UNIVERSIDAD EL BOSQUE

FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE QUMICA

Programa de Bioingeniera
Laboratorio De Bioqumica

Factores que afectan la actividad de las enzimas

Docentes: Vilma Teresa Pinzn Fajardo

BCTBE
Graciela Juez Castillo, MSc.

Factores que afectan la actividad de las enzimas

1. Introduccin
Las enzimas, con excepcin de las ribozimas, son protenas que actan
como catalizadores de las reacciones bioqumicas en todos los seres vivos.
Una de las formas de observar experimentalmente la actividad enzimtica es
mediante la identificacin y cuantificacin de los productos formados en las
reacciones que regulan. La accin de estos polipptidos en una reaccin se
ve afectada por factores fsicos y qumicos tales como la temperatura, la
concentracin de la enzima y del sustrato, el pH, la presencia de inhibidores,
la presencia de coenzimas y cofactores entre otros.
El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos
organismos vivos y debido a su toxicidad, ocasionada por su gran poder
oxidante, debe transformarse rpidamente en compuestos menos nocivos.
Para ello las clulas utilizan la catalasa que descompone el H2O2 en agua y
oxgeno.

2 H2O2(l)

2H2O(l) + O2(g)

Peroxidasa o Catalasa

La cantidad de O2(g) y en consecuencia la de burbujas es directamente

proporcional a la velocidad de reaccin y se puede utilizar como una medida
de esta ltima.
En esta prctica de laboratorio se hacen ensayos para verificar la actividad
de la enzima y compararla con la de un catalizador inorgnico (MnO2).
Igualmente se apreciar cualitativamente el efecto del pH, la temperatura y
el origen de la enzima sobre la velocidad de la enzima catalasa, esta enzima
puede actuar como una peroxidasa.
2. Objetivos
Los estudiantes mediante ensayos sencillos
2.1.

Reconocern y compararn la actividad de la enzima catalasa, presente

en tejidos animales y vegetales.

2.2.

Compararn la accin de la catalasa como catalizador orgnico con la

del MnO2, catalizador inorgnico, sobre el mismo sustrato perxido de
hidrgeno o agua oxigenada.

2.3.
2.4.

Observarn el efecto de la temperatura en la velocidad de la reaccin.

Observarn el efecto del pH sobre la velocidad de la reaccin.

3. Tareas de Aprendizaje
3.1.

Para el preinforme

Los estudiantes harn un resumen y lo consignaran en el cuaderno de

laboratorio, sobre los siguientes conceptos o temas.
3.1.1. Tipo de organismos, segn sean anaerobios o aerobios, en los que se
encuentra la catalasa y funcin de la enzima en ellos.
3.1.2. Cofactores o coenzimas de la catalasa (si los requiere).
3.1.3. Temperatura ptima y pH ptimo de la catalasa.
3.1.4. Factores que afectan la actividad enzimtica.
3.1.5. Inhibidores de la catalasa y cmo actan?.
3.1.6. Mencione algunos mtodos utilizados para medir la actividad enzimtica
de la catalasa.
3.2.
Para el Informe
Los estudiantes para el informe realizaran:
3.2.1. Anlisis de cada resultado obtenido y comparacin de resultados entre
tejido animal y tejido vegetal.
3.2.2. Segn los resultados analice en que condiciones de pH y temperatura,
se observa que la reaccin inicia en menor tiempo.
3.2.3. Anlisis del siguiente artculo cientfico. Boveris, A., Stoppani, A.
Metabolismo del Perxido de Hidrgeno en Trypanosoma cruzi. Ubicar
URL en bibiliografa. Responda las siguientes preguntas:
3.2.3.1.
Mencione los intermediarios glucolticos, del ciclo del cido
tricarboxlico y sustratos de enzimas, que se encuentren asociados a
la produccin de H2O2 en el artculo.
3.2.3.2.
Expliqu, por qu la adicin de NADPH y NADH aument la
concentracin de H2O2?.
3.2.3.3.
Expliqu, por qu se considera que un aumento intracelular de H2O2
en Trypanosoma cruci puede ser letal?.
3.2.3.4.
Mencione la enzima y el estado de desarrollo de Trypanosoma cruci
en el cual se basa el estudio para medir las concentraciones de H2O2.
3.2.3.5.
Deduzca una conclusin de la tabla N 1 (pag 260).

4. Materiales por grupo de trabajo

4.1.

Material de ensayo para todo el grupo: los estudiantes deben llevar el

siguiente material el da de la prctica (Solo las cantidades solicitadas)
Material biolgico Cantidad
Espinaca
50g
Hgado de res
50g
2

Papa criolla
Championes

4.2.
4.2.

50g
50g

Material por grupo de trabajo

Material por grupo de trabajo
Cantidad
Material
Tubos de ensayo
10
Gradilla
1
Pipeteador
1
Pipetas Pasteur
2
Pinzas para tubo de ensayo
1
Pipetas graduadas de 5 ml
1
Pipetas graduadas de 1 ml
1
Soporte universal
1
Aro con nuez
1
Placa refractaria de calentamiento
1
(1)
Vasos de precipitados de 400 ml
2
Vasos de precipitados de 250 ml
1
Vasos de precipitados de 100 ml
1
Termmetro -10 a 100 C
1

5. Reactivos para todos los grupos de trabajo

REACTIVOS
Descripcin
Cantidad
Perxido de hidrgeno al 5%
50 mL en gotero de seguridad
cido clorhdrico HCl 3M
50 mL en gotero de seguridad
Hidrxido de sodio NaOH 3M
50 mL en gotero de seguridad
Buffer de fosfatos 0.02M pH= 7
50 mL en gotero de seguridad
Cloruro mercrico HgCl2 al 5%
50 mL en gotero de seguridad
Dixido de manganeso solido MnO2 5 gramos en frasco plstico
6.

