DETERMINACIN DE FACTORES ANTINUTRITIVOS

TERMORRESISTENTES EN LEGUMINOSAS.
I: ALCALOIDES
M. MUZQUIZ
C. BURBANO
C. CUADRADO
C. DE LA CUADRA
CIT-INIA,
Apdo. 8111, Madrid

RESUMEN
Se han aislado y purificado, en forma cristalina, los alcaloides quinolizidnicos lupanina y lupinina
a partir de semillas de Lupinas albas y L. luteus con alto contenido en alcaloides. El alcaloide esparleina se obtuvo utilizando la tcnica de cromatografa preparativa ultrarrpida en columna. Se han comparado dos mtodos de extraccin de alcaloides, cuantifcndose por cromatografa de gases y cromatografa lquida de alta resolucin. Para la deteccin de los alcaloides se utiliz la tcnica de cromatografa en capa fina.
PALABRAS CLAVE: Lupinas
Alcaloides
ABREVIATURAS: CPUC = cromatografa preparativa ultrarrpida en columna; CCF = cromatografa en capa fina; CG - cromatografa de gases; CLAR = cromatografa
lquida de alta resolucin.

INTRODUCCIN
Dentro de las leguminosas que tienen importancia desde el punto de vista alimenticio por su alto contenido en protena, existen diferentes factores txicos o
antinutritivos que las pueden hacer poco aptas para el consumo humano y animal.
Entre estos factores los alcaloides son compuestos termorresislentes que se
encuentran principalmente en el gnero Lupinus. Las especies de Lupinus de
mayor inters desde el punto de vista de la alimentacin humana y animal son:
L. albus, L. angustifolius, L. consentira, L. luteus, L. hispnicas y L. mutabilis.
Los alcaloides de las especies del gnero Lupinus son derivados de la quinolizidina de variable complejidad, aunque la mayora son bicclicos o tetracclicos.
Se encuentran como bases terciarias y como N-xidos en concentraciones que
varan desde niveles indetectables en variedades dulces (genticamente obtenidas)
hasta un 3,8 p. 100 en algunas especies amargas de Lupinus albus y Lupinus mutabilis. (Keeler, 1989; Muzquiz et al., 1989). Las bases terciarias son normalmente
solubles en agua y fuertemente bsicas. Las proporciones relativas de alcaloides
Recibido: 8-1-93
Aceptado para su publicacin: 14-5-93
Redactor asociado: J. L. Garca Martnez
Invcst. Agr.: Prod. Prol. veg. Vol. H (3), 1993

352

M. MI J/QUI/

en una especie determinada varan con el cultivar, la localidad y las condiciones

climatolgicas.
Uno de los mayores impedimentos para una amplia aceptacin del lupino
como grano o forraje es, sin duda, la presencia de alcaloides. Los efectos txicos
de los alcaloides del lupino no son acumulativos y los alcaloides son rpidamente
excretados del cuerpo por el rion. Por tanto se pueden ingerir grandes cantidades
de semillas de lupino siempre que la cantidad total de alcaloides presentes no
exceda un determinado nivel. En dosis txicas, los alcaloides del lupino pueden
causar daos en el sistema nervioso y el exceso puede producir tambin una serie
de efectos que incluyen depresin respiratoria y fallo cardiaco (Culvenor et al.,
1986). Es por tanto importante conocer la cantidad de alcaloides presentes y los
niveles txicos de los alcaloides individuales.
Por otra parte, la ingestin de lupinos tambin puede producir intoxicacin
por lupinosis originada por una hepatotoxina. Durante mucho tiempo se relacion la lupinosis con el contenido de alcaloides en las plantas, aunque la lupinosis
tambin se presentaba despus del pastoreo del lupino dulce. En realidad, la lupinosis es debida a las micotoxinas producidas por una contaminacin secundaria de
la planta por el hongo Phomopsis leptostromirformis (Culvenor et al., 1986).
Actualmente hay gran inters en encontrar nuevas variedades de Lupinus con
bajo contenido en alcaloides. En este sentido, tanto el potencial del mtodo analtico para discriminar entre diferentes tipos de alcaloides, como su sensibilidad para
detectar bajos niveles son importantes debido a la gran variedad de alcaloides
encontrados en las diferentes especies. (Trugo, Gross, 1989).
El presente estudio examina el contenido total e individual de alcaloides en
diferentes especies del lupino utilizando diferentes mtodos de extraccin y cuantificacin.
MATERIAL Y MTODOS
Material vegetal
Las semillas utilizadas para la realizacin de este trabajo fueron cultivares o
lneas de las siguientes especies: L. albus, L. angustifolius, L. mutabihs, L. luteus y
L. hispnicas, procedentes del SIA de Badajoz.
Los patrones de alcaloides utilizados fueron: perclorato de lupanina y 13-OH
lupanina (Koch-Light, Ltd, Colnbrook, UK); esparteina y gramina (Sigma, St
Louis, MO, USA); lupinina (Serva, Heidelberg, FRG). La angustifolina y la epilupinina fueron proporcionadas por el Dr. Wiewiorowski y el Dr. Jach (Polonia).
Extraccin
Se han utilizado dos mtodos de extraccin:
(a) El primer mtodo est basado en el de Muzquiz et al, (1989). A 2 g de
harina molida se aadieron 32 mi de la mezcla ter etlico: cloroformo:
hidrxido sdico 4 N (20:10:2). Se agit durante 30 min y se dej reposar
durante la noche. Se filtr en ampollas de decantacin y el residuo se lav
dos veces con 20 mi de ter etlico. A los tres filtrados se aadi 3 x 10 mi
de cido clorhdrico 0,3 N, los extractos cidos se llevaron a pH 10 con

