UNIVERSIDAD CATOLICA BOLIVIANA

FACULTAD DE ENFERMERIA
ELIZABETH SETON

GUIA DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

AUTOR:
Dr. Ricardo Villegas Nava
Colaboracin:
o Lic. Claudia Snchez
o Lic. Yuvinska Salinas
o Est. Katrin Loma
o Est. ngela Aro
o Est. Marleny Ormachea
o Est. Wendy Arce
o Est. Alison Velazco
o Est. Lorena Villca

Cochabamba Bolivia

2004

PROLOGO

Cochabamba, Agosto 2004

Hna. Mara ngeles Gonzlez
DECANA
FACULTAD DE ENFERMERIA
UNIVERSIDAD CATOLICA BOLIVIANA

INTRODUCCIN
El presente Curso Prctico de Microbiologa es un texto que ha sido preparado
como un manual destinado a las estudiantes de enfermera.
La enfermera se constituye en un miembro importante del equipo de salud, por lo
tanto debe tener conocimientos prcticos en lo que se refiere a como prevenir la
enfermedad y entender los procedimientos de diagnstico desde el punto de vista
laboratorial.
Nuestro objetivo es el de capacitar a los estudiantes en el campo velozmente
cambiante de la Microbiologa, con conocimientos bsicos y que le servirn en la prctica,
principalmente en lo que se refiere a la toma de muestras, cultivos, quimioterapia
antimicrobiana, esterilizacin, desinfeccin, purificacin y prevencin.
El proceso educativo exige, adems de una programacin adaptada al educando,
el material docente que facilite el aprendizaje sin mayores dificultades, poniendo al
alcance de los alumnos los elementos bsicos para que el esfuerzo combinado con el
docente pueda superar las exigencias que los estudios demandan.
Estos requerimientos de material de apoyo docente son ms necesarios cuando
van dirigidos a estudiantes que se inician en una disciplina, siempre con un objetivo como
el de ampliar su campo de conocimiento.
Existen muchos textos de microbiologa que contienen abundantes conocimientos
tericos que servirn como una base para que el estudiante pueda iniciarse dentro de la
prctica de esta disciplina que la presentamos en forma ordenada y sistemtica, con el
propsito de coadyuvar y complementar el aprendizaje terico de la materia y, de esta
manera capacitarlo para la ejecucin e interpretacin de las pruebas de laboratorio para el
diagnstico de las principales enfermedades infecto-contagiosas.
El contenido total est agrupado en seis prcticas: la Prctica n 1, nos da una visin
general sobre el material utilizado en laboratorio; la Prctica n 2, los fundamentos de la
ptica y como manejar un microscopio; La Prctica n 3, sobre la asepsia, antisepsia y
bioseguridad; la Prctica n 4, nos ensea a emplear y describir los mtodos y tcnicas
para la obtencin adecuada de muestras para el diagnstico microbiolgico; la Prctica n
5, sobre el estudio microscpico de las bacterias; la Prctica n 6, sobre los cultivos de
bacterias y las distintas tcnicas.
Cada prctica, se la desarrolla con la suficiente claridad para que el estudiante
pueda realizarla fcilmente, estas actividades sern desarrolladas bajo supervisin del
catedrtico colaborado por las auxiliares de prcticas.

ORIENTACIN PARA EL ESTUDIANTE

Segn el Reglamento de Evaluacin Contnua, Es el proceso contnuo y
sistemtico que permite la valoracin de los conocimientos, capacidades, destrezas,
habilidades y valores/actitudes que adquieren y desarrollan los(as) estudiantes como
resultado del proceso educativo.
El objetivo de la actividad evaluativa es el mejoramiento del proceso de
enseanza y aprendizaje, y se realiza a travs de diferentes actividades, como los
controles de lectura, evaluaciones parciales, exposiciones grupales, trabajos de
investigacin, prcticas, etc., que tienen la funcin de valorar el grado en que se van
alcanzando los objetivos planteados por cada asignatura.
En este sentido el estudiante deber cumplir con los siguientes requisitos para
asistir y cumplir con este curso prctico:
Presentarse a realizar sus prcticas con guardapolvo blanco.
Asistir con puntualidad y al grupo que fue asignado.
Cumplir con el 100% de prcticas
Estudio del tema que corresponda a cada prctica
Debe ser evaluado en la totalidad de las prcticas
Realizacin de la prctica por el estudiante
Responder al cuestionario de cada prctica y dibujar en el presente
cuadernillo de practicas.
Presentar el cuadernillo llenado con las respuestas a los cuestionarios y
con los dibujos correspondientes a la prctica anterior.
Estudio del tema que corresponda a cada prctica
Los trabajos de grupo que se asignen debern ser presentados en la fecha
correspondiente.

PRACTICA No. 1
MATERIAL DE LABORATORIO
OBJETIVOS:
Conocern los distintos instrumentos utilizados en laboratorios
Conocer el uso correcto y el material de que est elaborado cada instrumento
Realizar el uso correcto de los mismos
MARCO TERICO:
Aro Soporte: Instrumento de laboratorio, que se emplea como soporte- de otros
materiales anexado al soporte universal.
Baln: Es un recipiente de vidrio pirex, que sirve para preparar soluciones o reacciones
qumicas, los balones son esfricos y tambin de fondo plano.
Buretas: Instrumento cilndrico de vidrio graduado alargado, que termina en una llave
para poder controlar el flujo del lquido que se va ha medir. Se usa en operaciones que, se
necesita volmenes con gran exactitud.
Cpsula de porcelana: material de laboratorio de porcelana, que se utiliza para la
preparacin de mezclas, por evaporacin y para someter al calor si sustancias que
requieran de elevadas temperaturas.
Cristalizador: instrumento de laboratorio que se utiliza para la preparacin de cristales.
Esptula: Aparato de laboratorio que sirve para sacar las sustancias slidas de los
recipientes que las contengan.
Gradilla: Material de madera o de hierro, que se utiliza como soporte de los tubos de
ensayos.
Matraz de Erlenmeyer: vasijas o recipientes de vidrio de diversas formas que se emplean
en el laboratorio para calentar lquidos citando hay peligro de prdida de vaporacin, o
para titular en el anlisis cuantitativa.
Matraz aforado o Fiola: Instrumento de vidrio de cuello largo y angosto se usa para
preparar soluciones.
Mechero: Es un instrumento de metal o de vidrio destinado a proporcionar combustin,
los mas usados son alcohol y de los de gas, principalmente el de bunsen; consta de un
tubo metlico vertical sujeto a un pie de peso conveniente, funciona a gas cuya entrada se
efecta por un tubo lateral interrumpido por una llave de paso en la parte inferior existe un
doble orificio par permitir la entrada de aire, cuya apertura se puede regular. Este se utiliza
para esterilizar el asa, la boca de los tubos de ensayo, matraces, etc.
Mortero: material de laboratorio de porcelana o de vidrio que se usa para moler o reducir
el tamao de las sustancias que consta de dos partes el mazo y el mortero,
Pinzas para tubo: Instrumento de laboratorio de madera o metal, que, se usa para coger
los tubos de ensayo.
Pipeta: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los lquidos con mayor
exactitud.

Probeta graduada: Instrumento de vidrio, que se emplea, para medir el volumen de los
lquidos.
Pizeta o frasco lavador: Son instrumentos de vidrio o de plstico que se llenan con agua
destilada
Rejilla: material de metal que puede estar o no, cubierto con un crculo de asbesto, se
usa para proteger el fuego directo, el material de vidrio que va a sufrir calentamiento.
Refrigerante: Se usa para condensar los vapores que se desprenden del valn de
destilacin por medio de un lquido refrigerante que circula por este.
Soporte universa: Instrumento de metal, que se usa como base soporte para el montaje
de diversos aparatos por ejemplo los que usan en destilacin y, filtracin etc.
Termmetro: instrumento que mide la temperatura en grados centgrados.
Tubos de ensayo: para disolver, calentar o hacer reacciones pequeas cantidades de
sustancias lquidas o slidas y preparacin de cultivos. Estos pueden ser grandes
medianos y pequeos.
Vaso precipitado: preparar, disolver o calentar sustancias.
Pinza para baln: sirve para sujetar balones
Soporte universal: posee una base rectangular, adems de metal rgido de 60 cm. este
aparato es empleado para colocar y fijar los anillos de las pinzas de la bureta y sostener
matraces y refrigerantes.
Trpode: este puede ser fijo o desmontable, se utiliza para colocar matraces y recipientes
en observacin, o para poner estos al fuego y aumentar su temperatura.
Embudo: Sirve para trasvasar lquido de un recipiente a otro, evitando que se derrame
lquido, tambin se utiliza en operaciones de filtracin.
Escobilla: Sirve para limpiar el material de laboratorio.
Varilla de vidrio: sirve como agitador, son de vidrio para que no se oxiden, corroen ni
reaccionan con las sustancias y miden de 20 a 30 cm.
Tapones: sirven para cubrir frascos, tubos de ensayo, matraces o probetas. Algunos
tienen perforaciones para colocar termmetros o varillas de vidrio.
Caja de petri: son recipientes de vidrio o de plstico de forma cilndrica compuestos de
caja y tapa, recipientes destinados a contener medios de cultivos slidos cuando se desea
disponer de una gran superficie.
Asas: estn construidas por un alambre de platino y mango, se utiliza para tomar
pequeas muestras de material contaminado, por ejemplo hongos y bacterias.
Balanza de precisin: Medir masas de sustancias slidas
Portaobjetos: son lminas rectangulares de vidrio, de bordes biselados que miden 76
mm de largo, 26 mm de ancho y 1 mm de espesor. Son utilizados para realizar
preparaciones microscpicas coloreadas o sin colorear.
Cubreobjetos: son laminillas delgadas de vidrio, de tamaos variados, de forma
cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones y facilitar la observacin
microscpica del material que se desea examinar.
Frascos goteros: son botellas de vidrio que tiene la capacidad de 50 a 60 ml con tapn
gotero de vidrio. Se utilizan para el manejo de soluciones colorantes.

