercambio inico: se producen intercambios
entre iones presentes en la fase estacionaria y los del compuesto
orgnico solubilizado e ionizado en la fase mvil.
B) En funcin del tipo de soporte empleado para la fase estacionaria:
Cromatografa en columna: utiliza como soporte una columna de
vidrio
Cromatografa en capa fina: el soporte es una placa de vidrio,
aluminio o plstico
La cromatografa se puede emplear para:
Conocer el nmero de componentes de una mezcla e identificarlos por
comparacin con patrones, Cromatografa Analtica.
Separar mezclas de compuestos y como mtodo de purificacin,
Cromatografa Preparativa.
CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
La cromatografa de adsorcin emplea una fase estacionaria slida de
carcter polar, ADSORBENTE y una fase mvil lquida, ELUYENTE. Se
utiliza tanto con fines analticos como preparativos y la separacin de los
componentes de la mezcla viene determinada por las interacciones polares de
los componentes de la misma con las fases estacionaria y mvil. Por lo tanto,
los compuestos ms difciles de separar mediante este tipo de cromatografa,
sern aquellos que tengan una polaridad muy similar.
FASE ESTACIONARIA: ADSORBENTE
Est constituida por un slido poroso, finamente granulado, con centros activos
polares en su superficie donde se adsorben las molculas de los compuestos
que se van a cromatografiar. Cuanto menor sea el tamao de partcula de este
material mayor ser la capacidad de adsorcin.
La adsorcin se debe a interacciones intermoleculares del tipo dipolo-dipolo,
dipolo dipolo inducido o enlaces de hidrgeno entre el adsorbente y el soluto.
El adsorbente ms utilizado es la gel de slice donde las interacciones tienen
lugar entre los grupos SiOH y SiOSi; tambin se emplea con relativa
frecuencia almina (Al2O3).

El adsorbente debe ser inerte con las sustancias a cromatografiar. La gel de

slice
presenta carcter cido y la almina puede adquirirse con carcter neutro,
cido o bsico.
FASE MOVIL: ELUYENTE
Es un disolvente en el que los componentes de las mezcla son, al menos,
parcialmente solubles. Al aumentar la polaridad del disolvente aumenta la
velocidad de elucin de los compuestos de la mezcla.
Se puede utilizar un nico disolvente o una mezcla de disolventes e incluso
llevar a cabo la elucin con un gradiente de polaridad aumentando
progresivamente la proporcin del disolvente ms polar.
RETENCIN
Las molculas de soluto S se adsorben en los centros polares de la fase
estacionaria X y, a medida que se produce la elucin, van siendo desplazadas
por las molculas de disolvente/s que constituyen la fase mvil M. La retencin
de un soluto se puede justificar por la competencia que se establece entre S y
M por adsorberse a los centros polares X, es decir, depende de los valores de
las constantes de los equilibrios:
X + S XS
X + M XM
Que estn en funcin de:
Polaridad del compuesto a eluir que depende de sus grupos funcionales
Naturaleza del adsorbente
Naturaleza del disolvente
CROMATOGRAFA ANALTICA EN CAPA FINA (CCF)
La fase estacionaria (adsorbente) se encuentra depositada, formando una capa
fina de un espesor uniforme sobre una placa de vidrio, plstico o una lmina
metlica. La mezcla a analizar se deposita con un capilar a una pequea
distancia del borde inferior de la placa y se introduce en una cubeta donde est
la fase mvil (eluyente), que ascender a lo largo de la capa por capilaridad
eluyendo a los componentes de la mezcla a distintas velocidades, lo que
provoca su separacin. Cuando el frente del disolvente se encuentra a 0.5 cm
del borde superior, se saca la placa de la cubeta, se marca hasta donde ha
llegado el eluyente y se deja secar para, a continuacin, proceder a la
visualizacin
de
las
manchas
correspondientes
a
los
productos
cromatografiados.
Determinacin del Rf
Se conoce como Rf (rate factor) la relacin entre las distancias recorridas por
un compuesto y por el disolvente desde el origen del cromatograma.

Cada compuesto en unas condiciones cromatogrficas determinadas:

adsorbente, disolvente, temperatura, etc., tiene un valor constante y

caracterstico de Rf. Sin embargo, solo se pueden establecer

comparaciones entre los Rf de dos compuestos cuando los dos se
eluyan juntos en la misma placa. La distancia recorrida por el compuesto se
mide desde el centro de la mancha.