l-Afl'ORI-i ANT1 NUTRITIVOS TI-HMOKKl-SIS'n-N'HiS IN UiiUMINUSAS I

i Vi 1

hidrxido sdico 4 N y se extrajeron con 3 x 10 mi de cloroformo. Los

extractos clorofrmicos se evaporaron u sequedad (30 C) y el residuo se
disolvi en 1 mi de metanol: 0,5 mi fueron usados para cromalograla en
capa fina y 0,5 mi para cromatografa de gases tras aadir 0,5 mi de una
solucin de codena en metanol (2 mg/ml) como estndar interno. Despus de filtrar la muestra (filtros Millipore 0,45 |m), se inyectaron alcuotas de 0,2 |il.
(b) El segundo mtodo es una modificacin del mtodo de Harris, W i I son
(1988). Se pesaron 0,5 g de harina y se homogeneizaron con 5 mi de
cido tricloroactico al 5 p. 100 durante 1 min a temperatura amhiente. La
mezcla se centrifug durante 5 min (700 g) y se decant el sobrenadante.
La extraccin se repiti dos veces ms y a los sobrenadantes se aadi
1 mi de hidrxido sdico 10 M en una ampolla de decantacin. Se extrajo
con cloruro de metileno ( 3 x 5 mi) y los extractos se evaporaron a sequedad (25 C). El residuo se disolvi en 1 mi de metanol y se procedi
como en el mtodo (a).
Aislamiento y purificacin de lupanina y lupinina
La lupanina, se aisl de semillas de L. albus amargo en forma de perclorato.
Para ello se utiliz 1 kg de harina y la extraccin se llev a cabo siguiendo el
mtodo (a). La fase acuosa fue evaporada a 200 mi y basificada con hidrxido
sdico 4 N a pH 10. Los alcaloides fueron extrados con cloroformo (4 x 30 mi) y
los extractos evaporados a sequedad. El residuo se disolvi en 20 mi de metanol y
se ajust a pH 6-7 con una solucin de cido perclrico en metanol (1:1), tic
acuerdo con Perkowska et al., (1979). Los cristales blancos obtenidos fueron
recristalizados varias veces con metanol.
La lupinina se aisl de semillas de L. luteus amargo (1 kg) utilizando el
mismo proceso de extraccin que para el perclorato de lupanina. La fase acuosa
fue evaporada a 200 mi y basificada con hidrxido sdico 4 N. Los alcaloides fueron extrados con ter dietlico (4 x 30 mi) y los extractos evaporados a sequedad.
Los cristales obtenidos fueron recristalizados con ter de petrleo para separar la
lupinina de la esparteina (Cromwell, 1955).
Los cristales de perclorato de lupanina y lupinina se disolvieron en mclanol y
la pureza se determin por cromatografa de gases y espectrometra de masas
(Hewlett Packard Mod. 5992 A).
Aislamiento y purificacin de alcaloides minoritarios por cromatografa
preparativa ultrarrpida en columna
El extracto crudo de alcaloides que qued una vez cristalizado el alcaloide
mayoritario, lupinina, se utiliz para aislar el alcaloide esparteina. El extracto
crudo de alcaloides se disolvi en cloroformo y se cromatogra'i en capa fina
(Silica gel 60 F 254, Merck) con cloroformo: ciclohexano: dielilamina (6:4:0,5).
La tcnica utilizada fue la de cromatografa rpida en columna (Still vi til.,
1978). Para ello se utiliz una columna de silicc (silicagel 60, 230-400 mesh) <k7 cm de dimetro interno por 12 cm de altura. El extracto crudo de alcaloides en
cloroformo fue pasado a travs de la columna utilizando aire como gas portador.
Se recogieron fracciones de 100 mi, que fueron anali/.adas por CCi para determinar
Invi-sl. AH.: l'mil, l'ml. vcg. Vul. X (.1), IW

