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INTRODUCTION -------------------------------------------------------------------------- 6
CHAPITRE 1 -------------------------------------------------------------------------------- 7
1. LA COAGULATION PLASMATIQUE------------------------------------------ 7
1.1 LES FACTEURS DE LA COAGULATION -----------------------------------------7
1.1.1 NOMENCLATURE---------------------------------------------------------------7
1.1.2 LIEU DE SYNTHESE ------------------------------------------------------------7
1.1.3 MODE DACTION ---------------------------------------------------------------8
1.2 LES ETAPES ------------------------------------------------------------------------ 10
1.2.1 FORMATION DE LA PROTHROMBINASE --------------------------------- 10
1.2.1.1 VOIE EXOGENE ( EXTRINSEQUE) ------------------------------------- 10
1.2.1.2 VOIE ENDOGENE (INTRINSEQUE)------------------------------------- 10
1.2.2 FORMATION DE LA THROMBINE ------------------------------------------ 10
1.2.3 FORMATION DE LA FIBRINE------------------------------------------------ 11
1.2.4 DEVENIR DU CAILLOT------------------------------------------------------- 13
1.3 LES TESTS DEXPLORATION DE LA COAGULATION------------------------ 15
1.3.1 LES TESTS GLOBAUX -------------------------------------------------------- 15
1.3.1.1 LE TEMPS DE CEPHALINE-ACTIVATEUR :TCA--------------------- 16
1.3.1.2 LE TEMPS DE QUICK :TQ ----------------------------------------------- 18
1.3.1.3 LE TEMPS DE THROMBINE :TT---------------------------------------- 18
1.3.2 LES TESTS ANALYTIQUES -------------------------------------------------- 18
1.4 INTERET PRATIQUE DE CES TESTS -------------------------------------------- 19
1.4.1 INTERET DIAGNOSTIC ------------------------------------------------------- 19
CHAPITRE 2 -------------------------------------------------------------------------------22
2. ESSAI COMPARATIF DU SCA 2000 -------------------------------------------22
2.1 PROTOCOLE EXPERIMENTAL--------------------------------------------------- 22
2.1.1 LES ANIMAUX----------------------------------------------------------------- 22
2.1.2 LES PRELEVEMENTS --------------------------------------------------------- 22
2.1.2.1 REALISATION------------------------------------------------------------- 22
2.1.2.2 CONSERVATION --------------------------------------------------------- 24
2.1.3 REALISATION DES TESTS AVEC LE SCA2000 ---------------------------- 24
2.1.3.1 MATERIEL----------------------------------------------------------------- 24
2.1.3.2 PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT ------------------------------------- 24
2.1.3.3 METHODE DE REALISATION ------------------------------------------ 25
2.1.4 REALISATION DU TEMPS DE QUICK PAR LA METHODE
CHRONOMETRIQUE ---------------------------------------------------------------- 25
2.1.4.1 MATERIEL----------------------------------------------------------------- 25
2.1.4.2 METHODE ----------------------------------------------------------------- 26
2.1.5 REALISATION DU TEST DE CEPHALINE AVEC ACTIVATEUR PAR LA
METHODE CHRONOMETRIQUE -------------------------------------------------- 26
2.1.5.1 MATERIEL----------------------------------------------------------------- 26
2.1.5.2 METHODE ----------------------------------------------------------------- 26
2.1.6 TRAITEMENT DES RESULTATS -------------------------------------------- 27
2.1.6.1 REPETABILITE------------------------------------------------------------ 27
2.1.6.1 REPRODUCTIBILITE ----------------------------------------------------- 27
2.2 RESULTATS OBTENUS ----------------------------------------------------------- 27
2.2.1 REPETABILITE ---------------------------------------------------------------- 27
2.2.2 REPRODUCTIBILITE---------------------------------------------------------- 28
CHAPITRE 3 -------------------------------------------------------------------------------34
3. DISCUSSION---------------------------------------------------------------------------34
PRECISION DE LA METHODE-------------------------------------------------------- 34
POUR LE TEMPS DE QUICK ------------------------------------------------------- 34
Rptabilit : ------------------------------------------------------------------------ 34
Reproductibilit :-------------------------------------------------------------------- 35
POUR LE TEMPS DE CEPHALINE-ACTIVATEUR ------------------------------- 35
Rptabilit : ------------------------------------------------------------------------ 35
Reproductibilit :-------------------------------------------------------------------- 35
COMMENTAIRE --------------------------------------------------------------------- 35
COMPARAISON DES RES ULTATS --------------------------------------------------- 35
ASPECTS PRATIQUES ----------------------------------------------------------------- 37
CONCLUSION-----------------------------------------------------------------------------38
ANNEXES ----------------------------------------------------------------------------------39