ACTIVIDADES DE LA PRACTICA DE
MATERIAL DE LABORATORIO
1.- Dibuja 5 materiales de laboratorio e indica la funcin que tienen

2.- Coloca el nombre a los siguientes materiales de laboratorio e indica la funcin

que tiene cada una

PRACTICA No. 2
MICROSCOPIA
OBJETIVOS:
Identificar las partes del microscopio
Utilizar correctamente el mismo
Conocer los cuidados correctos del microscopio
MARCO TEORICO:
PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

Sistema ptico
o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del
objetivo.
o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de
sta.
o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparacin.
o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecnico
o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.
o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular.
o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y
micromtrico que consigue el enfoque

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya
debera estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el
de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el
tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a
travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el
objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo
ntido la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
2. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al
cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a
enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo
de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que
ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las
precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una
preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.
3. Empleo del objetivo de inmersin:
a. Bajar totalmente la platina
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que
nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino
entre ste y el de x40.
d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de
inmersin.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota
ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre
el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el
de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de
aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y
repetir la operacin desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se
coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento
ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con
el objetivo de inmersin en posicin de observacin.
j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial
para ptica.

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MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en
posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su
funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del
polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el
microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda
en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo
sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo,
hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que
abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso
se pueden daar las lentes y su sujecin.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a
la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca
de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est
observando a travs del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn
lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao
humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin
prctica.

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ACTIVIDADES DE LA PRACTICA DE
MICROSCOPIA
1.- Coloca las partes al microscopio e indica su funcin.

2.- De que sistemas consta el microscopio? Mencinalos.

3.- Cules son los pasos a seguir para el manejo del microscopio?

4.- Qu cuidados debes tener con el microscopio?

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PRACTICA No. 3
ASEPSIA Y ANTISEPSIA
OBJETIVOS:
Conocer y manejar correctamente las tcnicas de asepsia y antisepsia.
Diferenciar asepsia mdica y asepsia quirrgica.
Aprender la aplicacin de las tcnicas de aislamiento.
Manejar correctamente e indicar la s ventajas y desventajas de los distintos
mtodos de esterilizacin.
MARCCO TEORICO:
Definicin:
Asepsia: es la ausencia de microorganismos, un estado libre de grmenes. Conjunto de
procedimientos que impiden la llegada de microorganismos a un medio, por ejemplo:
tcnicas de aislamiento, etc.
Antisepsia: proceso de destruccin de los microorganismos contaminantes de los tejidos
vivos. Conjunto se procedimientos destinados a destruir a los grmenes patgenos o no
patgenos, por ejemplo: antispticos, etc.
Antispticos: son antimicrobianos que s se pueden aplicar en tejido vivo, pero slo
localmente, de forma tpica, en piel y mucosas. Los antispticos no pueden ser
administrados por va parenteral u oral para tratar infecciones porque las dosis de
antispticos a las cuales se obtiene un efecto antimicrobiano efectivo son altamente
txicas. Al ser sustancias que se utilizan en tejidos vivos requieren de propiedades
especiales. Las caractersticas ideales de un antisptico son:
1. buen ndice teraputico: es la relacin que existe entre la concentracin
germicida y la concentracin txica local y sistmica. Mientras menor es la accin
germicida y mayor la accin txica, mejor es el ndice teraputico.
2. ms germicida que germisttico
3. amplio espectro de accin (virus, esporas, hongos, protozoos y bacterias).
4. Efecto de inicio rpido y duracin prolongada
5. Solucin de baja tensin superficial para que penetre bien en todos las
irregularidades del tejido
6. activo frente a materia orgnica (pus o sangre en heridas infectadas)
Bactericida: agente capaz de destruir a las bacterias.
Bacteriosttico: es todo agente que inhibe la reproduccin de bacterias. Un agente
puede ser usado como bacteriosttico o bactericida dependiendo de su concentracin, el
tiempo de accin, etc.
Sptico: presencia de microorganismos patgenos en los tejidos vivos.
Infeccin: es la entrada y multiplicacin de un agente patgeno en el organismo.
Detergentes: los detergentes son sustancias tenso-activas, que por sus propiedades
qumicas favorecen el proceso de emulsin de las grasas en agua. Por ello se los usa

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como productos de limpieza ya que facilitan el desprendimiento y posterior eliminacin de

la suciedad tanto de los objetos como de la piel.
Contaminado: se refiere a toda superficie, animado o inanimada, que se sabe aloja
microorganismos.
Desinfeccin de alto nivel: proceso de desinfeccin de destruye esporas
Desinfeccin terminal: proceso mediante el cual un rea u objeto se desinfecta luego de
que ha ocurrido alguna contaminacin.
Limpieza: reduccin sustancial del contenido microbiano, sin que llegue a la desaparicin
completa de los microorganismos patgenos
Funguicida: agente que destruye a los hongos
Esterilizacin: la esterilizacin es la destruccin total de todos los microorganismos,
incluso de las formas ms resistentes como esporas bacterianas, virus no lpidicos y
hongos. Con el uso de los procedimientos fsicos o agentes qumicos.
Los mtodos se esterilizacin son los siguientes:

Fsico

1. Por calor:
Seco:
a. Directo: flameado o incineracin
b. Indirecto: aire caliente (Pupinel)
Hmedo:
a. Calor hmedo discontinuo: tindalizacin
b. Vapor a presin: autoclave
2. Radiacin Ionizante
Gas xido de etileno

Qumico
Glutaraldehido activado
Esterilizacin con calor seco: la accin bactericida del calor seco se debe a la oxidacin
fsica d ruin procedimiento lento e coagulacin de la protena bacteriana por quemadura.
En ausencia de humedad se necesita una temperatura ms alta, ya que en esta forma los
microbios son destruidos al absorber el calor. Pueden ser dos tipos:

Directa: flameado o incineracin ms utilizada en laboratorios y en algunos

hospitales pequeos.
Indirecto: aire caliente u horno de Pasteur con temperatura de 160C a 180C por
1 a 2 horas siendo el ms eficaz y seguro el elctrico.

Ventajas:
El aire caliente penetra ciertos materiales que no se pueden esterilizar en el
autoclave
Puede utilizarse en laboratorios para la esterilizacin de artculos de vidrio
El calor seco da proteccin en esterilizacin de instrumentos delicados con punta o
filo al que daara el vapor
El acero no se corroe o decolora

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Desventajas:
Se requiere ms tiempo de accin, porque el aire penetra con lentitud y
uniformidad
El tiempo y la temperatura varan segn el tipo de material
La sobre exposicin puede daar algn producto
Destruye telas o material de caucho

Esterilizacin con calor hmedo: el calor hmedo es la forma de vapor saturado a

presin es eficaz para la destruccin de todas las formas microbianas, incluso espora. La
muerte de las bacterias es causada por la desnaturalizacin y coagulacin de su protena
o su sistema intercelular enzima-protena. Estas reacciones son catolizadas por medio del
agua. Estas pueden de dos tipos:

Calor hmedo discontinuo: algunos medios de cultivo que contiene carbohidratos

como la gelatina, leche, etc. no soportan temperaturas elevadas y se realiza
mediante los siguiente procedimientos:
1. Tindalizacin: hace uso del calor hmedo, para una buena esterilizacin
se debe realizar a 100C por hora (por tres veces discontinuas) durante
1 da.
2. Ebullicin: es el paso de un lquido al estado de vapor. El agua en
ebullicin representa en forma eficaz y prctica de proporcionar una
desinfeccin de alto nivel de instrumentos y guantes que entren en
contacto de las membranas mucosas, si bien al hervirlos por 20 minutos se
aniquilan todas las formas vegetativas de las bacterias, los virus, las
levaduras y los hongos, pero no destruye a las esporas.
3. Pasteurizacin: elimina a todos los microorganismos no esporulados se
puede variar las temperaturas por ejemplo: 62C por 30 min; 70C por 15
min. Se utiliza para preservar alimentos como ser leche, cerveza.