354

M. MII/QUI/,

l'M"IX)HI'.SANTINinirr!V()STlllMORII'.SISri',NT1'.SI',NI.1'.(HIMINO,SAS, I

su pureza, en las condiciones descritas posteriormente en este trabajo, y pasadas

de nuevo por columna hasta conseguir esprtenla pura.
Cromatografa en capa fina
Alcuotas de 2 p,l se aplicaron en placas de silica gel 60 F254 (20 x 20 cm,
250 (im, Merck), usndose como fase mvil cloroformo, ciclohexano y dietilamina (6:4:1). Para el desarrollo de las placas se utiliz luz ultravioleta, reactivo de
Dragendorff y reactivo de Bouchardat.

7.1-

LUPANINA

50-

Cromatografa de gases
Las muestras (0,2 fil) se analizaron usando un cromatgrafo de gases (Perkin
Elmer, Sigma IB) con detector de ionizacin de llama (FID) y columna capilar
(Teknokroma) SPB-1 (30 m x 0,4 mm d.i.). Las temperaturas del inyector y del
detector fueron 240 y 300 C respectivamente y la temperatura del horno fue programada de 150 C a 235 C a 5 C por minuto, permaneciendo a esta temperatura
15 min. El gas portador fue nitrgeno y el flujo 1,1 mi miir1.
Los alcaloides individuales se cuantificaron mediante curvas patrn.

25-

50

,
150

200

250

300

Fig. 1.-Espectro de masas de perclorato de lupanina aislado y purificad u partir

de semillas de L. albus
Mass spectra of apanine perchlorate ohtainedfrom L. albus secdx

Cromatografa lquida de alta resolucin

La extraccin utilizada fue la del mtodo (b). La fase acuosa se evapor a
sequedad y los alcaloides se disolvieron en 10 mi de metanol. 10 (il fueron diluidos en 3 mi de tampn fosfato.
El sistema cromatogrfico usado fue un Beckman (System Gold) y la columna
utilizada fue una Ultrasphere-ODS, 5 im (25 x 0,46 cm).
La fase mvil descrita por Me Calley (1986) se us como base para desarrollar un nuevo solvente. Los eluyentes (acetonitrilo, tampn fosfato) fueron desgasificados a vaco y filtrados a travs de membrana Millipore HA (0,45 u.m). El
flujo fue de 1 mi min^1 y el eluyente se monitoriz a 210 nm con un detector
Diode Array utilizando una velocidad de carta de 1 cm

i, ll ^',1, Jjp

100^

75-

RESULTADOS Y DISCUSIN
A partir de semillas amargas de L. albus y L. luteus se aislaron y purificaron
los alcaloides lupanina y lupinina, respectivamente. La pureza obtenida fue de un
97 p. 100 para ambos alcaloides. El espectro de masas de la lupanina se muestra
en la Figura 1 y coincide exactamente con el obtenido por Wink et al., (1980). En
la Figura 2 se muestra el espectro de masas de la lupinina obtenida de semillas de
L. luteus amargo, que fue exactamente igual al obtenido con un patrn de lupinina.
Para el aislamiento y purificacin de esparteina, alcaloide que se encuentra en
menor proporcin en la semilla, se utiliz la tcnica de cromatografa preparativa
ultrarrpida en columna. El eluyente cloroformo: ciclohexano: dietilamina
(6:4:0,5) fue el que permiti una mejor separacin de los alcaloides. A partir del
extracto crudo, y mediante sucesivas purificaciones, se aisl el alcaloide esparteina.
Esta tcnica nos ha permitido el aislamiento de alcaloides minoritarios con mayor
facilidad y rapidez que la cromatografa convencional.

