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27/03/2014

Microbiologia
Aula 4

Meios de Cultura

Prof. Dr. Agenor Messias Silvestre Jr


agenor@uninove.br

Meios de Cultura Semeadura e


Crescimento Bacteriano
Meios de Cultura (cultivo) so materiais nutritivos preparados em
laboratrio que permitem o crescimento (aumento em quantidade)
de microrganismos.
Quando microrganismos so colocados em um meio de cultura
para iniciar seu crescimento, so chamados de INCULO. E, ao
crescer, formam COLNIAS (agrupamentos bacterianos) visveis.

27/03/2014

Meios Slidos, Semi-Slidos e Lquidos


At cerca de 1880 os microrganismos eram mantidos em
laboratrio em extratos (caldos nutritivos), at que Robert Koch e
colaboradores introduziram os meios de cultura slidos, os quais
permitiram o estudo de espcies isoladas (culturas puras) de
bactrias, separando-as de espcies contaminantes.
Quando se deseja o crescimento de bactrias em um meio
slido, um agente solidificante denominado AGAR (polissacardeo
extrado de algas marinhas) adicionado ao meio que ser
posteriormente distribudo em tubos de ensaio ou placas de Petri.

algas marinhas

Agar- Agar
desidratado

Meios Slidos, Semi-Slidos e Lquidos


Os meios de cultura so classificados ento, quanto ao seu estado fsico, em

:
SLIDOS, quando contm agentes solidificantes como o
AGAR, sendo utilizados para visualizao de colnias;
[ ] maior que15g/1000ml.

SEMI-SLIDOS, quando a quantidade de AGAR


pequena, dando uma consistncia intermediria de modo a
permitir o crescimento de microrganismos em concentraes
variadas de oxignio ou para verificao da motilidade
(presena de flagelos); [ ] menor que 15g/1000ml;
LQUIDOS (CALDOS), quando no possuem agente
solidificantes, apresentando-se de forma lquida, utilizados
para o enriquecimento das culturas, repiques de
microrganismos, entre outros.

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Composio dos meios de cultura


MEIO QUIMICAMENTE DEFINIDO
Um meio quimicamente definido aquele em que a procedncia
dos constituintes conhecida e a composio qumica exata
conhecida.
MEIO DE CULTURA COMPLEXO.
Muitas bactrias desenvolvem-se em meios complexos, cuja
composio qumica no definida, compostos de nutrientes
como extratos de levedura, de carne, de vegetais, produtos de
digesto protica, sangue e outros. A composio qumica exata
pode conter pequenas variaes em diferentes culturas do
produto.

Composio dos meios de cultura


MEIO DE CULTIVO SELETIVO

Os meios seletivos contm substncias que inibem o


desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos,
permitindo o crescimento de outros. So elaborados com o
objetivo de favorecer o crescimento da bactria de interesse e
impedir o crescimento das outras bactrias;
MEIO DE CULTIVO DIFERENCIAL
Meio diferencial aquele que contm substncias que
permitem estabelecer diferenas entre bactrias parecidas,
sendo utilizado para a fcil identificao da colnia da bactria
de interesse quando existem outras bactrias crescendo
na mesma placa de meio de cultura.

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Meios de cultura
GAR SANGUE
A conservao dos eritrcitos ntegros favorecem a
formao de halos de hemlise ntidos, teis para a
diferenciao de Streptococcus spp. E Staphylococcus
spp.
PRINCPIO:
Cor original do meio: vermelho

Usado para o isolamento de


microrganismos no fastidiosos.
Verificao de hemlise dos
Streptococcus
spp.
e
Staphylococcus spp.

Meios de cultura
GAR SANGUE :

Cor original do meio: vermelho.

Beta hemlise: presena de halo


transparente ao redor das colnias
semeadas (lise total dos eritrcitos).
Alfa hemlise: presena de halo
esverdeado ao redor das colnias
semeadas (lise parcial dos
eritrcitos).
Gama
hemlise
(sem
hemlise):
ausncia de halo ao redor das colnias
(eritrcitos permanecem
ntegros).

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Meios de cultura
GAR MAC CONKEY
PRINCPIO
O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram
positivos especialmente enterococos e estafilococos.
A concentrao de sais de bile relativamente baixa em
comparao com outros meios, por isso no to seletivo
para Gram negativos como, por exemplo, o gar SS.
FUNO: Isolar bacilos Gram negativos

Meios de cultura
GAR MAC CONKEY
INTERPRETAO

Cor original do meio: rosa avermelhado.


