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8.10. 10.10.2012
NMR-Spektroskopie
| I | I ( I 1)
Die Magnetquantenzahl mZ
Quantenmechanik:
Ein Spin der Spinquantenzahl I kann im Magnetfeld (2I+1) stabile
Orientierungen einnehmen (stationre Zustnde) die durch die
Magnetquantenzahl mZ charakterisiert sind: mZ= -I, -I+1,-I+2I
I = 1/2
mZ
+ 1/2
= 54,7
- 1/2
I=1
mZ
+1
-1
= 45
Spin-1/2-Kerne
B
E = hB0/2
Auerdem hngt die Energiedifferenz von der Art des Kerns ab.
Kernspin
Hufigkeit [%]
1H
1/2
99.985
26.7519
2H
0.015
4.1066
10B
19.6
2.8746
11B
3/2
80.4
8.5843
13C
1/2
1.11
6.73
14N
99.6
7.2
15N
1/2
0.37
-2.71
17O
5/2
0.04
-3.63
19F
1/2
100
25.18
27Al
5/2
100
6.976
31P
1/2
100
10.8
73Ge
9/2
7.8
-0.9357
79Br
3/2
50.7
6.702
NMR-Spektroskopie
B0
E
exp
exp
N
kT
kT
NMR-Spektroskopie
Chemische Verschiebung
E1
E2
2
1
E3
Unterschiedliche
Resonanzfrequenzen fr
unterschiedliche Kerne
9.4 T
Referenzierung:
ref
[ ppm] 10
ref
6
Puls-FT-NMR-Spektroskopie
z-Magnetisierung als
Summe der einzelnen
magnetischen Momente
Im Gleichgewichtszustand
ist die makroskopische
Magnetisierung parallel
zum angelegten
Magnetfeld
n
n
n
n
Przession im Magnetfeld
M B0
dL
M r F
dt
dI
M
I B0 I B0 sin e
dt
Rotierendes Koordinatensystem
M x M x cos t M y sin t
t
M y
M y cos t M x sin t
L 0 [rad / s ]
Mit der Larmorfrequenz L und der Rotationsfrequenz
des Koordinatensystems 0
Rf-Pulse
Transversale Magnetisierung
Fazit
Transversale Magnetisierung przediert mit der
Larmorfrequenz der Kernspins
Der Magnetisierungsvektor kann mit Hilfe von rf-Pulsen
von der Richtung des ueren Magnetfeldes weg rotiert
werden.
Wird der rf-Puls im rotierenden Koordinatensystem in
Richtung des Magnetisierungsvektors eingestrahlt, so
hat das rf-Feld keinen Einfluss (spin lock).
NMR-Spektroskopie
E1
E2
2
1
E3
3
Unterschiedliche Resonanzfrequenzen
fr unterschiedliche Kerne
Fourier-Transformations-NMR /
rf-Pulse
z
rf-Puls
+
1
+
Fourier-Transformation
s (t ) f k (t ) exp(i 2 k t )
k
Fourier-Transformation
Fourier-Paare
k = 50 Hz
k = 250 Hz
k = 1000 Hz
FT
s (t ) exp(i 2 t )
S ( ) ()
k = 100 Hz
k = 1000 Hz
= 100 Hz
Fk ( )
2
2 2
S ( )
2
2
2
Fourier-Paare: Rechtecksfunktion
sin(2 )
1, if 0 t
Fk ( )
f (t )
2
0, if t
= 1 ms
= 2 ms
Fourier-Paare: Rechtecksfunktion
exp(i 2 t ), if 0 t
s (t )
0, if t
= 5 ms
sin(2 ( ) )
S ( )
2 ( )
Fazit FT-NMR
Je lnger der FID, umso schmaler das Signal
Die Oszillationsfrequenz bestimmt die Lage des
Signals
Die Linienform hngt von der Form des FID ab
Die Form des FID hngt unter anderem von der
Lebensdauer des Kernspinzustandes ab.
FT-NMR- wozu?
Richard R.
Ernst,
Nobelpreis
1991
Frage: Wie lange dauert es, bis wir den nchsten FID aufnehmen knnen?
