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La diferenciacin de los sexos en los peces del sub-orden Charachoidei slo es posible en
la poca de desove. Los machos presentan vientre comprimido y dejan fluir el semen
cuando se les presiona el abdomen. Se debe tener en cuenta que los machos en
condiciones para el desove presentan el semen viscoso y de color lechoso; individuos con
semen muy fluido y transparente deben evitarse.
Las hembras sexualmente maduras muestran un vientre flcido, no siempre voluminoso,
papila genital ligeramente dilatada. Debe evitarse utilizar peces con papila muy
prominente y muy colorada, eso demuestra que tales peces estan en un proceso
adelantado de reabsorcin de sus gnodas; forzar un desove enindividuos en esas
condiciones se tendr un resultado negativo. Si ocurre un desove, el producto sexual ser
de psima calidad comprometiendo as la sobrevivencia.
Los machos de pirapitinga, cuando estn prontos para desovar emiten ronquidos igual
que los Prochilodus machos, lo que no ocurre con el tambaqui.
Desde el punto de vista prctico, la cantidad de racin a ser establecida ser en funcin
del grado de apetencia de los peces. Restos de alimento en el fondo del vivero,
presentando olor caracterstico de putrefaccin, indica que esthabiendo exceso de
abastecimiento, eso ser fcilmente detectado examinando peridicamente los locales de
alimentacin del vivero; constatando tal hecho se efecta el inmediato cambio de agua,
restablecindose as las condiciones normales del vivero, el abastecimiento de racin
ser gradual hasta que los peces se alimenten normalmente.
2. Edad y Peso
Hembras de tambaqui estn para el desolve en el 4 ao de vida, los machos alcanzan
ese estadio a los 3 aos de edad.
En el caso de pirapitinga, las hembras y machos estn en condiciones de desove a los 3
aos de vida.
Es evidente que eso ocurrir si las condiciones ideales de alimentacin. espacio uycalidad
de agua fueron establecidas. En la prtica, los mejores resultados son obtenidos con
ejemplares de edad superior a las descritas encima.
Ambas especies son fciles de ser manipuladas en los trabajos de coleccin de productos
sexuales. Entrento, se recomienda trabajar con individiuos de 4 a 8 kg de peso; en
determinado momento esos peces se movilizan bruscamente, dificultando su manejo, el
uso de individuos de menor porte significar la economa de hipfisis.
Despus de 5 aos de uso esos ejemplares pueden ser descartados/substituidos por
otros ms jvenes y de menor porte.
Dosaje
Durante una evolucin natural el pez es capaz de regular con precisin el dosaje de su
propia hormona. De esa manera, no hay ningn desperdicio. En el proceso de
hipofisacin en que la hormona procede de otra fuente externa (donador) hay un
considerable desperdici. Se torna difcil determinar una dosis exacta resultando en una
aplicacin ms que necesaria de hormona en los reproductores.
El proceso de ovulacin es lento, durante varias horas, la duracin es regulada por la
temperatura. La ovulacin puede ser diferenciada en 2 fases: pre-ovulacin y ovulacin.
En la fase de pre-ovulacin, la migracin del ncleo se completa y el huevo absorbe una
cantidad de fluido (hidratacin) siendo el tamao el mismo que al final de la ovulacin. En
caso de que en la hipofisacin no se obtenga xito en el desarrollo de los vulos, se
interrumpe en esta fase y el pez podr morir fcilmente, pues los mismos son necrosados
pudieron causar un envenamiento interno.
La ovulacin se inicia con el desaparecimiento de la membrana del ncleo y el
aparecimiento de los cromosomas, terminando con la primera divisin meitica, al mismo
tiempo, el folculo que mantiene el huevo fijo a la pared del ovario se rompe y se disuelve
parcialmente, ocasionanado la liberacin de los vulos en la cavidad del ovario; en ese
momento se produce el desove con el flujo de los vulos a travs de la abertura genial.
La variacin en el dosaje necesaria de la hormona puede variar significativamente para
cada ejemplar de una misma especie, o bien, como por la tcnica empleada.
Realmente, un dosaje depende del grado de preparacin de las hembras, edad, tamao,
sensibilidad y de muchos otros factores (Woynarovich, Horvath), segn stos, en reas
tropicales y sub-tropicales donde el metabolismo del pez es ms alto (debido a la
temperatura ms elevada) y donde la probabilidad de desperdicio de las hormona es por
tanto mayor que en regiones templadas, generalmente se administran 2 o ms dosis, la
introductoria y la final.
Se recomienda una dosi nica (11.5 mg/kg). Muchas veces se hacen 2 aplicaciones en
el intento de obtener una mayor liberacin de semen, quedando con todos los machos
sujetos a liberar espermas antes que las hembras estn prontas para ovular.
Se debe evitar dosis excesivas en la aplicacin preparatoria, pues la misma podr inducir
al pez a una ovulacin parcial en detrimento de la programacin normal.
En la dosi decisiva final, se puede aplicar un pequeo exceso como medida de seguridad
en orden de 10 a 15%.
Diluyente
Puede ser usado suero fisiolgico o agua destilada, para la dosis decisiva se debe usar
una cantidad de solvente de 0.5 ml por cada glndula (2.53. Omg).
La cantidad de hormonas slo es importante cuando es demasiado grande o pequea.
Cuando pequea la prdida de una gota de solucin significara la prdida de una
cantidad considerable de hormona en cuanto que la administracin de un gran volumen
de solucin se transformara en un problema difcil. Entonces, se recomienda que la
cantidad vare entre 15 ml.
Para tener xito en la hipofisacin tiene que tomarse en consideracin las condiciones
ambientales que son importantes, tales como: temperatura adecuada, elevado tenor de O2
libre y tranquilidad.
Cuando un pez recibe tratamiento hormonal necesita de ms del 50% de O2 que
normalmente, pues su metabolismo es ms acentuado, exigiendo mayor demanda de
este gas, esto tambin es vlido en relacin a temperaturas elevadas. El exceso de
manipulacin resulta en mayor consumo de O2, siendo por lo tanto necesario mantener a
los peces en ambientes tranquilos evitndoles traumas y con renovacin constante y
abundante de agua.
Hora grado
Como normalmente el proceso final de maduracin de los vulos depende de la
temperatura del agua, el mismo lleva determinado tiempo para tal. Desde el intervalo de
tiempo entre la ltima aplicacin de hormona y la ovulacin total, ese intervalo de tiempo
es expresado en hora grado. Cada hora se mide despus de la ltima inyeccin hasta la
completa ovulacin. Se suman las lecturas de cada hora para obtener la hora grado,
esto ayuda al piscicultor a saber exactamente cuando se debe de la ovulacin de la ltima
inyeccin. El valor de la hora grado depende de la especie del pez, del tipo de
tratamiento, del tama de la hembra y si el pez comienza a desovar inmediatamente
despus de la ovulacin o no.
Incubadoras
Varios son los tipos de incubadoras que podrn ser usadas en la incubacin de huevos y
larvas de peces del gnero Colossoma, que poseen huevos libres y de densidad mayor
que la del agua. Con todo, la forma ideal es la cnica, con parte del cuerpo cilndrica (10
%) y la restante cnica (90%) ese formato ayuda considerablemente a mantener las
larvas en constante movimiento, evitando as que los huevos se depositen en el fondo de
la incubadora, lo cual sera perjudicial para los mismos. Antes de la obsorcin del saco
vitelino el movimiento de larvas es en sentido vertical con impulsos peridicos.
Es recomendable el uso de incubadoras hechas de fibra de vidrio, por ser resistentes y
livianas, fciles de ser transportadas, incubadoras de zinc pueden ser usadas siempre
que la parte interna sea pintada neutra. Ambas pueden ser confeccionadas
artesanalmente para disminuir considerablemente los costos.
