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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

Facultad de Ciencias de la Salud


Escuela Profesional de Medicina Humana
Ctedra de Fisiologa Humana
GUA DE PRCTICAS
de
FISIOLOGIA HUMANA
Autores:

Docentes del Curso


Dr. Carlos Ramrez Velasco
Dra. Pedro Nez Huaman
Dr. Enrique vila Zamora
Dr. Edgar Zrate Sez

LIMA - PER

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA HUMANA


OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN
ANIMALES Y SERES HUMANOS.
MANEJO DE ANIMALES DE
EXPERIMENTACION.
Introduccin
Definicin de Bioseguridad:
Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar seguridad al personal que trabaja en
salud frente a los diferentes riesgos producidos por agentes: biolgicos, fsicos, qumicos y mecnicos.
Agentes de riesgo o causantes de dao: agentes biolgicos trasmitidos por ingesta, inhalacin, inoculacin,
y por contacto directo a travs de piel y mucosas.
Agentes fsicos y mecnicos: Temperaturas extremas, radiaciones ionizantes, contacto y conexiones
elctricas, defectuosas, vidrios rotos.
Agentes qumicos: corrosivos, txicos, carcinognicos, inflamables, explosivos.
La Bioseguridad implica una accin de conjunto: Todos deben cumplir las normas de Bioseguridad: "El
descuido de una persona es el riesgo de todos"
Riesgo Biolgico: es la probabilidad de infectarse con un agente patgeno (agente patgeno se llama a
toda aquella noxa que es capaz de producir una enfermedad en la actividad laboral.
Exposicin: Es un contacto que implica riesgo con un patgeno capaz de trasmitirse por la va donde se
est produciendo la exposicin.
Propsito de la Bioseguridad:
Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las actividades de cada rea de
trabajo en salud para prevenir las exposiciones a fluidos con riesgo biolgico y vigilancia del
cumplimiento de las normas de bioseguridad. Adems promover, sugerir y establecer polticas que apoyen
la educacin continua de los trabajadores de salud.
Debe tenerse un suministro oportuno y continuo de insumos necesarios para la proteccin.
La disponibilidad de agua potable es primordial.
Disponibilidad de lavamanos cerca del rea de atencin de pacientes Laboratorio de trabajo.

PRACTICAS DE SEGURIDAD
Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiolgico o ingresa a l debe seguir reglas de seguridad.
Las normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no solamente para la acreditacin acadmica,
sino porque consisten en prcticas que otorgan seguridad y proteccin al personal, alumnos e
investigadores que trabajan en los laboratorios bioqumicos, fisiolgicos, bacteriolgicos, biolgicos,
qumicos, etc. Muy especialmente en el campo mdico donde trabajamos con muestras material
biolgico que es considerado potencialmente patgeno patgeno. La mxima seguridad y proteccin es
necesaria en estos casos
PRACTICAS GENERALES
Se prohbe fumar, comer y aplicarse cosmticos, para evitar la diseminacin de agentes infecciosos o
productos qumicos txicos de las mallas hacia la boca. Con el fin de evitar el contacto con agentes
infecciosos o diseminarlos, debe utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo,

mandil, la bata de laboratorio. Estas prendas de proteccin externa no deben usarse fuera del laboratorio.
Los zapatos han de ser de punta y taln cerrado. No es conveniente que las personas que trabajan en el
laboratorio usen lentes de contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que pueden
producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que las sustancias permanezcan ms
tiempo en la crnea.
Se recomienda el uso de lentes de proteccin o protectores para la cara a las personas que usan lentes de
contacto, en particular si hay alto riesgo de vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyera de tipo colgante,
el cabello largo y barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u otras
superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con movimiento, como mquinas rotatorias o
centrifugas. Se prohibe estrictamente pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier
otra sustancia biolgica debern usarse pipetas manuales automticas.
DERRAMES
.
.
Es necesario desarrollar y tener polticas escritas y procedimientos para instruir a los alumnos y a los
empleados acerca de la manera de manejar derrames qumicos y biolgicos. Existen en el comercio
estuches con insumos para ambos tipos de derrames.. Si no existen tales normas en la institucin el
laboratorio debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo.
LAVADO DE MANOS
El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminacin de agentes infecciosos.
Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es necesario. Por que es posible que stos tengan huecos
microscpicos. Al tratar con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos
aunque se utilicen guantes.
LIMPIEZA
No debe permitirse que la basura, los desperdicios biolgicos, infecciosos. y el material de vidrio sucio se
acumulen en grandes cantidades en el laboratorio. Los recipientes con muestras de desecho y agentes
etiolgicos deben taparse cuando no se estn empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las
superficies de trabajo con algn desinfectante al comenzar y terminar cada turno. El personal de
laboratorio fisiolgico es responsable de mantener el rea de trabajo limpia y sanitaria, aunque haya
servicio de limpieza adicional por parte de la institucin.
ETIQUETAS Y SEALES
Todos los recipientes que contienen productos qumicos deben etiquetarse con claridad, indicando el
nombre del producto y cualquier precaucin para su manejo. Las reas en que se almacenan productos
inflamables, peligrosos o txicos y carcingenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas
claramente. Las reas en que se almacenan o analizan sangre o liquidos corporales deben estar marcadas
claramente con el signo de riesgo biolgico.
DESECHO DE DESPERDICIOS
Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biolgicos. El desecho de materiales
biolgicos, como desperdicios infecciosos, se examina y regula en la actualidad por leyes especficas del
Ministerio de Salud Pblica.
AGUJAS Y OBJETOS PUNTIAGUDOS.
Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo fsico de infeccin potencial para el personal
de laboratorio fisiolgico. Todas las agujas desechables y dems objetos punzantes deben colocarse en un
reclpl9nte resistente a la perforacin y a prueba de fugas, marcado con el smbolo de riesgo biolgico.
Estos recipientes se descartan, siguiendo las polticas de la institucin, cuando estn llenos hasta la mitad o
las tres cuartas partes. La mayora de las instituciones incineran los recipientes que contienen objetos
punzantes. Inmediatamente despus de usada una aguja deber incinerarse y para ello existen en la
actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados destructores de agujas. Nunca, deber
reenfundarse volverse a colocar la cubierta de las agujas a menos que se utilice algn dispositivo como
pinzas diseadas para este fin, para evitar la puncin cutnea accidental. Las agujas nunca deben cortarse,
ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de otros lquidos al medio.

SEGURIDAD CONTRA INCENDIOS


Tipos de Incendio
En el laboratorio Fisiolgico u otros laboratorios biolgicos se requieren lquidos inflamables y
combustibles para ciertos procedimientos, y en ellos tambin existe el riesgo potencial de incendios
elctricos y de basura. El cientfico del laboratorio debe comprender estos peligros y la manera de
afrontarlos en caso de urgencia. Los incendios se clasifican de la clase A a la D.
Los incendios de clase A ocurren con combustibles ordinarios, como madera o papel; los de la clase B
ocurren con lquidos inflamables; en los de la clase C participan circuitos elctricos energetizados, sin
importar el combustible; y los de la clase D, son producidos por metales combustibles como el sodio. Para
cada tipo de incendio se requiere un extinguidor diferente y adecuado con el fin de controlar de manera
eficiente el fuego y evitar que se ste se extienda.
Extintores Extinguidores para incendios. Clases.
Los extintores contra incendios contienen diferentes sustancias y estn marcados segn el tipo de incendio
para el que deben emplearse. Los extintores clase A estn llenos de agua y nunca deben utilizarse para
incendios de tipo elctrico. ya que el agua puede conducir la electricidad de regreso a la persona que tiene
el extintor en las manos. Los extintores clase B contienen productos qumicos secos, espuma acuosa que
forma una capa (AFFF) o dixido de carbono. Los extintores clase C estn llenos de dixido de carbono o
Halon; los de la clase D de un polvo seco especial que contiene un enlazante termoplstico que permite
que el agente forme una corteza slida al calentarse. Hay extintores que pueden emplearse para Incendios
de clases A ,B y C. Contienen un polvo seco y pueden utilizarse con eficacia y seguridad para las tres
clases de incendios. Generalmente este tipo de extintores es el que se compra para uso en el hogar o en las
oficinas. Sin embargo, si se emplea para incendios de equipo elctrico en el laboratorio, es probable que
sea difcil o imposible eliminar posteriormente dicho polvo de los instrumentos. Por tanto, se recomiendan
los extintores de dixido de carbono para incendios de equipo elctrico.
Causas de incendio y su Prevencin
Las causas fundamentales de incendios en el laboratorio son descuido, falta de conocimiento acerca de los
productos qumicos que se utilizan, permitir que se efecten procedimientos sin.
la vigilancia adecuada, sobrecarga de circuitos elctricos , llamas de gas abiertas. Es necesario impartir
peridicamente conferencias para instruccin sobre seguridad en el trabajo, con el fin de recordar a los
empleados la manera segura de proceder para evitar incendios y otros tipos de accidentes.
En caso de que se produzca un incendio es necesario ponerse en contacto con el departamento de
bomberos y solicitar ayuda antes de intentar extinguirlo, Se pierde tiempo importante cuando se trata de
apagar el incendio primero, y despus se solicita ayuda. Los pasos que deben seguirse en caso de incendio
son:
1. Rescatar a cualquier persona que se encuentre en peligro.
2. Aislar el incendio cerrando alguna puerta.
3. Solicitar ayuda.
4. Intentar extinguido.
5. Evacuar las instalaciones en caso de que no se pueda apagar el fuego
Por supuesto, cuando hay varias personas presentes, estos pasos pueden llevarse a cabo de manera
simultnea y rpida en un esfuerzo conjunto. Es necesario adiestrar al personal de laboratorio en el uso de
los extintores contra incendios. En general, el departamento de incendios de la localidad o el comit de
seguridad de la institucin proporciona este entrenamiento.

SEGURIDAD BIOLOGICA
Proteccin Personal
La dispersin epidmica del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha revivido la preocupacin
acerca de las enfermedades que se transmiten por la sangre entre las personas que trabajan en el
laboratorio. Se sabe que las personas que laboran en los laboratorios mdicos en general, fisiolgicos,

bacterilogos, bilogos y otros relacionados con la salud en general, conforman un grupo de alto riesgo
para infecciones por virus de hepatitis B relacionadas con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana
(HIV). En 1987 el Centro de Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron
recomendaciones para proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de adquirir la
infeccin por HIV y se actualizaron nuevamente en 1988. Entre las recomendaciones se aconseja que "se
tomen precauciones congruentes al manejar sangre y lquidos corporales de todos los pacientes y las
muestras que se obtengan".
Esto se conoce como precauciones universales. Las recomendaciones incluyen el uso de equipo para
proteccin personal, como guardapolvos, mandiles, batas, guantes descartables y protectores para los ojos
al manipular sangre y lquidos corporales en el laboratorio. La revisin de los CDC en 1988 recomend
usar equipo de proteccin personal para manejar todas las sustancias biolgicas y animales. Deben tratarse
todas las secreciones y excreciones corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras
enfermedades adems de HBV y HIV que se transmiten a travs de diversos lquidos del organismo
humano y de los animales.
En 1991 la OSHA public una regulacin final la Occupational Exposure to Bloudborne Pathogens
(Exposicin ocupacional a patgenos que se transmiten por la sangre). Esta regla indica que el patrn debe
proporcionar equipo de proteccin personal que no permita que los materiales potencialmente infecciosos
entren en contacto con la ropa. la piel, los ojos y la boca del trabajador en condiciones normales de uso. La
regla tambin indica la manera correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo
biolgico y seala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el tratamiento tras alguna exposicin a
todos los empleados que corran este riesgo.
Adems de describir equipo de proteccin personal, dicha norma incluye instrucciones para el lavado de
manos, transporte de muestras, uso de pipetas, forma de recoger derrames, desechos de desperdicios y
descontaminacin del equipo.
Derrames
Es necesario que las personas que limpian algn derrame biolgico utilicen guantes descartables y bata de
laboratorio. Se colocan toallas desechables sobre el derrame y se vaca desinfectante sobre ellas. Tras
dejarlo reposar algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material absorbente (los
cojinetes absorbentes son tiles para derrames grandes) A continuacin se coloca el material contaminado
en un recipiente para riesgos biolgicos: bolsas plstico grueso color rojo en el Per y bolsa de color
negro para basura domstica.
Despus de absorber la mayor parte de material, el rea se limpia con un desinfect8nte de fuerza
intermedia o alta, por ejemplo, dilucin de Leja 1:10. La solucin desinfectante se absorbe con material
desechable. El rea se enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente preparar
un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biolgico que contenga todos los materiales
necesarios para efectuar la limpieza de este tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan
dichas muestras.
SEGURIDAD QUIMICA
Hoja De Datos Sobre Seguridad De Materiales
En Agosto de .1987.)a OSHA enmend la norma Federal Hazard Communication Standard
29CFR 1919: 1200 (Rigllt to Kriow/HCS Standard), hacindola extensiva a todas las industrias,
incluyendo las instalaciones para el cuidado de la salud. Esta norma establece que los responsables de cada
rea determinen si se utilizan productos qumicos peligrosos en el trabajo y proporcionen a los empleados
hojas con datos de seguridad en el uso del material riesgoso y marquen adecuadamente los recipientes que
contienen el producto, indicando el riesgo, y se mantendr una lista de productos qumicos peligrosos, es
decir, un inventario de productos qumicos, y proporcionen al empleado informacin y entrenamiento, y
desarrollen un programa de comunicacin de riesgos por escrito.
Informacin que contiene la hoja de datos de seguridad para cada material grupo de sustancias
relacionadas, de uso en Laboratorio fisiolgico y otros Laboratorios biolgicos.
1. Identificacin del producto qumico (nombre qumico, y sinnimo y/o nombre vulgar.)