Vapor a presin: conocido como autoclave, que posee todos los requisitos
indispensables como grados de temperatura y tiempo de exposicin, que junto con
el tamao del autoclave y el flujo del vapor, la densidad y el tamao de la carga en
la cmara aumentan la tasa se muerte de los microorganismos, en una
temperatura de 121C 132C durante 15 minutos o ms.
Ventajas:
Es ms fcil segura y eficaz
El uso del vapor es el procedimiento ms rpido, el ciclo total de tiempo es ms
corto
Es ms barato y de obtencin ms fcil
La mayora de las autoclaves poseen controles automticos y dispositivos de
control
Desventajas:
Se requiere mucho cuidado en la preparacin y confeccin de bultos, en la carga y
manejo del autoclave, as como el secado de los artculos
Los artculos a esterilizar deben estar limpios, sin grasa ni aceite
El vapor tiene que estar en contact directo con todas las partes de los artculos
Los ciclos de tiempo se ajustan segn el tipo de material y tamao de la carga
El vapor puede no ser puro

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Esterilizacin por radiacin: la ionizacin por radiacin genera iones al liberar

electrones de los tomos, estos se desprenden violentamente con tomos adyacentes y
se une a ellos, o bien se desprenden del segundo tomo. La energa liberada se
transforma en energa trmica o qumica la cual causa la muerte de los microorganismos
al romper la molcula del ADN e impide la divisin molecular y la propagacin de la vida.
Las principales fuentes de radiacin ionizante son las partculas Beta y rayos gamma.

Ventajas:
Penetra la mor parte de todos los materiales para esterilizarlos con confiabilidad
Es el mtodo de esterilizacin ms eficaz
No genera radiacin residual
Penetran en objetos grandes y voluminosos

Esterilizacin por gas oxido de etileno: este es un gas incoloro, soluble en agua y en
solventes comunes, se emplea para esterilizar objetos sensibles al calor, este proceso es
relativamente lento. El poder bactericida depende de la concentracin del mismo gas,
temperatura, humedad y tiempo de exposicin. La actividad esporicida se produce por
aniquilacin de los grupos terminales hidroxilo, carboxilo, amino y sulfridrilo.

Ventajas:
Es un buen sustituto eficaz cuando los artculos no pueden ser esterilizados por
calor
Es anticorrosivo y no daa el material
Penetra totalmente todo el material poroso
No deja pelcula sobre los instrumentos
Desventajas:
Es un proceso complicado por lo que se debe usarse indicadores biolgicos
La esterilizacin lleva ms tiempo, es un proceso lento y largo
Necesita equipo especial y costoso
Puede formar productos secundarios txicos
Necesita ser ventilado por lo menos 24 horas
Por frecuentes esterilizaciones pueden formar y aumentar residuos totales de gas
en artculos porosos
En contacto con la piel produce vesculas y an quemaduras
Si se inhala puede ser irritante para las mucosas
Esterilizacin por glutaraldehido: la solucin acuosa de glutaraldehido activado y
amortiguado al 2%, destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de la protena.
Es preferida para esterilizar instrumentos que no pueden esterilizarse al vapor o no se
cuenta con otro mtodo de esterilizacin.

No es absorbible por caucho ni plstico

Es poco voltil de modo que puede reutilizarse
Es eficaz a la temperatura ambiente
Es anticorrosivo, no mancha y eficaz para esterilizar instrumentos
Tiene una tensin superficial baja

Ventajas
Amplio espectro

Grado de desinfeccin
esterilizante
nivel alto
nivel bajo

Tiempo de inmersin
12 horas
30 min
10 min

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Desventajas:
Puede ser irritante, por lo tanto se debe enjuagar exhaustivamente con agua
estril
Es una solucin con olor
Es costoso

Desinfeccin: es el uso de procedimientos fsicos o qumicos para destruir a la mayora

de los microorganismos: bacterias y otros microorganismos relativamente resistentes por
ejemplo mycobacterias, virus lipdicos, hongos.
Desinfectantes: son sustancias qumicas capaces de destruir un germen patgeno que
debido a su alta toxicidad celular se aplican solamente sobre tejido inanimado, es decir
material inerte.
Segn el grado de desinfeccin tenemos:
1. desinfeccin de nivel alto
2. desinfeccin de nivel intermedio
3. desinfeccin de nivel bajo
Tipo
Desinfeccin de nivel alto
Desinfeccin
de
intermedio
Desinfeccin de nivel bajo

Agentes que no elimina

Frmaco
algunas esporas
Formalaldehido
Glutaraldehido
Hipoclorito de sodio 1%
nivel esporas
Alcohol etlico 70%
Esporas, TBC, VIH y Compuestos de amonio
VHB
Cuaternario
Principales
antispticos
desinfectantes:

DG6-SOLUCION: Detergente, germicida, funguicida. Moderno y poderoso germicida

desinfectante, ha demostrado una actividad 120 veces ms rpida que las sales de
mercurio y 50 veces ms eficaz que el fenol, yodo, alcohol, formol, etc. Aparte de destruir
los microbios es muy activo contra las formas fungosas (pie de atleta), penetra profunda
mente en los intersticios de la piel y alcanza los grmenes aislados en las zonas ocultas;
sigue actuando por su efecto residual luego de su largo lapso de su aplicacin no tiene
olor, no es custico, no mancha la piel ni ropa, no es txico a diluciones habituales.
AGUA OXIGENADA (H2O2): Es un antisptico de amplio espectro germicida, pero tiene la
gran desventaja que es inactivado rpidamente por los tejidos mediante la
enzima catalasa. Usos:
Se utiliza en heridas profundas por dos motivos: el O2 liberado del catabolismo es
txico para las bacterias anaerobias que frecuentemente afectan este tipo de
heridas y, adems es til ya que ayuda a eliminar detritus celulares y tejidos
desvitalizados que favorecen la infeccin. La accin del agua oxigenada es a
travs de la formacin de radicales libres.

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CLORHEXIDINA: Es un antisptico de la piel de uso ms limitado en consultorios y

hospitales debido a su costo, utilizndose ms en clnicas privadas.
Es un antisptico de bajo espectro de accin, actuando exclusivamente sobre bacterias,
Gram (+) y Gram (-), aunque hay cepas de pseudomona que pueden ser resistentes. No
es viricida ni tampoco esporicida, sin embargo es capaz de inhibir su germinacin.
Las ventajas que justifican el uso de clorhexidina son la accin germicida rpida y su
duracin prolongada gracias a que esta sustancia tiene gran adhesividad a la piel, tiene
un buen ndice teraputico y al combinarlo con alcohol al 70% su accin germicida
aumenta. Usos:
Gluconato de Clorhexidina en solucin acuosa con detergente: se utiliza en
limpieza pre-operatoria de piel, en ciruga plstica y en pacientes alrgicos al yodo.
Clorhexidina al 0,5% en etanol al 70%: se usa para el lavado de manos
YODO: Existen dos tipos de soluciones que contienen yodo. En primer lugar las
soluciones de yodo propiamente tales que son dos, el alcohol yodado (0,1 gr
de yodo en 100 ml de alcohol al 70%) y la tintura de yodo (1 gr de yodo en
100 ml de alcohol etlico al 70%). El segundo tipo es un yodforo, la povidona
yodada al 10%. Un yodforo es un complejo en que el yodo est unido a una
molcula orgnica y se va liberando progresivamente a la solucin. El primer
grupo corresponde a soluciones alcohlicas de yodo y la segunda es una
solucin acuosa del in.
Los 3 tipos mencionados tienen la misma accin germicida. Su accin antisptica se
clasifica entre nivel alto y el nivel intermedio. Son letales en minutos para las bacterias,
hongos, virus, protozoos, quistes amebas y esporas. Sin embargo, frente a esporas secas
requiere de un mayor tiempo de exposicin (horas). El yodo es mucho mejor antisptico
que el alcohol. El alcohol yodado es la forma de alcohol que se usa con mayor frecuencia
debido a su potenciacin.
Respecto al uso, para la antisepsia profilctica de piel y el lavado de manos se usa el
alcohol yodado y la povidona, mientras que para la limpieza de heridas y de mucosas se
utiliza la povidona exclusivamente. El alcohol en estos casos es muy irritante.
Los antispticos yodados tienen la ventaja de ser baratos.
ALCOHOL ETILICO O ETANOL70%: Una condicin particular del etanol es que s se usa
como antisptico en una solucin pura, al 100%, carece casi por completo de
accin germicida. Esto se debe a que el etanol acta precipitando las
protenas del germen exclusivamente en medio acuoso. El alcohol debe estar
diluido para tener efecto. La clnica ha demostrado que la solucin germicida
ms efectiva es el alcohol al 70%. Soluciones ms concentrados que se
venden en el comercio tienen menor efectividad.
El etanol 70% es un desinfectante de nivel intermedio. Es letal para bacterias incluyendo
el bacilo de Koch, es un irregular fungicida y viricida, y no acta sobre las esporas. El
alcohol etlico tiene un uso limitado, particularmente como antisptico profilctico en la piel
previo a la introduccin de agujas. Sin embargo, para obtener los resultados germicidas
esperados, deberamos esperar 2 minutos como mnimo (latencia de accin). El alcohol
es un buen antisptico pero no es el mejor. No debe ser administrado en heridas ya que
es irritante.
Otra caracterstica del etanol es que al combinarlo con antispticos de otro grupo se
potencia su accin germicida.
Bibliografa:
1. Tiejten Lynda Prevencin de las Infecciones
2. Atkinson Lucy Tcnicas de Quirfano Nueva Editorial Interamericana S.A. Mxico 1993