BIBLIOGRAPHIE -------------------------------------------------------------------------44
TABLEAUX
Tableau 1 :Les facteurs de la coagulation plasmatique ([3][9][10])..................................... 9
Tableau 2 : Modifications des tests au cours des principaux troubles de lhmostase du
chien et du chat ([8][11][17]) ......................................................................................... 21
Tableau 3 : affections rencontres dans lchantillon des chiens malades........................ 23
Tableau 4: Rptabilit pour le temps de Quick au SCA 2000 .......................................... 27
Tableau 5: Rptabilit pour le temps de Cphaline -Activateur au SCA 2000................ 28
Tableau 6: Apprciation de la reproductibilit par calcul des coefficients de variation
(CV).................................................................................................................................. 28
Tableau 7: Valeurs pour les diffrents tests et par les deux types de mthodes pour les 31
chiens sains ...................................................................................................................... 30
Tableau 8 : Rpartition des rsultats obtenus pour le temps de Quick pour les 68 chiens
malades............................................................................................................................ 30
Tableau 9 : Rpartition des rsultats obtenus pour le TCA pour les 68 chiens malades 32
GRAPHIQUES
Graphique 1: Corrlation entre les mesures de temps de Quick effectues par la
mthode chronomtrique et avec le SCA2000 pour lchantillon des chiens malades
(on a utilis les Log pour parpiller la distribution). .................................................. 31
Graphique 2: Corrlation entre les mesure de temps de Cphaline -Activateur ralises
par la mthode chronomtrique et avec le SCA 2000 pour lchantillon des chiens
malades (on a utilis les Log pour parpiller la distribution). ................................... 33
ANNEXES
Annexe 1 : Temps obtenus pour lchantillon des chiens sains (en secondes).................. 40
Annexe 2 : Temps obtenus pour lchantillon des chiens malades (en secondes)............. 42
Annexe 3 : mode demploi du SCA 2000 .............................................................................. 43
INTRODUCTION
Lhmostase est un tat dquilibre relativement instable qui peut tre
maintenu grce trois mcanismes successifs : lhmostase primaire qui aboutit
la formation du clou plaquettaire, la coagulation plasmatique dont rsulte la
formation du caillot et la fibrinolyse qui permettra terme la solubilisation de ce
caillot.
Une perturbation de lune de ces tapes aura pour consquence un dplacement
de lquilibre dans le sens dun syndrome hmorragique ou dun syndrome
thrombotique. Et si ces anomalies peuvent tre suspectes cliniquement, leur
diagnostic proprement dit passe par des examens complmentaires plus ou
moins complexes et donc plus ou moins accessibles au praticien, car difficiles
standardiser et interprter.
Ainsi la coagulation plasmatique ncessite pour son valuation de base:
Le temps de cphaline avec activateur (T.C.A.) qui explore la voie
endogne et la voie commune de la coagulation plasmatique
Le temps de Quick (T.Q.) qui explore la voie exogne et la voie
commune de la coagulation plasmatique
Le temps de thrombine (T.T.) qui explore la fibrinoformation, dernire
tape de la coagulation plasmatique.
Ces examens ncessitent, outre une certaine habitude de leur ralisation, de
comparer lchantillon test un chantillon tmoin, ce qui rend leur ralisation
plus lourde encore.
Le laboratoire SYNBIOTICS propose en commercialisant le SCA2000 une
mthode dobtention du T.C.A. et du T.Q. qui est rapide, automatise, ralisable
partir dun simple chantillon de sang total et ne requerrant pas de
comparaison un chantillon tmoin. Lobjet de ce travail et dapprcier, en la
comparant aux mthodes chronomtriques classiquement employes, la fiabilit
de cette mthode chez le chien.
Aprs un bref rappel des mcanismes mis en jeu lors de la coagulation
plasmatique, nous dcrirons les techniques employes, les mthodes utilises
pour les comparer et les rsultats obtenus. Enfin, nous valuerons lintrt de ces
mthodes, leurs limites et leur applicabilit en pratique courante.
6
CHAPITRE 1
1. LA COAGULATION PLASMATIQUE
Lhmostase est un tat dquilibre complexe qui dcoule de trois grands mcanismes. Le
1er dentre eux est lhmostase primaire qui aboutit la formation dun clou plaquettaire. La
coagulation plasmatique intervient ensuite pour renforcer ce clou plaquettaire grce la
synthse dun caillot de fibrine ( celui ci sera par la suite remani au cours de la 3me tape de
lhmostase que constitue la fibrinolyse). Elle fait intervenir de nombreux facteurs qui vont
interagir au cours dtapes ractionnelles successives.
Les facteurs V et VIII sont eux des cofacteurs enzymatiques, vritables catalyseurs de
la coagulation plasmatique. Ils nont en effet pas dactivit enzymatique propre mais
participent, avec le Ca+ et les phospholipides, la formation des complexes activateurs
tnase et prothrombinase.