50-

25-

50

100

150

200

Ki|>, 2.-Kspectn> de masas de lupinina aislada y purificada a partir de semillas di- /. luteus
Mus* \i>i't'ini iifliipiriini- ixolaU'd <iml tiirififtlJhwi /,. liilciix xt-nix
Invt-sl. Api-.: 1'riHl. l'K

M.MUZQUIZcfu/.

356

l:A("l'Oli;S ANTINiri'KlTIVOS'niRMORItESISTN'l'HSlN l.l I I I M I N O S A S .

Para la deteccin de alcaloides individuales se utiliz la cromatografa en capa

fina. Los resultados de ecotipos y cultivares de cinco especies de lupino (Fig. 3)
muestran que la lupanina (b) fue el alcaloide ms comn en L. mutabilis, L. albus,
y L. angusfolius. La esparteina (a) aparece en L. mutabilis y L. luteus, y la angustifolina (d) en L. angustifolius. En las especies L. luteus y L. hispanicus, el alcaloide
dominante fue la lupinina (e). La lupanina no se encontr en estas especies. La
esparteina se detect en algunas variedades y ecotipos de L, luteus estudiadas.
Solamente en L. hispanicus ssp bicolor se encontr epilupinina (f). Un alcaloide
de naturaleza indlica, no quinolizidnica, la gramina (g) apareci en las dos
subespecies del L. hispanicus (ssp hispanicus y ssp bicolor). Este alcaloide apareci en alguna muestra de L. luteus pero no se detect en ninguna de las otras especies estudiadas.
Para la determinacin de alcaloides se han comparado dos mtodos de extraccin usando dos especies diferentes de Lupinus: L. albus (LO 2423) y L. luteus
(LO 2915), cuantificndose por cromatografa de gases. Los contenidos de los
alcaloides mayoritarios de estas especies aparecen en la Tabla 1. Los dos mtodos
dieron resultados muy semejantes, mostrando ambos una alta reproducibilidad
(coeficientes de variacin inferiores al 5 p. 100) tanto para los alcaloides que presentan tanto altas como bajas concentraciones. El mtodo (b) es sin embargo
mucho menos complicado y con l pueden analizarse tres veces ms muestras en
un da que con el mtodo (a). Con el mtodo de extraccin (b), y cromatografa de
gases, se han cuantificado los alcaloides de diferentes muestras dulces y amargas
de lupino cuyos valores aparecen en la Tabla 2. Puede observarse que este mtodo
permite cuantificar alcaloides en muestras que presentan contenidos muy bajos de
los mismos. Mediante esta tcnica, adems de los alcaloides cuantificados se han
detectado otros alcaloides, como la albina, que no se ha podido cuantificar por
falta de patrones.
Debido a que en algunos casos es necesario analizar cantidades pequeas de
muestra se ensay la tcnica de CLAR. Existen pocos datos en la bibliografa
sobre anlisis de alcaloides del lupino mediante dicha tcnica, por lo que se
desarroll un nuevo mtodo basado en los de Hermans-Lokkerbol et al., (1989) y
Saito et al., (1989), este ltimo utilizado en alcaloides lupinnicos de Thermopsis
lupinoides y T. chinenesis. Para ello se ensayaron diferentes sistemas cromatogr-

L. angustifolius

/,. allms

O
o
'

O O O

&

t>

c=>

o o
>
OOOOO

a, o

L. mutabilis

"

L. luteus

O O O

O O

o o o O

o
o
C,
o

<>
o

O O OO

O O o O O

C
o

8
O

L. hispanicus

TABLA 1

OQoflOoflflOOOOOoW

CONTENIDO DE ALCALOIDES (mg/g de M.S. error tpico)

DE DOS MUESTRAS DE LUPINUS
Alkaloid conten (mg/g D.M. std. error) oftwo samples of Lupinus
Lupinus luteus