2. Ingredientes peligrosos
3. Datos fsicos
4. Datos de incendios y explosiones
5. Informacin de riesgos para la salud
6. Datos de reactividad
7. Procedimientos para derrames, fugas y desecho
8. Informacin de proteccin personal.
9. Precauciones especiales y comentarios
Manejo de Animales
La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de laboratorio es la instruccin
prctica directa. Pueden enunciarse aqu algunos principios generales.
El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos. cobayas. ratones)., pequeos
araazos cuando el animal trata de escapar; pero raras veces intenta ste lesionar al operador. En el caso de
las ratas, las cosas cambian; pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. y producir mordeduras
peligrosas, Tambin los monos deben manejarse con cuidado. En cualquier caso, es indispensable que aun
los pequeos araazos de animales se traten en forma adecuada; si el animal ha sido inyectado con
material patolgico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas medidas para proteger al
personal contra las consecuencias de la mordedura. Por lo tanto, debe reportarse de inmediato, y tratarse
mdicamente cualquier lesin, por pequea que sea.
Toma de Muestras de Sangre
La muestra de sangre para las pruebas de laboratorio pueden tomarse en diferentes sitios: capilar o
perifrica, venosa y ocasionalmente arterial. Esta muestra se utiliza para la valoracin de diversos
parmetros del medio interno que puede llevarse a cabo en sangre completa o una fraccin de la misma.
sea plasma o suero. Si la muestra sangunea no se recoge con una tcnica adecuada puede ocurrir que los
exmenes proporcionen informacin inexacta o incorrecta bien que la muestra se rechace y sea necesario
repetir la puncin. Deben tomarse precauciones en todos los casos por lo que la obtencin y manipulacin
de las muestras se harn con guantes quirrgicos descartables..
Sangre Capilar o Perifrica
La sangre que suele llamarse capilares, al menos parte arteriolar se obtienen por o general de: a). La yema
del dedo; b). el borde del lbulo de la oreja; y c). el taln en los nios pequeos En cualquier de estos
sitios el rea debe de estar tibia (ni fra ni congestionada) ya que de otra manera la composicin de la
sangre varia por la xtasis o la dilucin. Sin embargo debe recordarse que aun ejecutando una buena toma,
los valores de los parmetros difieren entre la sangre capilar y la venosa. Usar alcohol y lancetas
descartables.
TECNICA
1. Limpie la piel con una torunda de algodn con alcohol de 70 o con otro desinfectante adecuado
y deje secar.
2. Haga una puncin profunda (2- 3 mm con una lanceta o aguja estril desechable. La puncin
debe efectuarse de un golpe y rpidamente para que resulte casi indolora (sobre todo el borde del
lbulo de la oreja).
3. La primera gota de sangre se elimina por que contiene desechos tisulares. La sangre no debe
exprimirse o se obtendr una muestra diluida; peso s puede hacerse presin a distancia del sitio
de la puncin. Tras concluir la toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que
debe presionar sobre el sitio de lesin.
SANGRE VENOSA
Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas ante cubitales, pero con frecuencia tambin se
puncionan las venas de las manos las muecas o cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes
prematuros es posible punzar las venas del cuero cabelludo la yugular externa o la femoral) Las venas
deben examinarse cuidadosamente; si son profundas y no se palpan con facilidad se descartan. Para

facilitar el examen se usa un torniquete de jebe.


EQUIPO.
La muestras se toman previa desinfeccin con alcohol y con jeringas desechables con aguja de calibre 19
20 x1 (cuanto ms bajo es el numero mas es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar
la muestra y las de mayor grosor se reservan para la obtencin de sangre para transfusiones).
TECNICA
1. El paciente debe estar acostado o sentado cmodamente y con el brazo apoyado en una mesa o
soporte. Algunas pacientes en especiales los jvenes pueden sufrir malestar o incluso
desmayarse. Por tanto mantngase alerta ante seales como palidez o piel fra.
2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fcilmente. No efectu demasiada
presin ya que puede detener la circulacin arterial.
3. Pida al paciente que abra y cierre el puo un par veces para obtener mayor distensin de las
venas. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se palpan.
4. Una vez elegido el sitio de puncin se procede a limpiar con alcohol y se deje secar. Enseguida se
fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el
pulgar y los tejidos blandos situados justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta
entre el pulgar y los tres ltimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del
paciente. El dedo ndice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como gua. El bisel de la
aguja debe quedar hacia arriba.
5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada horizontal y
dirigida en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una sensacin de crujido. Cuando el
acceso a la vena no es tan perceptible, la puncin se efecta en dos tiempos: primero se punza la
piel y luego la vena. Para que la sangre entre a la jeringa se hace una traccin ligera sobre el
embolo evite realizar una traccin excesiva porque la vena puede contraerse e impedir el paso de
la sangre hacia la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la vena; entonces debe retirarse
ligeramente la aguja al verificar la entrada de la sangre. Esta operacin puede producir
hematomas; si se advierte seales de extravasacin de sangre a los tejidos, retire la aguja de
inmediato y aplique presin local.
6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el puo. En cuanto se
adquiera la destreza necesaria, esta ltima operacin se efecta cuando la sangre termina de
entrar a la jeringa. El paciente debe mantener la presin con una torunda en el sitio de la puncin
y el brazo flexionado durante unos minutos para evitar hematomas.
7. Tras la obtencin de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de metal y con un
movimiento de torsin y con la ayuda de otra pinza se coloca el extremo del embolo sobre la
pared interna del tubo. Nunca realizar el reenfundamiento de la aguja sin pinzas. La sangre se
vaca suavemente para evitar que se forme espuma y produzca hemlisis. Si la determinacin que
se va efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con
anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en cambio se desea
obtener suero, la sangre se coloca en tubo, de preferencia de 37 C para que el cogulo se forme
ms rpido. La retraccin del cogulo puede acelerarse separando de la pared del tubo con un
aplicador de madera. Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos.
USO DE VACUTAINER
En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para obtener las muestras de sangre
venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos estn sellados con un tapn de goma y extraen un volumen de
sangre predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el tapn de goma alcanc
justo la lnea gua. La aguja ms corta se mete dentro del tapn de goma, pero no penetra y por lo tanto no
rompe el vaci. Una vez que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo
hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vaco y la sangre entra al tubo. Cuando el flujo cesa, el tubo se
retira y si se desea puede sustituirse por el otro para obtener otra muestra .No debe usarse el Vacutainer
para dosaje de gases arteriales.

SANGRE ARTERIAL
Para la determinacin de gases se requiere puncin arterial. En esos casos la arteria se ubica localizado el
latido por palpacin muy cuidadosa. La puncin es necesariamente ms profunda y se requiere mayor
cautela para impedir hematomas. Debe practicarla el mdico.
ANTICOAGULANTES
Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y potasio, citrato trisodico,
Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros impiden la coagulacin al sustraer el calcio del plasma
sanguneo por precipitacin o fijacin en forma no ionizada, e inhibe la activacin de los factores de la
coagulacin.
El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulacin de la sangre destinada a transfusiones. El
Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin, pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica.
La mezcla de oxalato de amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de
sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina, hematocrito y recuentos
globulares. En frotis de sangre su utilidad esta limitada a los primeros minutos por que se desarrollan con
rapidez formas dentadas en los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los granulocitos y artefactos
en los ncleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre tomada con esta
mezcla de anticoagulantes no puede emplearse para determinados qumicas de nitrgeno ni potasio.
El citrato trisdico en solucin acuosa al 3.8%, se mezcla a razn de 1/9 con sangre para investigaciones
de coagulacin. El Sequestrene (EDTA) se emplea en una concentracin de 1 a 2 mg/ml de sangre. La sal
di sdica o di potsica de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para el
recuento de las clulas sanguneas. Hay que mezclarlo minuciosamente con la sangre. Para el estudio del
hematocrito es equiparable al oxalato y para estudios morfolgicos lo supera, ya que impide la
deformacin y artefactos incluso despus de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun
cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24 hs si la sangre se refrigera. Tambin es posible realizar el
recuento de plaquetas aun despus de unas pocas horas.
La heparina, a razn de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamao corpuscular ni el hematocrito. Es el
mejor anticoagulante para prevenir la hemlisis y para las pruebas de fragilidad osmtica. No resulta
satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones de sangre por
que en este segundo caso produce un fondo azul en las preparaciones teidas con el colorante de Wright.

CUIDADO, INOCULACIN Y SANGRIA DE LOS ANIMALES y


DIAGNOSTICO DE SUS ENFERMEDADES
Fundamentos
1. Para determinadas investigaciones de laboratorio fisiolgico es indispensable disponer de los
animales apropiados.
2. Los animales habrn de ser sanos y seleccionados con cuidado y estar instalados con limpieza y
comodidad, as como adecuada y suficientemente alimentados.
3. Pocos mtodos de inyeccin y sangra producen mayor dolor que los similares empleados en los
seres humanos, y todos los mtodos operatorios de importancia habrn de efectuarse con el
animal anestesiado. Por otra parte estos animales habrn de ser tratados con la solicitud que
merecen por los servicios que prestan a la humanidad .
ALOJAMIENTO DE LOS ANIMALES.
Las jaulas para los animales pequeos, como conejos, cobayos, ratones y ratas deben construirse y
disponerse de modo que los animales se conserven sanos y cmodos. Se evitara atestar las jaulas con lotes
demasiados numerosos. Convendr disponer de jaulas separadas para los animales normales que no se
utilicen.
Los animales recin llegados al laboratorio debern ser examinados cuidadosamente, a fin de comprobar
que no estn enfermos, antes de colocarlos en las jaulas de los normales. Si se dispone de suficiente
espacio ser conveniente guardarlos en aislamiento durante una semana a diez das.

Las jaulas se construirn de modo que permitan la limpieza y desinfeccin mas completas y posean
suficiente luz y ventilacin, deben construirse expresamente para fines experimentales fisiolgicos.
Debe disponerse de compartimientos, y jaulas de aislamiento para los animales inoculados y debern
estar solos, en jaulas aparte, para protegerlos de las molestias o herida que entre ellos pudieren infligirse.
Los compartimientos de animales deben estar bien iluminados y ventilados .Se procurara conservar a una
temperatura uniforme, da y noche.
IDENTIFICACION DE LOS ANIMALES
Es conveniente adoptar un sistema seguro para la identificacin de los animales .La practica de rotular las
jaulas sirve para la distincin de los lotes numerosos de animales aun cuando para conseguir un registro
completo conviene numera a cada animal y anotar los detalles relativos al sexo, descripcin, etc.
Chapas.
Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeas chapas de aluminio que se fijan a una oreja
de animal por medio de una grapa o un hilo metlico que perfore estos rganos y atraviese tambin los
orificios de las chapas.
Para los animales de mayor tamao pueden adquirirse identificadores especiales ..Pueden obtenerse en las
casas de artculos veterinarios.
Descripcin.
Cuando se use nicamente este mtodo de identificacin y haya que alojar juntos en una misma jaula
varios animales, deben seleccionarse los que presenten seales o colores diferentes .Para facilitar el
registro debe disponerse de sellos de goma con dibujos de ratn , cobayo o conejo. Este mtodo se
utiliza junto con el de la chapa metlica a fin de asegurar la identificacin si la chapa se perdiera.
Asimismo, debe anotarse cuidadosamente cualquier deformidad o sea particular .El sexo debe registrarse
en la descripcin (macho y hembra).
Seales o marcas para identificacin de animales
Los animales pequeos, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o en la cola pintndose la
piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohlicas saturadas de fucsina o cido picrico).Las jaulas
habrn de rotularse.

PREVENCION Y TRATAMIENTO DE LOS ACCIDENTES EN LOS


LABORATORIOS DE FISIOLOGIA
Las personas que trabajan en los laboratorios fisiolgicos se hallan rodeadas de mltiples peligros, de
modo especial a causa de las infecciones que pueden contraer durante el manejo de los animales de
experimentacin, durante el trabajo mismo con ellos como actos quirrgicos, exposicin de rganos, u
otros trabajos que as lo demanden los experimentos fisiolgicos, al manipular productos spticos
durante las investigaciones o sufrir quemaduras o la deglucin accidental productos biolgicos
producirse a heridas consecutivas rotura de cristales ,etc. A estos peligros estn principalmente expuestos
los investigadores poco experimentados que los ignoran o se entretienen o distraen mientras trabajan con
animales de experimentacin con productos infecciosos. con cidos, lcalis, etc.
PREVENCION DE LOS ACCIDENTES
Deben emplearse siempre guantes de goma descartables en los experimentos, el investigador ha de tener
especial cuidado en no herirse los dedos con las agujas y evitar cortarse con los instrumentos afiliados,
como bisturs, sierras, etc. Deben usarse pipetas automticas manuales de volmenes regulables con
punteras descartables.
Las pipetas de vidrio, en caso de ser usadas, aunque no es recomendable hacerlo, habrn de tener la parte
bucal tapada con algodn de modo obligatorio y tendrn bulbos de goma para aspiracin, y nunca aspirar
con la boca. Pueden utilizarse asimismo diversas jeringas. De igual modo, al aspirar cidos, lcalis y otras
soluciones peligrosas por medio de pipetas, deben usarse pipetas con bulbos de goma de aspiracin y
nunca hacerlo con la boca. Vale la redundancia, el alumno deber tomar todas estas preocupaciones con el
mximo cuidado. Es de suma importancia preocuparse del trabajo sin conversar ni distraerse.

Las manos del operador habrn de estar libres de cortes y escoriaciones, particulares en la proximidad de
las uas, debiendo lavarse cuidadosamente con jabn y agua y luego sumergirlas en una solucin
desinfectante antes y despus de haber manipulado productos infecciosos y antes de las comidas.
Una vez terminado el experimento deber lavarse la superficie de las mesas con una solucin
desinfectante; algunas veces es recomendable trabajar sobre una toalla humedecida en una de estas
soluciones, como por ejemplo lisol o tricresol al 2 por 100.
Las pipetas, tubos de ensayo y dems instrumentos empleados en la experimentacin fisiolgica tambin
se desinfectarn con una solucin lisol o tricresol al 2 por 100, o se esterilizarn inmediatamente por
ebullicin durante 20 minutos o autoclave que es lo ideal.
Los recipientes, lminas portaobjetos u otro material contaminado con orina heces secreciones
biolgicas de los animales, contaminados con productos biolgicos humanos, no se volvern a tocar por
ningn concepto sino que se sometern a un proceso de desinfeccin inmediata, como hemos indicado
lneas ms arriba
Los calentadores y dems aparatos elctricos se comprobarn con frecuencia para verificar la exactitud de
su funcionamiento, reparando sin prdida de tiempo sus averas a fin de evitar cortos circuitos incendios
.El mechero de Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables .Siempre se
verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de retirarse del Laboratorio , igualmente se
asegurar de cerrar la llave del baln contenedor del gas la llave general del gas del Laboratorio de ser el
caso. El ter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto elctrico. Es
obligacin del servicio de mantenimiento realizar revisiones peridicas de mantenimiento preventivo.

FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE


FRAGILIDAD OSMTICA
Introduccin
Todas las clulas del organismo estn rodeadas de una membrana limitante, a travs de la cual obtienen
sus alimentos y el oxgeno y excretan sus productos de deshecho y el C02 resultante de su metabolismo.
La membrana celular tiene propiedades bien establecidas: Solo deja entrar las sustancias que se necesitan
y solo deja salir las secreciones, los productos de desecho y las sustancias no indispensables, en otras
palabras, es semipermeable. Estas funciones las realiza a travs de diversos mecanismos, que hemos
revisado con detalle en las clases tericas. En la presente prctica trataremos de una de ellas que es la
Osmosis. En general la osmosis significa el paso de lquidos a travs de una membrana semipermeable.
Cuando dos soluciones de diferentes concentraciones estn separadas por una membrana semipermeable,
el solvente y los solutos atraviesan la membrana siguiendo las leyes que rigen el fenmeno de la smosis.
El agua es transportada a travs de la membrana celular por una fuerza hidrosttica llamada presin
osmtica, dicho de otro modo, la presin osmtica es la fuerza de atraccin que ejercen las partculas
sobre el agua atrayndola. La osmolaridad depende del nmero de partculas que se encuentran es
solucin. La Unidades de Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O , en medicina usamos el sub mltiplo mili
Osmol /Kg H20
Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partculas que se encuentran en 1
Litro Kg de solucin. Cada partcula (tomo) ejerce una presin osmtica independientemente; por
ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg (litro ) de agua ejerce una presin osmtica de 1 Osmol /kg
agua; en cambio un mol de ClNa disuelto en un litro de agua ejercer una presin Osmtica de dos
Osmoles debido a las dos partculas en que se disocia, una de sodio y otra de cloro. (Na+ y Cl- )
La capacidad de una partcula para producir un flujo de agua a travs de la membrana celular se llama
tonicidad.
Una solucin extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la clula haciendo que sta se
hinche se llama hipotnica (Hipo osmolar)
Una solucin que permite que el agua fluya hacia fuera de la clula se llama hipertnica. (Hiper osmolar)
La membrana del glbulo rojo nos servir en la presente prctica para demostrar este fenmeno y
asimismo demostrar que la membrana tiene ciertos lmites de resistencia normales a variaciones de la
tonicidad en el medio interno.
Aplicacin clnica.
Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana que generan
hemlisis por mayor fragilidad de la membrana, son defectos genticos heterogneos que afectan a las
protenas constitutivas de la membrana del eritrocito. La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas, en la
en la cual se ha demostrado una disminucin de la protena membranal Espectrina del hemate, y el grado
de dficit de la protena Espectrina parece asociarse con la gravedad clnica de esta enfermedad, pues los
hemates son muy frgiles y se hemolizan produciendo anemia intensa.
Fundamento
Se llama resistencia globular osmtica a la que presentan los hemates suspendidos en soluciones salinas
hipotnicas. Si empleamos soluciones salinas de 0.76 a 0.9 % y suspendemos dentro de ellas los hemates
veremos que stos se conservan sin alteracin durante varias horas, y que una vez sedimentados
(espontneamente por centrifugan), el lquido que sobrenada es claro y transparente como la misma
solucin salina. Pero si efectuamos suspensiones de hemates en soluciones de cloruro sdico a
concentraciones progresivamente decrecientes
observaremos que al llegar a una determinada
concentracin empiezan a destruirse, liberndose la Hb, lo que confiere al lquido una ligera coloracin
rojiza que no desaparece por centrifugacin. Esto se le llama hemlisis inicial o resistencia mnima, que
normalmente se presenta entre las concentraciones de 0.46 y 0.42 %.Esta hemlisis de los hemates va
aumentando en cantidad a medida que la solucin de cloruro sdico va siendo ms hipotnica hasta
presentarse una hemlisis total. Esta hemlisis total se observa entre las concentraciones de 0.34 a 0.30 %

Esta prctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glbulos rojos a la hemlisis en
presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas hipotnicas a temperatura ambiente y
veremos en cul de ellas se presenta hemlisis inicial y total.
.
Reactivos y Equipos Necesarios
1. Solucin salina al 0.9 %
2.-Pipetas graduadas: 1 ml al 0.01
10 ml al 0.1
5 ml al 0.1
3.- Micropipetas de 0.1 ml
4.- Fiola de 100 ml
6.- Muestra de sangre venosa desfibrinada hemates lavados.
7.- Agua destilada
8.- Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde

Mtodo
1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 19, segn la tabla adjunta,
haciendo las diluciones con agua destilada segn lo indicado:
Marcar 19 tubos de prueba y repartir as:
N
Tubo

Solucin
NaCl
1%
Ml

Agua
Destilada
ml

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19

1.0
2.0
2.5
3.0
3.5
3.75
4.0
4.25
4.50
4.75
5.0
5.5
6.0
6.5
7.0
7.5
8.0
8.5
------

9
8
7.5
7.0
6.5
6.25
6.0
5.75
5.5
5.25
5.0
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
10.0

Mezclar
Por
inversin

% NaCl de la sol.
resultante

S
S
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
---

0.10 %
0.20 %
0.25 %
0.30 %
0.35 %
0.375 %
0.40 %
0.425 %
0.45 %
0.475 %
0.50 %
0.55 %
0.60 %
0.70 %
0.70 %
0.75 %
0.80 %
0.85 %
0
%

El alumno calcular la Osmolaridad


correspondiente a cada uno de los tubos
( expresaren unidades mOsm/Kg H20)

Control de hemolisis total para comparacin visual.

NOTA: EL NUMERO 19 ES CONTROL DE HEMOLISIS TOTAL (100% HEMOLISIS)

2.- Una vez hecha la distribucin anterior, mezclar bien, por inversin cada uno de
los tubos. NO OLVIDAR ESTE PASO.
3.- Recin ahora, despus de haber mezclado, aadir 0.1 ml de sangre venosa desfibrinada cada uno de los
tubos.
4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversin suave.
5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar

por inversin suave.


6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos.
Examinar por simple inspeccin visual en cual de los tubos se inicia la hemlisis (hemlisis leve),
generalmente a partir del tubo N 8, de 0.425 % NaCl (lo que se manifiesta por el color ligeramente rojizo
del lquido) y luego examinar en qu otro tubo la hemlisis es intensa (aproximadamente en 0.36 % NaCl
).
En el Tubo N 19 se producir hemlisis total y corresponde al 100% de Hemlisis. (Destruccin total de
los hemates y no deja nada de sedimento).
Valores Normales:
Hemlisis inicial (leve) (empieza Hemlisis): 0.44 % + -- 0.02
Hemlisis Total (Hemlisis completa):
0.32 % + -- 0.02
CAUSAS DE AUMENTO DE LA FRAGILIDAD OSMTICA GLOBULAR:
(Los hemates son ms frgiles que lo normal, tienen poca resistencia ante ligeras
hipotonas, y se hemolizan muy fcilmente)
-Anemia Hereditaria Esferoctica, en la Enfermedad Hemoltica
del recin nacido por incompatibilidad ABO
-Despus de alguna injuria trmica (quemaduras)
-Anemias Hemolticas sintomticas en algunos casos de:
Linfoma Maligno, Leucemias, Cncer, Cirrosis, etc.
CAUSAS DE DISMINUCIN DE LA FRAGILIDAD OSMTICA
(Los hemates son mas resistentes que lo normal a la hipotona):
En la primera Infancia, tempranamente en la infancia.
En algunas Anemias por deficiencia de Hierro
Talasemia mayor ( anemia de Cooley, anemia del Mediterrneo )
Anemia Drepanocitica ( Hoz, Sickle cell anemia)
Anemia Megaloblstica Nutricional
Post Esplenectoma y algunas hepatopatas con ictericia
FRAGILIDAD EN MEDIO ACIDO:
- En la Hemoglobinuria paroxstica nocturna, que cursa con anemia
hemoltica, usualmente la fragilidad globular realizada en sol. salina
solamente, es NORMAL, PERO la fragilidad
globular realizada en MEDIO CIDO( pH cido) S ESTA
AUMENTADA .
La FRAGILIDAD MECANICA est aumentada en la Ovalocitosis hereditaria ( Eliptocitosis), en los
casos que evolucionan con anemia hemoltica.
Referencias Bibliogrficas
S., Mellor Leslie ,J. Inwood, Linch R. Medical Laboratory Technology.W.B.Saunders Co.Phila.USA.
1996.
Clinical Diagnosis by Lab Methods. Todd. Stanford, W.B Saunders Co. Phila. USA. 2002
Hematology Physiologic Basis for Clinical Practice .Reich P.MD. Little Brown Co. Boston USA.2004.
Clinical Laboratory Diagnosis Levonson and Mac Fate.Lea Febiger. 1999.
Wintrobe Clinical Hematology Lea Febiger. 1998.
Diagntico Hematolgico .Laboratorio y Clnica. Ciscar y Farrera. Edit.Jims 1998.

INTERCAMBIO DE LQUIDOS ELECTROLITOS Y OTROS SOLUTOS A


TRAVS DE MEMBRANAS
Introduccin
Existe un intercambio continuo de sustancias entre el medio ambiente y el organismo, a travs de los
epitelios drmicos, digestivos y respiratorios.
Dentro del mismo organismo existe un intercambio entre los espacios intracelulares y extracelular.
Algunas sustancias pueden atravesar la membrana celular por difusin pasiva .Otras requieren consumir
energa para moverse a travs de las membranas contra sus gradientes de concentracin .Estos fenmenos
de difusin pasiva y transporte activo permiten la creacin de una composicin orgnica diferenciada.
La piel del sapo no solamente separa al espacio extracelular del medio ambiente, sino que permite el
pasaje de muchas sustancias, incluyendo el agua, el sodio, el cloro y la glucosa. La direccin del
intercambio depende del tipo de transporte involucrado y de la gradiente de concentracin de los solutos.
Cuando cambia la composicin del lquido extracelular los riones excretan las sustancias presentes en
excesos o reabsorben las necesarias para lograr preservar la homeostasis.
Material
17 sapos
Beakers
Agua destilada
Solucin de NaCI 7.5%
Solucin de dextrosa al 15 %
Balanza
Urinmetro
Tubos de ensayo
Pipetas de Pasteur
Goteros
Pinzas mosquito
Mtodo
Experimento N 1: Preparacin del animal
Durante la noche previa al experimento se debe mantener a los sapos en un ambiente hmedo para que
estn adecuadamente hidratados.
Antes de la pruebas se vaca la vejiga de todos los animales y se liga la cloaca para analizar la orina
formada en condiciones experimentales. Si se coloca un sapo en una solucin de dextrosa y luego se
encuentra dextrosa en la orina, puede deducirse que fue absorbida a travs de la piel hasta alcanzar una
concentracin suficiente en liquido extracelular que obligase a los riones a excretar el exceso en la
orina. Los sapos son colocados en soluciones de diferente tonicidad y se les inyecta distintas soluciones
para producir cambios en la composicin de los lquidos corporales.
Los animales son pesados antes de realizar la prueba y despus de haber vaciado sus vejigas. Los cambios
de agua corporal se determinaran pesando a los sapos antes y despus de la exposicin a distintas
condiciones experimentales.
Para cerrar la papila cloacal se la toma con las pinzas mosquito y se liga con firmeza, sin llegar a cortar la
piel , pero lo suficientemente fuerte para prevenir el escape de orina .Despus de esto se pesa al sapo y se
registra su peso.
Experimento N2
Se inyecta a los sapos 4ml de una solucin en el saco linftico dorsal. Esta solucin puede ser hipotnica,
hipertnicas o isotnicas; de cloruro de sodio o dextrosa , tambin inyectaremos en algunos casos agua
destilada .Se vuelve a pesar para confirmar que todo el lquido inyectado se encuentre en el animal.
Se colocan 150 ml de lquido en un beaker de 250 ml y se pone al sapo dentro de l. El lquido debe
cubrir la mitad inferior del animal pero el punto de inyeccin debe permanecer por encima del nivel .Se
tapa el beaker Se pesa el sapo a intervalos de 30 minutos hasta por 8 horas. Se registra los cambios
obtenidos:

Bao
externo

1
2
3
4

NaCl
0.68%
agua
Dextrosa
3.87%
Dextrosa
7.74%

Bao
Saco
linftico
(inyectar
4 ml).
Agua

Saco Linftico
(Inyectar 4ml)
Peso
del Glucosa Peso al final
sapo
al basal
del
inicio
del (inicial) experimento
experimento

Glucosa pos
experimento
(final)

NaCl
0.68%
Agua
Dextrosa
3.87%

Experimento N 3
Despus de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vaca comprimiendo
el abdomen y se recolecta la orina.
Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la
ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso despus de recolectar la orina
del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento.
Se debe tomar en cuenta el peso despus de inyectar los 4ml.de solucin en los sacos dorsales .Se calcula
el porcentaje de variacin de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina
formada durante el experimento.
Experimento N 4: Anlisis de glucosa en orina del sapo.
La glucosa se determinara en la orina del sapo mediante el mtodo de la glucocinta (Urine Strip Winer
Lab).