18

3. Dugas Beverly Tratado de Enfermera Prctica Nueva Editorial Interamericana Mxico

1999

ACTIVIDADES DE LA PRACTICA DE
ASEPSIA Y ANTISEPSIA
1.- Cules son los mtodos de esterilizacin?

2.- Cul es la definicin de los siguientes trminos:

Asepsia:
Esterilizacin:
Fungicida:
Bacteriosttico:
Antisepsia:
Detergentes:
3.- Cules son los grados de desinfeccin y que agentes son eliminados en cada
grado?

4.- Realiza los dos tipos de lavado de manos tanto quirrgico y mdico; y en que
caso se realiza cada uno?

19

5.- Cuntos tipos de calzado de guantes existen, mencinalos y posteriormente

demustralo?

PRACTICA No. 4
MANEJO DE MUESTRAS
OBJETIVO GENERAL:
Los estudiantes de laboratorio aprendern y pondrn en prctica las tcnicas
correctas para una buena extraccin, manejo y trasporte de muestras.

OBJETIVOS ESPECFICOS:
Los estudiantes sern capaces de:

Saber que tipo de muestras es necesario y como de obtiene para el estudio

microbiolgico de las distintas patologas.
Conocer los mtodos de obtencin de las muestras mas caracterizadas como
(orina, heces, exudados).
Conocern como se trasportan las muestras, y los mtodos que dispone para
ello.
Indicar que tipo de muestras y sustancias orgnicas pueden ser extrados para
la muestra.
Referir el tipo de muestras que se solicitan y para que estudios son utilizados.

MATERIAL:

Dos pares de guantes

Jeringas de 5 o 3cc.
Dos baja lenguas y una linterna.
Cuatro hisopos ( cotonetes)
Un par de porta y cubre objetos ( para la muestra de esputo y de heces).
Torundas secas y con alcohol.
Cinta adhesiva (para la muestra de oxiuriasis).
Frascos colectores de esputo. Frascos estriles y limpios para muestras de
orina y heces Bistur. Termo con paquetes fros
Algodn e hisopos
jabn o jaboncillo abundante agua y toallas

DEFINICION:

20

La toma de muestra es el conjunto de procedimientos destinados a obtener una parte

representativa cualitativamente y cuantitativamente a partir de un todo, en nuestro caso,
el paciente, es el medio ambiente.

CONSIDERACIONES GENERALES PARA LA TOMA DE MUESTRA:

1. Debemos saber QUE vamos a tomar como muestra (esputo, sangre, etc.)
2. PORQUE vamos a tomar la muestra (con fines de diagnostico, investigacin)
3. COMO vamos a tomar la muestra (puncin, raspado, etc.)
4. DONDE vamos a tomar la muestra (piel, faringe, etc.)
5. CUANDO vamos a tomar la muestra (ayuno, etc.)
CARACTERSTICAS DE UNA MUESTRA:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Ser obtenida del lugar donde asiente la patologa.

Generalmente tomada de los bordes de la lesin.
Ser cualitativamente optima para su estudio.
Alcanzar cuantitativamente un volumen razonable
En la mayora de los casos ser de emisin reciente.
En algunos casos haber sido obtenida cuando el paciente esta atravesando
determinadas instancias evolutivas de su patologa.
7. Obtenida siguiendo criterios anatmicos y funcionales.
8. Perfectamente envasada, evitando recipientes que potencialmente puedan
producir contaminaciones accidentales.
9. Enviada inmediatamente al laboratorio para su estudio o si tiene que
transcurrir algn tiempo ser enviada en recipientes especiales o en medios de
cultivo de transporte.
10. Obtenida con material esterilizado y en condiciones de
asepsia.
PROCEDIMIENTO PARA LA TOMA DE MUESTRAS:
El frasco en el aislamiento de un germen se debe, ms a menudo, a una mala toma de
muestras o a deficiencias en el transporte de las mismas que a unos fallos en las tcnicas
de cultivo. Por ello, es muy importante la estudiante que vaya a realizar la toma de
muestras est bien informado d las normas a seguir.
Instrucciones generales y especificas a seguir para lograr una buena toma de muestras.
1. La toma de muestras debe realizarse antes de iniciar el tratamiento con
antimicrobianos, ya que este interfiere en la observacin directa del germen, as
como en posterior aislamiento del mismo en los medios de cultivo.

21

2. La toma de muestras debe realizarse en los lugares donde sea ms probable es

encontrar el microorganismo con la menor contaminacin externa posible.
3. Recoger la muestra en el estadio de la enfermedad ms apropiado.
4. Las muestras deben recoger es cantidades suficientes para permitir un examen
completo; deben colocarse en recipientes estriles y remitirse lo ms pronto
posible el laboratorio.
5. Es un requisito indispensable que el laboratorio recibe la suficiente o tcnicas
adecuas.
6. El personal debe rechazar las muestras que no se han recogido de forma
adecuada y los especialistas deben apoyar esta actitud.
7. Recordando:
La toma de muestras debe realizarse antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano.
Es muy importante seguir las normas necesarias
para evitar la contaminacin externa.
La cantidad debe ser suficiente y es fundamental que se utilice un
recipiente.
CLASIFICACION DE

LA TOMA DE MUESTRAS:

Se clasifican en:

MUESTRAS SUPERFICIALES

MUESTRAS DE CAVIDADES

MUESTRAS ESPECIALES.

MUESTRA SUPERFICIALES:
Aqu consignamos a las muestras de la piel, pelo, uas.

1. PIEL: Tenemos dos posibilidades de obtener la muestra, ya sea procediendo a

alzar a los grmenes con el asa bacteriologa, por simple raspado ligero o con la ayuda
de bistur proceder a raspar algo energticamente los bordes de la lesin, de manera no
solo obtendremos los microorganismos sino tambin las capas superficiales de la piel,
esto es provechoso en el caso de ciertas determinaciones.
Finalmente puede ser que en determinados casos se pretenden ndulos los cuales
estn por debajo de la piel, siendo ms palpable que visibles; en este caso procedemos
tambin a raspar con el bistur el lugar de la lesin llegando hasta el ndulo de manera
que una vez obtenida la pulpa, esta puede ser procesada y as llegar a observar al
microbio.
2. PELO: Tambin hay dos posibilidades, la primera cuando los grmenes se
hallan localizados en el folculo piloso, en este caso ser suficiente proceder a raspar la
regin con el asa bacterol6gca previo de la zona con agua destilada, tambin se podr
arrancar el pelo a fin de aislar al germen a partir del folculo piloso.

22

La segunda posibilidad se vera cuando el tallo del pelo este atacado (micosis) en esta
situacin proceder acortar el pelo para su observacin o posterior procesamiento en
cultivo.
3. UAS: Se utilizan dos tcnicas, de acuerdo al sitio atacado. La primera se
utiliza cuando la lesin asienta en el lecho ungueal, en esta
tcnica desplazamos el
asa bacteriolgica, previo lavado de la regin con agua destilada por el lecho ungueal con
un solo trazo firme y seguro.
Si la ua se halla atacada por microorganismos (hongos) entonces procedemos a cortar
ayudados de un bistur a fin de continuar luego con el cultivo y el diagnostico a travs de
la microscopia.

