17/03/2014

ENZIMAS III
REGULACION ENZIMATICA

La Ecuacin de Michaelis Menten se usa para determinar

KM y Vmax

La medicin de Vmax y el calculo de KM requiere altas [ S ] de

sustrato para alcanzar la saturacin.
La transformacin de la ecuacin de Michaelis Menten en una
forma lineal evita esta dificultad y permite extrapolar Vmax y KM
desde datos de Vo obtenidos a [ S ] menores que la de
saturacin

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Transformacin de la Ecuacin de Michaelis Menten en

Ecuacin de Lineweaver- Burk

Se invierte

Se separan los
componentes del
numerador

Se obtiene la ecuacin de Lineweaver- Burk

y =a .X+b
Semejante a la ecuacin de la lnea recta

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GRAFICANDO LA ECUACION DE LINEWEAVER-BURK

Al graficar 1 / Vo en el eje
Y en funcin de 1/ [ S ]
en el eje X da una lnea
recta cuya intercepcin en
y = 1 / Vmax y la pendiente se
define como KM / Vmax
De esta forma, a partir de
los datos experimentales
se puede calcular
grficamente, los valores
de KM y Vmax de una
enzima

REGULACION DE LAS ENZIMAS

INHIBIDORES
ENZIMAS REGULADORAS
ROTURA PROTEOLITICA

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Definicin
Son agentes moleculares que interfieren
en la catlisis haciendo ms lenta o
deteniendo la reaccin enzimtica
Los inhibidores pueden ser: iones,
tomos, molculas, compuestos que se
fijan y se unen a la enzima

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IMPORTANCIA
El estudio de los inhibidores proporciona
recursos de investigacin de los mecanismos
de reaccin enzimtica que han permitido
definir cada una de las reacciones de las rutas
metablicas
Sirven como el mayor mecanismo de
control en los sistemas biolgicos

CLASIFICACION DE LOS INHIBIDORES

Por semejanza estructural con el sustrato original o
porque alteran la conformacin espacial de la enzima

Los inhibidores pueden ser de dos tipos

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CARACTERSTICAS
El inhibidor se parece estructuralmente al sustrato, lo que
permite que pueda competir con el sustrato por el sitio
activo de la enzima
Para superar el efecto del inhibidor competitivo se eleva
la concentracin de sustrato

Un inhibidor competitivo aumenta la KM

Un inhibidor competitivo no tiene efecto sobre la Vmax.

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INHIBICION COMPETITIVA

Para la inhibicin competitiva las lneas convergen en el

eje Y la Vmax no cambia.
La interseccin en el eje X la KM se hace mayor en
presencia de [ I ] mayores

INHIBIDORES REVERSIBLES COMPETITIVOS

Competitiva: El inhibidor compite con

el sustrato por situarse en el sitio
activo de la enzima.
Cuando el inhibidor se combina con la
enzima forma el complejo E I,
afectando negativamente la funcin de
la enzima
La unin del inhibidor es reversible por
lo tanto si se agrega ms sustrato se
desplaza al Inhibidor y se forma el
producto.

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La accin de un inhibidor competitivo es disminuir el nmero

de molculas de enzima libre disponibles para enlazarse con
el sustrato formar el complejo E S y finalmente formar
el producto

Malonato

La enzima Succinato Deshidrogenasa es inhibida en forma

competitiva por un anlogo de su sustrato EL MALONATO

INHIBICION ACOMPETITIVA
CARACTERISTICAS
El inhibidor se une a un sitio distinto al que se
une el sustrato y solamente al complejo E-S
formndose el complejo ESI
La eficiencia para transformar al sustrato se ve
reflejada en la disminucin de la velocidad
mxima y de la KM

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INHIBICION ACOMPETITIVA
Las grficas de doble recproca facilitan la evaluacin de los inhibidores

Un inhibidor acompetitivo DISMINUYE LA Vmx y KM

INHIBICION ACOMPETITIVA

El inhibidor no se une en el mismo sitio que el sustrato,

no afecta la fijacin del sustrato a la enzima formndose
el complejo E-S y luego E-S-I.