La entrada del agua deder ser colocada en la parte inferior de la incubadora con el uso
de ducha domstica, de manera que el flujo del agua en movimiento sea en sentido
vertical, de abajo para arriba. La salida del agua se dar por encima de la incubadora,
teniendo cuidado de usar un tela de malla de 350400 micras, a fin de impedir la fuga de
huevos o larvas permitiendo con esto que el flujo del agua no sea interrumpido. Mallas de
esa dimensin favorecer el pasaje de los residuos de la desintegracin de la camara de
los huevos. El implemento de ese flujo ocasionar el revalse de agua con la inevitable
prdida del material de incubacin.
plsticos. Al llevar los recipientes con las larvas para el vivero, se debe dejar fluir el agua
lentamente en los anaqueles, a fin de equilibrar la temperatura del agua de esa manera,
las larvas van siendo colocadas tambin en el vivero, tetornando del balde o saco de
agua.
Es evidente que para recibir las larvas, el vivero deber estar debidamente preparado,
consistiendo en:
a. Graduacin del lecho del vivero.
b. Aplicacin de abono orgnico e inorganico esparcido en todo el rea del vivero, la
cantidad depender del tipo de suelo y edad de cada vivero, dos a tres toneladas
por hectrea durante la primera aplicacin. La experiencia de cada piscicultor
establecer la manera correcta de abonar y la frecuencia con que se haga. El
abonamiento a base de fosfato es necesario para la formacin de fitoplancton, que
servir de alimento a los rotferos que, a su vez constituyen el alimento inicial de
las larvas durante los seis primeros das de vida en el vivero.
c. Se debe llenar el vivero gradualmente, para que haya una concentracin gradual
de zooplancton al alcance de las larvas, stas, por su tierna edad, no poseen
energa suficiente para su locomocin en volumenes mayores para procurar su
aliemto por s mismas. Cada da se eleva el nivel del agua de tres o cinco
centmetros, de preferencia de noche, para que muy importante es el tamao de
los viveros para la crianza de larvas; stos dedern ser con dimensiones de 1.000
a 2.000 m2 cada uno, de mayores extensiones estan sujetos a los viveros que
causaran choques mecnicos con la consecuente mortalidad de las larvas.
Despus del surgimiento de organismos constituyentes de zooplancton, se hace
una seleccin de los mismos con el uso de insecticidas; Dipterex (1 ppm), Folidol,
etc., eliminando los coppodos y cladceros; los cladceros son consumidores en
potencia de fitoplancton, alimento substancial de los rotferos y los coppodos que
son predadores de las larvas de peces. Tampoco pueden por su tamao ser
ingeridad porlarvas de poca edad, pues la boca delas mismas no poseen la
bertura suficiente para esa funcin. Los coppodos constituyen tambin
predadores de rotferos.
Una manera de eliminar los organismos predadores de larvas de Coiossoma, es el
uso de cal viva, sin tener que sufrir hidratacin. De esta forma, el cuidado que
debe tenerse en el momento de su adquisicin debe ser enorme; la cal hidratada
no causa ningn efecto en los predadores de larvas de peces.
La cantidad de cal usada es aproximadamente de 200 a 400 g / m2, esparcida en
el lecho hmedo del vivero. constatada la eliminacin de predadores (ninfa de
Odonata, disticida, rantara, peces, etc.) el residuo de cal podrser eliminado
haciendo un lavado del viero antes del relleno normal del mismo. con la cal
efectunando la eliminacin del zooplancton y pasado el efecto residual de la
misma, se podr efectuar la inoculacin de rotferos capturados en otros viveros,
filtrados en mallas de 60 a 80 micras. En poco tiempo estar restablecida la fauna
planctnica del vivero.
d. La densidad es, generalmente, entre 100 a 100 larvas/m2. Debe tenerse todo
cuidado con cantidades excesivas de larvas, pues eso podra implicar en una
reduccin del crecimiento de las mismas causado por el poco volumen alimenticio.
Tambin el exceso de larvas, puede traer consigo el consumo exagerado de
oxgeno, el de la fauna planctnica que favorecera el aparecimiento de blooms
de algas nocivas. Constada esa densidad elevada, debr efectuarse previamente
preparados para recibirlos.
e. Algunos criadores prefieren alimentar a los pequeos alevines despus de los seis
das en los mismos viveros, pero la mayora prefiere hacerlo despus de completar
de los seis das en los mismos viveros, pero la mayora prefiere hacerlo despus
de completar el mes estabulado. Se usa una racin finamente molida, con alto
poder proteico (42%) que puede ser colocada en determinados puntos del vivero,
inicialemente en mrgenes humedecidos.
La aplicacin deber ser varias veces al da, siempre con el cuidado de no excederse
para evitar poluciones con el vivero. Usase tambin cuando se retiran las larvas de las
incubadoras, la yema de huevo cocida liquidificada para enjuagar el vivero, ello causar el
mismo efecto explicado ya anteriormente.
Despus de una semana de vida en el vida en el vivero, las larvas ya estarn aptas para
alimantarse con organismos mayores; a esa altura o nivel, la fauna de rotferos ya deber
estar bastante reducida por la accin de los peces, bien como por la presencia de
coppodos.
Cada 15 das, se deber realizar la captura de los peces en el vivero, a fin de certificar su
estado nutricional, como tambin el posible ataque de parsitos.
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INTRODUCCION
La reproduccin inducida de peces reoflicos en la regin de la Amazona peruana, ha
cobrado mucho inters durante los ltimos aos, debido al desarrollo que est alcanzando
la piscicultura de las especies nativas. A la fecha, se ha logrado inducir la reproduccin de
boquichico, Prochilodus nigricans (Pezo y Sicchar, 1979; Eckman, 1980; Alcntara, 1982;
Ruiz et al. 1985); sbalo, Brycon sp (Eckman, 1980); gamitana, Colossoma macropomum
(Alcntara, 1985) y paco Colossoma brachypomum (Alcntara y Guerra, 1986). El grado
de avance es variado, siendo Alcntara y Guerra (1986) quienes lograron un avance
significativo en la produccin se semilla de gamitana y paco para el cultivo.
El xito en las operaciones de reproduccin inducida, est determinado por factores
inherentes al pez as como por factores externos. Entre los primeros estan, el estado
nutritivo del soma y el estado de desarrollo gonadal, aspectos primarios que determinan la
calidad de los productos sexuales. Entre los segundos estan, el tipo de hormona
necesaria, la dosis adecuada, los cuidados en el manejo de los reproductores a travs del
tratamiento hormonal.
El presente trabajo tiene por objeto efectuar una sntesis de las normas y procedimientos
generales de la reproduccin inducida de las especies reoflicas, con la finalidad de
orientar los operativos de produccin de semilla de las especies de inters para el cultivo
en la amazona peruana.
No se pretende hacer un documento definitivo, ni que el mismo cubra todo el
conocimiento sobre los asuntos tratados. La intencin es la de proponer una gua prctica
y accesible a todos aquellos que pretenden dedicarse a la produccin de semilla, por
medio de la reproduccin inducida.
Se ha omitido los aspectos de la fisiologa de la reproduccin intencionalmente, por lo que
consideramos necesario sugerir que para fines experimentales se revisen estos aspectos
que han sido tratados con amplitud, por diversos autores, tales como: Pickford y Atz
(1957), Clemens y Sneed (1962), Harvey y Hoar (1979), Woynarovich y Hovath (1981),
etc.
2
1. SELECCION DE REPRODUCTORES
1.1 Determinacin del Estado de Madurez a travs de la medicin del
dimetro de los ovocitos
El dimetro de los ovocitos debe ser conocido para todos los estadios de madurez de una
especie en particular, elaborndose un atlas del desarrollo de los mismos. El dimetro
de los ovocitos puede ser usado adecuadamente como un indicador del estado de
maduracin.