Relaxation
Zwei Arten der Kernspinrelaxation:
T1: longitudinale Relaxation (Spin-Gitter-Relaxation)
beschreibt die Zeit, bis die Magnetisierung wieder den
Glechgewichtszustad erreicht hat (und der
Magnetisierungsvektor entlang der z-Richtung
ausgerichtet ist).
T2: transversale Relaxation (Spin-Spin-Relaxation)
beschreibt die Zeitkonstante, mit der der die spins
irreversibel (?!?) dephasieren (die Spins haben ihre
Phaseninformation verloren, unter Umstnden ist der
Gleichgewichtszustand aber noch nicht wieder erreicht).
a=100Hz
a=1kHz
1/(1+(2/a)2
Inhomogene Linenverbreiterung:
Jeder Kernspin hat eine etwas andere
Larmorfrequenz
Rekapitulation: Przession
z
rf-Puls
z
y
2
+
+
Unterschiedliche Larmorfrequenzen unterschiedliche Przessionsfrequenzen
Inhomogene Linenverbreiterung:
Jeder Kernspin hat eine etwas andere
Larmorfrequenz
Inhomogen!
Homogen!
Spinecho
Inhomogene Linienverbreiterung:
Lochbrennen
Homogene Linienverbreiterung:
Das gesamte Signal wird gesttigt
Fazit
Transversale Relaxation fhrt zu homogener
Linienverbreiterung
Wenn die Phaseninformation verloren ist, kann sie nicht
mehr zurckgewonnen werden.
Inhomogene Linienverbreiterungen knnen durch einen
180-Puls refokussiert werden (Spinecho).
NH (Amidprotonen)
H,N-HSQC von
KanamycinKinase
(Protein mit 264
Aminosuren).
Jedes Signal
entspricht der
Amidgruppe einer
Aminosure.
(aufgenommen bei
21.1T, oder 900
MHz
Protonenfrequenz)
Dr. Matthias Stoldt
2D-NMR-Spektroskopie
2D-NMR
Prparation: Die Magnetisierung wird angeregt (in die
xy-Ebene gebracht)
Evolution: Die Magnetisierung przediert in der xyEbene, jede Komponente enthlt am Ende der
Evolution eine Phase, die proportional zur
Evolutionszeit und der Larmorfrequenz ist.
Mischen: Durch geeignete Radiofrequenzpulse kann
Magnetisierung zwischen verschiedenen Kernspins
bertragen werden. Dazu knnen J-Kopplungen oder
die rumliche Nachbarschaft ausgenutzt werden. Der
Transfer ist homo-oder heteronuklear mglich.
Detektion: Der FID wird aufgenommen.
2D-NMR-Spektroskopie
2D-NMR-Spektroskopie
2D-NMR-Spektroskopie
ein Signal, das in t1
ebenfalls mit einer
charakteristischen
Frequenz oszilliert.
Dieses Signal lsst sich
selbstverstndlich auch in
t1 fourier-transformieren.
2D-Spektrum
Darstellung als
Hhenlinien
2D NMR-Spektren
Es gibt ein groes Arsenal an verschiedenen 2DNMR-Experimenten, die sich in der Art der
Prparation und der Art des
Magnetisierungstransfers unterscheiden.
2D NMR-Spektren
Homonuklear: Der Magnetisierungstransfer erfolgt
zwischen Kernspins der gleichen Sorte (meist
Protonen)
Heteronuklear: Der Magnetisierungstransfer erfolgt
zwischen verschiedenen Kernspins (1H/13C oder
1H/15N)
Verschiedene Transfermechanismen fr die
Mischsequenz:
Durch Bindungen (Information ber die chemische Struktur)
Durch den Raum (Information ber die rumliche Struktur in
Proteinen)
Homonukleare 2D-NMR-Experimente
COSY (COrrelation SpectroscopY): Nutzt J-Kopplungen
aus, Kreuzkorrelationssignale zwischen Protonenspins,
die ber 3 Bindungen miteinander verbunden sind.