Visualizacin del Cromatograma

Con luz UV (ultravioleta).- Las placas suelen llevan incorporado un

indicador fluorescente que absorbe luz UV y emite luz visible,
generalmente verde. Cuando se cromatografan sustancias que
absorben en el UV donde se encuentra el compuesto no absorbe el
indicador y como resultado vemos una mancha que indica su presencia.
Con un agente revelador.- Se emplea cuando las sustancias no
absorben radiacin UV. El revelador reacciona con los productos
absorbidos dando lugar a compuestos coloreados y por tanto se utilizar
uno u otro en funcin del compuesto que se quiera visualizar.
Algunos ejemplos: H2SO4 concentrado en etanol para azcares,
nihidrina para aminocidos y yodo para compuestos insaturados y
aromticos.

Aplicaciones de la CCF
La CCF es una tcnica cualitativa muy utilizada en los laboratorios de Qumica
Orgnica para:

Determinar el nmero de componentes de una muestra:

Precaucin si solo hay una mancha muy retenida o aparece junto al
frente del disolvente hay que probar otro eluyente.

Comprobar la pureza de un compuesto: aparecer una sola mancha.

Se debe comprobar que solo hay una mancha utilizando distintos
eluyentes.

Determinar la identidad de dos compuestos: Hay que tener

precaucin, pues valores de Rf iguales (o prcticamente iguales) para
dos compuestos en una misma placa no garantizan inequvocamente su

identidad. En la misma placa hay que cromatografiar una mezcla de los

compuestos cuya identidad se quiere comprobar.

Seguir la evolucin de una reaccin: cada cierto tiempo se

cromatografan en una misma placa los reactivos y la mezcla de
reaccin.

Determinar el disolvente ms apropiado para llevar a cabo una

separacin mediante una cromatografa preparativa (en columna
o en placa).

CROMATOGRAFA EN COLUMNA (CC)

Es el mtodo ms utilizado para la separacin y purificacin de compuestos
orgnicos, slidos o lquidos, a escala preparativa. La fase estacionaria
(adsorbente) se coloca en una columna de vidrio que termina en un
estrechamiento con una llave y se impregna con el eluyente (fase mvil). La
mezcla a separar se deposita en la parte superior de la columna y la fase mvil
atraviesa el sistema. Los compuestos se van eluyendo disueltos en el eluyente,
se van recogiendo ordenadamente en fracciones de pequeo volumen (1,2,...)
y se analizan por CCF. Los productos van saliendo de la columna segn su
polaridad, primero salen los menos polares que son los menos retenidos por el
adsorbente y los ltimos los ms polares por su mayor retencin en la fase
estacionaria.
El adsorbente ms utilizado para este tipo de cromatografa es la gel de slice y
en segundo lugar la almina.
El tamao de partcula del adsorbente es importante para la separacin y su
eleccin depende en gran medida de que la elucin de la cromatografa se
realice por gravedad o a media presin (flash chromatography). En una elucin
a media presin se pueden emplear tamaos de partcula ms pequeos, que
permiten una separacin ms eficaz. Sin embargo, en una elucin por
gravedad el uso de tamaos de partcula pequeos impedira el flujo del
disolvente.
Antes de realizar una separacin en cromatografa de columna hay que elegir
adecuadamente el disolvente haciendo ensayos en CCF.

PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES Y REACTIVOS:

cido acetilsaliclico obtenido

por extraccin (prctica n2)
y por recristalizacin (prctica
n3). Observar Fig. 1.
cido acetilsaliclico (muestra
estndar)
N-hexano
Metanol
Cloroformo
Reactivo de cloruro frrico

Iodo metlico
Aspersador
Cromatoplaca de slica gel
Cmara de revelado UV
Tubos capilares de vidrio (5080 cm)
Campana extractora

Fig.1. cido acetilsaliclico. El frasco traslcido contiene cristales obtenidos por

extraccin y el frasco oscuro contiene los cristales obtenidos por
recristalizacin.

MTODO OPERATORIO
1. Diluir 0.5 a 1 ml de Cloroformo y metanol (3:1) en 3 tubos de ensayo que
contienen una pequea muestra de 5 mg de cristales de cido
acetilsaliclico obtenidos por extraccin, recristalizacin y una muestra
estndar de dicho compuesto (Fig.2 y 3).

Fig.2. Al llenar los tubos de ensayo, tuvimos en cuenta el mtodo del

pergamino para evitar perder muestra.