1.1.1 En especies que no se conoce el tamao medio de los ovocitos segn el
estado de madurez sexual:
a. se extraen los ovarios de la cavidad abdominal;
b. se cortan logitudinalmente sus membranas en toda su extensin
c. se colocan los ovarios en solucin Gilson (1:3). Ver anexo;
d. despus de 15 minutos se agita fuertemente el frasco para que ocurra el primer
fraccionamiento de la masa de vulos;
e. se deja los ovarios en Gilson por varias horas, agitando frecuentemente el frasco
hasta que se produzca la separacin de las membranas, para no dificultar la
limpieza del material;
f.
j.
g. la moda del dimetro medio de los ovocitos, nos indicar el estado de madurez de
la especie en cuestin, comparando tales observaciones, con un cuadro de
distribucin de frecuecias del dimetro de la especie, determinado en una poca
de maduracin anterior.
2. DOSIFICACION
Las dosis pueden ser preparatorias o estimulantes y definitivas o desencadenantes. Las
dosis desencadenantes son de mayor concetracin. El nmero de dosis estimulante y
desencadenantes vara segn los autores, no obstante se considera que el menor nmero
de dosis, adems de facilitar el trabajo, disminuye las posibilidades de que los peces
reproductores se perjudiquen o lleguen al stress. En un tratamiento prolongado, de tres
a cuatro das, es frecuente observar problemas de micosis (Saprolegnia).
veterinarios. Estos productos se los adquiere en el mercado local con los nombres
comerciales de Pregnyl, Antern y otros.
Tabla 1
Dosis empleadas para inducir la reproduccin, segn especies y autores.
ESPECIE RECEPTORA
ESPECIE DONADORA
DOSIS 1 2 3 4 5
AUTOR
Prochilogus argenteus
idem
Fontenele 1959
Prochilodus nigricans
idem Abramisbrama
1.45 id id2
Eckman 1980
Prochilodus nigricans
idem
Alcntara 1982
Colossoma macropomum
Cyprinus carpio
Alcntara 1985
Colossoma macropomum
Arapaima gigas
Colossoma macropomum
Prochilodus nigricans
idem
1.2 2.0 4.04
Alcntara 1985
Da Silva 1981
Nota:
1
Nmero de pituitaria
2
Glndulas/kg
3
mg/2kg
4
Glndulas/2kg
INTRODUCTOR
DOSIS 1 2 3 4 5
AUTOR
Prochilodus nigricans
Buserelina1
0.02
Prochilodus nigricans
GCH 2
Colossoma macropomum
GCH 3
1 mg/kg
2 UI/g
3 UI/g
3.2 Procedimiento
a. Determinada la dosis a administrar, se coloca la glndula hipfisi (entera o en
polvo) en un mortero o cpsula de superficie lisa.
b. Se procede a moler el producto, mediante un pistilo suave, agregando una gota de
agua destilada, hasta conseguir la homogeinizacin completa.
c. Se agrega agua destilada por gotas hasta conseguir concentrar el producto,
cuidando de no emplear ms de 1 cc.
d. Se succiona el producto mediante una jeringa hipodrmica.
e. Se elimina las burbujas de aire de la jeringa, para proceder a la inoculacin.
3.3 Comentario
En la preparacin del extracto, algunos autores han centrifugado el producto (Fontenele,
1959; Alcntara, 1983), para inocular solamente el sobrenadante. Sin embargo, en las
prcticas de campo, se ha eliminado este procedimiento.
4. INOCULACION
4.1 Vas de inoculacin
Se ha utilizado tres vas de inoculacin de los extractos hormonales: va intracraneal, va
intraperotoneal y va intramuscular. La va intramuscular es la va ms utilizada y las
inoculaciones se efectan a nivel de los msculos dorsales delante de la aleta dorsal y
sobre la lnea lateral, adicionalmente puede inocularse en los msculos dorsales, por
delante del pendlo caudal.
4.2 Procedimientos
a. Se sujetan los reproductores con el mayor cuidado posible y una vez elegida la
zona de inoculacin, se procede a levantar una escama levemente, para pasar la
aguja por debajo de ella.
4.3 Recomendacin
Al iniciar la inoculacin de un pez debe registrarse la temperatura del estanque de
tratamiento hormonal y continuar el registro hasta la ovulacin. Esto ser muy importante
para determinar el tiempo de ovulacin de cada especie, el cual es altamente dependiente
de la temperatura.
5. OVULACION
La administracin de extractos hormonales gonadotrficos tiene por objeto desencadenar
la ovulacin en los peces.
La ovulacin es un proceso complicado, que requiere varias horas y cuya duracin exacta
depende de la temperatura. Es posible dividir la ovulacin en dos fases: preovulacin
propiamente dicha. Durante la fase de preovulacin se completa el ncleo y el huevo
absorbe gran cantidad de fido (hidratacin), alcanzando un tamao casi igual al que
tendr en el momento de la ovulacin. En el medio natural, este proceso se cumple
durante la migracin de reproduccin y en condiciones controladas, luego de la
administracin de los extractos de glndula hipfica, en las operaciones de reporduccin
inducida. Sin embargo, si la hipofisacin no da resultado, los huevos interrumpen su
desarrollo en la fase y el pez puede morir por necrosis necrosis de los huevos, que
pueden provocar un envenamiento interno. Woynarovich (1981).
6. ESTRUJAMIENTO
El estrujamiento es la operacin consistente en la obtencin de los productos sexuales
mediante suaves masajes del vientre, tanto de la hembra como del macho, durante los
trabajos de reproduccin inducida.
Una vez extrado el pez (hembra o macho) se procede a secarlo cuidadosamente con una
toalla absorbente, manteniendo ligeramente inclinado al pez, con la cabeza hacia abajo, a
fin de posibilitar la eliminacin de agua de la cavidad bucal y regin bronquial.
Una vez seco el pez, se sujeta firmemente y se procede a masajear suavemente la regin
ventral aplicando presin y avanzando desde la regin pectoral hacia la regin ventral. En
esta operacin, debe evitarse deslizar la mano, de otro modo se desprender las
escamas de la regin comprometida, perjudicando el estado general del pez. Esta
precaucin debe ser extremada tratndose de peces menores como el boquichico.
Prochilodus nigricans y los sbalos, Brycon sp.
Los vulos deben obtenerse nicamente con lquido ovrico y la prevencin de evitar el
contacto con el agua se debe a que esta acelera el tiempo de cierre del micrpilo,
disminuyendo las posibilidades de fecundacin. Por lo tanto, los vulos deben recibirse en
un recipiente seco y limpio.
Finalizando el estrujamiento de la hembra, se sigue el mismo procedimiento con el
macho, efectundose presin del vientre del pez a la altura de los testculos. Durante esta
operacin, debe evitarse la obtencin de esperma con sangre ya que la misma limitar la
viabilidad de los espermatozoides para la fecundacin.
7. FECUNDACION
La fecundacin debe efectuarse en seco, mezclando los productos sexuales suavemente
con una pluma de ave.
El tiempo de viabilidad de los espermatozoides es muy breve y tratndose de gamitana,
Colossoma macropomum, los espermatozoides son viables durante 12 minutos; sin
embargo, este tiempo puede prolongarse durante unos minutos mediante la adicin de
carbamida (rea). Woynarovich (1981).
Para la fecundacin es preciso tener en cuenta que el tiempo de ovulacin tambin es
relativamente corto. En Prochilodus sp Woynarovich (1981), report sobremaduracin al
cabo de 2030 minutos desde la ovulacin, en el 50% de los vulos.
Finalizada la fecundacin se procede a lavar los huevos, eliminando los restos de sangre,
esperma coagulado y escamas, luego se llevan los huevos a las incubadoras.
Tan pronto como los huevos toman contacto con el proceso de hidratacin final se acelera
y los huevos de dilatan hasta alcanzar, aproximadamente el doble de su dimetro, al
momento de la ovulacin.
8. INCUBACION
La incubacin debe efectuarse a flujo lento de manera que se posibilite un ligero
movimiento de los huevos en la base de la incubadora. Debe evitarse que los huevos
ocupen toda la columna de agua de la incubadora, seal que indicar un flujo excesivo
que puede ser cause de la muerte de los huevos.