TOCSY (TOtal Correlation SpectroscopY):
Magnetisierungstransfer zwischen allen Kernspins, die
ber J-Kopplungen miteinander verbunden sind
NOESY (Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY):
Transfer durch den Raum ber dipolare Kopplungen
(Abstandsinformation)
TOCSY
1H
von 1-13C-Glucose
H1
H1
2xH6
H6
H3 H3
H5
H4
H1
H1
H4
H5
H2
H1
H2
H1
Abstandsinformation
J-Kopplungen geben Auskunft ber chemische
Struktur und sind daher fr die chemische Analyse
organischer Molekle sehr wertvoll
Die chemische Struktur von Proteinen sollte
allerdings bekannt sein, bevor es mit NMRSpektroskopie untersucht wird.
Wie bekommt man Abstandsinformation?
Wir erinnern uns: Atomkerne sind kleine
Magnetnadeln, die als solche auch ein Magnetfeld
um sich herum aufbauen.
Frage: Was spren Nachbarkernspins von diesem
Magnetfeld?
Dipolare Kopplungen
B0
Dipolare Kopplungen
B0
Fazit Dipolkopplungen
Das Magnetfeld, das ein Kernspin von seinem Nachbarn
sprt, hngt von drei Dingen ab
Dem Kernspinzustand des Nachbarn (mZ)
der Entfernung r der beiden Spins
der relativen Orientierung des Abstandsvektors zum ueren
Magnetfeld (charakterisiert durch den Winkel , zwischen r
und dem ueren Magnetfeld)
D mZ
B0
rAB
1 2
rAB
3cos 2 1
Kreuzrelaxation, NOE
2
2
2
c
3
W1I I S6
r
20
1 I2 c2
c
1 I2 S2 2
W0
2 2
6
10
r
1 I S c
Nullquantenkreuzrelaxation
(groe Molekle )
Dipolar gekoppelte
(rumlich benachbarte)
Kernspins knnen durch den
Raum Magnetisierung
miteinander austauschen
c
3 I2 S2 2
W2
2 2
6
5
r
1 I S c
Doppelquantenkreuzrelaxation
(kleine Molekle )
2D NOESY-Spektroskopie
rAB
Kreuzsignale:
- zuordnen
- kalibrieren
- quantifizieren
Ausschnitt aus einem 2D NOESY; zeigt
Kreuzsignale zwischen Amidprotonen
und aliphatischen Protonen
2D-NOESY- schematisch
Fazit 2D-NMR
Zweidimensionale NMR-Spektroskopie bietet ein Arsenal
an Mglichkeiten, Informationen ber Konnektivitten (JKopplungen) oder rumliche Nhe (Kopplungen durch
den Raum) in einem Molekl zu bekommen.
Die Methoden lassen sich noch erweitern:
Heteronuklearer Transfer (von H auf N oder C)
Dreidimensionale NMR-Spektroskopie: Das Spektrum ist ein Wrfel,
in dem jeder Punkt im Raum eine gewisse Signalintensitt hat.
Protein-Flssig-NMR-Spektroskopie
Aufbau Puls-FT-NMR-Spektrometer
-> in Jlich whrend Praktikum
Kartesische
(Raum)Koordinaten aller
Atome zusammen mit der
Kenntnis der kovalenten
(chemischen) Struktur
oder
Torsionswinkel zusammen
mit der Kenntnis der
kovalenten Struktur
Eigentlich Konformation!
Verschiedene Betrachtungsebenen:
- Primrstruktur (Aminosuresequenz, kovalente (chemische) Struktur
- Sekundrstruktur (Konformation des Proteinrckgrates
- Tertirstruktur (gesamte Struktur, Faltung)
- Quartrstruktur (Oligomere, Komplexe, supramolekulare Strukturen)
Proteinstruktur bestimmt
Funktion des Proteins
(Enzyme, Ionenkanle,
Rezeptoren, Strukturproteine,
Regulationsproteine etc.;
Proteinfehlfaltungen ->
Krankheiten)
Vertieftes Verstndnis nur
mit/durch die 3D Struktur
Protein-NMR-Probe
Konzentration: ca. 1 mM
Reinheit > 95%
ab ca. 50 Aminosurereste -> Isotopenanreicherung mit
13C und 15N: warum?
monodisperse Probe (keine Aggregation, keine
verschiedenen Zustnde)
langzeitstabil
Protein-NMR-Probe
Transformation
Protein-NMR-Probe
Protein-NMR-Probe
Zellaufschlu
Proteinreinigung (chromatographische Methoden)
Konzentrierung der Proteinprobe (Ultrafiltration)
Vorcharakterisierung der Probe (Reinheit: SDS-PAGE,
lichtspektroskopische Methoden, Lichtstreuung usw.)