N.B. : le facteur VIII est en ralit la combinaison de deux protines relies par des liaisons
non covalentes : le facteur VIII coagulant ( VIIIc) et le facteur de Von Willebrand (FVW).
Dnomination
fibrinogne
Forme
active
fibrine
II
prothrombine
thrombine
III
absente
IV
thromboplastine
tissulaire
ion calcium
proacclrine
Va
VII
proconvertine
VII et VIIa
VIIIc
facteur antihmophilique A
VIIIa
Ca+
IX
facteur antihmophilique B
IXa
facteur Stuart
Xa
XI
facteur PTA
XIa
XII
facteur
Hageman
XIIa
XIII
facteur
stabilisant de la
fibrine
XIIIa
prK
prkallicrine
kallicrine
KHPM
kininogne de
haut poids
molculaire
idem
Lieu de
synthse
foie
consommation DemiRle
vie
oui
2-4 Monomre protique se
jours polymrisant pour donner la
fibrine
foie avec
oui
3-4 Hydrolyse le fibrinogne.
vitamine K
jours Active les facteurs
II,V,VII,VIII,XI & XIII
tissus
----- Active le facteur X dans le
complexe prothrombinase
------- Ncessaire la plupart des
tapes de la coagulation
foie et SMM
oui
36-48 Cofacteur du X dans le
heures complexe prothrombinase
foie avec
non
4
VIIa et facteur tissulaire
vitamine K
heures activent le X
foie?
oui
10-16 Cofacteur du IX dans le
Cellules
heures complexe antihmophilique,
endothliales
constitue avec les
phospholipides, le Ca+ et
le IXa le complexe tnase
permettant l'activation du X
foie avec
non
24 Entre dans la composition
vitamine K
heures du complexe tnase
permettant l'activation du X
par voie endogne
foie avec
non
36-48 Donne le Xa faisant partie
vitamine K
heures du complexe
prothrombinase et active les
facteurs VII et IX
foie?
peu consomm 2-3 Donne le XIa qui active le
jours facteur IX en prsence de
calcium
foie ?
peu consomm
48 Systme contact. Active le
heures XI. Participe au systme
fibrinolytique et au systme
des kinines
foie ?
oui
7 jours Donne en prsence d'ions
calcium le XIIIa (
transaminase) qui
transforme la firine soluble
en fibrine insoluble
------- Systme contact. Active le
XII,le systme des kinines,
la prornine et le
plaminogne
------- Systme contact. Active la
prkallicrine en prsence
de XIIa
10
11
VOIE ENDOGENE
VOIE EXOGENE
Systme contact
KHPM + prK +XIIa
XI
complexe
tnase
XIa
IXa
IX
Facteur tissulaire
+ VIIa
VIIIC
Xa
Va
N
I
II
V
VII
VIIIc
IX
X
XI
XII
XIII
Facteur
Fibrino
gne
Prothrombine
Proacclerine
Proconvertine
Facteur
antihmophilique
A
Facteur
antihmophilique
B
Facteur Stuart
Facteur PTA
Facteur
Hageman
Facteur
stabilisant
de
la fibrine
V
O
I
E
II
I
C
O
M
M
U
N
E
Monomres de
fibrine
IIa
XIII
XIIIa
Fibrine stable
CAILLOT
12
13
V
O
I
E
E
N
D
O
G
E
N
E
Phospholipides
Collagne (contact)
XII
XIIa
KHPM
Fragments de XIIa
Kallicrine
Prkallicrine
Activation
du
complment
Kinines
Activateur
plasmatique
( pro-UK)
Activateur
tissulaire
(t-PA)
Plasminogne
Plasmine
Anti-plasmines
Streptokinase
Urokinase
Dgradation du V, duVIII
Du fibrinogne et de la fibrine
VOIE
EXOGENE
PDF
14
15
Cf. Schma 3
Cest par dfinition le temps de coagulation dun plasma pauvre en plaquettes ( i.e.
centrifug
4000
tours
pendant
5-10
min)
mis
en
prsence
dune
suspension
A lE.N.V.Toulouse, les valeurs de TCA considres comme normales chez le chien sont
comprises entre 10 et 14 sec.
16
Voie
endogne
Voie
exogne
Voie
commune
Temps de
CphalineActivateur
Temps de
Quick
Fibrinogne
Temps de
Thrombine
Caillot
17
Il est galement possible de doser lantithrombine III dont le taux diminue lors dactivation de
la coagulation, dinsuffisance hpatique et de syndrome nphrotique. On ralise ce dosage en
ajoutant au plasma de lhparine et de la thrombine et en mesurant lactivit de la thrombine
rsiduelle sur un substrat synthtique. Les rsultats ainsi obtenus sont exprims en
pourcentage par rapport un plasma tmoin : on considre comme normales des valeurs
comprises entre 80 et 120 % de celles obtenues avec le tmoin.