El perodo de incubacin vara en funcin de la temperatura media del agua, entre 16 y 20
horas.
Son diversos los modelos de incubadora utilizados en la incubacin de huevos de peces
reoflicos, pero todos se basan en dos principios bsicos: eliminacin de los catablicos
NH3 y CO2 y provisin de oxgeno necesario a travs del proceso de embriognesis.
A travs del proceso de incubacin se registra la muerte de algunos huevos que se van
degradando, esto aumenta la demanda de oxgeno disuelto en la incubadora, por lo cual
no debe deternerse el flujo de agua.
9. CUANTIFICACION DE OVULOS
Se efecta el clculo del nmero de huevos aplicando una regla de tres simple.
Mtodo B
a. Proceda como en A.
b. Proceda como en A.
c. Agregar el homogenizador directamente al agua hirviendo. La agitacin depende
del tamao de pticula deseada. Inicialmente se forma tiras de huevo cocido. La
yema se mantiene encapsulada por la albmina (desnaturalizada).
d. Proceda como en A.
e. a suspensin alimentica est lista para las larvas.
f.
Proceda como en A.
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Zoologia. Braslia, Brasil. 106pp.
Woynarovich, E. y Horvth, L. 1981, Propagacin artificial de peces de aguas templadas.
Manual para extensionistas. FAO. Doc. Tec. Pesca (201), 187pp.
ANEXO
1. SOLUCION DE GILSON (Simpson, 1951)
100 ml alcohol 60%
880 ml agua destilada
15 ml cido ntrico 80%
20 g bicloruro de mercurio
18 ml cido actico glacial
2. SOLUCION SERRA
60% alcohol
30% formol
10% cido actico glacial
3. SOLUCION DE FERTILIZACION CARBAMIDA - SAL
(Woynarovich, 1981)
30 g de carbamida (rea)
40 g de sal comn (NaCl)
10 litros de agua
Nota: La solucin se aade en 1020% del volumen de huevos.
I. INTRODUCCION
En las ltimas decadas se ha experimentado una gran dependencia del hombre en
relacin a los peces cultivados como una valiosa fuente alimenticia. En tal virtud, tambin
se han incrementado los esfuerzos de los cientficos y especialistas, para dominar las
tcnicas de reproduccin y rpida propagacin de alevines y jaramugos en estanques y
en muchos cuerpos de aguas libres y/o controladas, como represas, embalses, atajados,
jagueyes, etc., as como lagos, lagunas y ros.
Naturalmente, se debe reconocer que el avance de la acuicultura en relacin a la crianza
de animales domsticos, bovinos, ovinos, conejos, aves y otros, es pequeo y reciente, es
decir, hablando estrictamente de su desarrollo tcnico - cientfico. No obstante, formas de
acuicultura ms o menos efectivas, ya eran practicadas por las civilizaciones chinas y
egipcias desde hace ms de dos mil aos A.C., claro est, como una actividad ornamental
fundamentalmente y una fuente subsidiaria de alimentos, en donde primaba el arte y la
belleza como criterio bsico.
3
por G.E. Pickford y J.W. Atz, 1957 en su bien documentado tratado sobre la glndula
pituitaria de los peces. A partir de entonces, millares de publicaciones han aparecido para
informar los avances del proceso reproductivo de teosteos. G.E. Pickford, 1964); E.M.
Donaldson (1977) y C.G. Swann y E.M. Donaldson (1980) y muchos otros autores ms
comunican sobre el control del proceso reproductivo, entre los que cabe resaltar estan:
Pickford y ATz (1957), Atz y Pickford (1959), Clement y Sneed (1962), Donaldson (1973,
1975), Shehadeh (1975), Fontaine (1976), Harvey y Hoar (1979), Chondar (1980),
Woynarovich y Horvath (1980), Pullin y Kuo (1981), Davy y Chovinard (1981), Sundararaj
(1981), Lam (1982), Billard (1983) y Fostier y Jalabert (1982).
ii.
aos de la dcada del 70, esta tcnica fue refinada por Donaldson et al., 1972;
Donaldson, 1973 en producciones a escala experimental, piloto y finalmente de aplicacin
de gonadotropinas pisciarias parcialmente purificadas expresamente con el propsito de
inducir la maduracin y ovulacin final de teleosteos. Durante la misma poca, se
obtuvieron desoves exitosos con substancias inductoras de origen animal, tales como la
gonadotropina corinica humana (HGC), ya sea sola o mezclada con extractos pituitarios
de peces.
El tamao y la complejidad de la molcula gonadotrpica lo hace difcil para ser obtenido
sintticamente en escala industrial dentro de un futuro cercano, a menos, que ella sea
producida con la ayuda de la ingeniera gentica en micro-organismos, como han sido
recientemente producidas la hormona del crecimiento humano y la insulina.
Justamente la bsqueda de alternativas de la gonadotropina sinttica en los aos 70, ha
conducido al desarrollo de tcnicas de la segunda generacin para la induccin final de
maduracin, ovulacin y espermiacin en los peces. Estas tcnicas operan o en niveles
ms elevados del eje mediante el estmulo de la produccin y/o liberacin de
gonadotropina en la glndula pituitaria (por ejemplo, anti-estrgeno y hormonas
liberadoras de gonadotropina) o tambin ellos operan en niveles ms bajos del eje, al
suplir hormonas a los ovarios (ej., 172, 2013-dihidroporgesterona y prostaglandinas), las
que podra normalmente ser estimuladas por gonadotropinas endgenas o exgenas.
Estos inductores de la ovulacin de la segunda generacin son todos molculas
pequeas relativas a la gonadotropina, y por eso mismo, pueden ser producidas
sintticamente. Tambin se espera que ellas sean relativamente libres de la especificidad
de la especie. (Ver Fig 1, los posibles niveles de intervencin en el eje hipotalmicopituitario-ovrico) de Hoar, Randall y Donaldson, volumen IX, FISH PHYSIOLOGY, 1983.
Fig.1
Niveles de intervencin extrerna en el eje hipotlamopituitaria-ovario, que pueden ser
utilizados para inducir la maduracin y ovulacin en teleosteos.
HIPOTALAMO
Hormona liberadora de
gonadotropina (Gn RH)
Intervencin exgena
Antiestrgena Dopamina
Antagonstica
GLANDULA PITUITARIA
Gonadotropina (GtH)
OVARIO
Extractos pituitarios
Preparaciones GtH
OOCISTO
Maduracin final
Ovulacin
Progestenos
Corticoesteroides
Prostagladines
Catecolaminas
OVA Ovulos
4.1 Antiestrgenos
La secrecin de gonadotropina en teleosteos como en vertebrados superiores, es
regulado por la retroalimentacin de esteroides gonadales. En la hembra de bagre
Heteropneustes fossilis, inyecciones de estradiol y/o testosterona inhiban la vitelognesis
y causaban atesia de los oocitos maduros (Sundarraj y Goswani, 1968), y el estradiol, el
crecimiento compensatorio ovrico despus de una ovariosectoma unilateral (Goswani y
Sundararaj, 1968). El el salmn Oncorynchus nerka, la gonadoctoma bilateral causaba la
activacin de gonadotropos (Mc Brile y Van Overbeeke, 1969), el que se hizo reversible
por tratamiento con estradiol cepionato (Van Overbeek and Mc Bride, 1971). La presencia
de este control retroalimenticio negativo de secrecin de gonadotropinas por el estrgeno,
condujo a pruebas de desove con antiestrgenos. Los antiestrgenos son compuestos
sintticos que son capaces de competir con el estrgeno al alcanzar lugares con los
receptores de estrgeno. Dos de estos compuestos nonesteriodales de las series de
trifeniletileno, que han sido usados en vertebrados superiores e inferiores son el citrato
clourifeno y tamoxifeno. La induccin con xito de la ovulacin en la mujer con clourifeno
fue informado por Greenblatt et al. (1961) y con tamoxifeno por Klopper y Hall (1971). La
accin de estos anestrgenos no ha sido debidamente aclarada en los vertebrados
superiores.