Introduccin
Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a estmulos, es decir
variaciones del medio qumicas o fsicas, tales como alteraciones de la temperatura, deformacin
mecnica, etc.
En los fenmenos estmulo respuesta, la respuesta depende de las caractersticas del estmulo y de las
condiciones del tejido estudiado. La descripcin correcta de la relacin entre estmulo y respuesta
requiere el control de la duracin , intensidad y frecuencia del estmulo.
Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en funcin al tiempo y al espacio.
Material
Sapos grandes

Tabla de fijacin para batracios


Alambre de cobre
Alambre de zinc

Estimulador elctrico
Equipo de diseccin
Mtodo
Experimento N 1
Se anestesia al sapo por destruccin del cerebro y la mdula espinal.
Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la regin anterior homloga al tronco. Se contina la incisin
de la piel en cinturn. Una vez completado el cinturn, se desprende la piel de un tirn hacia abajo. En la
regin dorsal se debe tener cuidado por la adherencia de la piel al urostilo.
Se levanta el urostilo con la pinza de diseccin y se seccionan los elementos paravertebralmente y en
direccin ceflica, fracturando el proceso del iliaco paralelo al urostilo que se articula con el proceso
transverso de la novena vrtebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen
por tres races ms arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los nervios citicos. Por debajo se
observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones.
Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o lesionar los dos nervios
citicos.
Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios citicos y se realiza una ligadura lo ms proximal
posible a la columna vertebral. En este momento se observa una reaccin muscular.
Se secciona el nervio proximalmente a la mdula, entre la columna vertebral y la ligadura. Con la ayuda
del hilo se puede efectuar la diseccin del nervio citico, no siendo necesario manipularlo con ningn
instrumento.
Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el msculo piriforme, despus se lo asla por diseccin
roma entre el semimembranoso por dentro y el bceps por fuera. A todo lo largo del nervio se ir
seccionando sus colaterales y se lo aislar hasta la rodilla, comprobando que exista conexin funcional
entre el nervio y el msculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que se
seque humedecindolo constantemente en solucin fisiolgica.
Experimento N 2: Experimento de Galvani
Se fabrica un asa con alambre de cobre y alambre de zinc. Con el alambre de cobre se toca la piel del
animal y con el zinc el nervio.
Experimento N 3
Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar, amarrndola
fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza la diseccin de la aponeurosis, que en
el sapo se contina hacia la pierna por el tendn de Aquiles que tiene un sesamoideo.
Se libera el tendn de Aquiles por diseccin roma y se separa el gastronemio hasta llegar a su insercin
superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo de la rodilla y el fmur un poco por encima
de esta. Se libera el fragmento de fmur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura.
Con cuidado se coloca el electrodo sobre el nervio y se procede a estimular la preparacin neuromuscular.
Con el estimulador elctrico se realiza el estmulo de menor intensidad y se incrementa gradualmente

hasta obtener una contraccin muscular este es el nivel de umbral que genera la respuesta de contraccin.
Con el estmulo elctrico de esta misma intensidad se continuara la estimulacin durante todo el
experimento (estimulo superior al umbral).
Humedecer constantemente la preparacin con un gotero.
Experimento N 4: fenmeno de la escalera
Se realizan descargas simples para buscar el umbral de estimulacin y despus se disminuye el voltaje
para obtener el estmulo subliminal.
Luego de repetir la estimulacin por un tiempo se observar que las contracciones son cada vez ms
amplias, de mayor intensidad hasta alcanzar un valor mximo. Este incremento progresivo de la amplitud
es lo que se denomina el fenmeno de la escalera.
Experimento N 5: tetania
Se realizaran estimulaciones intensas, muy rpidas y/o continuas y se obtendr una serie de contracciones
sucesivas de modo que las estimulaciones no permitan que termine la sacudida anterior y continuaremos
as hasta obtener una contraccin sostenida, permanente, intensa y que es lo que denominamos tetania.
Experimento N 6: Relacin longitud - tensin
Emplearemos la fuerza muscular que ejerce el musculo gastronemio cuando se anudan ambos extremos
del musculo antes disecado en una balanza con pesas graduadas en gramos. Un extremo del musculo ser
anuda en la parte inferior del platillo de la balanza y el otro extremo se anudara en el brazo de la nuez del
soporte de fierro, estando el fiel de la balanza en cero se desplazara la nuez hacia debajo de modo que el
musculo no quede ni mu flojo ni muy tenso de tal forma que pueda responder al estmulo con una
contraccin. A continuacin se estimula para que el msculo se contraiga sin vencer ninguna resistencia
(pesa deslizante en cero) al obtenerse respuesta de contraccin el fiel de la balanza se deslizara hacia
arriba. Ahora incrementamos gradualmente de dos en dos gramos y al mismo tiempo la longitud el
musculo bajando la nuez de la balanza y repetimos el estmulo y el fiel de la balanza volver a moverse
hacia arriba, llegara el momento en que el estmulo a medida que aumentamos el peso y la longitud del
musculo el fiel de la balanza no se desplazara. Esta es la longitud a la cual corresponde la mxima tensin
capaz de ser ejercida por el musculo. El alumno realizara una grfica que ilustre la relacin longitud vs
tensin.
Discusin:

1.
Introduccin
La placa mioneural media la transmisin de la seal de la fibra nerviosa motora a la clula muscular. Salvo
en el caso de las fibras musculares intrafusales, existe una sola placa terminal por cada fibra muscular. A
medida que el axn del nervio se acerca a su fin emite varias ramas, cada una de las cuales inerva una
fibra muscular. Ests ramas terminales son de poco dimetro y carecen de mielina, por lo que la velocidad
de conduccin en ellas es baja. La placa mioneural es una discontinuidad entre la clulas nerviosa y la
muscular donde la transmisin del impulso de despolarizacin queda a cargo de un mediador qumico, la
acetilcolina.
La terminal presinptica posee vesculas sinpticas, las cuales han sido sintetizadas en el soma neural, y
presenta canales de membrana de sodio y calcio dependientes del voltaje.
La generacin del potencial de accin da lugar a la apertura de los canales de calcio y se incrementa la
concentracin citoslica de calcio. Este incremento promueve la fusin de las vesculas sinpticas con la
membrana citoplasmtica del rafe sinptico, liberando acetilcolina. La acetilcolina acta sobre receptores
nicotnico presentes en el miocito y produce despolarizacin de la membrana celular muscular. Este
fenmeno es denominado potencial de la placa terminal.
Este potencial de accin excita a las miofibrillas para que se contraigan. Para el control de la actividad
muscular existe adems una va inhibitoria recurrente, es decir, un mecanismo de retroalimentacin
negativa que mejora la resolucin espacial de la accin neural. Esta va inhibitoria provee un mecanismo
para evitar la contraccin muscular persistente.
El axn de la motoneurona A sale de la sustancia gris a nivel de la medula espinal, pero emite antes una
rama colateral, la rama recurrente. Esta rama se desprende a partir del primer ndulo de Ranvier,
permanece dentro de la materia gris ventral y pasa medialmente y dorsalmente. Est rama forma sinapsis
con interneuronas que se encuentran en la regin ventromedial del asta anterior y son denominadas clulas
de Renshaw. Sus axones se proyectan hacia las motoneuronas , tanto hacia aquella en la cual se origin la
primera sinapsis desde el hasta dorsal, representada como la motoneurona A, y a sus vecinas,
representadas como motoneuronas B, terminan en sinapsis inhibitorias. La transmisin de este sistema
inhibitorio est a cargo de la glicina.
Nota: en la presente prctica emplearemos ya sea dextrotubocurarina o succinilcolina.
Material
Sapos grandes
Migrafo
Estimulador elctrico
Equipo de diseccin
Tabla de fijacin para batracios

Succinilcolina
Vecuronio
Neostigmina
Atropina

Mtodo
Experimento N 1
Se l anestesia a un sapo por destruccin del encfalo. Se diseca y se expone el nervio citico en la cara
posterior de ambos muslos, evitando lesionar la arteria femoral que corre paralela al nervio.
En una de las extremidades, se separa el nervio de la arteria y se procede a ligar alrededor del msculo y
de la arteria, dejando libre al nervio.
Se aplica estmulos de baja intensidad a los nervios citicos y se va incrementando su intensidad hasta
obtener la contraccin muscular.

Luego se estimula directamente al msculo gastrocnemio a travs de una incisin hecha en la piel.
Experimento N 2
Se administra 1 mL de succinilcolina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos se
procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Experimento N 3
Se administra 1 mL de vecuronio en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos procede a
estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Experimento N 4
Se administra 1 mL de solucin de atropina y neostigmina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de
unos minutos se procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Discusin
La succinilcolina es un bloqueador muscular despolarizante. Inicialmente simula el efecto de la
acetilcolina, produciendo apertura de los canales inicos y despolarizacin persistente. Inicialmente puede
producir excitacin, la que se manifiesta por fasciculaciones transitorias. Esta fase es seguida por el
bloqueo de la transmisin neuromuscular y parlisis flcida.
La estricnina acta a nivel de la medula espinal, bloqueando la sinapsis inhibitoria de las clulas de
Renshaw sobre las motoneuronas , en las que ejerce el rol de antagonista competitivo selectivo que
bloquea los efectos inhibitorios de la glicina.
La estricnina produce aumento de los impulsos nerviosos sucesivos, creando contracciones similares a las
tetnicas. Origina una contraccin muscular sostenida de extensores y flexores y espasmo muscular
persistente.

PRCTICA DE SHOCK ESPINAL PARA ESTUDIAR LOS


REFLEJOS EN EL SAPO
Leyes Pfluger, Turck, Sumacion Espacial, Sumacion Temporal y efecto de la ablacin medular.Material
Sapo
Beakers, estilete de acero,
Carrete de Runckford
Acido sulfrico diludo 0.1 %; 0.2%; 0.3 %; 0.4%; 0.5 %; 1% sol. acuosas.
Suero fisiolgico
Equipo de diseccin, guantes ltex descartables
Sol.Ringer para batracio.
Mtodo
Experimento N 1: PREPARACIN DEL SAPO ESPINAL
Observar la postura, los movimientos espontneos y respuesta a los diversos estmulos, movimientos
respiratorios, reflejos del salto, respuesta a la rotacin y posicin de espalda del sapo normal.
Se fija al animal con la mono izquierda y se determina lasa siguientes lneas: una lnea transversal a nivel
del lmite posterior de la membrana timpnica ( A-B), Una segunda lnea entre el ojo y la membrana
timpnica (X-Z). Se toma una tijera y se introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo
decapita con un solo golpe, procurando que en este momento el sapo se encuentre con el dorso hacia
abajo, a lo largo de la lnea X-Z Realizar hemostasia por compresin y realizar las mismas observaciones
que en el sapo normal. Este es el sapo descerebrado. En este caso, el sapo puede realizar movimientos
complejos tales como saltar y si se coloca de espalda puede regresar a la posicin normal.
En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulacin elctrica y luego realice el
corte a lo largo de la lnea A-B. Inmediatamente se observa el tono y la actitud postural del animal y se
efecta el pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivar la depresin motora que constituye uno de los
componentes del shock espinal, ademasno se encuentra los resultados del sapo descerebrado.
Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural del animal y se efecta el
pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivar las respuestas motoras.
Experimento N 2: leyes de Pfluger
Se pasa un hilo a travs de un orificio hecho en el piso de la boca y se cuelga al sapo espinal de un
estativo.
A continuacin se efecta una secuencia de estmulos graduados, los que producen respuestas
determinadas:
a) Ley de UNILATERALIDAD.- Se pellizca suavemente un dedo y se produce contraccin de la
misma pata solamente.
b) Ley de SIMETRA.- Se pellizca con mayor intensidad el dedo y se produce contraccin de la
misma pata y de la pata opuesta.
c) Ley de IRRADIACIN.- Se pellizca fuertemente un dedo y se produce contraccin de la misma
pata, de la pata opuesta y finalmente de las extremidades anteriores.
d) Ley de GENERALIZACIN.- Se pellizca muy fuertemente un dedo y el animal se contrae y se
mueve enrgicamente.

Experimento N 3: experiencia de Turck


Se emplea la preparacin de sapo espinal. Se la cuelga de un estativo y se espera que est en reposo.
Se prepara varios beakers con concentraciones crecientes de CIDO SULFRICO desde 0.1, 0.2, 0.3,
0.4, 0.5 y 1%. Se sumerge la pata del animal en cada una de las distintas soluciones, empezando por la de
menor concentracin; se espera y se registra el tiempo necesario para la respuesta. Una vez que se haya

producido la respuesta, se lava la pata del animal en suero fisiolgico antes de pasar a la solucin
siguiente.
Se observa y se registra las caractersticas y tipo de respuesta en cada caso.
Experimento N 4: sumacin temporal
Se sumerge la pata del animal en una solucin de cido sulfrico al 0.1% varias veces. Se observa el
incremento progresivo de la respuesta.
Experimento N 5: sumacin espacial
Se sumerge en una solucin de cido sulfrico al 0.1% primero la punta del dedo, luego el dedo completo,
la pata y la rodilla. Se observa la mayor intensidad de las respuestas.
Experimento N 6
Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la mdula. Despus se repite las mismas
estimulaciones hechas previamente.-

REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS EN EL HOMBRE


Introduccin
Los mecanismos reflejos estn constituidos por un rgano receptor, un rgano efector y una red de
comunicaciones entre ambos. La accin refleja se inicia por un estmulo de entrada y tiene como resultado
una respuesta de salida. La accin refleja abarca el reflejo axnico sencillo hasta los reflejos complejos en
los que existe intervencin cerebral.
El sistema nervioso comprende un gran nmero de arcos reflejos. Cualquier estmulo produce una
respuesta. El estmulo puede originarse en los rganos internos y afectar la parte visceral del sistema
nervioso. El sistema puede originarse en el exterior y afectar la parte somtica del sistema nervioso. Un
mismo arco reflejo puede afectar tanto partes viscerales como somticas.
Los reflejos viscerales no suelen alcanzar la conciencia, mientras que los reflejos somticos pueden ser
percibidos concientemente. Muchos reflejos pueden considerarse como parte de un programa, puesto que
la respuesta adecuada parece estar prevista dentro del sistema nervioso.
Los reflejos espinales, que requieren transmisin del estmulo desde la periferia hasta la mdula y de all
regresar al rgano efector, son de este tipo. Los reflejos espinales no requieren de intervencin del sistema
nervioso central y funcionan igualmente bien en un animal cuya mdula se ha seccionado por encima de la
localizacin de las neuronas de los nervios correspondientes.
Las inserciones tendinosas de los msculos poseen receptores sensitivos especiales que responden a ala
distensin y envan la informacin al sistema nervioso central sobre la posicin de un msculo o de un
miembro. Cuando estos receptores tendinosos son estimulados por una distensin rpida y brusca, mandan
impulsos a la mdula espinal y, a travs de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva el msculo.
Esta neurona manda impulsos al msculo y produce una sacudida rpida.
La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de excitacin de la mdula
espinal. Esta facilitacin puede conseguirse haciendo que el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza.
Material
Sujeto de prueba

Martillo de reflejos

Mtodo
Experimento N 1: reflejo rotuliano
Se sienta al sujeto en una posicin cmoda y cruza las piernas. La pierna superior debe estar relajada. Por
palpacin, se localiza el tendn rotuliano y se da un golpe seco con el martillo de reflejos. La respuesta
adecuada es la contraccin del cuadriceps, lo que produce extensin de la pierna.
Experimento N 2: reflejo aquiliano
El sujeto se pone de rodillas sobre una silla y deja colgar fuera los pies sin contraccin de los msculos de
las pantorrillas. Se busca el tendn de Aquiles y se estimula. La respuesta apropiada es la contraccin de
los msculos gemelos y del sleo, lo que produce extensin del pie.
Experimento N 3: reflejo bicipital
El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el antebrazo. Se busca el
tendn del bceps con el pulgar de la mano que sostiene el antebrazo, se deja el pulgar sobre el tendn y se
da un golpe sobre el pulgar. la respuesta apropiada es la contraccin del bceps, lo que produce flexin del
antebrazo.