MUESTRA DE CAVIDADES:
Consignamos
las muestras de mucosas, conducto auditivo
externo, esputo, orina, heces fecales.
1. MUCOSAS.- El instrumento que sirve de como denominador en la obtencin de
estas muestras es el hisopo, es decir un aplicada de madera que posee es uno de sus
extremos un engrosamiento de algodn y que obviamente debe ser esterilizado. Si
vamos describiendo las mucosas de arriba hacia abajo, encontramos lo siguiente:
2. MUCOSAS CONJUNTIVAL.- Usamos un hiposo estril aunque algunas
escuelas prefieren utilizar el asa bacteriolgica, luego ubicamos la conjuntiva infectada o
aquella que presente mayor exudado si la muestra a nivel del ngulo interno del ojo
afectado. El hisopado debe ser cuidadoso y suave para ri producir mayor traumatismo.
3. MUCOSA NASAL.- De igual forma utilizamos un hisopo si la lesin es visible a
simple vista procedemos entonces a obtener la muestra, si la lesin es mucho ms
interna. Entonces ser necesario que un especialista la obtenga con instrumental que
nosotros ya no poseemos. Hay otras oportunidades en que es preciso utilizar un cincel
delgado y largo que podemos fabricar a partir de un sujetador de papel (clip) el cual es
convertido en alambre rectilneo y posteriormente aplastando uno de los extremos
obtendremos un pequeo cincel, con el cual y una vez esterilizado procedemos a raspar
lesiones sospechosas.
4. MUCOSA ORAL.- En esta cavidad es sencillo tomar cualquier nuestra pues
tenemos gran visibilidad All podemos observar donde se localizan una lesin y
posteriormente utilizando el hisopo llevar a cabo la toma de muestra. Por otra parte para
fines de investigacin podemos escoger cualquier segmento de la mucosa oral puesto,
que esta posee una flora variada de microorganismos.
5. MUCOSA GENITAL FEMENINA.- Aun debemos considerar dos posibilidades
ms y son aquellas que se presentan en el caso de una mujer con himen intacto y otra
que haya tenido contacto sexual. En la mujer con himen intacto tan solo debemos
esperar que las secreciones se viabilicen al exterior para as ser obtenidas.
En la mujer desflorada utilizaremos el especulo es decir dos valvas que una vez
introducidas en el canal vaginal pueden ser separadas a voluntad, brindndonos de esta
forma un campo de accin y observacin ideales luego procederemos a hisopar las

23

regiones escogidas, haciendo hincapi en las vecindades del orificio cervical externo,
pues all se acumularan las secreciones.

MUESTRAS ESPECIALES. ESPUTO.- El esputo es la coleccin de secreciones patolgicas provenientes del

rbol traqueo-bronquial. La muestra podemos obtenerla a travs de diferentes tcnicas,
entre las cuales citaremos las ms importantes:
1. FORMA NATURAL DE ELIMINACIN DEL ESPUTO: Esta es la tcnica ms
utilizada, se aplica a pacientes que pueden entender y aplicar las instrucciones que se
les d.
Entregamos al paciente un recipiente especial para esta muestra y le indicamos que al
despertara proceda a realizar un enjuague bucal con un antisptico, luego debe
proceder a expectorar directamente dentro de recipiente, llegando a acumular por lo
menos tres esputos (flemas).
Posteriormente se sierra hermticamente el envase y deber ser enviado a laboratorio
debidamente rotulado (nombre completo, edad y sexo) adems de la numeracin
correspondiente y fecha.
2. LAVADO GSTRICO.- Esta tcnica se prctica en pacientes que no van ha
poder realizar lo anterior, los nios (por que degluten el esputo), ancianos, enfermos
mentales finalmente mujeres (por que tambin degluten el esputo.
3. LAVADO TRAQUEAL.- Esta tcnica consiste en instalar suero fisiolgico tibia
hacia el rbol traqueo- bronquial de manera que provoquemos el acceso de tos al
despertar o excitar ese reflejo, en esa circunstancia debemos estar bien protegidos con
barbijo, gorro, mandil y guantes.
4. FORMA POSTURAL.- Este mtodo tambin es til en pacientes que no
pueden eliminar en forma espontnea la muestra.
Procedemos a colocar al paciente en decbito ventral sobre una camilla (o cualquier
superficial que cumpla la misma funcin ) con una almohada debajo de ala regin
abdominal finalmente la cabeza queda colgado en una de los extremos la camilla al
igual que los brazos lateralmente: de esta forma por simple accin de la gravedad la
secreciones se viabilizaran al exterior, directamente al recipiente

RECOGIDA DE ORINA. - La toma de muestras se realizar en un frasco estril que

no deber abrirse antes de la recogida.
La recogida de orina puede realizarse de tres formas:
1. RECOGIDA DE LA PORCIN MEDIA DE LA MICCIN.- Es aconsejable que la
orina recogida sea de la primera hora de la maana. El paciente debe lavarse
meticulosamente los genitales externos con agua y jabn enjugndose finalmente con
agua limpia. Iniciar la miccin desprecindose la primera parte. A continuacin, y sin
detener la miccin, debe recogerse la segunda mitad de la misma en un frasco estril de
unos 20, 35 m1 evitando tocara el interior o borde de 1 frasco.

24

2. SONDAJE VESICAL 0 PUNCIN DE SONDA.- El sondaje vesical debe

utilizrselo menos posible yaque con lleva el riesgo de provocar una infeccin por
introducir microorganismos del exterior. Se efectuara en condiciones de rigurosa asepsia
y por personal cualificado.
El enfermo portadores de sonda permanente debe recogerse la muestra a trabes de la
sonda y nunca directamente de la bolsa.
3. PUNCION SUPRAPVICA.- Esta tcnica permite extraer la orina directamente
de la vejiga mediante una jeringa con aguja asegurando una muestra libre de
contaminaciones. Este mtodo puede realizarse con muy poco riesgo en lactantes, nios
y adultos con vejiga llena.
Dado que la orina es un excelente medio de cultivo para la mayor parte de las
bacterias, la muestra debe refrigerarse inmediatamente despus de la extraccin.
A 40 C el recuadro de bacterias permanece constante durante 24 horas.
4. TCNICA DE RECOLECCIN EN 24 HORAS.- Se usa cuando la patologa
esta situada en los riones. Consiste en recolectar durante 24 horas toda la orina
eliminada de manera que aumentemos las posibilidades de coleccionar el agente
etiolgico.
Caractersticas del recipiente para recolectar orina.
a. La capacidad mnima es de 250 cc.
b. Debe poseer boca ancha.
c. Debe poseer sistema de rosca y tapa que asegure con este sistema.
d. Debe ser estril.
e. Debe ser construido de material susceptible de esterilizacin.
f. De preferencia ser transparente a fin de observar ciertas caractersticas
macroscpicas.
g. Tiene que consignar el nombre, edad, sexo del paciente, adems de la
fecha y el correspondiente nmero de registro.
HECES FECALES.- Tenemos dos posibilidades: heces diarreicas y heces slidas.
1. HECES DIARREICAS.- En este caso obtenemos un volumen similar al de
una cuchara sopera lo que ms o menos viene a ser una cantidad de 10 cc. Estas
muestras deben procesarse dentro de un margen de tiempo prudencial pues al
acidificarse muchos grmenes patgenos se lisan.
2. HECES SLIDAS.- Se toma un volumen similar al de una pepa de durazno.
Caractersticas del recipiente para recolectar heces fecales.
a. La capacidad mnima es de 30 ml
b. Debe poseer sistema de rosca y tapa que asegure con este sistema, o en
su defecto un tapn que asegure hermticamente.

25

c. En lo posible debe ser estril, aunque se puede utilizar un envase bien

lavado.
d. Podr ser construido de material susceptible de esterilizacin,
(polipropileno, policarbonato, vidrio)
e. No debe ser fabricado de cartn pues deshidrata la muestra. En ltimo
caso se podr utilizar recipientes de cartn parafinado.
f. Tiene que consignar el nombre, edad, sexo del paciente, adems de la
fecha y el correspondiente nmero de registro.

MUESTRAS ESPECFICAS
1. EXTRACCIN DE SANGRE PARA CULTIVOS: La tcnica de extraccin consta
de una serie de pasos que deben rigurosamente, con objeto de reducir al mximo
el riesgo de contaminacin.