13C/15N-Isotopenanreicherung:
spezielle, knstliche
Wachstumsmedien fr Bakterienkulturen ->
Minimalmedium, z.B. M9 (Kohlenstoffquelle z.B. 13CGlukose, Stickstoffquelle 15N-Ammoniumsalze)
Protein-NMR-Probe
Alternative Expressionssysteme:
- Hefe- oder Insektenzellkulturen (posttranslationale
Modifikationen eukaryotischer Proteine) -> sehr teuer
- Zellfreie Expression (Zellextrakte mit allen wichtigen
Komponenten)
Aufnahme NMR-Spektren
1D Protonenspektrum (Lieblingskern: hchste Empfindlichkeit)
P
methyl
aliphatic
H
backbone HN
aromatic
side-chain HN
Ausweg: 2D Protonen-Spektren
2D 1H-1H-TOCSY (28 Aminosurereste-Peptid, Zink-Finger)
Ausweg: 2D Protonen-Spektren
2D 1H-1H-COSY (128-aa Protein, Lysozym)
Ausweg: 2D Protonen-Spektren
2D 1H-1H-NOESY (85 aa, HPr)
(15N) [ppm]
(1H) [ppm]
(15N) [ppm]
=1/(4*1JHN)
4=1/1JHN=1/90-95Hz=10-11 ms
(1H) [ppm]
3D Zuordnungsexperimente
13C
15N
1H
3D HNCACB
3D Zuordnungsexperimente
C(i)
C(i-1)
C(i)
C(i-1)
3D HNCACB
3D Zuordnungsexperimente
3D Zuordnungsexperimente
2D (1H-15N)-HSQC zugeordnet!
3D Zuordnungsexperimente
Struktureinschrnkende Parameter
(experimentell aus NMR-Spektren!!)
Struktureinschrnkende Parameter
Torsionswinkel-Einschrnkungen aus 3J-Kopplungskonstanten -> Karplus-Beziehung
Beispiel: Torsionswinkel des Proteinrckgrates aus3JHN-H
Struktureinschrnkende Parameter
Torsionswinkel-Einschrnkungen aus 3J-Kopplungskonstanten -> Karplus-Beziehung
Struktureinschrnkende Parameter
Struktureinschrnkende Parameter
Struktureinschrnkende Parameter
HN-C=0,5
Hz
Struktureinschrnkende Parameter
1H-1H-Abstnde
W
6
20
1 I2 c2
r
I
1
c
1 I2 S2 2
W0
2 2
r6
10
1 I S c
Nullquantenkreuzrelaxation
(groe Molekle )
c
3 I2 S2 2
W2
2
5
r6
1 I S c2
Doppelquantenkreuzrelaxation
(kleine Molekle )
Struktureinschrnkende Parameter
1H-1H-Abstnde
rAB < 5
Kreuzsignale:
- zuordnen
- kalibrieren
- quantifizieren
Struktureinschrnkende Parameter
1H-1H-Abstnde
3D (1H-1H-15N)-NOESY-HSQC
INOE ~ r-6
1H
[ppm]
2D (1H-15N)-HSQC
Struktureinschrnkende Parameter
NOEs und Sekundrstruktur-Elemente: -Helix
Struktureinschrnkende Parameter
NOEs und Sekundrstruktur-Elemente: -Helix
Struktureinschrnkende Parameter
NOEs und Sekundrstruktur-Elemente: -Faltblatt parallel
Struktureinschrnkende Parameter
NOEs und Sekundrstruktur-Elemente: -Faltblatt antiparallel
Struktureinschrnkende Parameter
Sekundrstruktur-Elemente zusammen gefat
Strukturberechnung
Mglichst alle gemessenen NOEs zuordnen
1H
[ppm]
HNOE
HN
Strukturberechnung
1H
[ppm]
HN V275
Strukturberechnung
1H
[ppm]
HG1 V275
HG2 V275
HB V275
HA V275
Strukturberechnung
1H
[ppm]
HG1 V275
HG2 V275
A294
HB A294
P292
F295
HB V275
HBs F274
HA P292
HA V275
HA F274