Crescimento de bacilos Gram negativos.
Colnias cor de rosa: fermentadoras de lactose.
Colnias incolores: no fermentadoras de lactose.
No h crescimento de cocos Gram positivos.

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Meios de cultura
GAR MAC CONKEY
Lac+

Lac-

Meios de cultura
GAR CLED
CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT
PRINCPIO
Usado para isolamento e quantificao de microrganismos
presentes em amostras urina. A deficincia de eletrlitos
inibe o vu de cepas de Proteus.
FUNO:
Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram
negativos e leveduras.

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Meios de cultura
GAR CLED
DEFICIENT

CYSTINE

LACTOSE

ELECTROLYTE

INTERPRETAO:

Cor original do meio: azul claro.


Colnias lactose positiva: cor amarela.
Colnias lactose negativa: cor azul.

Meios de cultura
CALDO BHI BRAIN HEART INFUSION
PRINCPIO

um meio derivado de nutrientes de crebro e


corao, peptona e dextrose.

A peptona e a infuso so fontes de nitrognio,


carbono, enxofre e vitaminas.

A dextose um carboidrato que os microrganismos


utilizam para fermentao.

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Meios de cultura
CALDO BHI BRAIN HEART INFUSION
PRINCPIO
Funo:

Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos,


meningococos,
enterobactrias,
leveduras e fungos.

no

fermentadores,

Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste de


susceptibilidade aos antimicrobianos, para realizao de teste
de coagulase em tubo, para teste de crescimento bacteriano
a 42 e 44C e para teste de motilidade em lmina.

Meios de cultura
CALDO BHI BRAIN HEART INFUSION
PRINCPIO
INTERPRETAO

Cor original do meio:


amarelo claro, lmpido.

Positivo: presena de
turvao = crescimento
bacteriano.

Negativo: ausncia de
turvao.

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Meios de cultura
LWENSTEIN JENSEN
PRINCPIO:

A base do meio constituda por ovos integrais, o


que permite amplo crescimento das micobactrias e
o crescimento satisfatrio para o teste de niacina
(que positivo para Mycobacterium tuberculosis).
Funo:

Isolamento primrio das micobactrias.

Meios de cultura
LWENSTEIN JENSEN

INTERPRETAO:

Cor original do meio: verde claro


Positivo: Crescimento de colnias
amarelas

Negativo: ausncia de crescimento.

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Meios de cultura
LWENSTEIN JENSEN

Controle de Qualidade
Uma amostra do lote deve ser
inoculada e observada para testar
viabilidade dos nutrientes e certeza de
resultados.
Ex: Estreptococos grupo A em gar
sangue observar bom crescimento e
beta-hemlise.

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Medidas Asspticas para a


Inoculao do Meio de Cultura
Alas flambadas antes e depois;
Deve-se esperar o resfriamento;
Os recipientes contendo meios devero ser abertos
somente na zona de esterilidade gerada pelo Bico de
Bunsen;
A boca do tubo de ensaio deve ser aquecida antes e
depois de ser retirada a tampa,
A rolha nunca deve ser apoiada na bancada;

Inoculao

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Cabinas de fluxo laminar


As cabines de fluxo laminar so unidades
projetadas para criar reas de trabalho estreis
para a manipulao, com segurana, de materiais
biolgicos ou estreis que no possam sofrer
contaminao do meio ambiente. Utilizam um
filtros de alta eficincia filtro HEPA.
Nos fluxos da classe II que o manipulado no
contamine o operador e o meio ambiente.

Inoculao pour-plate
O objetivo obter colnias isoladas (estudo
qualitativo) para realizar a contagem de colnias
(estudo quantitativo)

Espcime

0,1 ml

0,1 ml

0,1 ml

+ 9,9 ml

+ 9,9 ml

+ 9,9 ml

= 1:100

= :10.000

= 1:1.000.000

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Plaqueamento - pour-plate

Espcime

0,1 ml

0,1 ml

0,1 ml

+ 9,9 ml

+ 9,9 ml

+ 9,9 ml

= 1:100

= :10.000

= 1:1.000.000

1 ml

1 ml

1 ml

gar + incubao

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