Colocar una ligadura en el antebrazo.

Escoger la vena tocando la piel antes de la desinfeccin.

Limpiar la piel con alcohol (70%) sobre el sitio de la venopuntura en un

rea se unos 5 cm frotando vigorosamente.

Aplicar yodo-povi dona (2 %) desde el centro hacia afuera, hasta haber

saturado todo el circulo. Se dejara que el yodo se seque, durante un
minuto como mnimo, Este tiempo es fundamental y se debe cronometrar.

Si despus de desinfectada, el flebotomista debe tocar la piel, deber

desinfectarse los dedos que va a usar para la palpacin o bien utilizar
guantes estriles.

Se insertara la aguja en la vena a y se realizara la extraccin. Se

cambiaran las agujas antes de inyectar la sangre en las botellas de
cultivo.

Despus e retirar la aguja, la piel del paciente se desinfectara otra ves

con alcohol al 70% , ya que muchos enfermos son sensibles al yodo.

Una ves inoculadas, las botellas de hemocultivos deben remitirse

inmediatamente al laboratorio para iniciar lo ms pronto posible su
procesamiento.
No es aconsejable extraer sangre a travs de una derivacin 0 catter, ya que estos
dispositivos pueden estar colonizados por bacterias que no estn presentes en la
sangre el paciente por lo tanto, estos hemocultivos podran dar resultados falsos
positivos.
Tambin se aconseja realizar la toma por debajo de las tubuladuras intravenosas ya que
la sangre tomada por encima e ella estar diluida por el lquido transfundido.
Se recomienda 3 muestras en 24 h con un intervalo entre ellas superior a 1 h.
Sin embargo se acepta 2 o 3 extracciones separadas 30 min. Cada 24h, para cada
hemocultivo, se extraern lO ml de sangre y se inocular a partes iguales en dos frascos
(5ml en cada uno) uno para aislamiento de grmenes aerobios y otro para anaerobios.

26

2.

LIQUIDO

CEFALORRAQUDEO: Esta muestra se obtiene a partir de una puncin lumbar que se

practica entre el 3er. Y 4to. Espacio intervertebral lumbar.
Esta es una tcnica prctica operatoria y se la debe realizar con todos los cuidados
necesarios teniendo en cuenta las contraindicaciones.
La cantidad necesaria es de 3 - 5ml. y siempre se debe realizar un estudio microscpico
antes de entrar al estudio microbiolgico. La presin ms importante es de procesar el
liquido cefalorraqudeo dentro de un margen de tiempo mnimo desde la toma de
muestra, pues muchos grmenes se lisan transcurrido cierto tiempo; dndonos de esta
manera un resultado negativo.
3. MUESTRA CAPILAR: tcnicas.
Realizar la antisepsia del lugar elegido (lbulo de la oreja, pulpejo del dedo
anular, planta del pie en lactantes.
Funcionar con rapidez y firmeza de tal manera que ingrese toda la punta de la
lanceta.
Descartar la primera gota.
Recoger la sangre que fluye libremente llenando las tres cuartas partes del capilar.
Presionar suavemente el lugar de puncin con un algodn empapado en alcohol.
La puncin cutnea o capilar se emplea para:
Frotis
Micro hematocrito
Grupo sanguneo
Recuento de lbulos blancos
Y otros.

CONCLUSIN.- No solo se puede obtener de los segmentos mencionados, en

determinado momento cualquier regin del cuerpo humano se presta a ser tributarla de
este procedimiento.

27

EJERCICIOS DE EVALUACIN (Extraccin de muestras)

1.- Qu caractersticas debe tener una muestra indique 6?
R

2.- Por qu es importante obtener la muestra con material estril y con asepsia?
R.............................................................................................................................................
................................................................................................................................................
................................................................................................................................................
................................................................................................................................................
........................................................................................................................................
3.- Por qu es importante refrigerar la muestra de orina inmediatamente despus
de la extraccin?
R

4.- Cules son las caractersticas del frasco para recolectar la orina?
R.

28


.........
5.- Cul de las siguientes muestras no deben guardarse en la nevera cuando se
requiere realizar un cultivo microbiolgico? Subraya la respuesta y justifcala.
a) Esputo
b) Orina
c) Liquido cfalo raqudeo
d) Heces
Porque

6.- Para qu estudio se emplea la puncin cutnea o capilar?

R

7.- De que espacio intervertebral se obtiene la muestra del Lquido Cfalo

Raqudeo y porque?
R

8.- Qu pasa con las heces cuando se las deja mucho tiempo sin refrigerarse y sin
conservantes?
R

9.- Por qu no es aconsejable extraer sangre de una derivacin o catter?

R

10.- Qu medidas de seguridad debe tener la persona que recolecta cualquier tipo
de muestra y porque?
R .

....

29

PRACTICA No. 5
TINCIONES

OBJETIVO GENERAL:
Los estudiantes de laboratorio aprendern y pondrn en prctica las tcnicas
correctas de las tinciones y su importancia.

OBJETIVOS ESPECFICOS:
1.- Conocer la morfologa de los elementos en sangre aquellos que son normales y los
producidos por patologas.
2.- Aprender la tcnica de extensin realizando la gota gruesa y un extendido delgado
para la observacin del parsito.
3.- Conocer los parsitos de la sangre en caso de Malaria.
4.- Conocerla tcnica de tincin de Leishman.
5. Conocer las causas que puede dar error en
una tincin.
DEFINICIN.Las tinciones fueron desarrolladas filogenticamente para poder diferenciarlos tipos de
elementos existentes en el torrente sanguneo como ser Glbulos Rojos, Glbulos
Blancos, Plaquetas y todos los elementos que puedan existir de acuerdo a las
enfermedades presentes.
MATERIAL..

Dos varillas de vidrio

30

.
.
-

Frasco Lavador
Cronmetro
Gradilla para secarlos porta objetos
Porta objetos

REACTIVOS.Colorante de Leishman
Buffer o Agua ale alcalina
FUNDAMENTO.Las Tinciones Hematolgicas, se fundamenta en la coloracin de los elementos formes
de la Sangre.
Elementos Celulares: a) Glbulos Rojos o eritrocitos
b) Glbulo s Blancos o leucocitos
c) Plaquetas o Trombocitos
Las clulas de la sangre tienen un origen comn en la mdula sea de los huesos.
Tanto los Glbulos Rojos como Blancos y Plaquetas provienen de una calda
pluripotencial llamada Stem-Cell, o clula troncal las que por accin de diferentes
hormonas y respondiendo a las necesidades del organismo progresan en varias Ineas
de diferenciacin.
Los Glbulos Rojos.- Son elementos ms abundantes en la sangre circulante y le dan
su caracterstico color rojo se produce en la medula sea y salen a la circulacin en
forma de discos bicncavos sin ncleo.
La funcin primordial del Glbulo Rojo es transportar el Oxgeno.
Los Glbulos Blancos o Leucocitos.- Los leucocitos son clulas encargadas de la
defensa contra las infecciones cuando hay una agresin de un agente patgeno los
leucocitos acuden al lugar de la agresin y destruyen al invasor secretando sustancias
que los inhiben (anticuerpos) o digirindolos (Fagocitosis) o por ltimo destruyndolos
por contacto (Cito toxicidad)
Los leucocitos se dividen en tres clases diferentes, a pesar de derivar de una clula
comn en la mdula sea.
Estos tres tipos diferentes de leucocitos son:
a) Granulocitos Neutrfilos, Eosinfilos y Basfilos
b) Monocitos
c) Linfocitos Linfocitos B
Linfocitos T
El nmero normal d e leucocitos son: de 6000 a 8000 por
mm3

31

Plaquetas.- Son clulas muy pequeas sin ncleo que provienen de la mdula sea,
tiene una vida media de 7 das y su tamao es de 2 a 4 micrones.
Los colorantes colorean el elemento ingresando a travs de la pared celular adquiriendo
una coloracin caracterstica, tanto el ncleo en caso de un glbulo Blanco, coloreando
tambin la Hemoglobina o los elementos que se puedan formar dentro de los eritrocitos.
En caso de la coloracin de Bacilos cada colorante tiene su principio y colorea de
acuerdo a las caractersticas de membrana de cada bacilo que se especifica en la
prctica respectiva.
Existen adems soluciones decolorantes que permiten en una misma placa diferenciar
dos tipos de Bacterias.
PROCEDIMIENTO.1.-Preparar un extendido de Sangre en caso decoloracin Hematolgica esto consiste en
una capa delgada, nica, de clulas sanguneas. Esto facilita la observacin de las
caractersticas morfolgicas de los de los parsitos presentes en los glbulos rojos.
Depositar la gota en un extremo y con un extensor poner en ngulo de 45 realizar el
extendido.
2.- Realizar la gota gruesa realizando la desfibrinaci6n para deshemoglobinizar y nos
permita ver mejor el hematozoario.
3. - Cabe mencionar que la placa se fija con el metanol existente en el colorante.
4.- Depositar el colorante sobre la placa cubriendo en su totalidad
5.- Homogeneizar el colorante soplando la placa por el lateral de la misma.
6.- Cronometrar el tiempo exacto que la tcnica prescribe por el lapso de 4 minutos.
7.- Dejar caer unas 4 a 5 gotas de agua alcalina o buffer homogenizar soplando la placa
por uno de los laterales.
8.- Dejar por el lapso de 12 minutos.
9.- Lavar con abundante agua para eliminar los excesos de colorante.
10.- Dejar secar el extendido ya teido
11.- Examinar al microscopio.
INTERPRETACIN.Los parsito s de la Malaria toman con la coloracin de Leishman en la gota gruesa y en
el extendido, que permite el reconocimiento del tamao y forma del parsito.