Enfin il faut citer le dosage des PDF qui permet de dpister une activation de la coagulation
suivie de thrombolyse ou bien une hyperfibrinolyse primitive. Il seffectue laide de kits
spcifiques bass sur des techniques dagglutination de particules de latex recouvertes
danticorps anti-PDF.
Chez le chien, des valeurs de PDF suprieures 10 g/mL sont considres comme
anormales et des valeurs suprieures 30-40 g/mL sont fortement vocatrices dune CIVD
([14]).
19
respiratoire). Un diagnostic rapide est alors primordial. Celui-ci passe en premier lieu par
un bilan associant un hmogramme, le dosage des protines plasmatiques et lexploration de
la coagulation plasmatique par la ralisation dun TQ, dun TCA et dun TT (ou dune
fibrinognmie).
Cf. tableau 2
1.4.2 INTERET DANS LE SUIVI THERAPEUTIQUE
Ces tests ont aussi pour vocation de suivre lvolution du patient au cours de son traitement.
Ainsi un animal intoxiqu aux rodenticides anti-vitamine K sera trait classiquement par
ladministration quotidienne de vitamine K1 (5 mg/Kg) pendant 3 semaines. On vrifiera
lefficacit du traitement en effectuant un TQ 48 heures aprs larrt du traitement : si celui-ci
est encore allong, on prescrira 10 jours de traitement supplmentaires ([16]).
Le TCA pourra par exemple tre utile la surveillance dun animal ayant prsent une CIVD
et trait lhparine : une volution favorable se signe par une normalisation du TCA
concomitante dune diminution des PDF plasmatiques.
20
Troubles de
lhmostase
Intoxication
aux antivitamines K
CIVD aigu
TQ
TCA
TT
Fibrinogne
++
++
Numration
plaquettaire
= (ou )
Autres
tests
ventuels
F II
FV=
Insuffisance
hpatique
Parfois
associe 1
CIVD
Hmophilies
=
Dficit en F
VII
Dficit en F I
Dficit en F
XII
Anticoagulants
circulants
Thrombopnies
( sauf CIVD)
Mie de Von
Willebrand
Trouble des
fonctions
plaquettaires
Ou =
=
Facteurs VIII
ou IX
Tps
saignement =
F VII
Temps
corrigs par
apport de
plasma
F XII
Ou =
=
Temps non
corrigs par
apport de
plasma
Ou =
=
=
++
=
=
+
=
=
=
=
=
=
=
Temps de
saignement
F Willebrand
Temps de
saignement
21
CHAPITRE 2
2. ESSAI COMPARATIF DU SCA 2000
2.1 PROTOCOLE EXPERIMENTAL
On se propose de comparer ici les temps de Quick et les temps de Cphaline avec Activateur
donns par le SCA2000 avec ceux obtenus par les mthodes chronomtriques classiques
utilises en routine au Laboratoire dHmatologie du service de Mdecine de lENVT.
2.1.1 LES ANIMAUX
cf. tableau 3
On dispose dun pool de 98 animaux pour lesquels une exploration de lhmostase a t
demande. Ils sont rpartis en deux chantillons.
Lchantillon des chiens malades comprend 68 individus, prsents pour diffrentes
raisons la consultation. Une trentaine dentre eux prsente effectivement des perturbations
de la coagulation plasmatique.
Lchantillon des chiens sains est quant lui constitu de 31 animaux cliniquement sains
appartenant lENVT (animaux destins lenseignement pratique) ou des tudiants, ou
bien vus en consultation pour des oprations de convenance ( strilisation par exemple).
2.1.2 LES PRELEVEMENTS
2.1.2.1 REALISATION
Les tests sont effectus partir de sang veineux. Le prlvement est obtenu par ponction
jugulaire franche aprs compression manuelle. On utilise un systme de type vacutainer
associant une aiguille, un porte-aiguille et un tube sous vide contenant un milieu de
prlvement citrat ( tube de 5 mL contenant 0,5 mL de citrate de soude 3,8%). Le tube est
rempli au trait dans le but davoir un rapport entre la quantit de sang et lanticoagulant
proche de 9 pour 1.
On effectue les mesures laide du SCA 2000 avec du sang total. Celui-ci est ensuite
centrifug pour donner le plasma pauvre en plaquettes ncessaire la ralisation des tests par
la mthode chronomtrique.