Los primeros estudios de la ovulacin inducida con un antiestrgeno en teleosteos, fueron
conducidos en el golfish (Carassius auratus). Las hembras grvidas mantenidas a 13C y
16 horas de fotoperodo fueron diariamente inyectadas intraperitonealmente con 1 mg/kg10mg/kg de clourifeno en 0.6% de salinidad. En ambos grupos, 90% de los peces
ovularon entre 1 a 4 das despus del tratamiento, sin embargo, ninguna del grupo de
control ovul (Pandey y Hoar, 1972). Los goldfishes hipofisectomizados, 4a 7 horas antes
de la inyeccin dejaron de ovular luego del tratamiento con clourfeno.
La inyeccin en la locha Misgurnus anguillicaudatus con clourfeno, 1 a 10mg/kg
diariamente a 1722C ovul entre 2 a 4 das en dosaje bajo, y en 2 a 3 das con dosage
alto.
Donaldson et al (1978b, 1981b) examinaron la factibilidad de inducir la ovulacin final en
el salmn del Pacfico con el antiestrgeno tamoxifeno. El salmo cho (Oncorynchus
kisutch) recibi una primera inyeccin de 0.1 mg/kg de gonadotropina parcialmente
purificada de salmn (SG-G 100), seguida en el tercer da por inyecciones
intraperitoneales de 1 a 10mg/kg de tamoxifeno en aceite de man. Los vulos de ambos
grupos tratados sufrieron la ruptura de la vescula germinativa (GVBD) y 85% de
ovulacin, comparadas al 84.6% (GVBD) y 77% de ovulacin en el grupo de control.
plro Glu-Hls-Trp-Ser-Tyr-Glu-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Muy pronto se hizo evidente que este pptido carece de especificidad para las especies
(Schally y Kastin, 1972).
4.4 Gonadotropinas
Ellas son glicoprotenas hormonales de origen pituitario o placentario, que estimulan su
desarrollo y funcin.
Las gonadotropinas utilizadas para inducir la ovulacin en los peces pueden ser de dos
orgenes: de mamferos y/o de peces. Las primeras pueden ser de naturaleza pituitaria
como la hormona luteinizante (LH), y hormona estimulante del folculo (FSH)o de origen
placentario, tal como la gonadotropina corinica humana (HCG) y la gonadotropina del
suero de yegua (PMSG). Las preparaciones de gonadotropina de peces pueden
subdividirse segn el grado de purificacin variando desde los extractos acuosos de
glndulas pituitarias completas usadas en los procedimientos tradicionales de hipofisacin
mediante el polvo de pituitaria en etanol, hasta las gonadotropinas parcialmente
purificadas preparadas por filtracin del gel, con o sin intercambio de in cromatogrfico, o
por afinidad de cromatografa de concanavalina A-sefarosa.
La gonadotropina de teleosteos tiene un peso molecular de 30.000(Burzawa-Gerard,
1971, 1974; Donaldson et al., 1972b; Idler et al. 1975a), y consiste de dos unidades
(Donaldson, 1973; Burzawa-Gerard et al. 1976; Pierce et al., 1976; Lo et al., 1981) al igual
que las gonadotropinas de otros vertebrados (Licht et al, 1977). Adems de esta
gonadotropina que normalmente contiene carbohidratos, puede existir una segunda
hormona pituitaria en los peces de bajo contenido en carbohidratos presentan dos
funciones gonadotrpicas, tal como la habilidad de acelerar la captacin de vitelo en el
oocito durante la vitelognesis (Idler et al, 1975a; Idler y Ng, 1979; Ng y Idler, 1978b,
1979).
ii.
iii.
el doseje puede ser facilmente calculado basndose entre las relaciones del peso
corporal del recipiente y donador; y
iv.
Las desventajas:
i.
ii.
iii.
iv.
v.
La actividad de hipofisacin fue debidamente revisada por Harvey and Hoar (1979);
Sundararaj (1981); Rothbard (1981); Lam (1982), El proceso normal incluye 2 inyecciones
intramusculares de extractos acuosos de pituitarias. La secuencia de esta actividad
consta de los siguientes pasos:
1. seleccin de las especies donantes y grado de madurez;
2. evaluacin de madurez del recipiente;
3. tcnica de homogenizacin y temperatura;
4. separacin del extracto de los residuos por centrifugacin, filtracin o
sedimentacin;
5. adicin de otros componentes, ejemplo, glicerina para incrementar la viscosidad y
de ese modo prevenir prdida despus de la inyeccin, o prolongar la captacin;
6. localizacin de la inyeccin;
7. volumen de inyeccin;
8. temperatura del agua en el momento de la inyeccin;
especies donantes;
madurez de los desovantes;
iii.
dosage;
iv.
v.
vi.
temperatura.
El prximo paso del procedimiento bsico de hipofisacin con extracto fresco de pituitaria,
involucra el uso de glndulas pituitarias y extractos preservados. Las glndulas completas
pueden ser deshidratadas y desgrasadas con polvillo de acetona fra, y luego
almacenadas as completas o pulverizadas, o tambin las mismas, podran ser liofilizadas
o conservadas a -24, o por debajo, durante varios aos sin prdida significativa de su
potencia (Donaldson et al, 1978a).
Alternativamente, puede prepararse un extracto acuoso de las glndulas pituitarias o del
polvo en acetona y luego conservarlo en forma liofilizada, o tambin, en presencia de una
substancia preservante como el glicerol. En este ltimo caso, el material puede ser
conservado en ampolletas de vidrio. La ventaja del polvo en acetona o de los extractos
preservados, es de que ellos pueden ser preparados en forma homognea a partir de una
buena cantidad de glndulas pituitarias, y posteriormente estandarizadas por bio ensayos
de una pequea alicuota. Otras ventajas son, que las glndulas de los peces donantes
pueden ser colectadas y procesadas en varias veces y en localidades, eliminando as la
necesidad de tener que ser donante de la propia localidad donde se va a realizar la
hipofisacin. Las pituitarias disecadas en acetona fueron originalmente empleadas por
von Ihering y Azevedo (1936) para desovar Astyanax taenistus y A. bimaculatus, habiendo
continuado el procedimiento extensivamente (Pickford y Atz, 1957). La pituitaria de carpa
discecada en acetona ha sido utilizada con xito despus de 10 aos de conservacin
(A.D. Hasler, R.K. Meyer and W.K. Meyer, and W.J. Wisby, 1950 en Pickford y Atz 1957).
Las glndulas de pituitarias frescas pueden colocarse directamente en acetona enfriada
en hielo seco (Burrows et al., 1952; Palmer et al., 1954); empero, podra ser ms
conveniente congelar las glndulas pituitarias frescas en una capa de hielo seco en un
depsito de isopor y luego, porceder al secado o al proceso de extraccin en el
laboratorio. El uso del hielo seco la necesidad de utilizar un equipo elctrico de
regrigeracin en el campo. En general, se recomienda que la acetona sea cambiada dos o
tres veces para asegurar la deshidratacin y desgrasado completo.
Una alternativa al secado en acetona es hacerlo en alcohol absoluto (de Azevedo y
Oliveira, 1939; Fontenele, 1955; Pickford y Atz, 1957; Ibrahim y Chandhuri, 1966;
Chondar, 1980; Rothbard, 1981). El peso de la pituitaria seca y desgrasada es 13
17%del peso hmedo (Pickford y Atz, 1957) y el peso de las glndulas pituitarias del
salmn del Pacfico despus de la liofilizacin es 17% del peso hmedo (E.M. Donaldson,
no publicado).