32

La identificacin de la especie y del estadio se basa, principalmente, en el aspecto del

ncleo y del citoplasma del parsito:

El ncleo del parsito (la cromatina) es generalmente redonda y se

colorea de un rojo intenso (rojo grosella).
El citoplasma tomas diferentes formas, desde una forma de anillo a
una totalmente irregular, y se colorea siempre de color azul violceo
o cielo, aunque la totalidad puede variar ligeramente.

Para el reconocimiento de la especie y el estadio de los plasmo dios, el extendido

permite observar mejor las caractersticas del parsito, aunque a veces se pueda hacer
diagnostico de especie de la gota gruesa.
RESULTADOS.El resultado debe dar una descripcin detallada de los elementos o grmenes que
se pueda observarlos mismos deben ser supervisados por un Bioqumico en dichos
resultados se debe hacer constar:
1.- Morfologa de los elementos en sangre
2.- Indicar la presencia del hematozoario como SPP
3.- Indicarla cantidad de los G. Rojos, G. Blancos, Plaquetas por recuento en
100 elementos.
CAUSAS DE ERROR.- Frotis muy grueso
- Frotis teido antes de fijar
- Colorante no filtrado (precipitando cristales)
- Colorantes muy concentrados.

Tincin cido-alcohol resistente

33

bacilo de koch

Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Asa de siembra
Cubeta de tincin
Cultivo bacteriano
Pinzas

Frasco lavador
Mechero de alcohol
Papel de filtro
azul de metileno
fucsina-fenol

mezcla de cido y alcohol

REALIZACIN
1. Prepara un frotis bacteriano.
2. Cubrir la preparacin con carbofucsina.
3. Calentar la preparacin en un mechero Bunsen durante 5 min. No debe hervir. Si
se evapora, se aade ms carbofuxina para que no se seque en ningn momento.
4. Lavar con agua el resto de colorante.
5. Decolorar con la mezcla cido-alcohol.
6. Lavar con agua para que no prosiga la decoloracin.
7. Teir con azul de metileno 1 min.
8. Lavar con agua el resto de colorante.
9. Secar la preparacin.
10. Examinar al microscopio.
Tincin GRAM: Bacterias Gram-Positivas

34

Mtodo de identificacin de bacterias mediante una tincin especfica. Desarrollado por

el mdico dans Hans Christian Joachim Gram, es un procedimiento utilizado
universalmente. En un primer momento las bacterias se tien con violeta de genciana
(derivado metilado anilnico) y despus se tratan con la solucin de Gram (1 parte de
yodo, 2 partes de yoduro potsico y 300 partes de agua); por ltimo se lavan con alcohol
etlico, y unas bacterias retienen el fuerte color azul de la violeta de genciana y otras se
decoloran por completo. A veces se aade una contratincin con fucsina o eosina para
teir las bacterias decoloradas de color rojo y hacerlas ms visibles.
Se denominan bacterias Gram positivas a aquellas que retienen la tincin azul y bacterias
Gram negativas a las que quedan decoloradas. Algunas bacterias presentan capacidad
variable de tincin de Gram y se llaman Gram variables. Bacterias Gram positivas tpicas
son los estafilococos que producen fornculos; Gram negativas representativas son la
Escherichia coli de la flora intestinal o los bacilos de la tos ferina; Gram variables son los
bacilos de Koch de la tuberculosis.

Cocos Gram-positivos

Racimos:

forma

Staphylococcus

tpica
sp,

como

de
S.

aureus

Cadenas:

forma

Streptococcus
pneumoniae,

tpica

sp,

como

de
S.

Streptococcus

grupo B

Gruesos: forma tpica de

Clostridium sp, como C.
perfringens, C. septicum

Ramificados:

forma

tpica

de

Actinomycetes y Nocardia, como

A. israelii
35

Racimos:
forma
tpica
Staphylococcus sp, como
aureus

de Tincin GRAM: Bacterias GramS. Negativas

Cocos Gram-negativos

Curvados: forma usual de Vibrio sp, Forma de aguja fina: forma usual
como
V.
cholerae,
y de Fusobacterium sp
Campylobacter sp, como C. jejuni

Tincin GRAM: Bacterias Gram-Negativas

Cocos Gram-negativos
Diplococos: forma usual de Neiseria
sp, como N. meningitidis
Tambin
Moraxella
sp
Acinetobacter sp aparecen
morfologa de diplococos.

y
con

Acinetobacter
puede
ser
pleomrfico, y a veces aparece como
coco Gram-positivo.
36

EJERCICIOS DE EVALUACIN (Tinciones)

1.- Qu objetivo tienen las tinciones?
R

2.- Por qu es importante conocer la morfologa de los elementos de la sangre?

R.............................................................................................................................................
................................................................................................................................................
................................................................................................................................................

37

................................................................................................................................................
........................................................................................................................................
3.- Cules son las principales causas de error en las tinciones y por que se debe
tener mucho cuidado en no cometer errores?
R

4.- Mencione 3 diferencias entre las bacterias gram negativas y positivas?

R.

.........
5.- La tincin de Zielh Neelsen es la mas utilizada en el diagnostico de
a) Mycobacterium tuberculosis
b) Mycobacterium bovis
c) Mycobacterium szulgay
d) Micobacterium Leprae
e) a y d son ciertos
f) Ninguno
6.- La coloracin de Zielh Neelsen utiliza como colorante principal.
a)
b)
c)
d)
e)

Violeta cristal
Fucsina fenicada bsica
Azul de metileno
Safranina
Fucsina cida

7.- Cmo se interpretan los resultados de la tincin de Zielh Neelsen en el caso

de la tuberculosis.
R

8.- Por qu es importante deshemoglobinizar los glbulos rojos?

R

9.- De que color se tie el ncleo del plasmodium y por que?

38

10.- Qu formas toma el citoplasma del plasmodium y de que color se tie?

R .

....

PRACTICA No. 6
CULTIVOS
OBJETIVOS:

Conocer los distintos medios de cultivos

conocer sus usos y materiales
Realizar un cultivo correcto
Conocer que enfermedades se diagnostican con el apoyo de los cultivos
Interpretar el crecimiento de las colonias.

MATERIALES:

Muestras de bacterias Gram () y Gram (+)

Hisopos estriles

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Asa de cultivo
Agar sangre
Guantes
Porta y cubreobjetos
Microscopio
Mechero

MARCO TEORICO:
Cultivos bacterianos: Colonias de
bacterias Escherichia coli (ms
grande, rosa) y Proteus vulgaris
(ms pequea, de color castao)
que crecen juntas en una placa
Petri. En circunstancias normales
estas bacterias son inofensivas y
habitan en el intestino humano
favoreciendo la digestin, si bien
pueden convertirse en patgenas y
producir infecciones del tracto
urinario. Los cientficos y mdicos
llevan a cabo cultivos bacterianos y
estudian sus caractersticas con el
fin de adquirir conocimientos
respecto a las enfermedades
bacterianas y su prevencin

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS

OBJETIVO GENERAL:
Los estudiantes de laboratorio aprendern y pondrn en prctica las tcnicas
correctas para una buena extraccin, manejo y trasporte de muestras.

OBJETIVOS ESPECFICOS:
Los estudiantes sern capaces de:

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Conocer en que se basa la eleccin de un antimicrobiano para el tratamiento de

una infeccin y los motivos por los que se realizan las pruebas de sensibilidad y
cuando sta indicado hacerlas.

Saber interpretar el antibiograma de acuerdo a los trminos Intermedio, Sensible

y Resistente.

Conocer los principales grupos de antibacterianos disponibles y su mecanismo de

accin.