22
CN
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
Tableau
3:
affections
Motif de la demande
Rhinite - Epistaxis
Saignements
post op
post op
pr op
post op
suivi intoxication
Hmaturie
Mlna
suivi intoxication
atteinte hpatique
atteinte hpatique
retard de croissance
CIVD dcompense
Ascite
saignements
anmie chronique
Choc
suivi torsion
Mga sophage
atteinte hpatique
panchement pricardique
post op (pritonite)
CIVD
Suivi mtastases
Saignements
Prop
abdomen aigu
CIVD
CIVD
epistaxis-hmaturie
epistaxis unilatrale
Saignements
atteinte hpatique
Suivi tumeur hpatique
post op
suivi intoxication
Hmaturie
hparinothrapie
hparinothrapie
atteinte hpatique
suivi intoxication
suivi IRC
Epanchement pleural
Leishmaniose
Mlna
anmie-choc
hyperthermie
post op
post op
post op
suivi
CIVD?
CIVD post op
post op
Ictre
suivi 56
Pr op
retard de croissance
Apathie
ascite-ictre
suivi 61
suivi 61 62
vomissements chroniques
rencontres
Diagnostic de laffection
aspergillose
tumeur vaginale
ovariohysterectomie
pyomtre
pyomtre
ovariohysterectomie
intoxication-anticoagulants
Cystite
Gastro-entrite
intoxication-anticoagulants
shunt portocave
lymphome
foie?
tumeurs mammaires
foie?
Hernie discale avec
Myelosclrose
torsion estomac
torsion estomac
shunt portocave
tumeur hpatique
tumeur pricardique
Pyomtre
Pritonite
tumeurs mammaires
intoxication-anticoagulants
Ovariectomie
Pritonite
pritonite-ncrose intestinale
Suivi 28 et 29
L.A.M.
Rhinite
tumeur hpatique
hypothyroidie
ovariectomie
intoxication-anticoagulants
Cystite
CIVD
CIVD
?
intoxication-anticoagulants
insuffisance rnale
lymphome
histiocytose
arthrite septique
pyomtre
tumeur abdominale
pyomtre
piroplasmose
tumeur rate
ovariectomie
pyomtre
lithiase foie
lithiase foie
cytoponctions pulmonaires
Atteinte hpatique
shunt portocave
intoxication-anticoagulants
atteinte hpatique
anticoagulants circulants
atteinte hpatique
atteinte hpatique
dans
23
lchantillon
des
chiens
malades
2.1.2.2 CONSERVATION
Le prlvement sur citrate permet de diffrer la ralisation des tests mais on considre que
pass 2 heures aprs le prlvement, les rsultats obtenus sont altrs.
Certains des tests ont t raliss partir dchantillons de plasma congel remis
temprature avant la ralisation de ces tests, ceci dans le but de grouper les manipulations.
Cette mthode courante dentreposage naltre de toute faon en rien lvaluation de la
fonction hmostatique ([1]).
Ainsi la cartouche pour temps de Quick est pourvue dune chambre-test contenant une
prparation dshydrate de thromboplastine, de sels de calcium et dagents stabilisants.
La cartouche pour temps de Cphaline Activateur est elle pourvue dune prparation
dshydrate de kaolin, de phospholipides, de sels de calcium et dagents stabilisants.
24
son
utilisation,
le
fabricant
recommandant
dutiliser
ces
cartouches
temprature ambiante.
La cartouche est ensuite insre dans lappareil qui va lidentifier et procder une
tape de prchauffage visant amener les ractifs quelle contient la temprature
idale.
Loprateur dpose ensuite laide dune seringue ou dune pipette une goutte de
sang dans le puits de la cartouche, sans bulle dair, et lance lanalyse en poussant le
bouton Start . Lanalyseur aspire ensuite prcisment la quantit juste de sang
ncessaire lanalyse (soit 15L).
Le rsultat du test est lu sur lcran de lappareil : il sagit dune valeur donne en
secondes.
2.1.4 REALISATION DU TEMPS DE QUICK PAR LA METHODE
CHRONOMETRIQUE
Ce test consiste activer in vitro la prothrombine prsente dans lchantillon par addition de
thromboplastine calcique. On obtient alors de la thrombine qui hydrolyse le fibrinogne en
fibrine et permet la formation du caillot.
2.1.4.1 MATERIEL
On dispose dun bain-marie rgl 37C, de pipettes, de tubes hmolyse, dun crochet et
dun chronomtre.
La source de thromboplastine calcique est une prparation lyophilise base de cervelle de
lapin (Thromboplastine calcique bioMrieux) que lon reconstitue avant usage en y ajoutant
un volume donn deau distille.
25
2.1.4.2 METHODE
On travaille partir dun plasma pauvre en plaquettes obtenu en centrifugeant le sang citrat
du patient 4000 tr pendant 5-8 minutes. On peut travailler partir de plasma frais ou
dcongel.
La premire tape consiste pr-incuber au bain-marie 0,1mL de plasma et 0,2 mL de ractif
pendant quelques minutes.