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INHIBICION MIXTA

CARACTERISTICAS
El inhibidor mixto tambin se fija a un sitio distinto al del sustrato,
pero se fija tanto a la ENZIMA como al complejo E- S
Y afecta la KM y la Vmx

REGULACION POR INHIBICIN IRREVERSIBLE

Son los venenos enzimticos que se unen
FUERTEMENTE a la enzima por enlace covalente
muy estable
Los inhibidores irreversibles producen
modificaciones qumicas a la enzima.
Rompen enlaces covalentes esenciales para la
unin de la enzima con el sustrato y para el
mantenimiento de la conformacin funcional

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INHIBICION IRREVERSIBLE
La inhibicin irreversible se diferencia de la
reversible en la imposibilidad que presenta la
enzima para regenerar su actividad
enzimtica.
Esto se debe a la unin covalente que se crea
entre el inhibidor y la enzima.
Alteran la estructura tridimensional del sitio
activo inhabilitndolo.
No necesariamente se dar esta unin en el
sitio activo, con unirse a un aminocido y ste
desconfigure el sitio activo sera suficiente.

EJEMPLOS DE INHIBIDORES
IRREVERSIBLES
Metales pesados: Mercurio y Plomo
Antibiticos: Penicilina y los beta lantamicos
inhibe a la alanil alanina carboxipeptidasa
transpeptidasa
Plaguicidas: rgano fosforados, inhiben a la
acetilcolinesterasa

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IMPORTANCIA

La actividad de las enzimas reguladoras debe dar respuesta

a seales para que la velocidad de cada ruta metablica se
ajuste a los cambios en las necesidades de la clula con
respecto a la energa, a las molculas requeridas durante el
crecimiento celular y en la reparacin de lesiones de nuestro
organismo

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FORMAS DE REGULACION ENZIMATICA

1-LA COMPARTIMENTALIZACION : Asegura la
eficiencia metablica y simplifica la regulacin.
ej.: enzimas lisosomales, citoslicas,
mitocondriales

2- El control de una enzima que cataliza una

REACCIN LIMITANTE , regula una va
metablica completa. Las enzimas limitantes
constituyen blancos para la accin de los
frmacos

3.- REGULACION DE LA CANTIDAD DE ENZIMA

Las enzimas se encuentran en un equilibrio dinmico por lo cual
se sintetizan y degradan de manera continua
A-CONTROL DE LA SNTESIS DE ENZIMA
Enzimas Constitutivas: Las concentraciones son
constantes, ejemplo glucolisis, ciclo de Krebs, etc.
Enzimas Regulables: Inducibles y Represoras
Implica regulacin a nivel de ADN en genes especficos.
La concentracin depende de inductores y represores

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B- CONTROL DE LA DEGRADACIN DE LA ENZIMA

LA VIA UBIQUITINA PROTEOSOMA
Degrada protenas celulares seleccionadas en respuesta a seales
intracelulares y extracelulares especficas
La ubiquitinizacin es catalizada por enzimas llamadas
LIGASAS E3 que fijan la ubiquitina a la protena defectuosas o
aberrantes a degradar

ENZIMAS REGULADORAS
Existen dos clases principales de enzimas
reguladoras en las rutas metablicas

ENZIMAS ALOSTERICAS
ENZIMAS MODULADAS
COVALENTEMENTE

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Experimentan cambios conformacionales en

respuesta a la unin del modulador

Funcionan a travs de la unin reversible,

no covalente de compuestos reguladores
denominados moduladores o efectores
alostricos
El efector o ligando se une a un lugar
especfico en la enzima y promueve un
cambio conformacional que altera la
afinidad de la enzima por su sustrato .

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Es el sitio de una enzima que al unirse a un

modulador, provoca que la enzima sufra un
cambio conformacional que puede alterar sus
propiedades catalticas o de unin.