Conocer el por qu se hace resistente el microorganismo frente a un determinado

antibitico.

Entender el fundamento del antibiograma, el modo en que se debe realizar y las

principales fuentes de error.

ANTIBIOGRAMA.- Un consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con

distintos antibiticos para ver la sensibilidad de cada uno de ellos para dar el tratamiento
correcto.
Se cultivan en cajas Pettry que contiene el medio adecuado (Muller Hinton), que
favorecen el crecimiento de los microorganismos, se adiciona posteriormente los discos
de sensibilidad ( Discos embebidos del antibitico) de acuerdo al germen identificado
(Gram. (+) o (-) ).
Luego de 24 horas, y en algunos casos, 48 horas, observaremos el grado de inhibicin
del antibitico sobre la bacteria representado por falta de crecimiento bacteriano alrededor
del disco ( Halo inhibitorio).
Se procede posteriormente a medir el tamao del Halo con la ayuda de una regla la
lectura es del dimetro del halo existiendo tablas para ver la sensibilidad o resistencia del
germen..
Hemos de escoger por tanto aquel que tenga mayor inhibicin y con l y las propias
defensas del organismo se intentar erradicarlo, es decir, curar la infeccin bacteriana.

El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:

La utilidad bsica del antibiograma es la instauracin de un tratamiento antibitico

correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la
infeccin posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algn antibitico
para no incluirlo como terapia.
En cuanto al tratamiento el antibiograma no slo es necesario en la instauracin,
tambin resulta til en el seguimiento e incluso en la confirmacin de tratamientos
empricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el
tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma
tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.

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Otra aplicacin de las tcnicas de estudio de resistencia es la epidemiologa. Es

necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos
clnicos para tomar medidas correctoras.

Por otro lado tambin puede tener utilidad diagnstica porque el perfil de
resistencia puede en algn caso orientar en la identificacin bacteriana.

ANTIBITICO.- Es una sustancia orgnica producida por microorganismos capaces de

inhibir o destruir el desarrollo de otro microorganismo debiendo tener las siguientes
condiciones:
a) Especificidad o " Espectro de accin"
b) Elevada potencia biolgica que se refiere a la CMI
c) Toxicidad selectiva.- Que es la capacidad de inhibir el
microorganismo sin producir toxicidad al organismo
Se clasifican por:

Origen Biolgicos, sintticos y semisintticos

Estructura Qumica Son familias con caractersticas similares
formando grupos por matices Ej. Lactamicos, Macrolidos, sulfas,
nitrofurantonas, etc.
Actividad --> Amplio espectro, menos amplio y corto siendo
adems:
a) Bacteriostticos.- reversible
b) Bactericida .- Irreversible

ACCION DE LOS ANTIBITICOS SOBRE LAS BACTERIAS EN GENERAL

a) Sobre coco y Bacilos Gram. (+) y (-) AMPLIO ESPECTRO.
Gentamicina, Sulfametoxsazol, trimietoprin (Bactrin),
Ciprofloxacina, Cefotaxima, Cioranfencol, tetracclinas.
b) Sobre cocos y bacilos Gram. (+) MENOS ESPECTRO.
Penicilinas, Vancomicina, Eritromicna, la Cefalotina,
Nitrofurantoina, etc.
e) Sobre Bacilos Gram. (-) CORTO ESPECTRO.- Ampicilina,
Cloranfenicol, Cefalotina, ms otras cefalosporinas, Polimixina
B y E.
MECANISMO DE ACCIN.

Para actuar debe llegar al foco infeccioso

Ingresar al interior de la bacteria
Alcanzar una concentracin intracelular.

42

En el aspecto molecular actan:

1) Inhibiendo la pared celular
2) Alteran la membrana Citoplasmtica
3) Inhiben la sntesis proteica
4) Bloqueo de la sntesis de los cidos nucleicos.

FUNDAMENTO.El antibiograma por el mtodo de difusin en agar es una prueba en la que se enfrenta
la bacteria inoculada sobre la superficie del medio de agar a una solucin antibitica
absorbida en discos de papel filtro. Varios factores afectan el halo de inhibicin:
- La carga de antibitico en los discos
- La difusin del antibitico en el medio de cultivo
- La cantidad del inculo bacteriano
- La composicin o grosor del medio de cultivo debe ser de 4 a 6
El tiempo de incubacin .
Se usa normalmente el medio de Mller-Hinton porque permite el crecimiento de casi
toda clase de bacterias y sin C02, El inculo bacteriano debe tener una turbidez similar
al estndar de Mc-Farland. La inoculacin se puede efectuar con hisopo de algodn
estril, la placa se debe incubar a 37C en aerobiosis por el lapso de 18 a 24 hrs. Si el
tiempo es ms prolongado puede dar lecturas errneas del tamao del halo.
El tratamiento antimicrobiano es uno de los pilares fundamentales para combatir las
enfermedades infecciosas. La eleccin de un determinado agente est condicionada por
una serie de factores entre los que destacan:
-

Conocimiento de la sensibilidad del microorganismo infectante.

Propiedades Farmacolgicas
Factores relacionados con el paciente (Patologa de base, inmunidad...)

Los dos ltimos puntos son ms dirigidos a la parte clnica siendo el medico quien tenga
que realizar la eleccin de un determinado medicamento.
MATERIAL. Cepa Bacteriana
Placas de agar de Mller-Hinton
Solucin salina estril
Un estndar de Mc.Farland
Discos comerciales de antibiticos
Hisopos estriles
Pinzas de laboratorio
Asa de platino

43

 Estufa de incubacin a 37C

Regla.
PROCEDIMIENTO.1.- Preparar el cultivo de 24 hrs. anteriormente sembrado y analizado con un Gram. El
tipo de bacteria.
2.- Inocular 3 o 4 colonias de las Bacterias en 5 ml.. de solucin salina estril hasta una
turbidez equivalente a la de Mc.Farland

3.- Utilizando un hisopo de algodn, sumergirlo en el inculo y eliminar el exceso

presionndolo sobre la pared interna del tubo que lo contiene.

4.- Inocular la superficie de una placa de agar de Mller-Hinton con el hisopo pasndolo
uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por ltimo pasar el hisopo por
el reborde de la placa de agar dejar secar unos minutos.

44

5.- Colocar los discos de antibiticos sobre la superficie del agar utilizando unas pinzas
estriles y apretndolos suavemente sobre la superficie del agar. Los discos no deben
estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y lo bastante separados entre ellos
para que no se superpongan las zonas de inhibicin.

45

6.- Incubar la placa en posicin invertida a 37C durante 18 a 24 hrs.

7.- Medir los dimetros de la zona de inhibicin con una regla.

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INTERPRETACIN.Los dimetros de los halos de inhibicin se traducen a las categoras de (R), Intermedio
(I) y Sensible (S) de acuerdo a los criterios interpretativos de la tabla.

Agente
antimicrobiano
Ampicilina
Cloranfenicol
Cefalotina
Ciprofloxacina,
Cefotaxma
Eritromicina
Gentamicina
Penicilina
Sufatrimetroprin
Vancomicina

Dimetro del Halo de inhibicin

R
1

14
12
14
14
14
13
12
10
10
9

17
18
18
17
23
18
15
13
16
12

15-16
13-17
15-17
15-16
14-17
13-14
11-12
11-15
10-11

CONCLUSIN.- Podemos concluir indicando que la prctica ha cumplido con los

objetivos propuestos.

47

EJERCICIOS DE EVALUACIN (Antibiograma)

1.- Qu objetivo tienen el antibiograma?
R

2.- Por qu es importante realizar siempre un antibiograma de dar un tratamiento

farmacolgico?
R.............................................................................................................................................
................................................................................................................................................
................................................................................................................................................
................................................................................................................................................
........................................................................................................................................
3.- Cules son las principales causas de error en las tinciones y por que se debe
tener mucho cuidado en no cometer errores?
R

4.- Cules son las 4 utilidades principales del antibiograma?

R.

.........
5.- Qu medicamentos tiene accin sobre los gram negativos?
R

6.- Qu medicamentos tiene accin sobre los gram positivos?

R

48

7.- Qu condiciones importantes debe tener un antibitico?

R

8.- Qu medicamentos es de amplio espectro?

a)
b)
c)
d)
e)

Cloranfenicol
Penicilina
Ampicilina
Gentamicina
Cloranfenicol

9.- Por qu se debe tener mucha asepsia en el procedimiento de siembra y la

colocacin de discos y a que distancia deben estar los discos?
R

10.- Cmo se mide el dimetro de un halo y porque tiene que medirse antes de 48
hrs.?
R .

....

49