On mlange ensuite les 2 composants et on dclenche le chronomtre. Le mlange est
continuellement sond laide du crochet jusqu ce que le caillot form ait t crochet. On
arrte alors le chronomtre et le temps indiqu est not (en secondes).
Cette mthode est la mthode de rfrence classiquement employe dans les tudes
concernant le temps de Quick ([18]).
2.1.5 REALISATION DU TEST DE CEPHALINE AVEC ACTIVATEUR
PAR LA METHODE CHRONOMETRIQUE
Ce test consiste provoquer la coagulation dun plasma in vitro en le mettant en prsence
dune suspension phospholipidique, dun activateur et de calcium.
2.1.5.1 MATERIEL
On emploie le mme matriel que celui employ pour la mesure du temps de Quick.
On utilise un kit de dtermination du temps de cphaline-kaolin produit par les laboratoires
Diagnostica Stago. Il est compos de 2 flacons, lun contenant de la cphaline lyophilise,
lautre contenant une solution tamponne de kaolin 5 mg/mL. Le ractif est prpar une
demi-heure avant emploi par transvasement de la solution dans le flacon contenant la
cphaline lyophilise et homognisation.
On emploie un deuxime ractif qui est une solution de CaCl2 0,025M prte lemploi.
Cette mthode est la mthode de rfrence classiquement employe dans les tudes
concernant le temps de Cphaline-Activateur ([6]).
2.1.5.2 METHODE
On pr-incube dans le bain-marie 0,1 mL de plasma, 0,1 mL de ractif que lon aura bien
homognis au pralable et 0,1 mL de solution calcique. On mlange tout dabord le plasma
et le ractif puis on laisse incuber 3 minutes. On ajoute alors la solution calcique et on
dclenche le chronomtre. Le caillot est alors crochet laide du crochet et on note le temps
correspondant (en secondes).
26
2.1.6.1 REPRODUCTIBILITE
Ltude de la reproductibilit est base sur la rptition des tests de rptabilit. En effet les 5
tests successifs sont raliss dans les 30 minutes suivant la prise de sang puis une nouvelle
srie de 5 tests est ralise 1h30 aprs la prise de sang.
Elle est estime par la mme technique.
Prlvements physiologiques
N
M+
(CV)
23 (30min)
14.4+0.55
(3.8%)
23 (1h30)
14.4+0.55
(3.8%)
26 (30 min)
14.2+0.45
(3.1%)
26 (1h30)
13.2+1.10
(8.3%)
Prlvements pathologiques
N
M+
(CV)
63 (30min)
20.6+1.67
(8.1%)
63 (1h30)
22+1.41
(6.4%)
59 (10min)
25.6+1.52
(6%)
27
Prlvements physiologiques
N
M+
(CV)
23 (30min)
65.4+2.07
(3.2%)
23 (1h30)
74.6+2.30
(3.1%)
26 (30 min)
74.2+3.00
(4.1%)
26 (1h30)
72.4+1.34
(1.9%)
Prlvements pathologiques
N
M+
(CV)
63 (30min)
89.8+5.54
(6.2%)
63 (1h30)
100+4.74
(4.7%)
59 (30 min)
101+3.67
(4%)
On constate que, pour le temps de Quick comme pour le temps de Cphaline-Activateur, les
rsultats obtenus sont assez homognes et caractriss par des coefficients de variation peu
levs. La rptabilit des tests pratiqus laide du SCA2000 semble donc satisfaisante.
Il faut souligner que si lon a pas test la rptabilit pour les tests pratiqus par la mthode
chronomtrique cest que lon considre que cette mthode est connue pour tre fiable et
dote dune bonne rptabilit dans la mesure o la personne ralisant les tests est toujours la
mme, ce qui est le cas ici.
2.2.2 REPRODUCTIBILITE
Les rsultats obtenus pour la reproductibilit sont prsents dans le tableau suivant:
N
23
26
63
CV pour TQ
0
5.2
4.6
CV pour TCA
9.3
1.7
7.6
28
On constate qu en ce qui concerne le temps de Quick, les rsultats sont plutt bons dans la
mesure o les coefficients de variation sont relativement peu levs et proche de ceux calculs
pour la rptabilit. Ils semblent par ailleurs tre assez homognes entre eux.
En revanche, les rsultats semblent un peu moins bons pour le temps de Cphaline-Activateur
car les coefficients de variations sont relativement levs et peu homognes entre eux.
Nanmoins ces rsultats, mme sils ne sont pas excellents, sont acceptables.