Fig.3. El llenado de cloroformo a los tubos de ensayo se realiz en la

campana extractora.
2. Sellar los tubos capilares de vidrio de tal manera que quede una punta
por la cual pueda aplicarse puntadas a la placa cromatogrfica de silica
gel (Fig.4).

Fig.4. Romper la punta del tubo de ensayo aplicando una pequea fuerza de tal
manera que sta sea mnima.
3. En la placa cromatogrfica de silica gel, marcar el origen (1 cm contando
desde el borde inferior) y las posiciones de las 3 muestras a analizar
(Fig.5).

Fig.5. Para evitar errores al observar impurezas en el revelado en

cmara UV, no tocar la cromatoplaca directamente.
4. Preparar el sistema de solventes de 12 ml que consiste en vertir Nhexano en un beaker. Posteriormente, introducir la cromatoplaca con un
ngulo de inclinacin que se aproxime a 45. (Fig.6).

Fig.6.Tener en cuenta que hay que tapar el beaker que contiene la

cromatoplaca, pues el sistema de solventes contiene un compuesto que
se evapora.
5. Realizar puntadas dbiles a la cromatoplaca con la fase mvil
correspondiente contenida en los tubos capilares (siembra).
Posteriormente llevarlo a la cmara de revelacin UV e identificar las
manchas que probablemente pertenezcan al cido acetilsaliclico (Fig.7).

Fig.6. Las manchas marcadas en crculo demuestran pertenecer al

cido acetilsaliclico por haber recorrido la misma distancia en las tres
muestras.
6. Otra manera de reconocer la presencia de cido acetil saliclica es
usando triclorofrrico (FeCl3) y rociarlo por toda la cromatoplaca. Este
indicador tiende a colorearse en presencia de grupos fenoles (Fig. 7).

Fig.7.El anin frrico a partir del cloruro frrico tiende a unirse a los
alcxidos. Al unirse, tiende a colorearse amarillo-mbar.

RESULTADOS
Para el presente experimento se requiri nuevamente aprox. 5 mg de los
cristales de cido acetil saliclico obtenido de la prctica n3
Purificacin de compuestos orgnicos por cristalizacin- e igual cantidad
de cristales obtenidos por extraccin de metabolitos de la prctica n2
Extraccin de compuestos orgnicos-.
Al plasmar la parte terica en la prctica, surgi un interrogante: la
elaboracin de una fase mvil ideal. Como requeramos de un solvente
que no generara tanto desplazamiento, pues el frente de solvente no era
muy alejado del origen, se emple un solvente que no fuera tan polar
pero a la vez s; por lo tanto, una combinacin de 3:1 en relacin al
cloroformo y metanol respectivamente era ideal, pues disminuira la
polaridad del metanol. Recordemos que la polaridad est directamente
relacionado con el desplazamiento recorrido.
La inclinacin de la fase estacionaria tena que ser la ms aproximada a
45 posible debido a que la fuerza contra gravedad que sufre la fase
mvil seria menor, pero debido a que la realizamos en un beaker
pequeo, nuestro ngulo correspondi a 70.35 (Fig. 8).

7 cm

Tg = 7/ 2.5
Tg = 2.8
ArcTg (2.8) = 70.35

Fig.7. Clculo aproximado del2.5

ngulo de inclinacin de la cromatoplaca.
cm

 Al comparar la cantidad y nivel de marcas de la cromatoplaca

visualizadas en la cmara de revelado UV, pudimos percibir la presencia
de cido acetilsaliclico en las 3 muestras tomadas. No obstante,
tambin se percibi la posible cantidad de impurezas existentes en las
muestras de cristales por extraccin y recristalizacin. A mayor cantidad
de marcas visualizadas, mayor contenido de impurezas.
El otro revelador empleado fue escogido en base a sus cualidades
cromatforas, es decir, un compuesto orgnico que en presencia de
algn grupo funcional o ion de algn elemento se colorea; en este caso
empleamos al cloruro frrico (FeCl3) debido a que cambia de color en
presencia de grupos fenlicos. Si bien el cido acetil saliclico no es
reconocido con este indicador, solo es posible el reconocimiento del
cido saliclico, un subproducto que pudo originarse en la extraccin y/o
recristalizacin (Fig.9).

Fig.9 .cido saliclico. Se puede observar en su estructura el grupo

fenlico.