Experimento N 4: reflejo tricipital


El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el antebrazo. Se palpa el
tendn del trceps, inmediatamente por encima de su insercin en el codo, y se golpea el tendn con el
martillo. La respuesta apropiada es la contraccin del trceps, lo que produce extensin del pie.
Experimento N 5: reflejos radial y cubital
Se golpea los tendones insertados sobre los extremos inferiores de ambos huesos, por encima de la
mueca. El examinador sostiene el brazo del sujeto. La respuesta adecuada para el reflejo cubital es la
pronacin de la mano y para el reflejo radial la flexin del antebrazo.
Discusin

EVALUACIN DE LA PERCEPCIN SENSORIAL Y SENSACIONES


NOCICEPTIVAS: EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR.
Introduccin
La estimulacin de un receptor tctil de la piel es transmitida por la va del asta posterior (sensitiva) hasta
la corteza somestsica. En esta la excitacin del receptor activa un determinado nmero de neuronas que
constituye su campo cortical. Sin embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma
magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma mxima y las de la
periferia en menor magnitud. Este contraste es el que permite localizar el punto exacto de estimulacin.
Las capacidades tctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de discriminar dos puntos
de estimulacin sobre la piel.
Las diferencias en las capacidades de discriminacin en las diferentes zonas del cuerpo se deben al
nmero de receptores que exista en esa zona y a la representacin cortical que stos poseen. Los dedos
estn profusamente poblados de receptores y el rea de corteza a que llega la informacin proveniente de
ellos es amplia, de ah su mayor posibilidad de discriminacin. Otras zonas del cuerpo tienen menor
densidad de receptores siendo ste uno de los factores que conlleva a que la informacin que llega al rea
de la corteza sea reducida y, por lo tanto, sea menor su posibilidad de discriminacin.
Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitar de forma mxima al centro de su
campo cortical; pero como los campos se superponen parcialmente, la resultante ser una excitacin
mayor, aunque se mantienen los mximos de excitacin separados.
El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y fro, que pasan del fro glacial, al fro, al fresco,
a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y quemante.
Objetivos
1. Discriminar procesos y modalidades de percepcin sensorial en el ser humano de tal manera que
pueda sistematizarlos.
2. Comprobar la distribucin anatmica de los receptores cutneos y la importancia fisiolgica de
dicha distribucin.
3. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad.
4. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones, estas observaciones debern ser
correlacionadas con sus conocimientos neuroanatmicos y neurofisiolgicos.
EXPERIMENTO 1: IDENTIFICACIN DE CAMPO RECEPTIVO SENSORIAL
Materiales
Sello especial
Hoja de papel
Pelo de cerda (pelo de Von Frey)
Sujeto experimental (alumno 1)
Sujeto experimentador (alumno 2)
Procedimiento
1. Por medio de un sello especial marcar un rea en la piel de un compaero: cara, dorso del cuello,
antebrazo, dorso de la mano.
2.

Sellar en una hoja de papel un rea similar y proporcional

3.

Luego el sujeto experimental deber cerrar los ojos y se le aplica por medio de un instrumento
sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera presin en cada uno de los cuadrantes del

rea delimitada por el sello.


4.

El sujeto experimental deber reportar las modalidades de sensaciones que percibe en la piel de
cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros).

5.

Marcar con notacin diferente, en un esquema, los puntos correspondientes.

6.

Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones investigadas.

Resultados

EXPERIMENTO 2: DISCRIMINACIN DE DOS PUNTOS


Materiales
Comps de doble punto.
Regla.
Sujeto experimental (alumno 1).
Sujeto experimentador (alumno 2).
Procedimientos
Para la realizacin de estos experimentos los estudiantes se dividirn por parejas, actuando cada uno como
sujeto experimental y como experimentador.
1. Indique a su compaero que cierre los ojos y se concentre en las sensaciones que va a percibir.
2. Aplique los dos extremos del comps de forma tal que lleguen simultneamente al rea de piel
estimulada. Se deber estimular las siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca.
3. En cada paso la separacin de las puntas del comps se aplicarn de forma tal que la diferencia
entre ellas sea diferente y, alternante, mantenindose constante para cada zona corporal esto es
0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm.
4. Durante la aplicacin de las agujas, pregunte al compaero cuantos puntos discrimina y anote su
respuesta.
5. Analice el comportamiento de los receptores.
Resultados

Area de la Piel
Estimulada
Yema de los dedos
Antebrazo
Cara
Dorso del Cuello
Dorso de mano

Distancia de separacin de las puntas del comps ( cm )


0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACIN


DEL UMBRAL DEL DOLOR
Introduccin
El dolor es un mecanismo de proteccin y por tanto puede definirse como una respuesta de defensa
corporal, el cual aparece siempre que un tejido est siendo lesionado y obliga al individuo a reaccionar
para suprimir el estmulo nocivo.
Si colocamos inadvertidamente el brazo sobre una plancha caliente sentimos dolor e inmediatamente
retiramos el brazo para evitar un mayor dao tisular.
La respuesta al dolor puede expresarse en trminos conductuales, tales como el retiro de la fuente del
estmulo o la fuga; puede haber una respuesta verbal, como el quejido y la expresin del dolor; y puede
haber una respuesta fisiolgica como cambios en la presin sangunea, sudoracin y taquicardia.
El dolor es una respuesta sensorial medible, su magnitud vara con la intensidad del estmulo. Todo ser
viviente presenta una tolerancia al dolor hasta determinado nivel, denominado umbral, en que el dolor es
insoportable. El dolor puede tambin ser socialmente determinado, se dice que hay grupos tnicos ms
sensibles al dolor que otro, y el sexo femenino es ms resistente al dolor que el sexo masculino.
El dolor se ha clasificado en dos tipos fundamentales: 1) Dolor Rpido, que aparece en menos de una
dcima de segundo, no se percibe en los tejidos ms profundos del cuerpo, se transmite a travs de fibras
de tipo A y la seal dolorosa llega al sistema nervioso central va el haz neoespinotalmico. 2) Dolor
Lento, aparece despus de un segundo o ms y aumenta lentamente en el curso de varios segundos o
minutos, suele ir acompaado de destruccin tisular, se percibe en la piel como en cualquier rgano o
tejido profundo, se transmite a travs de fibras tipo C y las seales dolorosas llegan al sistema nervioso
central va el haz palioespinotalmico.
El dolor como todo tipo de sensibilidad tiene receptores y vas neurales especficas.
Los receptores para el dolor son terminaciones libres y se diferencian por el tipo de estmulo al cual
responden y bsicamente son de tres clases:
1) Los mecanociceptores responden a estmulos mecnicos muy intensos de la piel como apretar,
pellizcar, pinchar, etc. Tambin pueden responder a estmulos trmicos repetitivos, entre 45 y
55C.
2) Los termociceptores responden a bajas temperaturas, menos de 10C, y altas temperaturas, por
encima de 42-45C, y asimismo responden a estmulos mecnicos intensos.
3) Los nociceptores polimodales responden a estmulos dolorosos mecnicos, trmicos y qumicos.
El estmulo doloroso (E) acta sobre un terminal nervioso que lleva su axn hacia la neurona sensorial
primaria (1) en las astas posteriores de la mdula espinal. El mediador excitatorio de esta informacin
dolorosa es la sustancia P, aunque tambin pueden participar otras sustancias como el cido glutmico, la
somatostatina y el polipptido intestinal vasoactivo (VIP).
Los axones de las segundas neuronas del sistema de transmisin del dolor (2) ascienden en dos tractos
diferenciables tanto anatmica como funcionalmente; el tracto Pleo-espino-talmico con proyecciones
amplias y difusas; y el tracto Neo-espino-talmico con proyecciones menores y circunscritas. La va
neuronal del neo-espino-talmico es responsable de la localizacin certera en la superficie corporal de los
dolores agudos, siendo pequeo el nmero de las fibras que la componen. Los axones del Pleo-espinotalmico se enlazan sinpticamente con neuronas del tronco enceflico en especial con la informacin
reticular tegmental y los cuadrigminos (Tracto espino-tectal), mientras que otras de sus fibras alcanzan
directamente a los ncleos talmicos intramamilares. Hasta este nivel no hay participacin de la corteza
cerebral en las sensaciones del dolor.

En el tlamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3) que provienen de los ncleos
intramamilares del tlamo y que se proyectan enviando sus axones al frontal superior de la corteza
cerebral. Igualmente existen neuronas de tercer orden en el ncleo ventro-basal y grupo posterior del
tlamo que proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza cerebral. Es aqu, donde ocurre la
modulacin del dolor, y donde socioculturalmente puede variar la expresin del dolor
EXPERIMENTO N 1: SENSACIONES TRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR
Materiales: Hervidor elctrico con agua ,termmetro y gotero.
Procedimiento
1. Introducir el termmetro en el hervidor elctrico y registrar la temperatura del agua.
2. Aumentar la temperatura del agua, conectando el hervidor en el suministro elctrico.
3. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar caer unas dos o tres gotas
en el dorso de la mano hasta que el sujeto de experimentacin perciba un cambio en la
temperatura del agua en relacion a la temperatura inicial del primer minuto.
4. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota en la palma de la mano
sienta dolor. 5.- Construir una curva tiempo vs. Temperatura y determine el umbral del dolor.
Resultados
TIEMPO (MIN)
TEMPERATURA C
DOLOR

EXPERIMENTO N 2: ISQUEMIA LOCAL Y DOLOR


Materiales
Tensimetro.
Cronmetro.
Sujeto Experimental (alumno 1).
Sujeto Experimentador (alumno 2).
Procedimiento
1. El sujeto de experimentacin deber sentarse cmodamente, colocando el brazo sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazn.
2. Coloque el manguito del esfigmomanmetro, completamente desinflado, alrededor del brazo de
manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una presin de 200 mm
Hg.
4. Solicitar al sujeto de experimentacin que abra y cierre rtmicamente ambas manos.
5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el momento en que el
dolor se torna insoportable.
6. Disminuir rpidamente la presin del sistema, abriendo la vlvula de la pera insufladora.
7. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor.
8. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda.
Resultados

BRAZO
Derecho

Izquierdo

Inicia el dolor
Dolor insoportable
Desaparece el dolor

UMBRAL DEL DOLOR


DOLOR

TIEMPO (MIN)

TEMPERATURA (C)

Insoportable

ISQUEMA LOCAL Y DOLOR


BRAZO
Derecho
Inicia el dolor
Dolor insoportable
Desaparece el dolor

Izquierdo

PRUEBAS CEREBELOSAS
Marco Terico.
Anatoma.
Rol Fisiolgico.
Evaluacin de la Fisiologa Cerebelosa.
Sntomas y Signos de la alteracin Cerebelosa.

FUNCIN DEL CEREBELO

la principal funcin del cerebelo es la coordinacin del movimiento, es


decir, permitir que el movimiento se realice con facilidad y precisin.

los ncleos profundos tienen una actividad continua en situacin basal, y


tienen conexiones excitadoras con el origen de las vas motoras (corteza motora
a travs del tlamo, ncleo rojo, ncleos vestibulares y formacin reticular, que
son el origen respectivamente de las vas motoras corticoespinal, rubroespinal,
vestibuloespinales y reticuloespinales). as, los ncleos del cerebelo mantienen
una activacin tnica de las vas motoras que facilita la realizacin del
movimiento.

Las clulas de Purkinje inhiben a los ncleos profundos, con lo que


pueden inhibir unos componentes del movimiento y otros no, y as DAR
FORMA AL MOVIMIENTO.

EL CEREBELO REGULA EL TONO MUSCULAR, modificando la


actividad de las motoneuronas gamma, de manera QUE AUMENTA EL TONO
PARA MANTENER LA POSTURA, O LO INHIBE PARA FACILITAR LA
REALIZACIN DE LOS MOVIMIENTOS VOLUNTARIOS.

Tambin contribuye a la COORDINACIN DE LOS MOVIMIENTOS


POLIARTICULARES. Las fibras paralelas recorren una larga distancia en la
corteza del cerebelo, y en su recorrido pueden actuar sobre clulas de Purkinje
correspondientes a VARIAS ARTICULACIONES, COORDINANDO SU
ACTIVIDAD.

EL CEREBELO PARTICIPA EN EL APRENDIZAJE DE LOS


MOVIMIENTOS. MIENTRAS SE EST APRENDIENDO UN
MOVIMIENTO NUEVO SE PRODUCEN FRECUENTES ESPIGAS
complejas en las clulas de Purkinje. Esto produce depresin a largo plazo, por
lo que una vez que el movimiento se ha aprendido disminuye la frecuencia de
las espigas simples. Puesto que las clulas de Purkinje inhiben a los ncleos
profundos, la disminucin de las espigas simples produce una mayor actividad
de los ncleos profundos y de las vas motoras.