29
Valeurs du TQ
Valeurs du TCA
Mthode chronomtrique
5 6.7 sec (m=6+0.44)
11 14 sec (m=12.7+0.87)
Mthode SCA2000
12 15 sec (m=13.8+0.99)
51 92 sec (m=74.1+10.53)
Tableau 7: Valeurs pour les diffrents tests et par les deux types de mthodes pour les 31
chiens sains
Nombre de chiens
44
23
1
Tableau 8 : Rpartition des rsultats obtenus pour le temps de Quick pour les 68 chiens
malades
Les deux mthodes dobtention du temps de Quick sont caractrises par un trs fort
coefficient de corrlation : = 0.967
30
2,5
1,5
= 0.967
0,5
0
0
0,5
1,5
log(TQ Rfrence)
31
Nombre de chiens
29
24
6
9
Tableau 9 : Rpartition des rsultats obtenus pour le TCA pour les 68 chiens malades
La comparaison des deux mthodes par la mthode du coefficient de corrlation donne ici
encore dexcellents rsultats puisque on a un coefficient l aussi trs fort : = 0.977.
32
2,5
1,5
= 0.977
0,5
0
0
0,5
1,5
33
CHAPITRE 3
3. DISCUSSION
Avec le SCA 2000, la possibilit soffre dutiliser une mthode rapide, simple et automatise
de mesure du temps de Quick et de Cphaline-Activateur. En permettant la mise en uvre de
2 des tests les plus usits en premire intention lors de suspicion de troubles de lhmostase,
cet appareil rpondrait donc une vraie attente du praticien vtrinaire. On a donc cherch
dmontrer que les rsultats fournis par cet appareil savrent aussi fiables que ceux fournis par
la mthode chronomtrique classique.
La rpartition des troubles observs sur lchantillon des 68 chiens malades t la suivante :
v Pas de modification : 31 cas.
v C.I.V.D. : 20 cas.
v Insuffisance hpatique : 6 cas.
v Intoxication aux anti-vitamine K : 6 cas.
v Autres : 5 cas.
La gamme des temps observs pour le TQ et le TCA stends des valeurs usuelles des
rsultats extrmes ( incoagulable dans 4 cas).
PRECISION DE LA METHODE
Dans ltude de la prcision de cette technique, mene pour les 2 tests, nous avons observ :
POUR LE TEMPS DE QUICK
Rptabilit :
Les coefficients de variation que lon a obtenu sont voisins de 6% en moyenne. Un travail
antrieur men au sein du Laboratoire du Service de Mdecine de lEcole Nationale
Vtrinaire de Toulouse sur le temps de Quick ([20]) donne des coefficients de variation pour
la mthode chronomtrique classique de lordre de 1.8%. On a donc une prcision un peu
34
moindre par la mthode au SCA 2000 mais ces coefficients de variation restent tout fait
compatibles avec une interprtation diagnostique.
Reproductibilit :
Les valeurs de coefficients de variation obtenues sont proches de 5% ce qui sans doute moins
bon que pour la mthode manuelle mais reste acceptable.
pas
de
donnes
bibliographiques
sur
les
valeurs
concernant
la
mthode
chronomtrique mais l aussi on peut supposer que ces valeurs sont compatibles avec une
interprtation clinique.
Reproductibilit :
Les valeurs de coefficients de variation, proches de 6% en moyenne, sont compatibles avec
une utilisation diagnostique de la mthode.
COMMENTAIRE
Dans lensemble, lutilisation du SCA 2000 est une mthode un peu moins prcise que la
mthode chronomtrique classique au crochet . Nanmoins, les coefficients de variation
observs restent tout fait raisonnables et lon peut donc considrer que les rsultats obtenus
seront cliniquement pertinents.
35
Pour le TCA, les valeurs observes sur lchantillon des chiens sains stendent de 51
92 s. Les valeurs figurant dans la notice du constructeur vont de 71 102 s.
Les rsultats obtenus par les 2 techniques sont fortement corrls pour le temps de Quick
comme pour le temps de Cphaline-Activateur. On considre donc que les rsultats obtenus
avec le SCA 2000 ont la mme signification clinique et diagnostique que ceux obtenus
manuellement par la mthode au crochet .
On notera cependant que dans quelques cas de chiens malades et pour des valeurs situes
aux limites de lintervalle des valeurs usuelles, on a obtenu des discordances entre les 2
mthodes. Ces anomalies concernent essentiellement la mesure du temps de CphalineActivateur : en effet, sur les 68 chiens malades tests, on a observ une divergence chez
15 animaux.
Pour 6 dentre eux (chiens n 7, 19, 20, 33, 58 et 67) on note un TCA rfrence normal
et un TCA SCA 2000 augment. Parmi eux, les chiens n 20, 33, 58 et 67 ont un TCA SCA
2000 trs faiblement augment (93 94 s). Le chien n 7, souffrant dune intoxication aux
anti-vitamine K traite 48 heures auparavant avec de la vitamine K probablement vu sont
TCA rfrence sous estim. En effet son TQ est encore assez lev et on pourrait sattendre
ce quil en soit de mme pour son TCA.