Procedimiento
6.1.

Preparacin de las muestras de trabajo.

Preparar las muestras, por separado, a partir de trozos de papa ( 50 g), hgado( 50
g), championes ( 50 g) y espinaca ( 50 g) con 200 mL de agua en cada caso, en
una licuadora, hasta disgregar la muestra y obtener una suspensin homognea.
Colocar cada homogenizado en un vaso de precipitado previamente rotulado.
6.2.

Verificacin de la actividad de la catalasa.

Tomar cinco tubos de ensayo, en los cuatro primeros colocar 1mL de cada
homogenizado (agitarlos antes de su uso) y en el quinto agua destilada como
blanco.
3

En cada tubo hacer una marca para indicar hasta donde llega el homogenizado.
Adicionar 3mL de perxido de hidrgeno a cada tubo.
Observar la intensidad en la formacin de burbujas, indicar la velocidad de reaccin
de acuerdo a la escala y registrar el cambio en el nivel del lquido de cada tubo.
Escala de Reaccin:
0: No hay reaccin
1: poca reaccin
5: reaccin muy rpida
6.3. Efecto de la temperatura.
En 4 tubos de ensayo, aadir 1 mL de hgado homogenizado en cada tubo, luego
rotular e incubar cada tubo por 5 minutos segn las indicaciones de la siguiente
tabla.
Tubo
1
2
3
4

Temperatura de
Incubacin
80C
37C
Temperatura ambiente
0C

Adicionar 2 mL de perxido de hidrgeno, registrar como tiempo cero (utilice

cronmetro) el momento en que se terminan de agregar los 2 mL de perxido de
hidrgeno en cada tubo y establezca el tiempo al que se empiezan a formar
burbujas en cada tubo. Para la descripcin de resultados tenga en cuenta la escala
de velocidad de reaccin. Haga una grfica de Temperatura vs tiempo. Indique y
analice a que temperatura inicia en menor tiempo la reaccin.
6.4. Efecto del pH sobre la actividad enzimtica.

En 4 tubos de ensayo, limpios y marcados, agregar a cada uno respectivamente 3

mL de HCl 3M, 3 mL de agua, 3 mL de NaOH 3M y 3 mL buffer de fosfatos pH 7,
verificar el pH de cada solucin con papel universal o pH-metro. Luego agregar a
cada uno de los tubos 1 mL de homogenizado de hgado o championes y
observar. Adicionar 2 mL de perxido de hidrgeno, registrar como tiempo cero
(utilice cronmetro) el momento en que se terminan de agregar los 2 mL de
perxido de hidrgeno en cada tubo y establezca el tiempo al que se empiezan a
formar burbujas en cada tubo. Para la descripcin de resultados tenga en cuenta
la escala de velocidad de reaccin. Haga una grfica de pH vs tiempo. Indique y
analice a que pH inicia en menor tiempo la reaccin.
Para la descripcin de resultados tenga en cuenta la escala de velocidad de
reaccin.

En 6 tubos de ensayo, limpios y secos, agregar a cada tubo en su orden los

reactivos sealados en la siguiente tabla.
6.5 Comparacin de la actividad del catalizador qumico (MnO2) con la
actividad de la enzima, efecto del cloruro mercrico y el proceso de coccin
sobre la actividad enzimtica.
Proceder como se indica en la siguiente tabla.

REACTIVOS
Papa (tr=trozo)
H2O2, 5% (gotas)
Ext. papa hervida (ml)
Cloruro de mercurio (ml)
*Extracto enzimtico (ml)
MnO2 (g.)

1
1tr
10
-

2
10
1
-

3
10
1
1
-

TUBOS
4
5
10
10
0.01 **0.01

6
7
1 tr 10
10
1
0.01 -

*Se puede utilizar cualquier extracto

**Al tubo 5 primero se calienta con dixido de manganeso (MnO 2) a la llama por 30 segundos, despus se enfra y por ltimo se agrega el agua oxigenada (perxido
de hidrgeno).

7. Bibliografa.
7.1. BOVERSI, A., STOPPANI, A (1978). Metabolismo del Perxido de Hidrgeno en
Trypanosoma cruzi. Instituto de Qumica Biolgica. Universidad de Buenos Aires. Ebook. Google.
7.2. LODISH, Harvey. et. al. Biologa Celular y Molecular. 5 ed. Argentina: Mdica
Panamericana, 2005.
7.3. LOZANO, J.A. et. al. Bioqumica para ciencias de la salud. Mxico: Interamericana
McGraw-Hill, 1999.
7.4. PLUMMER,David. Introduccin a la Bioqumica prctica. Mxico: Mc Graw Hill
Latinoamericana, 1981
7.5. Pginas Web de inters:
7.5.1. Enzimas. Disponible en:
http:biology.uprm.edu/labs/genetica/lab_4_enzimas.ppt
7.5.2. http://www.ifcc.org/ifcc.asp
7.5.3. Editorial Mdica Panamericana. Disponible en:
http://www.medicapanamericana.com