Lupinus albus

Mtodo a
Mtodo b

lupanina

13-OH-iupanina

lupinina

esparteina

gramina

21,0 + 0,89
20,3 0,90

0,9 + 0,02
0,8 0,03

3,5 0,09
3,8 0,10

0,9 + 0,03
1,0 0,02

0,4 + 0,02
0,7 0,03

La cuantificacn se realiz por CG. Ver Material y Mtodos para detalles experimentales
The (fuautitalion wax carnea oul by GC. See Malcriis and Melhodx SSCtionjor jwrther dciails

Fig. 3.-Cromatografa en capa fina de extractos de aloiltiides de diferentes cultivares de /..

L. angustifolius, L. mutabilis, I,. Luteus y L. hispanicus
Diagramatic repres'nttilion o/Tl.C ojalkaloui extracmjront iiffi'ri'ni L tilhitx. I,, (in^uxlifnl
/,. niiittihilix, L. Inicua, /,. fii.\i>finifii.\
t: cspurli-inu. sfHtl,-iii,; b: Itipjimiui, liii>iiniii\1: H Ol l u p m i i m . M Ol ln><uiiin'; d: niipiisliliiliim.
ftilim1; v: liipiim. lut'ininr. f: rpilupiiiiiiit, c/ii/i/nw/wc. (: pnimiim. xraminr
Invcsl, A>-i

l'nul l'inl vi-0. Vul. H t I ) , l'J'H

J
M. Mll/Ql]]/ f l a l .

l ' A M o m - s ANTINIITR1TIVOSTERMORRBailTBNTBS BN I H i l i M l N o s A S i

TABLA 2

TABLAS

< :ONTENIDO DE ALCALOIDES (mg/g de M.S. error tpico)

I'.N D1FKRKNTES ESPECIES DE LUPINUS CUANTIFICADO POR CG
AI ka I od conten (mg/g DM. + std. error) in different species of Lupinas
quantified by GC

TIEMPO DE RETENCIN (min) M! A L C A L O I D E S DLL L U P I N O

KN CROMATOGRAFA LIQUIDA DK ALTA RESOLUCIN
UTILIZANDO DIFERENTES SISTHMAS DE SOLVL'NTKS

Especies

13-OH lupanina

lupanina

angustifolina

.a//wisL01584A.. .
/,.<rf&HsL023947A. .
L albas N 903
L fl/mi N 906
L iuteus 304
L. angusiifolius 201 .. .

0,30 0,01
0,60 0,02

16,00 0,30
30,00 + 0,40
0 20 + 0,01
0,50 + 0,02

1,90 + 0,04

70,00 0,59

gramina

Ketcnion lime (min) of alkaloids of lupia in 11 TLC nxitig tlifferenl

aolvent svsicms

esparteina

lupinina

Solvente

1 50 + 0 09

5 90 + 0 08

acetonitrilo:
lampn
fosfato

1,30 0,05

Alcaloides
13-hidroxilupanina lupanina angustifolina graminu csparteina

lupininu v)ilii|)iiinii

A)

(-) No detectado
Se utiliz el mtodo (b) de extraccin y purificacin

fieos en los que se vari el pH y las proporciones de los solventes. En la Tabla 3A

aparecen los tiempos de retencin de distintos alcaloides del lupino con estos sistemas cromatogrficos, en donde se puede observar un aumento en los tiempos de
retencin a medida que aumenta el pH. Por el contrario segn aumenta la fase
orgnica del solvente (acetonitrilo: tampn fosfato) se acortan los tiempos de
retencin. El mejor sistema de solvente fue un gradiente (curva convexa) de acetonitrilo: tampn fosfato pH 3,5, cambiando de 20:80 a 10:90 durante 20 min, y
manteniendo las condiciones finales 10 min ms. Usando este sistema se consigue
una mejor resolucin de los alcaloides que salen en primer lugar sin retrasar el
tiempo total de anlisis (Tabla 3B). Estas condiciones fueron usadas para la determinacin cuantitativa de alcaloides en diferentes especies de lupino utilizando
para la extraccin el mtodo (b) (Tabla 4). Las curvas de calibrado para los cinco
alcaloides cuantificados mostraron que la respuesta fue lineal para un rango de
concentracin de 1-600 |g mh1, con un coeficiente de correlacin de 0,99, excepto para la esparteina.
Los resultados obtenidos (Tabla 4) muestran que los alcaloides detectados
(13-hidroxilupanina, lupanina, angustifolina y gramina), aparecen en concentraciones similares a las encontradas por Muzquiz et al., (1989), mediante CG. No
fue posible determinar el nivel de esparteina, o detectar lupinina y epilupinina.
Este mtodo podra ser til en programas de mejora de L. albus, donde la lupanina
es el alcaloide mayoritario y el que interesa detectar, para comprobar si se estn
obteniendo variedades dulces.