Los extractos acuosos de pituitarias frescas y/o secas pueden ser conservadas con la
adicin de glicerina 2:1 (Ribeiro and Neto, 1944, Ibrahim and Chandhuri, 1966; Ibrahim,
1969 2,b) o por liofilizacin. En goldfishes, la inyeccin de soluciones que contengan ms
del 10% de glicerina causa inflamacin peritoneal (Clemens y Sneed, 1962).
Los extractos de glndulas pituitarias preservadas en etanol y acdo tricloroactico no han
dado resultado satisfactorios (Bhowmick y Chaudhuri, 1968).
En general, para inducir la ovulacin, se podra recomendar como solucin prctica, el
empleo de extractos de glndulas pituitarias frescas y/o preservadas de peces maduros.
la India Labeo rohita (Bhowmick, 1979). El aspecto negativo de HCG es de que el uso
repetido de esa hormona puede hacer de inmunizacin. Los altos preparados de
gonadotropinas placentarias derivadas de PMSG, ha sido utilizadas solas en algunas
especies como Heteropneustes fossiles (Sundararaj y Goswami, 1966).
La LH ha demostrado ser un efectivo inductor de la ovulacin en los peces (Sundararaj y
Goswami, 1966, 1969; Arrand y Sundararaj, Kapoor, 1976, y no efrece ninguna ventaja de
precio en relacin al aspecto de costo y/o de efectividad.
4.8 Esteroides
La accin de las gonadotropinas a nivel del ovario se considera que se debe grandemente
a las hormonas esteriodes (Jalabert, 1976). Se han llevado a cabo numerosos estudios
para determinar la factibilidad de inducir la maduracin final y ovulacin con los
esteriodes, en lugar de hacerlos con gonadotropinas u otras substancias de naturaleza
hipotalmica. En general los esteroides, desde su sntesis hasta convertirloen un producto
puro, con una duracin de almacenaje de muchos aos, podrn ser producidos en escala
comercial.
4.8.1 Progestinas
Derivados de progesterona (Prog) 17-hydroxiprogesterona (17 Prog) y 17-hidroxi-20Bdihidroprogesterona (17-20B-Prog) fueron detectados en cantidades significativas en el
plasma del salmn Oncorhynchus nerka (Idler et al. (1960), Schmidt and Idler (1962).
Estas progestinas, en particular 17, 20B-Prog tambin mostraron ser efectivas inductoras
de la maduracin final (migracin de la vescula germinal y ruptura) en los oocistos de los
teleosteos (Jalabert, 1976). Fue inducido con xito en vivo la induccin en truchas
maduras que contenan oocitos con la vescula en el estadio subperiferal, utilizando
2mg/kg 17-20B-Prog, o Prog despus de 9 das, aproximadamente el 80% de los 17-20BProg, 55% del grupo Prog, y 30% del grupo de control habin ovulado. La progesterona
podra haber formado un substrato para 17, 20-Prog biosntesis (Jalabert et al., 1976).
Cuando las truchas arco iris fueron inyectadas dos veces con 3mg/kg 17, 20-Prog, 48
semanas antes del desove y antes de la migracin de la vescula germinal, 94%
alcanzaron la maduracin final, pero solamente el 24% ovularon. La ovulacin fue
nuevamente inducida en truchas que presentaban los oocitos con la vescula germinal en
posicin perifrica (Jalabert et al., 1980; Bry, 1981). Al monitor la gonadotropina del
plasma indic una cada en su concentracin 24 horas despus de la inyeccin, quizs,
como resultado de una retroalimentacin negativa, seguida de un incremento gradual, la
que continu despus, especialmente en peces que no fueron sometidos a la estrusin.
4.8.2 Corticoesteroides
Son en su mayora de origen renal, aunque tambin pueden ser sintetizados en el tejido
gonadal (Colombo et al., 1973). Las concentraciones de corticoesteroides y su tasa de
secresin tienden a incrementarse en muchos teleosteos durante el desarrollo
reproductivo y el desove (donaldson y Fegerlund, 1970; Fagerlun y Donaldson, 1970; Katz
y Eksein, 1974; Wingfield y Grimm, 1977; Cook et al., 1980). El primer empleo que tuvo
xito fue al inyectar corticoesteroides al Misgurnus fossilis locha, en la que aplic una
simple dosis de Img de DOCA/pez y se logr inducir la ovulacin (Kirshenblatt, 1952, en
Pickford y Atz, 1957, Kirshenblatt, 1959). Tambin se ha inducido la ovulacin con DOCA
4.9 Prostaglandinas
Estas estn involucradas en el ruptura folicular de los peces (Jalabert y Szollosi, 1975;
Kagawa y Nagahama, 1981).
De varias prostaglandinas probadas, la PGF2 result comunmenete la ms efectiva. La
indometacin, un agente anti-inflamatorio que bloquea la sntesis de la prostaglandina,
5. OTROS FACTORES
Muchas hormonas, adems de las mencionadas y discutidas, previamente juegan un rol
en la reproduccin (Fontaine, 1976), estas, inclueyn las catecolaminas, calcitonicas (Wats
et al, 1975), las hormonas tiroides, las hormonas de la urohipfisis (Lederis, 1972), la
hormona del crecimiento y la prolactina. Sin embargo, existe notoria diferencia entre una
hormona que es conocida y/o sospechada accin directa o indirecta en uno o ms
aspectos sobre el desarrollo de la reproduccin, y la factibilidad del empleo de la hormona
como una aplicacin prctica y de rutina.
En el caso de las catecolaminas, han demostrado su capacidad de inducir in vitro la
ovulacin de los oocitos de truchas que haban alcanzado la maduracin final in vitro. La
potencia de las catecolaminas probadas estuvieron en el orden epinefrina - fenilefrina isoproterenol. El tiempo de respuesta fue de 2024 horas en 15C comparado entre 18 a
20 horas para PGF2 (Jalabert, 1976). Los inhibidores de los rganos (lugares)
adrenergticos previnieron el efecto de las catecolaminas en la ovulacin. Jalabert (1976)
propuso que las catecolaminas podran causar la contraccin folicular directamente y ms
an por estmulo de la prostaglandina, la sntesis y/o la liberacin. Se han hecho algunos
ensayos invivo con las catecolaminas aplicadas a truchas de arroyo Salvelinus fontinalis,
en proporciones de 100mg de epinefrina cada dos das durante 4 semanas notndose en
consecuencia la aceleracin del desarrollo sexual en machos y hembras, (Strand, 1958).
Las hormonas tiroides han sido consideradas desde hace mucho, por tener un rol
importante en la reproduccin de peces (Fontaine, 1976). En el esturin, Acipenser
stellatus, los estudios en laboratorio indicaron que las hembras maduras alcanzan la
maduracin final y ovulacin cuando eran mantenidas a temperatura baja. Inyecciones de
triyodotironina (T3) juntamente con el extracto de pituitaria facilit la maduracin y
ovulacin.
6. ESPERMIACION INDUCIDA
6.1 Niveles de intervencin
En los peces machos, el desarrollo testicular est regulado por el eje hipotalmicopituitario-testicular. La estructura, desarrollo y la endocrinologa en los peces teleosteos
fueron revisados por Crier (1981), Nagahama et al. (1982), Billard et al, (1982). El rango
de hormonas que pueden inyectarse para la espermatognesis y/o la espermiacin es
relativamente limitado comparado con la situacin de las hembras. Sin embargo, el
piscicultor tiene an la opcin de intervenir con las hormonas derivadas del hipotlmo,
hipfisis y gnadas. Es mucho ms fcil inducir a un macho inmaduro de teleosteos para
desarrollar la vitelognesis y la espermiacin, debido a la simplicidad del control endcrino
comparado con las hembras que no responden con tanta facilidad al tratamiento. En
varias especies cultivadas, elmacho eyacula espontneamente, pero en ms de una
especie, el macho que est en cautiverio se niega a eyacular o producir una pequea
cantidad de semen viscoso. Felizmente, es posible aumentar el volumen y la calidad del
esperma con una sla inyeccin de hormona. Si el macho es inmaduro y se niega a
producir semen, habr que inyectarle varias veces o implantar alguna hormona en el
alimento peletizado para estimular la espertognesis y subsecuentemente la
espermiacin.