HA F295
HD F274
HN A294
HN F295
HN V276
F274
V276
HN F274
HN V275
Strukturberechnung
Mglichst alle gemessenen NOEs zuordnen
Strukturberechnung
Die potenzielle Energie einer Modell-Struktur: Moleklmechanik / Kraftfeld
Strukturberechnung
Die potenzielle Energie einer Modell-Struktur: Moleklmechanik / Kraftfeld
Strukturberechnung
Die potenzielle Energie einer Modell-Struktur
plus zustzliches Potential (Energie) fr NOEAbstandseinschrnkungen
Strukturberechnung
Molekulardynamik-Simulation
Kinetische Energie folgt einem Temperaturprotokoll
Lsen der Newtonschen Bewegungsgleichungen fr alle
Atome i im Potentialfeld U
P
Koordinaten des Protein-Modells ndern sich mit t
Ziel: Minimierung der potenziellen Energie
Strukturberechnung
Molekulardynamik-Simulation
Movie!
Strukturberechnung
Strukturschar
cAMP-freie CNBD
Konformerenschar (15 Strukturen)
r.m.s. Abweichung zur mittleren Struktur:
Proteinrckgrat 0.037 nm
aller Schweratome 0.070 nm
Strukturberechnung
Validierung
- Anzahl und Strke von Verletzungen (Nichteinhalten) der
experimentellen Einscrnkungen
- Ramachandran-Plot (erlaubte -Bereiche)
- Allgemeine Geometrie der Struktur, van-der-WaalsZusammenste
- Machen lokale Interaktionen Sinn? (polare WW -> HBrckenbind., Salzbrcken; unplolare WW ->
hydrophober Kern)
- Beantwortet die Struktur biologische Fragen?
P
.
koff gro
koff klein
P L P' L
k off
.
. ..
15N
CNBD
cAMP-frei
CNBD
+ 250 M cAMP
1H
cAMP-gebundene CNBD
NMR-Struktur
(GABAA-Rezeptor
assoziierte Protein
GABARAP)
InteraktionsPartner (Trp)
Interaktionsanalyse
Zeitskalen
Alle
Zustandsnderungen,
die langsamer als die
spektrale Zeitskala
sind, fhren dazu,
dass im Spektrum
zwei getrennte
Signale beobachtet
werden.
Alle Zustandsnderungen,
die schneller als die
spektrale Zeitskala sind,
fhren dazu, dass im
Spektrum ein Mittelwert
beobachtet wird (z.B.
Entkopplung, dipolare
Kopplungen, Austausch
von Protonen)
Wechselwirkungen
Zeeman-Wechselwirkung HZ: Wechselwirkung mit dem
ueren Magnetfeld
Chemische Verschiebung HCS: Modulation des ueren
Magnetfeldes durch die Elektronenhlle
Magnetfelder benachbarter Kernspins, die im Magnetfeld
unterschiedliche stationre Zustnde einnehmen
knnen:
Durch den Raum (Dipolkopplungen) HD
ber Bindungen vermittelt (indirekte, oder JKopplungen) HJ
rk
B0
NMR Wechselwirkungen
hngen von der Orientierung
im Magnetfeld ab
I A B0
A11
A A12
A
13
A21
A22
A23
A31
A32
A33
CS
B B0
BxCS xx
CS
By yx
BzCS zx
xy xz 0 xz B0
yy yz 0 yz B0
zy zz B0 zz B0
Tensoren
Axx
A 0
0
0
Ayy
0
0
Azz
Tensoren
Jeder Tensor ist durch drei Hauptwerte Axx, Ayy und Azz sowie drei Winkel,
die ihn relativ zum Bezugskoordinatensystem orientieren, charakterisiert.