REGIONES FUNCIONALES DE CEREBELO


El cerebelo se divide en tres regiones funcionales. La estructura microscpica es
semejante en las tres, por lo que las diferencias entre ellas se deben a que tienen distintas
conexiones aferentes y eferentes, y realizan el mismo tipo de procesamiento pero con
distinta informacin.
Vestibulocerebelo

El vestbulocerebelo corresponde anatmicamente con el ndulo-flculo.

Colabora con los ncleos vestibulares en las funciones de mantenimiento


del equilibrio y de ajuste del reflejo vestibuloocular.

Las lesiones del vestibulocerebelo en un lado producen sntomas


parecidos a las lesiones de los ncleos vestibulares en el lado cotralateral. La
razn de esto es que, puesto que la corteza del vestibulocerebelo inhibe a los
ncleos vestibulares ipsolaterales, la lesin del vestibulocerebelo produce
hiperactividad vestibular ipsoateral, que equivale a una lesin de los ncleos
vestibulares contralaterales.

Espinocerebelo.

Incluye al vermis cerebeloso y la zona intermedia de los hemisferios


cerebelosos. El vermis junto con el ncleo fastigio se asocia a los movimientos
axiales (del tronco y raz de los miembros) y la zona intermedia de los
hemisferios cerebelosos se asocia a los movimientos la parte distal de las
extremidades. Por5 eso las lesiones del ,los hemisferios cerebelosos se asocian
con alteraciones de los movimientos de las extremidades partes distales. Y las
lesiones de la lnea media (VERMIS) producen inestabilidad en la marcha. Por
eso debe ampliar la base de sustentacin.

El espinocerebelo se encarga de controlar la ejecucin de los


movimientos. Recibe informacin por las vas espinocerebelosas de cmo se
estn realizando los movimientos, y si detecta que el movimiento comienza a
apartarse del objetivo deseado, enva seales correctoras. El ncleo fastigio
enva las seales correctoras al origen de las vas que controlan los

movimientos axiales, que son la vestibuloespinal y reticuloespinal, y el ncleo


interpuesto enva seales correctoras al origen de las vas que controlan los
movimientos distales, que son la va corticoespinal lateral y rubroespinal.

El espinocerebelo coordina la actividad de msculos agonistas y


antagonistas durante los movimientos. Regula la relajacin del antagonista
durante realizacin del movimiento, y tambin la contraccin del antagonista al
final del movimiento para frenarlo cuando llega al objetivo. Cuando se altera
produce el temblor intencional( no puede ensartar la aguja con un hilo).

Cuando se altera la parte lateral (hemisferio neocerebeloso se produce la ataxia,


disimetra, disdiadococinesia (juego sucesivo de palma- dorso de las manos
muy dificultoso) .

Cerebrocerebelo.

Comprende la parte lateral de los hemisferios cerebelosos y el ncleo


dentado.

Participa en la preparacin del movimiento. Recibe informacin de la


corteza, a travs de los ncleos del puente, sobre el movimiento que se desea
realizar, elabora el plan motor (determina qu msculos hay que contraer, y en
qu secuencia, para realizar ese movimiento) y enva ese plan motor a la corteza
motora, a travs del tlamo, para que se ejecute.:Cuando se retrasa esta accin
de descompone el movimiento en sus partes ( movimientos roboticos)

El cerebrocerebelo es necesario para el aprendizaje de movimientos


complejos (p. ej. aprender a tocar el piano).

El cerebrocerebelo tambin interviene en funciones cognitivas no


relacionadas directamente con el movimiento.

Para evaluar la FUNCIN CEREBELOSA se estudia la Taxia es decir se explora la


Taxia durante la ejecucin de los movimientos ( Taxia dinmica) se evalan en la
posicin de reposo( Taxia esttica).
Evaluacin de la Taxia DINMICA: Se examina por medio de pruebas que consisten
en establecer una meta u objetivo a los movimientos de la persona. Si estas pruebas se
alteran se dice que existe ataxia dinmica, por ejemplo tenemos:
La Prueba del taln rodilla para miembros inferiores: estando la persona echada tocar
con el taln de un pi la rodilla del la otra pierna, lo debe hacer en forma precisa, exacta,
enseguida se le pide que descienda el taln bordeando la tibia de la pierna opuesta y no
debe zigzaguea hasta llegar al dedo gordo del otro pi. Si tiembla, duda zigzaguea el
taln , es anormal.
Para Miembros superiores: Prueba de Indice-Nariz de ndice- oreja .
Con los dedos de la mano contrados se le pide que con el ndice extendido se toque la
punta de la nariz y luego el lbulo de la oreja con los ojos abiertos y luego cerrados.
Debe hacerlo en forma precisa sin oscilaciones irregulares o bruscas y sin exceder la
distancia.
Tambin ndice del mismo paciente o con el del examinador.
Para el Tronco: Se invita a la persona a efectuar cambios de postura: incorporarse,
sentarse o caminar: En caso de ataxia dinmica se producirn movimientos oscilantes del
tronco.
Evaluacin ce la TAXIA ESTATICA: Signo de ROMBERG:
La investigaremos con un voluntario de pi, con los pies juntos y las palmas de las
manos adosadas al cuerpo(en actitud de firme).
Se observar si la persona mantiene la postura erecta o si, por el contrario aparecen
oscilaciones y la persona busca apoyo para no caerse. Luego le pediremos que cierre los
ojos: si la persona oscila mucho y tiende a caer decimos que es ROMBERG POSITIVO
(anormal). Debemos permanecer cerca de la persona examinada o para sostenerlo en
caso de cada.
A veces esta maniobra no es suficiente para detectar el signo de Romberg y y entonces
se buscar lo que se denomina ROMBERG Sensibilizado que consiste en poner de pi a
la persona con un pi delante del otro , o sobre un solo pi ; o bien haciendo un
cuatro ( el paciente levanta un pi hasta la altura de la rodilla, con los ojos cerrados. Si
existe Romberg positivo aparecern oscilaciones y tendencia a la cada.
Significado Fisiolgico: Este signo revela un trastorno del sistema propioceptivo, un
dficit en las vas de conduccin aferentes de la sensibilidad profunda o laberntica
corregido por la visin. Por ello se pone de manifiesto cuando se le pide cerrar los ojos.
El mismo significado fisiolgico tienen las alteraciones de la taxia dinmica cuando se
le pide al paciente que cierre los ojos. Revelan tambin alteracin de los cordones
posteriores de la mdula, sistema laberntico y degeneraciones espinocerebelosas. El
signo de Romberg positivo pone de manifiesto la presencia de ataxia esttica.
Evaluar Disimetra

Evaluar Disdiadococinesia
Evaluar Temblor intencional
LESIONES DEL CEREBELO
Los sntomas de las lesiones cerebelosas se pueden comprender fcilmente si se conocen
las funciones del cerebelo:

Dismetra. Consiste en que el movimiento pasa de largo del objetivo,


porque los msculos antagonistas no se activan a tiempo para frenarlo

Temblor intencional. el temblor cerebeloso o intencional se acenta con


los movimientos voluntarios. Se produce porque se contraen a la vez los
msculos agonistas y antagonistas al realizar el movimiento

Disdiadococinesia. Dificultad para los movimientos alternantes y


repetitivos, como golpear rtmicamente con el dorso y la palma de la mano. Se
debe a la falta de coordinacin en la activacin alternante de agonistas y
antagonistas.

Disartria. Dificultad en el habla, por falta de coordinacin en los


msculos de la articulacin de las palabras.

Descomposicin de los movimientos. Cuando un movimiento implica a


varias articulaciones de un miembro, primero se mueve una articulacin y luego
otra.

Alteracin del equilibrio y nistagmus si la lesin afecta al


vestibulocerebelo

Ataxia. Significa falta de coordinacin de los movimientos

Hipotona. Por alteracin en la regulacin del tono muscular.

FISIOLOGIA DEL VIII PAR CRANEAL VESTIBULO COCLEAR


En esta practica evaluaremos solamente la funcin de la rama coclear del VIII Par craneal (mediante test
Weber, Rinne y Schwabach) y evaluar hipoacusia solamente, pues la rama vestibular ser evaluada de
modo diferencial conjuntamente con el estudio del cerebelo en su oportunidad.
Exploracin de la rama coclear del Nervio acstico VIII par;nervio vestbulo coclear)
El nervio coclear
conduce
los estmulos auditivos
inducidos por las vibraciones
sonoras ,recogidas por el receptor: rgano de Corti ,de los estmulos auditivos.
No nos olvidemos que el nervio vestibular conduce los estmulos especficos del sentido del
equilibrio que traduce las sensaciones de posicin o movimientos del cuerpo en relacin al
espacio.
Para la evaluacin fisiolgica de la percepcin del sonido evaluaremos la transmisin area y la
transmisin sea.
La hipoacusia POR ALTERACIN EN LA TRANSMISION CONDUCCION AREA
(HIPOACUSIA DE CONDUCCIN) : en AFECCIONES DEL OIDO EXTERNO O MEDIO
acumulo de cerumen o perforacin timpnica.

Y LAS AFECCIONES DE HIPOACUSIA POR ALTERACIONES EN LA CONDUCCIN


SEA EN LOS TRANSTORNOR DEL NERVIO AUDITIVO)RAMA COCLEAR DEL
LABERINTO(Hipoacusia sensorial, nerviosa o de Percepcin .
Evaluacin fisiolgica de la audicin.
El estudio de la transmisin sea se efecta por medio de tres pruebas CLSICAS QUE SON
Weber, Rinne y Schwabach. El objeto de ellas es comprobar si la eventual hipoacusia se debe:

a que existe una prdida de la conduccin area(hipoacusia de conduccin


si se trata de una perturbacin de la transmisin sea como ocurre en la afecciones del laberinto ,
nervio vias auditivas nerviosas(hipoacusia sensorial nerviosa de percepcin).

Las pruebas de audicin constituyen lo que se llama: Acumetra Puede ser Fnica o
Instrumental.

AUDIOMETRIA INSTRUMENTAL: Se realiza mediante los DIAPASONES, que son


instrumentos metlicos vibrantes de acero o de magnesio cuyas ramas son de forma de U alargada y
con un mango corto que sirve para cogerlos. Las frecuencias del juego completo de diapasones van
desde 64 Hertz hasta los 4000 Hertz. Con ellos se puede hacer el diagnstico cualitativo de las
hipoacusias y decir si se trata de una hipoacusia conductiva o de transmisin, una hipoacusia
neurosensorial o de una mixta, lo cual se averigua mediante las siguientes pruebas:

PRUEBAS DE AUDICION
TEST DE WEBER COMPARATIVO: ambos odos
Es una prueba de lateralizacin y generalmente se utiliza cuando la audicin por va area es diferente en
los dos odos.
En el odo normal y en el paciente con hipoacusia simtrica, no hay lateralizacin del sonido.
La prueba se realiza pellizcando las ramas de un diapasn de 500, 250 o 128 Hertzios y no golpendolas
para no originar armnicos, se coloca el mango del diapasn en la frente o en los incisivos superiores y se
le pregunta al paciente de qu lado oye mejor el sonido.
- Si el paciente afirma sentir el sonido ms fuerte hacia el odo hipoacsico quiere decir que se trata de
una sordera de tipo conductivo o de transmisin.
- Si el sonido del diapasn colocado en la frente o en los incisivos superiores lateraliza hacia el odo sano,
ello indica que el odo contralateral presenta una hipoacusia de tipo neurosensorial.

TEST DE WEBER COMPARATIVO


Con el diapasn vibrando en medio del crneo (vertx), se escucha bien
en ambos lados el sonido no se lateraliza, el sonido es igual en ambos
lados.
El test compara las vas seas en ambos odos. Se puede colocar el
diapasn en la frente en incisivos superiores.

RESULTADO
Si el sonido se lateraliza hacia el lado sano, entonces es hipoacusia Neuro sensorial Derecha. Si
se lateraliza hacia el odo que escucha mejor, el odo Derecho enfermo peor prcticamente no
escuchara.
Si el odo Derecho (enfermo) escucha mejor, el sonido lateraliza hacia la izquierda, ser
hipoacusia de transmisin o de conduccin.