En las carpas chinas, indias y europeas, con las que por costumbre se induce la ovulacin
de las hembras, con dos inyecciones de extractos pituitarios, homoplsticos y
heteroplsticos, tambin es correcto recomendar el suministro de una sla dosis de
extracto pituitario a los machos en el da que la hembra recibe la segunda inyeccin, para
asegurar la espermiacin satisfactoria del macho en el momento de ovulacin de la
hembra. En las carpas de la India, rohu (Labeo rohita); catla (Catla catla) se les aplic
a los machos una sola inyeccin de 23 mg/kg de extracto de pituitaria de carpa, y a dos
machos se les permiti una hembra para el desove (Chandhuri, 1976; Blowmick et al.,
1977). Sin embargo, al finalizar la estacin de desove, es necesario inyectar al macho de
catla dos veces para obtener una respuesta satisfactoria (Blowmick et al., 1978). En la
carpa comn la inyeccin de un extracto acuoso de polvo de pituitaria de carpa disecada
en acetona, en dosis de 22 y 22mg/kg produj un incremento de volumen de esperma
dentro de un perodo de 24 horas a 22C desde 0.12 ml en el grupo de control hasta 2.90
ml en el nivel ms alto de la dosis (Clemens y Grant, 1965). En Israel, consiguieron que
los machos de carpa comn eyacularon en 24 horas a 16C cuando aran inyectados con
pituitarias homogenizadas de carpa en una dosis de 1 glndula/kg, sin tener relacin con
el mes en que fueran colectadas las glndulas pituitarias (Rothbard y Rothbard, 1982). En
un estudio experimental, en un goldfish hiposectomizado se indujo la espermiacin con 50
mg/kg de extracto de hipfisis de trucha (Billard, 1977). Cuando la espermiacin fue
cuantificada midiendo la produccin de semen, en el momento de la respuesta mxima
(12 das), el extracto de pituitaria proviene de una especie emparentada con la carpa,
proporcion los mejores resultados.
6.2.2.2 Preparaciones purificadas de gonadotropina de peces
Aunque casi siempre se han empleado los extractos de pituitaria entera, se han llevado a
cabo muchos estudios experimentales para inducir la espermiacin con el empleo de
gonadotropinas de peces purificadas y/o parcialmente purificadas. Indujieron en el
goldfish la espermatognesis, como la espermiacin por inyecciones cada 3 das a 24C
con 10, 20, 60 o 120mg/kg de gonadotropina de pituitaria de carpa parcialmente purificada
(Clemens y Reed, 1967). Con la dosis ms alta, se produjo la espermiacin a los 42 das.
En un macho maduro hipofisectomizado de goldfish, una sla inyeccin intraperitonal de
gonadotropina parcialmente purificada de salmn (SG_G100) con un rango de 0.1 a 3.0
mg/kg, induj la espermiacin en 24 horas a 20C (Yamasaki y Donaldson, 1968a). La
espermiacin ha sido tambin inducida en el lucio utilizando gonadotropina purificada de
salmn en cantidades varibles de 5 a 100 mg/kg (Billard y Marcel, 1980).
6.2.2.3 Gonadotropinas de mamferos
6.3 Esteroides
6.3.1 Andrgenos
eficiencia de las hormonas. Sin duda alguna, el uso de hormonas aumentar en el afan de
incrementar la tasa de produccin de peces.
y testculos (ver fig. 1). Las hormonas del crecimiento y las feminizantes, 17 alfametiltestosterona y 17 beta-estradiol no tienen un efecto inmediato sobre la reproduccin
y no estan representados en la figura.
Los cuatro mayores preparados de hormonas que existe en el mercado (Argent
Laboratories) para la induccin del desove en escala comercial, (dos de ellos son las
hormonas purificadas) como LHRH, HCG, SPE y CPE deshidratados en acetona, son
extractos obtenidos de la pituitaria completa de salmn y carpa, respectivamente.
La LHRH (a) es una protena sinttica que ha demostrado inducir la secrecin de
gonadotropina en teleosteos. hormonas similares, aunque muchos menos potentes, son
producidas probablemente en la glndula pituitaria de los peces. La LHRH es un inductor
pobre de gonadotropina, LHRH (a) ha sido usada para acelerar la ovulacin y
espermiacin en varias especies en estadios de desove, incluyendo a la carpa y salmn.
No es especfico de especies. Ha sido empleado sla o en conjunto con una fuente de
gonadotropina.
La gonadotropina corinica humana (HCG) es una gonadotropina humana purificada que
encubre (mimetiza) a las gonadotropinas endgenas. Ya que existe una correlacin entre
los niveles de sangre de la gonadotropina y la disponibilidad para el desove mediante el
aumento de niveles de suero de la hormona gonadotropina en los animales que ya estan
maduros. Muchas especies de peces han sido y son rutinariamente descovados por el
uso de inyecciones de HCG. Es stos se incluye a los bagres, lobina listada y carpa. AGC
es empleada ocasionalmente en combinacin con extractos de glndula pituitaria pura, no
refinada. Esto mismo ha sido tambin aplicado con pexito en lisas, esturiones y sabalotes
(milk fish).
SPE y CPE son preparados de glndula pituitaria completa cruda y deshidratada en
acetona. Ellas son disueltas enteras o reducidas en polvo y deshidratas, como ellas son
fuentes naturales de gonadotropinas de peces, no requieren tcnicas complejas de
purificacin de stesis para producirlas, son ampliamente usadas para inducir el desove en
muchsimas especies de peces. En general, cuanto ms cerca sea la afinidad filogentica
del pez donador, mayor ser la posibilidad de xito del desove del pez recipiente sin
requerir de dosis adicionales. Por esa razn, los salmnidos responden mejor,
inmediatamente cuando son inyectados con extractos de hipfisis de otros salmnidos. La
carpa, el bagre, etc. responden mejor a los extractos pituitarios de carpas. Sin embargo,
una amplia gama de especificidad ha sido observada notablemente con SPE. Se ha
empleado con mucho xito para el desove de peces tropicales, tales como carpas y
bagres.
de la salud del pez, el estadio de madurez sexual, tamao delpez y su historia previa
sobre factores tienen que ver en el impacto dela capacidad de las hormonas para
funcionar efectivamente y que est en condiciones de ser reproducibles.
Tabla 1
LHRH (A) Niveles encontrados como efectivos en el desove inducido
NIVEL
REGIMEN
ESPECIES
COMENTARIOS
24 mg/1b
(4.59 mg/kg)
dosis simple
carpa herbvora
4 mg& 1b
(9 mg/kg)
dosis simple
carpa negra
4 mg/1b
(9 mg/kg)
dosis simple
carpa plateada
90 mg/1b
dosis simple
Mg = microgramos =
106 (o).000001g
salmn coho
Como los datos indican, LHRH (a) ha sido usado con xito para inducir el desove en
carpas y salmnidos, su uso sin embargo, est an considerado en estado experimental
por lo que debera emplearse con precaucin. Es muy potente, requiriendo para su
efectividad slo de unos cuantos microorgamismos. A menudo, lo utilizan en combinacin
con extractos pituitarios.
HCG es til para el desove en una variedad de especies. La regla general para determinar
el nivel apropiado del dosaje es considerar aproximadamente 1 IU por gramo de pescado.
La inyeccin intramuscular (IM) es la ms empleada. Muchos acuicultores emplean HCG
en combinacin con extractos crudos y purificados de glndula pituitaria ya sea junto o en
inyecciones separadas.
(xx IU = Unidad internacional de actividad de 1 HCG.