Alternativ zu den drei Werten Axx, Ayy und Azz lassen sich auch drei andere
charakterisitsche Gren angeben, die die Form des Tensors anschaulicher
wieder geben und folgendermaen von den drei Tensorhauptwerten
abhngen:
Azz
Axx
Ayy
Chemische Verschiebungs-Anisotropie
Die chemische Verschiebung hngt von der Orientierung des Molekls im
Magnetfeld ab (CSA = Chemical Shift Anisotropy)
obs
1 3
iso (3cos 2 k 1) kk
3 k 1
Chemische Verschiebungs-Anisotropie
xx yy
yy
>0
zz
xx
xx yy
0
zz
yy
zz
yy
0.5
xx
zz
xx
xx
zz
yy
zz
yy
0.5
xx
1
zz
Dipolare Kopplungen
B0
Dipolare Kopplungen
B0
Dipolare Kopplungen
H ~
D
1 2
r
(1 3cos )
2
Dipolare Kopplungen
B0
H ~
D
r
1 2
r3
(1 3cos 2 )
Pulverspektrum
eines isolierten
Spinpaares
Linienverschmlerung(I): Orientierung
Orientierte Proben
PISEMA : 2D Correlationspekrum (dipolare NH-Kopplung) (Abstand bekannt)
mit 15N Verschiebung korelliert (CSA tensor bekannt)
Orientierungen aller AMidgruppen.
15N
CP
Homonuclear
Decoupling
DEC
15N
CP
t1
t2
NH Dipolar Coupling
1H
Powder Spectrum
Chemical Shift
Orientierte Lipiddoppelschichten
60
Circular patterns
(PISA Wheels)
depend on the tilt
angle of the helix
axis
30
250
90
150
50
250
15N Chemical Shift (ppm)
150
50
Ile
simulated
Ala
Val
Leu
1 3
iso (3cos 2 k 1) kk
3 k 1
54.7
arccos
1
54.7
3
HD ~
1 2
r3
(1 3cos 2 )
Rotationsseitenbanden: Warum?
z
rf-Puls
z
y
2
+
+
Unterschiedliche Resonanzfrequenzen unterschiedliche Przessionsfrequenzen
Verschiedene Orientierungen
y
x
MAS
y
x
Rotationsechos
2 kHz
4 kHz
rot
rot
FT
rot
4 kHz
Inhomogene Linienverbreiterung
a=100Hz
a=1kHz
1/(1+(2/a)2
Inhomogen!
Homogen!
Inhomogene Linienverbreiterung:
Lochbrennen
Homogene Linienverbreiterung:
Das gesamte Signal wird gesttigt
Flip-flop-bergnge
(Nullquantenbergnge)
Im 3D-Netzwerk wird
Magnetisierung sehr schnell
ausgetauscht und durch die
gesamte Probe weitergereicht.
Spindiffusion.
H ~
D
1 2
r3
Dipolkopplungen-isoliertes Spinpaar
y
x
Dipolkopplungen - Netzwerk
y
x
NH
Aromaten
+ NH3
CO2+H N
3
H
2H
HH
1 HN +
H1
DQ(SPC5)
H2
NH2
Konsequenzen
Hochauflsende Festkrper-NMR-Spektroskopie von
Protonen ist oft nicht realisierbar
Stattdessen: 13C und 15N Isotopenmarkierung
Heteronukleare Kopplung zum Protonennetzwerk macht
auch 13C- und 15N-Linienbreiten homogen
Protonenentkopplung
Einstrahlung von rf-Strahlung auf dem 1H-Kanal whrend der
Evolutions-und Detektionsperioden
Dadurch wechseln die Protonen so hufig ihren Spinzustand,
dass benachbarte 13C- und 15N Kerne nur noch einen gemittelten
Duchschnittsuzstand sehen.