TEST DE RINNE
Compara la calidad de la Percepcin Auditiva por medio de 2 Vas:

AEREA
OSEA
Transmisin
Apfisis mastoides
Conduccin
(Investigamos un solo odo cada vez ; es monoaural)
PARA COMPARAR AEREA Y OSEA SE TOMA EL TIEMPO DE DURACION DEL
SONIDO CON CRONMETRO DESDE EL INSTANTE EN QUE COLOCAMOS EL
MANFGO DEL DIAPASON VIBRANTE EN HUESO MASTOIDES (INICIO) HASTA QUE
DES APARECE EL SONIDO

Metodo para exploracin de Rinne


TEST DE RINNE EN UN SOLO OIDO
Va sea
1. Diapasn
mastoides.

vibrando

sobre

apfisis

Va area
2. De inmediato acercar el diapasn a la oreja
del mismo lado.
3. Preguntar al paciente Cundo escucho
mejor?, Dnde con mayor intensidad?
RESULTADO
Si se escucha mejor por va sea, Hipoacusia de
Transmisin conduccin RINNE NEGATIVO.
Si se escucha mejor por Va area es normal
Hipoacusia de percepcin neurosensorial. RINNE
POSITIVO.
TEST DE RINNE:
Tiene por objeto comparar la audicin de un sonido transmitido por va sea(mastoidces), con la audicin
del mismo sonido transmitido por va area ( delante oreja ) tomando los tiempos de duracin del sonido
en segundos con el diapason en mastoides y luego con el mismo estmulo tomar tiempo delante de la
oreja.
Al poner un diapasn vibrante en la mastoides de un individuo sano, ste oir el sonido generado hasta que
la magnitud de la vibracin no se se escuche pues se hace insuficiente para vencer la impedancia acstica
que le ofrecen los tejidos que se interponen en su transmisin hasta la cclea, el sonido en regin
mastoidea normalmente se percibe durante 20 segundos.
Una vez que el diapasn deja de ser audible por va sea si se lo coloca INMEDIATAMENTE frente al
conducto auditivo externo (sin tocar la oreja) reaparece la sensacin auditiva por va area 40 segundos
ms, ya que la impedancia a vencer por esta va es mucho menor que por va sea. En este caso que es el
normal se dice que el RINNE es POSITIVO.
En las hipoacusias conductivas la percepcin se mantiene durante un tiempo mayor por va sea que por
va area, por ejemplo 35 segundos por va sea y 20 segundos por va area, esto constituye el RINNE
NEGATIVO.
En las hipoacusias neurosensoriales se hayan disminuidas ambas fases, las proporciones se mantienen pero
los tiempos estn disminuidos y se habla de RINNE POSITIVO ACORTADO. Los valores podran ser 10
segundos por va sea y 20 segundos por va area.
TEST DE SCHWABACH
Consiste en comparar el tiempo de audicin de un diapasn vibrante colocado en el vrtex del paciente
con el tiempo que oye un sujeto normal. Se aplica el diapasn vibrante en el vrtex del paciente hasta que
deja de orlo.
Si el examinador o testigo normal oye, se habla de SCHWABACH CORTO y orienta a una sordera
neurosensorial;
en el caso contrario SCHWABACH LARGO orienta hacia una lesin de tipo conductivo, por ejemplo una

otoesclerosis.
Si los tiempos son semejantes se dice que el SCHAWABACH es normal.
RESULTADOS COMPARATIVOS ENTRE LA ACUMETRA FNICA (VOZ) Y LA
ACUMETRA INSTRUMENTAL ENTRE UNA PERSONA NORMAL Y UNA CON
HIPOACUSIA NEUROSENSORIAL:
FONICA
Voz cuchicheada
Voz alta
Instrumental
Conduccin sea
Conduccin area
Weber
Rinne
Schwabach

NORMAL
6 metros
40 metros

NEUROSENSORIAL
0.2 metros
1 metro

20 segundos
40 segundos
Sin lateralizacin
Positivo (normal)
Igual al examinador

10 segundos
20 segundos
Lateralizacion (al mejor odo)
Positivo (corto)
Menor que el examinador normal

Resumen :
En la hipoacusia de conduccin (Trastorno de la conduccin area , afecciones del odo externo
y/o medio) tenemos:
El Weber se lateraliza hacia el odo afectado el odo peor
El Rinne es negativo en el odo afectado
El Schwabach es normal o ms prolongado en el lado afectado
En la hipoacusia de percepcin o nerviosa(trastorno de la transmisin sea , afecciones del odo
interno laberinto u nervio auditivo) tenemos:
Weber lateralizado hacia el lado sano
Rinne es positivo en el odo afectado
El Schwabach s acorta en el odo afectado.

Sistema Nervioso Autonmico


EFECTOS SIMPTICOS Y PARASIMPTICOS
Introduccin
El sistema nervioso autnomo comprende dos grandes divisiones antagnicas: sistema simptico y
parasimptico, relacionados a respuesta de stress y antiestrs.
Se emplea el sapo para observar los efectos simpticos y parasimpticos en la actividad cardiaca.
Material
Sapos grandes
Conejos
Adrenalina
Acetilcolina
Atropina
Tabla de fijacin para batracios
Pilocarpina
Equipo de diseccin

Algodn
Jeringas descartables
Suero fisiolgico
Electrocardigrafo con juego de agujas de metal
Atenolol
Solucin de Ringer para batracios

Mtodo
Experimento N 1
Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y la medula espinal. Colocar al animal en la tabla de
fijacin. Abrir el peto esternal y exponer el corazn. Humedecer peridicamente con la solucin de Ringer
para batracios. Conectar el electrocardigrafo por medio de las agujas de metal y obtener un trazado
electrocardiogrfico basal. Instilar una gota de solucin de Acetilcolina al 1/5000 y obtener un nuevo
trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar por al
menos 2 minutos.
Experimento N 2
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar dos gotas de solucin de Adrenalina al
1/2000 y obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.
Experimento N 3
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solucin de Atenolol y
obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos. A continuacin instilar dos gotas de solucin de Adrenalina al 1/2000 y obtener
un nuevo trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos.
Experimento N 4
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solucin de Atropina al
0.1% y obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos. A continuacin instilar dos gotas de solucin de Acetilcolina 1/5000 y
obtener un nuevo trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.
Experimento N 5
Instilar 1 gota de Pilocarpina en el ojo derecho de un conejo y una gota de solucin de Adrenalina en el
ojo izquierdo.

Discusin

FISIOLOGA
CARDIOVASCULAR
Corazn in situ: Propiedades del Corazn
1.- Fundamento
El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad, conductibilidad y contractilidad
que le permite al corazn trabajar como bomba, de una manera adecuada a las necesidades del organismo.
Tiene inervacin autnoma y sistema de conduccin elctrica organizada.
La actividad elctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la superficie corporal y
graficarse en ondas por medio del Electrocardigrafo. Existe una correlacin entre la actividad elctrica y
el ciclo cardiaco.
2.-Objetivos
a. Reconocer la anatoma del corazn y vasos
b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-caractersticas del msculo cardiaco
c. Detectar la actividad elctrica del corazn (Electrocardiograma)
d. Relacionar la actividad elctrica y el ciclo cardiaco
e. Demostrar los efectos de estmulos fsicos y qumicos (adrenrgicos y colinrgicos) sobre el
corazn
f. Conocer el efecto vagal
3.-Materiales
- Animal para experimentar- sapo
- Electrocardigrafo
- Quimgrafo
- Migrafo para cardiografa por suspensin
- Carrete de estimulacin elctrica
- Equipo de diseccin y 2 pares de guantes)
- Sol. CIK 1%
- Propranolol 1/1000

- Tablilla de fijacin
- Tubos de ensayo (03)
- Agua caliente (40), fra (80)
- Sol. Ringer.
- Adrenalina 1/2000
- Acetilcolina 1/5000
- Sol. C12Ca 1%
- Atenolol 1/1000

4.-Experimentos
4.1 N 1: Exposicin del corazn-anatoma- ciclo cardiaco
Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y mdula espinal
Colocar al sapo en la tablilla en decbito dorsal-fijarlo con alfileres
Cortar la piel del trax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca hasta la porcin media
del abdomen
Humedecer permanentemente las vsceras y tejidos con Sol. Ringer
Reconocer la punta del esternn y cortar por su lado izquierdo
Con tijera cortar el esternn en su lnea media
Exponer al corazn e identificar el pericardio, cortarlo y observar las partes del corazn y vasosreconocer las fases del ciclo cardiaco
Colocar el Electrocardigrafo y tomar un basal; relacionarlo con el ciclo cardiaco
4.2 N 2. Experimento de Gaskel- Estmulo fsico (temperatura) al corazn

Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo); identificar la pared
posterior del corazn.
Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurculas y Ventrculo)
Con tubo de ensayo (agua fra) tocar el Seno venoso y observar los latidos
Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de ensayo con agua caliente;
observar latidos
Interpretar los eventos que acontecen
4.3 N 3. Cardiografa directa por suspensin- Efecto Vagal y Farmacolgico
Fase A: Disecar el nervio vago derecho:
Cortar piel y subcutneo hasta llegar al ngulo externo del maxilar
Identificar y cortar y transversalmente al msculo cutneo pectoral derecho
Colocar el brazo derecho a 45 con respecto al eje del cuerpo
Observar debajo de la mandbula a dos nervios :glosofarngeo(lateral) y el hipogloso (medial),
individualizarlos y seguir sus recorridos hasta la lnea media , en donde cambian de direccin y
se dirigen al piso de la boca
Entre los dos nervios, reconocer la arteria cartida primitiva (en el ngulo externo de la
mandbula). Desplazarla hacia arriba e identificar por debajo al nervio vago derecho.
Pasar por debajo del nervio vago un hilo mojado con sol. Ringer
Fase B: Proceder a los siguientes experimentos:
4.3.A: Cardiografa directa- Efectos del vago en el corazn
Colocar el clamp del Cardigrafo en al punta del ventrculo ; Aproximar el Quimgrafo a la
palanca y obtener un trazado
Determinar el ritmo, frecuencia y amplitud del trazado ; relacionarlo con el ciclo cardiaco
Dibujar un grfico, sealando sus caractersticas
Desconectar Electrocardigrafo.Estimular al nervio vago ( usar los electrodos del carrete de
induccin ), observar los cambios en el latido (Durante/estimulacin desconectar /
Electrocardigrafo)
Estimular con una aguja a las aurculas y al ventrculo y reconocer la contraccin prematura
morfologa y la pausa compensadora.
4.3.B Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina
Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar c/Sol. Ringer
Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar
Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar
Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar
4.3.C Ligadura de Stannius- Conduccin elctrica automatismo
En el surco en el Seno venoso y las aurculas colocar un hilo humedecido con sol. Ringer y ligar.
Observar efectos en el ECG. Analizar
Una segunda ligadura entre las aurculas y el ventrculo ; ligar y observar ECG
Observar la frecuencia de contraccin de aurcula y el ventrculo (Bloqueo aurculo- ventricular)
5.

Graficar, analizar e interpretar los experimentos realizados

ACTIVIDAD ELCTRICA DEL CORAZON Y EFECTO DE LOS


ELECTROLITOS
1.
Fundamento
Los potenciales de membrana de la clula cardiaca tienen relacin directa con la concentracin de los
iones dentro y fuera de la clula. El potencial de accin es consecuencia de la entrada y salida de los iones,
de la clula. Algunos iones INTERVIENEN en la despolarizacin y otros en la repolarizacin celular.
La perfusin del corazn con soluciones que tienen mayor concentracin de iones van a
alterar los potenciales de la clula y se expresaran en la contraccin del miocardio.
2.

Objetivos
Reconocer y analizar los cambios de la actividad cardaca cuando se le expone a soluciones con
Potasio, Calcio y Magnesio
b. Esquematizar los lugares de accin de dichos cationes en el potencial de Accin
c. El alumno ser competente para entender los conceptos :
- Relaciones espaciales de las Cavidades cardiacas: (aplicacin en el ECG, auscultacin cardiaca)
- Diferenciar entre el msculo auricular y ventricular: relacin con presiones que manejan.
- Sistema de conduccin: automatismo, conduccin, velocidad de conduccin, excitabilidad
Diferencias del potencial de accin entre N. Sinusal y fibra ventricular: Canales inicos en la
despolarizacin y repolarizacin, efectos y su fundamento de administracin de Potasio, calciocambios en el ECG. Por que el N. sinusal comanda el inicio de la despolarizacin cardiaca?
- Periodo refractario absoluto y relativo :consecuencias ante estmulos
- Innervacin cardiaca: efectos en las propiedades del msculo cardiaco
- Irrigacin cardiaca: a. coronarias y venas cardiacas- relacin de la sstole y distole con la
irrigacin coronaria.
a.

3.
-

MATERIAL
Animal de experimento: sapo
Tablilla de fijacin y alfileres
Catteres EV
Frascos de perfusin de 125 ml
Anzuelos
Cera

4.

EXPERIMENTOS:

- Sol. Ringer (Sol A)


- Sol. Ringer con C1Ca (1 gr/lt)(Sol.B)
- Sol. Ringer con CIK (0.3 g/lt)(Sol.C)
- Sol. Ringer con C1Mg (1g/lt)(Sol.D)
- Quimgrafo
- equipo de diseccin

4.1. Experimento N 1: Preparacin


Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y mdula espinal
Fijar al animal a la tablilla, con alfileres
Exponer al corazn a travs de una incisin media toraco abdominal
Cortar el pericardio, insertar el anzuelo, con un hilo, a la punta del corazn
Levantar el corazn para exponer la vena cava y canularla
Conectarla a un sistema de perfusin graduando la altura de los frascos
Se conecta los frascos de perfusin a travs de tubos en Y a una va comn que se inserta en la
vena cava
Cada una de los frascos posee una llave para abrir o cerrar el flujo
Frasco A: Sol. Ringer
Frasco B: Sol Ringer con CLCa
Frasco C: Sol. Ringer con CIK

Frasco D: Sol. Ringer con CIMg


Evitar que quede aire en el sistema de perfusin llenar un lado del sistema con sol. Ringer
Se inicia la perfusin hasta que el corazn se contraiga

4.2. Experimento 2: Exponer al corazn al Cloruro de Calcio


Prefundir al corazn con la sol. B.
Registrar la actividad cardiaca y las caractersticas de las contracciones
4.3. Experimento 3: Exponer al corazn al Cloruro de Magnesio
Prefundir al corazn con la sol. D.
Registrar la actividad cardiaca y las caractersticas de las contracciones
4.4. Experimento 4: Exponer al corazn al cloruro de Potasio
Prefundir al corazn con la sol. C.
Registrar la actividad cardiaca y las caractersticas de las contracciones
5.

Graficar y analizar los efectos de los iones Potasio, Calcio y Magnesio

ELECTROCARDIOGRAFIA EN EL SER HUMANO EN REPOSO


1.
Introduccin
El corazn tiene la capacidad de generar su propio potencial de accin , el que es transmitido a travs del
sistema de conduccin a las aurculas y los ventrculos. Es transmitido a travs del volumen conductor a la
superficie del cuerpo. Donde es captado por los electrodos del electrocardigrafo.
La electrocardiografa puede realizarse en reposo (electrocardiografa clnica de reposo) o en actividad
(prueba de esfuerzo).
En la presente prctica se realizara la electrocardiografa de reposo.
1. A Objetivos y competencias que obtendr el alumno: Electrocardiografa
1. Relacionar la actividad elctrica del corazn con las ondas e intervalos del ECG
2. Conceptos de derivaciones perifricas y precordiales
3. Relacin entre la ubicacin de una derivacin y las ondas del ECG.
4. Por que hay diferencias entre la morfologa de ondas en cara diafragmtica y cara lateral?
5. Derivaciones de la cara inferior y posterior del corazn
6. Derivaciones de la cara lateral del corazn: morfologa del QRS
7. Derivaciones de la cara anterior del corazn
8. Derivaciones de la cara anteroseptal del corazn
9. Eje elctrico del QRS: importancia y relacin con la masa ventricular
10. Concepto de ritmo sinusal y nocin elemental arritmias y bloqueos.