Tabla 2
HCG Niveles usados para inducir el desove
NIVEL
REGIMEN
VIA
ESPECIE
125150 IU/1b
(275330 IU/kg
dosis simple
IM
lobina listada
270900 IU/1b
(600200 IU/kg)
dosis simple
IM
bagre de canal
IM/IP
300500 IU/1b
(6601100IU/pez 70 dosis simple
IU/pez)
COMENTARIOS
1500 IU/pez
dosis simple
IM
lobina de mar
Tabla 3
Hormona pituitaria - Niveles del extracto usado para inducir el desove
NIVEL
FUENTE
VIA
ESPECIE
COMENTARIOS
2.0 mgxxx
(4.4 mg/kg)
CPE
IM
bagre
3 inyecciones
0.9 mg/1b
2.0 mg/kg
3.6 mg/1b
(8.0 mg/kg)
CPE
IM
carpa india
2 inyecciones
36 horas intervalo
1.8 mg/1b
4.0 mg/kg
5.0 mg/1b
(11.0 mg/kg)
CPE
IM
carpa china
2 inyecciones
36 horas intervalo
1.4 mg/1b
CPE
IM
cyprnidos
2 inyecciones
2 horas intervalo
0.7 mg/1b
SPE
IM
salmnidos
2 inyecciones
3 das intervalo
1.5 mg/1b
2.7 mg/kg
6.0 mg/kg
xxx
Como la inyeccin de pituitaria es mas utilizada para inducir el desove ya que hay
literalmente cientos de ejemplos de su uso eficaz. Muchas especies de peces han
desovado efectivamente usando CEP o SPE, ya sea slos o en combinacin con HCG
que con otras hormonas acuosas. La metodologa involucra el empleo de 2 a 3
inyecciones intramusculares de un preparado acuoso. El dosaje exacto vara de especie y
debera ser determinado experimentalmente para los tres grupos de peces mencionados
en la Tabla 3, un rango de 0.7 a 5.0mg de material seco por libra (1.5 a 8.0mg de materia,
secado por kg) de pescado se ha encontrado ser suficiente en la mayora de casos para
inducir el desove.
Tabla 4
Algunos ejemplos de induccin hormonal de maduracin gonadal.
NIVEL
ESPECIES
COMENTARIOS
14 mg/1b
(30 mg/kg)
anguila
21 mg/1b
salmnidos
(45 mg/kg)
5 ppm en dieta
das.
trucha arco iris
Aunque hay evidencia buena que las hormonas deben ser usadas para acelerar la tasa en
la que el pez madura, hay sin embargo pocos datos disponibles sobre el mejor mtodo a
ser utilizado para una especie dada. La mayora de los mtodos incluyen inyecciones
repetidas haciendolo un mtodo poco deseable cuando sse trata de aplicaciones en gran
escala. Mayor xito se ha tenido en peces machos al acelerar con ms facilidad la
maduracin, aunque el metiltestosterona aplicado por va oral trabaja en ambos casos.
Incrementando la tasa de crecimiento del pez no indica necesariamente que ellos
madurarn precocemente. Metiltestosterona ha sido empleado experimentalmente para
acelerar la tasa de crecimiento del goldfish y de varias especies de salmnidos, cuando
alimentados por un perodo de 8 semanas a un nivel de 1ppm a 10% de incremento en el
peso del pez en estudio, se not diferencia en aquel pez sin tratamiento.
Tabla 5
Uso de metiltestosterona para el control de sexo
NIVEL
ESPECIE
COMENTARIOS
23 mg/1b alimento
(50 mg/kg)
Tilapia
30 mg/kg
1.4 mg/1b
alimento
(3.0 mg/kg)
45.0 mg/1b
alimento
(100 mg/kg)
Carpa
ESPECIES
Trucha arco iris
COMENTARIOS
Alimentado 30 das desde la alimentacin inicial, 100% de
hembras
1.0 mg/gal
(250 mg/I)
1.3 mg/gal
Salmn coho
Las hormonas pueden tambin ser empleadas para feminizar poblaciones de peces.
Estradiol ha sido usado para producir poblaciones con todos los individuos hembras en
varias especies. Como metiltestosterona que pueden emplearse ya sea oralmente o por
inmersin. Ambos mtodos han dado resultados eficaces.
Tabla 7
Uso de hormonas para producir peces estriles.
NIVEL
22 mg/lb
alimento
(50 mg/kg)
HORMONA
ESPECIE
Metiltestosterona Tilapia
COMETARIOS
Alimentado 60 das, 100% esterilidad
11 mg/lb
alimento
11 mg/lb
alimento
"
"
"
"
Trucha Arco
iris
100800
mg/gal
"
"
Salmn coho
9 mg/lb
(20 mg/kg
alimento)
El pez deber ser examinado externamene para asegurar si est listo para el
desove.
Observar la distencin abdominal debido a los ovarios, preferiblemente despus
que el tracto digestivo haya sido vaciado.
Examinar la condicin de la abertura genital.
Para los machos, observaciones de sus actitudes frente a las hembras y en relacin a
otros machos. podran ser tiles para determinar el estadio relativo a la proparacin
sexual. Un entendimiento completo de qu cambios fisiolgicos externos esten
conectados con el desove, facilitarn para determinar cuales de los peces estan listos
para desovar. Para algunas especies, el manipuleo del ambiente externo podra jugar un
rol esencial al asegurar que las hormonas funcionan tan efectivamente como sea posible.
Hay muchas tcnicas diferentes disponibles para manejar el pez durante la inyeccin de
hormonas tricaine metanosulfonato (MS 222) Finquel marca comercial servir
anestsico y luego el pez ser inyectado con una dosis de extracto pituitario h/o otroas
hormonas mezcladas en agua. Como se indic anteriormente, el nivel exacto de hormona
inyectada ser dependiente de una serie de variables. Las indicaciones sugeridas estan
en las tablas siguientes. Estas son slo recomendaciones sugeridas. La experiencia
propia podra ser a favor de otras dosis aplicadas y que tengan resultado buenas.
Para peces ms pequeos, tales como los ornamentales, menos de 3 pugladas, el pez
ser inyectado con no ms de 0.2ml de material, usando una aguja de calibre 26 0 menor.
Para peces ms grandes, se puede inyectar mayor volumen pudiendose, como mucho,
inyectarse hasta 2 ml en un pez grande utilizando una aguja de hasta 2ml, en un pez muy
grande, utilizando una aguja de calibre 19 a 21.
Como previamente se recomend, habr de tenerse en cuenta el rol crusial que
desempea las variables ambientales que pueden afectar la eficiencia de cualquier
preparacin ambiental apropiada, el flujo de agua y la temperatura que son esenciales
para asegurar que las hormonas funcionen efectivamente.
Hormona
LHRH (a)
HCG
SPE/CPE
17 alfa metil
testosterona/ 17
beta estradiol.
METODO DE
ADMINISTRACION
DOSAJE
COMENTARIOS
LHRH
4.5 mg/1b
9.0 mg/lb
Intraperitoneal
HCG
450 lU/kg
Intramuscular
CPE/SPE
4.5 a
55mg/1b
10 a 12
mg/kg
Intramuscular
DOSAJE
METODO DE
ADMINISTRACION
COMENTARIOS
17 alfa metil
testosterona
05045
mg/1b
Incorporado, adherido al
alimento
17 beta estradiol
29 mg/1b
Incorporado, adherido al
alimento
Una vez que el dosaje apropiado ha sido decidido y el efecto deseado se ha determinado,
as como todo el material y equipo se tiene listo, entonces Ud. estar preparado para
administrar la hormona. La siguiente tabla desribe la forma de dosaje de cada producto
disponible y proporcionado por los laboratorios Argent.
CONCENTRACION
INICIAL
CANTIDAD DE AGUA
AGREGADA
CONCETRACION
FINAL
LHRH (a)
10 ml
1 ml
10 microgramos/0.1 ml
1 microgramo/0.1 ml
HGC -5000 IU
10 ml
1 ml
50 IU/0.1 ml
500 IU/0.1 ml
HCG -10000 IU
10 ml
1 ml
100 IU/0.1 ml
1000 IU/0.1 ml