CONCLUSIONES
El mtodo de extraccin (b) propuesto en este trabajo es un mtodo rpido
que permite analizar alcaloides en el laboratorio en un gran nmero de muestras.
Con este mtodo las semillas son destruidas, por lo que habra que conseguir
mtodos no destructivos de cuantificacin de alcaloides, adems de los ya existentes (papel Dragendorff y test de fluorescencia), que ayudaran a genticos y
mejoradores en sus programas de mejora. Actualmente se estn llevando a cabo

pH2,5 (15:85)
(20:80)

3,24
3,09

3,94
3,10

5i58
3,72

9,71
6,06

pH3,5 (12:88)
(15:85)
(20:80)

3,29
3,33
3,03

4,03
4,10
3,03

5,67
5,84
3,04

9,51
11.11
4,56

pH4,0 (15:85)

3,51

4,44

6,67

11,81

3,82

4,95

6,15

8,33

[1,90
12,60
11,71
10,71
6,02

25,78
7,%

B.32

B)
pH3,5 (20:80)

9,55

a
(10:90)
(-) No detectado

TABLA 4
CONCENTRACIN DE ALCALOIDES (mg/g de M.S. + error Ifpico)
EN DIFERENTES ESPECIES DE LUPINUS
Concentraron of alkaloids (mg/g D.M. sld. error) in different species
ofLupinm
Especies

13-OH lupanina

lupanina

..albus 4080
.. Iuteus Irycl
, lulcus X408
,. angustifoliiiK llnicrop ....
,. angusuTolius AN 4K58A ..

0,41 0,02

0 7 4 0 12
20,26 + 0 27

,. liispiiniciiN ssp bicolor ....

angustifolina

graminu

0 H(> i 0 04

2,W)0,13
0,91 0,01

3,45 0 , 1 3
1 2.KO 0 54

1,X70,05
2,63:1 0,1')

l.as ili'lorilitiuti'iiHii-s si- iviiM/iiiim riK-dimilo uom;iUif'.r;ih;i l i q u i d a ikl ;il|:i resol lie (Stl
Tin- dtttftntnOtQR HT;C inutif h\ ('
I n v r M A)>i l'nul !'...! v.-n Vul H l

sptirl i'lnu

l-ACTOKIiS A N ' I ' I N i m i r r i V D S l ' l ' H M t l K H I ' . S I S ' l ' l - N ' t ' l - S I ' N I l' U M I N I I S A S I

irahajos, en colaboracin con el Centre de Recherches Agronomiqucs de Blgica, en anlisis de alcaloides con tcnicas de NIRS dentro de un Programa
ICLA1R (AGRE -CT 90-0048) de la CE.
En la ltima Conferencia Internacional del Lupino se acord que la cromatografa de gases con columnas capilares sea aceptada como mtodo oficial a la hora
de hacer trabajos en colaboracin entre distintos laboratorios del mundo (Harris,
1991; Trugo et al., 1989). Esta tcnica es, sin duda, la mejor para cuantificar los
alcaloides, ya que no es necesario derivatizar las muestras y en las condiciones
propuestas se pueden cuantificar todos los alcaloides del lupino.
Debido a que existen muy pocos alcaloides comerciales del lupino, la purificacin y extraccin de estos es muy importante. La CPUC es una tcnica de gran
ayuda para separar principalmente alcaloides que se presentan en las distintas
especies en menor proporcin y poder as usarlos posteriormente como patrones.
El mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin no es el idneo a la
hora de cuantificar los alcaloides de todas las especies del lupino, pero s podra
ser muy til en programas de mejora del L. albus.
La cromatografa en capa fina es un mtodo de gran ayuda a la hora de conocer qu alcaloides tenemos que cuantificar en cada especie.

t.