DISCUSIONES
En esta prctica se realiz la cromatografa en capa delgada (C.C.D) de 3
muestras de cido acetilsaliclico: una de la clase de extraccin, otra de la
clase de purificacin y una ltima de patrn estndar.
Se empez diluyendo cada muestra por separado en 1 ml de cloroformo. Se
elige el cloroformo por algn motivo especial? En realidad no, pudo haberse
elegido alguna otra sustancia que cumpla la condicin que diluya al cido
acetilsaliclico, para as poderlo sembrar en la cromatoplaca (fase estacionaria).
Como fase estacionaria se nos facilit una lmina de aluminio cubierta con
slica gel. Es comn usar, en C.C.D., slica gel como fase estacionaria debido a
que es un compuesto polar, perfecto para absorber al soluto por formacin de
enlaces dipolo y puentes de hidrgeno, y porque es inerte con respecto a
varias muestras, evitando as probables reacciones con las muestras de cido
acetilsaliclico.

Luego se prepar el sistema de solventes (fase mvil), en el cual se eligi

cloroformo-metanol (3:1). Qu criterio se utiliz para elegir el sistema de
solventes antes mencionado y la proporcin entre ellos? Para responder, es
necesario mencionar que la mezcla de solutos de la muestra es absorbida en la
superficie del absorbente y luego desabsorbida por el solvente de la fase mvil,
as el ms fuertemente atrado por el absorbente es ms difcil de eludir y ser
el que se desplace menos.
Al ser de nuestro inters el criterio de pureza y separacin, necesitamos que el
desplazamiento del cido acetilsaliclico sea el adecuado para poder observar
el desplazamiento, tal vez mayor o menor, de las impurezas.
As, para lograr que el cido acetilsaliclico no sea tan retenido por la silica gel,
se necesita tener un sistema de solventes cuyos enlaces sean ms fuertes con
el cido acetilsaliclico que este ltimo con la slica gel. De esta forma se logra
un desplazamiento ptimo y una mejor resolucin al momento de observar los
resultados.
Justo la proporcin tambin se debe a ello, conviene tener ms cloroformo,
para que se enlace con el cido acetilsaliclico y este ascienda por capilaridad,
que metanol para que lo retenga a la slica gel por ser polar.
Por otro lado, para poder observar nuestros resultados usamos como
reveladores el espectro UV y FeCl 3. Con el espectro UV pudimos observar la
posicin del cido acetilsaliclico e impurezas de las 2 primeras muestras y
compararlas con la muestra patrn. Los puntos de posicin del cido
acetilsaliclico de las 3 muestras no eran tan lejanos y hasta se podra decir que
coincidan. Tambin se observ otras manchas debajo de las primeras muestras
que al parecer se tratara de impurezas. Es aqu que usamos FeCl 3, con la cual
confirmamos que aquellas manchas antes mencionadas se trataban de
impurezas, pues se colorearon de rojo oscuro, color caracterstico de la
reaccin del FeCl3 con grupos fenoles, los cuales en esta prctica, por ser el
cido acetilsaliclico el soluto principal, son considerados impurezas.

CONCLUSIONES
Al realizar la cromatografa de capa fina utilizamos como fase mvil una
mezcla de cloroformo y metanol, en una proporcin de 3:1
respectivamente con la finalidad de hallar una polaridad media ya que el
metanol es muy polar y el cloroformo es apolar y la sustancia de esta
manera no subira lentamente ni muy rpidamente y como fase
estacionaria se us la silica gel.
Se sembr tres tipos el cido acetilsaliclico, uno el que obtuvimos de la
extraccin, otro por recristalizacin y el otro que fue la muestra patrn
que supuestamente es cido saliclico puro. Luego se us dos tipos
reveladores para observar nuestra cromatografa
y utilizando el

revelador UV observamos que en el frente del solvente aparecan puntos

en la columna donde sembramos en los tres casos apareci no a la
misma altura ya contienen diferente grado de pureza las muestras,
luego como solo eso es visible en presencia de iluminacin UV utilizamos
otro revelador, en este caso el cloruro frrico, con el cual nuestra silica
gel se colore medio amarillento o marrn en la parte donde haba
impurezas , la muestra patrn tenia menor grado de impureza.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Wade L.G. Qumica orgnica 7 edicin. Editorial Pearson
educacin, Mxico, 2012.
Wade L.G. Qumica orgnica 5 edicin. Editorial Pearson
educacin, Mxico, 2004.