Catalizan la primera reaccin de la va metablica

El enlace entre la enzima y los moduladores es
DBIL Y REVERSIBLE
Son MULTIMRICAS U OLIGOMRICAS
presentan COOPERATIVISMO

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Las enzimas alostricas en los cuales el

sustrato y el modulador son idnticos se
denominan HOMOTROPICAS
Cuando el modulador es otra molcula
diferente al sustrato la enzima es
HETEROTROPICAS

LA CINETICA DE UNION A SUSTRATO MOSTRADA POR ENZIMAS

ALOSTERICAS ES COOPERATIVA Y TIENE FORMA
SIGMOIDEA

La enzima reguladora responde a una cintica que no obedece a

la ecuacin de Michaelis-Menten porque no generan una
hiprbola, En su lugar, se obtiene una curva sigmoidea.

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INTERACCIONES ENTRE SUBUNIDADES EN UNA

ENZIMA ALOSTERICA

Aspartato transcarbamilasa

TIPO DE REGULACION ALOSTERICA: RETOINHIBICION O

RETROALIMENTACION

Sitios de inhibicin por la retroalimentacin en una

va metablica ramificada

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RETROINHIBICION HETEROTROPICA

A- REVERSIBLE: FOSFORILACIN
DESFOSFORILACION
B- IRREVERSIBLE: PROTELISIS PARCIAL

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REGULACION POR MODIFICACION

COVALENTE REVERSIBLE
Fosforilacin: fosforilo
Adenilacin: adenililo
Uridililacin: uridililo
Difosforibosilacin
Difosfato ribosilo
Metilacin: metilo

Las enzimas reguladas por modificacin covalente

pasan de una forma menos activa a otra ms activa
unindose covalentemente a un grupo qumico de
pequeo tamao como el Pi o el AMP.
La regulacin es llevada a cabo por otras ENZIMAS y
consiste en la unin covalente de otra enzima que
modifica la actividad de la enzima reguladora.
En las enzimas de las vas degradativas del
metabolismo, la forma fosforilada es ms activa
participando las CINASAS, mientras que en las vas
biosintticas la desfosforilacin es efectuada por las
FOSFATASAS .

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REGULACION POR MODIFICACION COVALENTE

Ejm.
GLUCOGENO
FOSFORILASA

Es un mecanismo diferente de regulacin

enzimtica
Es irreversible
Solo tiene lugar una vez en la vida de la
molcula enzimtica.

Ejem: Las enzimas digestivas

Los factores de la coagulacin
sangunea
Algunas hormonas proteicas

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Cuando las enzimas se

sintetizan y secretan
como precursor
enzimtico inactivo se
llaman pro enzimas o
ZIMOGENO

Para activarse, necesita de un cambio

bioqumico en su estructura que le lleve a
conformar un centro activo donde pueda
realizar la catlisis
La sntesis de zimogenos es uno de los
mecanismos de seguridad conque
cuenta el organismo para su
supervivencia.

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La protelisis selectiva convierta un precursor enzimtico

mediante segmentaciones proteolticas en una enzima
activa

Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico

que origina la liberacin de uno o varios pptidos. El resto
de la molcula proteica adopta la conformacin y las
propiedades de la enzima activa.

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ISOENZIMAS
Son enzimas que catalizan la misma reaccin,
pero fsicamente son diferentes por lo que sus
parmetros cinticos, su KM, las propiedades
reguladoras y bioqumicas son diferentes as
como su movilidad electrofortica

EJEMPLOS de ISOENZIMAS
LACTATO DESHIDROGENASA: 5 ISOENZIMAS
CREATINCINASA: 3 ISOENZIMAS
CPK BB
INFARTO CPK MB
CPK MM

FOSFATASAS: 2 ISOENZIMAS
FOSFATASA ALCALINA
FOSFATASA ACIDA
TRANSAMINASAS: 2 ISOENZIMAS AST
ALAT

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PATRONES ELECTROFORETICOS DE LAS ISOENZIMAS DE LA

LDH EN SUERO NORMAL Y PATOLOGICO

LDH-1: La isoenzima H4 abundante en el corazn, un aumento en sangre

es indicativo de infarto agudo del miocardio
LDH- 5: La isoenzima M4 abundante en hgado y msculo
esqueltico , un aumento indica enfermedad heptica

MUCHAS GRACIAS
ESTUDIEN MUCHO
QUE DIOS LOS
BENDIGA

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