M i l I ' H R 1''.. I9H9. Qiiituili/idiiR- ilkiiloiils n nnij-i- mu f.',min lii|tin.s, f i n : '['iixiumls ni plmil nngiti.
Viiliiiiit- I. Alkaloids. C'liL-L-kc I1. R. (ccU CRC I'irsv pp. 1.14 159.
M< '< 'Al I I Y I). V., 1986. Analysis o thf cim-hona alkaloids by hij'Ji prrloimaiKV li(|iiiil dimiunlo

j-i,i|i|iv. J. Chrom., 357: 221-226.

M H / n l l ] / . M.. IHJRBANOC., OROSI'li M. J., KODIiNAS 1., 19H9. A dicminil sludy o LiifHtiix
ktlpantcus (Boiss et Reul) secd. II. Toxic ;ind antinulritional componen!*. J. Si'i. I ; IHH| A^rk'., 47:

,'m 214.

l'l KM 1WSKA A., P1EC7ONKA G.. W1EWIOROWSKI M., 1979. Iwlher slmlk-s un ihe slcu-oduini.sliy !>l spaileine, ils isomers and derivalives. V. Studics of mono and dicalions D' i isolnpaiiiiic.
lii|iininc and tbeir 17 b methyl dcrivativcs. Bulletin de TAcademie l'olimaise des Sciences, 27:
(. \I 654.
SAITO K.. KOHAYASHI K., OHMIYA S., OTOMASU H., MURAKOSHI 1., 1989. Analysis o lupi
ni' alkaloids in plas by high- performance liquid chromatography. J. Chrom., 462: 333-340.
ST1LI. W. C.. KAHN M., MITRA A., 1978. Rapid chromatographic tcchnique for preparalivc separa
liims wilh modrate resolution. J. Org. Chem., 43 (14): 2923-2925.
I I I K i O L. C., GROSS R., 1989. Collaborative study of alkaloid determinalion in lupin .sceds. Lupin
Ncwslcllcr, 13:55-58.
W I N K M., W1TTE L., SCHIEBEL H. M., HARTMANN T., 1980. Alkaloid pattern of ceel suspcnsi.in
cultures and differentiated plas of Lupinus polyphylus. Planta Mdica, 38: 238-245.

AGRADECIMIENTOS
Parte de este trabajo ha sido financiado por el INIA (Proyecto n.e 8202) y por la CICYT (Proyecto
ALI91-1092-C02-02).
Queremos agradecer al Dr. Serafn Valverde, Director del Instituto de Qumica Orgnica del CSIC,
su experta colaboracin en las tcnicas de CPUC.

SUMMARY
Determination of thermoresistant antinutritional factors in legumes.
I: Alkaloids
Quinolizidine alkaloids lupanine and lupinine were isolated and purified from L. albus and
L. luteus seeds with high alkaloid conten. The sparteina alkaloid was obtained using flash chromatography. Two methods of alkaloid extraction were compared. Thin layer chromatography was used for
alkaloid detection and the quantitation was made using gas liquid chromatography and high performance liquid chromatography techniques.
KE\ Lupinas
Alkaloids

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
CROMWELL B. T., 1955. The alkaloids. En: Modern Methods of Plant Analysis. Paech K., Tracey
M.V. (eds.).
C'ULVENOR C. C. J., PETTERSON D. S., 1986. Lupin toxins. Alkaloids and phomopsins. Proc.
Fourth Int. Lupin Conference. Geraldton, Australia, pp. 188-198.
IIARRIS D. J., WILSON P. E., 1988. A rapid manual method of lupin alkaloid analysis. Proc. Fifth
Int. Lupin Conference. Poznan, Polonia, pp. 598-601.
HARRIS D. J., 1991. Alkaloids. Lupin Newsletter, 14: 15-16.
Nl-RMANS-LOKKERBOL A., VAN DEER LEER T., VERPOORTE R., 1989. Reversed-phase high
performance liquid chromatographic separation of some ndole and quinoline alkaloids from Cinchona. J. Chrom., 479: 39-51.
Invi-sl. A^r,: l'nnl. l'rol. ven. Vitl. K (.1), IW.