NH
Aromaten
+ NH3
CO2H
+H N
3
2H
HH
1 HN +
H1
DQ(SPC5)
H2
NH2
CO
Isotopenmarkierung
Festkrper-NMR:
Experimente
A. Pines
E. Hahn
J.S. Waugh
1H
X
1H
90
,RF
S,RF
Signalverstrkung
Selektion bestimmter
Spinpaare
Durch gleichzeitiges
Einstrahlen eines rf-Feldes auf
dem X-Kanal wird der
Polarisationstransfer auf X
begnstigt, wenn I,RF = S,RF
CP MAS
1H
90
,RF
S,RF
Magnetisierungstransfer ist
mglich, wenn:
I-S/R=-2
-1
Hartmann-Hahn-Bedingung
CP MAS
1I 1S kR , k 1,2
IS=MAS
Signal buildup
700
1H
1.5
600
2.5
3.5 Distance
in
500
400
300
200
100
0
Cross-Polarization 2D
I
t1
Entkopplung
CP
t2
CP
HETCOR-Spektren:
Korrelation zwischen dipolar
gekoppelten Kernen
CP fr heteronuklearen Transfer
Selektiver Transfer auf CO oder C
mglich: Specific-CP
N/C transfer:
intraresidue N/C
correlation
N/CO transfer:
interresidue N/C
correlation
Baldus, M.; Petkova, A. T.; Herzfeld, J.; Griffin, R. G. Mol. Phys. 1998, 95, 1197-1207.
2D Spektren
Wiedereinkopplung (Recoupling)
obs
1 3
iso (3cos 2 k 1) kk
3 k 1
54.7
arccos
1
54.7
3
HD ~
1 2
r3
(1 3cos 2 )
Dipolar Recoupling
Homonuklear:
Double-quantum Hamiltonian:
Rotational resonance
rotary resonance
HORROR
RFDR
C-Sequences (SPC5, POST-C7 ect)
R-sequences (R18, R14)
Heteronuklear:
REDOR
Zero-quantum Hamiltonian:
HZQ = deff (I1+I2- + I1-I2+)
Heteronukleare Wiedereinkopplung
Dipolkopplungen-isoliertes Spinpaar
y
x
REDOR Recoupling
y
x
REDOR Abstandsmessung
15N
Abstandsmessung
13C
REDOR Signal:
dephasiert aufgrund der
Dipolkopplung
13C
R.G. Griffin
13C
13C 2
RR Bedingung
Symmetrie-basierte
Pulssequenzen
M. H. Levitt
C-Sequenzen
R-Sequenzen
t1
Recoupling
t2
k
k
Doppelquantenspektroskopie
1
DQ excitation
rec
2
t1
DQ reconversion
t2
2
1
0
-1
-2
Ohne t1-Evolutionszeit:
Doppelquantenfilter (siehe Praktikum)
Doppelquantenspektroskopie
1
rec
DQ excitation
t1
DQ reconversion
2+3
t2
Keine Diagonalsignale.
1+3
1+2
exc
t1
mix
t2
Fazit
Die Ausmittelung durch MAS kann durch rotor-synchronisierte rfFelder ausgeschaltet werden.
Festkrper-NMR-Spektroskopie von
Biomoleklen Wozu?
Heise, H.; Hoyer, W.; Becker, S.; Andronesi, O. C.; Riedel, D.; Baldus, M., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2005, 102, 15871-15876.
Homonuklear:
SD, DQ-mixing
Intraresidue transfer
-> spin systems
Einquantenkorrelation
CO
C
C
Doppelquantenkorrelation
CO
20
40
60
160
180
Luca, S.; Heise, H.; Baldus, M. Acc. Chem. Res. 2003, 36, 858-865.
C
Tripeptid:
Ala-Gly-Gly
DNP
Dynamic Nuclear Polarization (historischer Name, nicht
wirklich aussagekrftig): Magnetisierung wird von
Elektronen auf Kernspins bertragen
Der Original-Overhauser-Effekt beruht auf dem
Magnetisierungstransfer von Elektronen auf Kernspins
durch Kreuzrelaxation (Elektronen-Kern-NOESY)
Overhauser-Effekt: Doppelquanten-Kreuzrelaxation
Solid-Effekt: Verbotene bergnge werden angeregt
Cross-Effekt/Thermal mixing: Dreispinprozess