On note aussi pour 9 chiens (n17, 24, 28, 31, 41, 46, 50, 55 et 63) un TCA SCA 2000
normal et un TCA rfrence augment. Cette divergence est faible pour 6 dentre eux : TCA
rfrence allant de 14.8 15.5 s cest dire trs modrment allong. Pour les 3 autres,
lallongement est plus marqu ( de 15.6 16.2 s). Ces chiens prsentaient :
Dans la mesure o ces chantillons nont pas t traits diffremment des autres, on peut se
demander si ces anomalies ne sont pas lies au prlvement lui-mme. On sait par exemple
que des variations de paramtres hmatologiques de lchantillon tels que le taux dhmolyse,
la lipmie ou la bilirubinmie sont susceptibles dinfluer lgrement sur les valeurs de TQ et
de TCA mesure laide dun coagulomtre bille dacier et de ractifs du commerce ([15]).
On pourrait donc imaginer que la technique employe par le SCA 2000 soit plus sensible
ces variations.
36
Dautres auteurs voque des perturbations de ces tests lies une anmie marque ou un
hyperviscosit sanguine ([19]).
Un rle possible des PDF est aussi envisager pour expliquer ces perturbations des tests.
Dans le doute, il parat donc souhaitable de renouveler le prlvement et le test en cas de TCA
SCA 2000 compris entre 92 et 100 s, surtout si le contexte clinique et les autres paramtres
biologiques sont vocateurs dun trouble de la coagulation.
ASPECTS PRATIQUES
La mthode employant le SCA 2000 est incontestablement plus pratique que la mthode
chronomtrique :
Elle
ncessite
prlvement
un
effectu,
minimum
il
suffit
de
manipulations :
dallumer
le
lappareil,
Le SCA 2000 est donc un appareil adapt la pratique vtrinaire que se soit dans une simple
cabinet ( pour le diagnostic et le suivi des intoxications aux rodenticides de type anti-vitamine
K par exemple) comme dans une structure beaucoup plus lourde, vocation spcialise telle
quun bloc chirurgical ( pour la surveillance des patients problmes) ou une structure
urgentiste ( pour lvaluation rapide des fonctions hmostatiques dun patient choqu par
exemple).
37
CONCLUSION
Lorsquune exploration de lhmostase savre ncessaire, les temps de Quick et
de Cphaline-Activateur sont parmi les premiers paramtres demands. Le
praticien vtrinaire sadresse classiquement des laboratoires danalyse car les
mthodes manuelles classiques de dtermination de ces temps sont peu pratiques
raliser et les mthodes automatises font appel des appareils issus de la
mdecine humaine (et donc coteux). Le SCA 2000 est donc une alternative
intressante puisquil propose une mthode automatise adapte la pratique de
la mdecine vtrinaire avec un cot plus accessible.
Nous avons donc test un chantillon de 31 chiens sains et de 68 chiens
malades avec la mthode chronomtrique au crochet employe
classiquement au Laboratoire de Mdecine de lEcole Nationale Vtrinaire de
Toulouse et avec la mthode automatise propose par le SCA 2000.
Les rsultats obtenus sont assez concluants, montrant une bonne corrlation
entre les deux mthodes mme si on a pu pour quelques cas dans la mesure du
TCA constater des divergences.
Le SCA 2000, avec des intervalles de valeurs usuelles adapts a cette mthode,
est donc un moyen tout fait valable dexploration de lhmostase chez le chien.
Il est de plus trs intressant car, en se rfrant des valeurs chronomtriques de
normalit, il permet denvisager de ne plus comparer lchantillon un tmoin.
38
ANNEXES
1. Tableau dtaill des rsultats obtenus pour les temps de Quick et de CphalineActivateur par les deux mthodes avec lchantillon des chiens sains .
2. Tableau dtaill des rsultats obtenus pour les temps de Quick et de CphalineActivateur par les deux mthodes avec lchantillon des chiens malades .
3. Schma dutilisation du SCA 2000 ([22]).
39
Annexe 1 : Temps obtenus pour lchantillon des chiens sains (en secondes)
40
41
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
6
6
8
6,2
6
6
6
6,2
8
7,3
6
9,2
5
60
7,8
8,1
7
6,1
6,5
6
8
12
12
16
14
14
15
14
14
18
16
14
27
13
100
19
19
16
16
14
12
19
12
11
16
13,8
15
17
19
15,5
16,3
24
13
23
13
60
17
16,2
15
18
19,8
13
16,8
81
88
91
84
100
110
125
90
152
172
93
101
91
400
109
85
93
114
115
93
110
Annexe 2 : Temps obtenus pour lchantillon des chiens malades (en secondes)
42
43
BIBLIOGRAPHIE
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