2.
Material
Sujetos de prueba varones y mujeres, Electrocardigrafo, leptosmicos y pcnicos
3.
Mtodo
3.1. Experimento N. 1
Colocar al sujeto en decbito dorsal y aplicar los electrodos de acuerdo a la convencin internacional.
Estandarizar el aparato aplicando 1 mV , debiendo defleccionar la aguja inscriptora 10mm amplitud; la
velocidad de registro del aparato deber ser 25 mm/seg. Realizar 6 trazados de derivaciones de miembros
y 6 trazados de de derivaciones precordiales.
Informar de acuerdo al siguiente protocolo:

Nombre:
Edad:
Peso:
Informe electrocardiogrfico:
Ritmo:
Intervalo PR:
Complejo QRS:
Eje QRS
Morfologa de P
Morfologa de QRS:
Morfologa de T:
Conclusiones:
Comentario:

Fecha:
Talla:
Tipo constitucional:

Frecuencia cardiaca:
Intervalo Q-T:
Q-Tc:

4.

Discusin

PRESIN SANGUNEA EN EL HOMBRE ADULTO


1.-FUNDAMENTO
El volumen sistlico produce en la circulacin perifrica cambios en el flujo y presiones intravasculares;
presin arterial, presin venosa. Estas presiones estn relacionadas con la longitud y radio del vaso y con
la viscosidad de la sangre; factores que producen resistencia al flujo. La presin arterial tiene un pico
mayor denominado presin sistlica y un nivel inferior denominado presin diastlica. La presin
promedio se denomina presin arterial media. La presin arterial puede determinarse en forma indirecta
por medios de un aparato Esfigmomanmetro de mercurio o aneroide.
1.
a.
b.
c.

2.
3.

OBJETIVOS
Determinar la presin arterial sistlica, diastlica, en forma indirecta
Determinar los cambios de la presin arterial cuando se expone factores, fsicos (temperatura),
cambios de posicin y de actividad fsica
Calcular la presin arterial media-El alumno tendr competencia para saber:
- Cuales son los factores mecnicos y humorales que determinan la presin arterial?
- Relacionar presin hidrosttica y onctica con la PA
- Mencionar tres sustancias que sean vasoconstrictoras y tres que sean vasodilatoras
cmo actan? Cmo se regulan?
- Relacione los cambios de PA y FC en relacin con el ejercicio y la postura corporal
- Qu importancia tiene la PAM? Cmo la determina?
- Relacionar gasto cardiaco, resistencia vascular, vol. Sistlico, frecuencia cardiaca,
Inotropismo, precarga, volumen sanguneo, capacidad venosa, presin venosa central,
regulacin de agua y sodio por el rin
MATERIAL
Sujeto de prueba: alumnos
Tensiometro de mercurio o anaeroide
Estetoscopio
Beakers
Agua fra (5 C)

EXPERIMENTO
Experimento 1: Determinar la presin arterial
Sujeto de prueba en posicin sentada, brazo descubierto a la altura del corazn
Esperar 5 minutos
Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo
Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral
Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial
Desinflar el manguito lentamente y
Registrar la presin sistlica con el primer ruido de Korotkoff
Registrar la presin diastlica con el quinto ruido de Korotkoff
Recordar: 1mmHg = 0.13 Kpa = 13.6 cm. H2O

Experimento 2: Efecto del ejercicio fsico sobre la presin arterial


Realizar un ejercicio fsico intenso ( 20 abdominales o 20 cuclillas)
Tomar la presin inmediatamente, a los dos y cinco minutos
Registrar la frecuencia cardiaca en el basal y post ejercicio
Interpretar los cambios

Experimento 3: Efecto de la posicin del cuerpo sobre la presin arterial


Registrar la presin arterial y frecuencia cardiaca en la posicin de decbito dorsal, sentado y de
pie; previo descanso entre cada posicin
Interpretar los resultados

Experimento 4: Efectos del fri sobre la presin arterial


Sumergir la mano en agua fra (5 C) por 30 a 60 segundos, hasta cubrir la mueca
Determinar la PA
La prueba se considera positiva si la PAS sube ms de 20mmHg y la PAD ms de 15 mmHg.

Bibliografa

Mc Graw Hill: Practicas de Fisiologa. Interamericana


William Ganong. Fisiologa Mdica
Arthur Guyton y may John. Tratado de Fisiologa Mdica

ESPIROMETRA: VOLMENES Y CAPACIDADES PULMONARES.


TESTS DE FUNCIN VENTILATORIA.
1.

Introduccin

La medicin de los volmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometra. Este procedimiento
permite determinar todos lo volmenes pulmonares, excepto el volumen residual, cuya medicin se realiza
por mtodos indirectos. Emplearemos el Espirmetro Pneumotacmetro Fleich Datospir 120
En esta prctica el alumno adquirir competencia para entender:
1.
2.

Cantidad de Aire inspirado y expirado normalmente: Volumen Tidal


Volmenes pulmonares: V. espiratorio forzado(VEF); V. Inspiratorio Forzado(VIF) ; Volumen
residual (VR)
3. Capacidades Pulmonares (relacin de dos ms volmenes): Capacidad Vital (CV); Capacidad
funcional residual (CFR); Capacidad pulmonar Total (CPT)
4. Espacio Muerto (EM): relacin con el VT
5. Espacio Muerto fisiolgico (EMF): ejemplos
6. Volumen alveolar (VA) - Relacin entre VA, EM y VT
7. Ventilacin: (volumen de aire por minuto): tipos
8. Ventilacin alveolar: FR x VA
9. Ventilacin Pulmonar: FR x VT
10. Volumen Espiratorio Forzado al primer segundo (VEF1) (80% de la CV)
11. Diferencias procesos Obstructivos de Restrictivos pulmonares.
2.

Equipo

Pinza Nasal
Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar
EQUIPO ESPIRMETRO NEUMOTACMETRO FLEICH DATOSPIR
3.

Mtodo

3.1. Obtencin del Espirograma


Sentar al sujeto de prueba, colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al neumotacmetro. Constatar
que no haya fugas de aire por la boca, borde de los labios, ni nariz.
Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal, para que se acostumbre a ella. Una
vez que la frecuencia respiratoria se ha vuelto constante y la profundidad de la respiracin uniforme,
conectar al espirmetro para obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). A continuacin
solicitar al sujeto que realice las siguientes maniobras segn instrucciones del profesolr de Practicas.:
a) Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima y luego respirar
normalmente. .
b) Al final de una espiracin normal (FEN) realizar una inspiracin mxima y luego respirar
normalmente.
c) Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima seguida de una
inspiracin mxima, luego respirar normalmente.
Mediciones de la capacidad ventilatoria.
CAPACIDAD VITAL FORZADA (CVF)
Es la mxima espiracin forzada y rpida realizada despus de una inspiracin profunda.

VOLUMEN ESPIRATORIO FORZADO DEL PRIMER SEGUNDO (VEF1)


Es el volumen de aire espirado durante el primer segundo de la espiracin de una CVF. Los valores
normales son: 83% para el primer segundo, 94% para el segundo segundo y 97% para el tercer segundo.
FLUJO ESPIRATORIO FORZADO DE 25% AL 75% (FEF 25-75%)
Es la medicin del flujo espiratorio considerando el 50% del medio de la CVF. De esta medicin se
obtiene el flujo espiratoria mximo medio, cuyo valor normal para un sujeto joven es de 150L/minuto.
MXIMA VENTILACIN VOLUNTARIA (MVV) o mxima capacidad ventilatoria o
mxima capacidad respiratoria
Es el mximo volumen de aire que pueden movilizar voluntariamente los pulmones en un minuto.
Velocidad del flujo medio respiratorio mximo (MMEFR) o velocidad del flujo espiratorio forzado
(FEF 25-75%)
Es la relacin del medio de la CVF y el TEM. Es el test ms sensible para el diagnstico de la enfermedad
obstructiva.
Se discutirn los trazados obtenidos con los respectivos profesores de Prcticas en cada mesa.

OXIMETRIA: SATURACION ARTERIAL DE OXIGENO


Introduccin
En los seres humanos como en todos los mamferos, la hemoglobina, constituye el principal componente
del eritrocito y normalmente es responsable del transporte del 99.2% de oxigeno presente en la sangre.
Tambin juega un papel importante en el transporte de di6xido de carbono (C02) y del ion hidr6geno
(H+).
La hemoglobina es una protena conjugada con un peso molecular de 68000.
Est formada por cuatro subunidades de peso molecular cercano a 17000. Cada subunidad est constituida
por un grupo heme y una cadena polipeptdica. La molcula de hemoglobina, por lo tanto, est
integrada por cuatro grupos "heme" y cuatro cadenas polipeptdicas, que en su conjunto constituye la
globina.
La globina constituye el 96% de la molcula de hemoglobina y est compuesta por cuatro cadenas
polipeptdicas que aparecen como dos pares no idnticos. La hemoglobina A, la principal hemoglobina en
los adultos, consta de dos cadenas y dos cadenas siendo su estructura 2 y 2 , y representa el 90%
del total de la hemoglobina. Una segunda especie de hemoglobina es la HbA2, y representa el 2.5% del
total, y contiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta (2 y 2 ) Adems de estas dos hemoglobinas, otras
seis formas adicionales se encuentran en pequeas cantidades y cuyo significado fisiolgico aun falta
precisar.
Adems de la heterogeneidad presente a nivel individual, se observa una heterogeneidad de la
hemoglobina durante el ciclo vital. Durante la vida embrionaria aparece la hemoglobina embrionaria (
HbE ), en la cual las 2 cadenas a estn combinadas con las 2 cadenas epsilon (a2E"z); rnientras que durante
la vida fetal, la principal protena transportadora es la hemoglobina Fetal (HbF) donde las cadenas alfa
estn combinadas con cadenas gamma (2 2)
Un tercer tipo de heterogeneidad de la hemoglobina, resulta de mutaciones de genes que
controlan la secuencia de aminoacidos en las cadenas alfa y beta, dando lugar a la aparicin de
hemoglobinas anormales.
El grupo "heme" constituye el 4% de la molcula de hemoglobina; y es una rnetaloporfirina que
resulta de la combinacin de un metal, el hierro, con una porfirina. EI hierro puede estar en el estado de
oxidacin ferroso (+2) o en el ferrico (+3), y las formas correspondientes de hernoglobina se denominan
ferrohemoglobina y ferrihemoglobina o metahemglobina, respectivamente; y solamente la
ferrohemoglobina puede captar oxigeno.
La hemoglobjna presenta las siguientes caracteristicas:
1) Cada atomo de, hierro de los grupos "hemo" reacciona directamente con el oxigeno molecular
(Oz) y logra fijar una molcula de oxigeno por cada tomo de hierro, de lo que podemos deducir que una
molecula de hemoglobina puede transportar cuatro moleculas de oxigeno.
Para que esta reaccin ocurra, el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe2+o ferroso).
Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina: existe oxigenacin y no
oxidacin de la hemoglobina. Cuando el tomo de hierro es oxidado a su forma trivalente (frrico), como
ocurre en la metahemoglobina, no reacciona con el oxigeno, perdiendo la hemoglobina la capacidad de
transportarlo. En condiciones normales in vivo, el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito
mantiene al hierro de la molcula en estado ferroso.
2) La hemoglobina tambin se combina con el monxido de Carbono (CO2), unin que se
realiza, al igual que con el oxgeno, con el hierro. Cada tomo de hierro puede fijar una molcula de

monxido. EI producto resultante recibe el nombre de "carboxihemoglobina".


Cada tomo de hierro puede fijar una molcula de monxido de carbono, compuesto producido
por la combustin incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de alumbrado, motores a explosin). El
monxido de carbono se combina ms fcilmente con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el
oxigeno. El peligro de la intoxicacin con monxido de carbono radica en el hecho de que la
carboxihemoglobina no tranporta oxigeno. Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta
ocupada con monxido de carbono aparecen las cefaleas y vmitos; si lo esta un 50 %, la vida peligra; si
lo est un 60-70 %, se produce la muerte por asfixia.
3) El hierro de la hemoglobina sufre constantemente procesos de oxidacin, formndose la
metahemoglobina. Ocurre en un 3% del total de la hemoglobina por da. La conversin de una fraccin
de hemoglobina en metahemoglobina tiene un efecto similar al de la carboxihemoglobina, es decir, pierde
la capacidad de transportar oxigeno. En condiciones normales "in vivo" la metahemoglobina es
reducida a hemoglobina por accin de la diaforasa del eritrocito, enzima que permite acoplar la NADH2
generada por la gliceraldehido-fosfato-deshidrogenasa en la reaccin de Embden-Meyerhoff
Entre los factores que ocasionan una acumulacin excesiva de metahemoglobina se encuentra: a)
La metahemoglobinemia hereditaria, por disminucin de la actividad de la diaforasa o bien por sntesis
de hemoglobinas anormales, y b) La metahemog!obinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai
ingesta de frmacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se suspende
la administracin de las drogas.
4)
La hemoglobina se combina con el dixido de carbono, producindose la
carboxihemoglobina. Esta combinacin se efecta con la globina de la molcula, mediante la formacin
de compuestos carbamnicos, reaccin que aumenta considerablemente cuando desciende la saturacin
con oxgeno.
5) La combinacin de la deoxihemoglobina (Hb) con el oxgeno da lugar a la formacin de
oxihemoglobina (HbO2). Esta combinacin es reversible y la proporcin de desoxihemoglobina que se
transforma en oxihemoglobina al ponerla en contacto con el oxigeno depende de la presin parcial de
oxigeno (PO2) del medio que rodea a la molcula. Cuando toda la hemoglobina est como
oxihemoglobina, se dice que el contenido de oxigeno de la hemoglobina ha alcanzado la "capacidad de
oxigeno" del compuesto, pero cuando el contenido de oxigeno de la sangre es menor que la capacidad de
oxigeno, el contenido de oxgeno se expresa en trminos de porcentaje de saturacin (SO2).
La saturacin arterial de oxgeno (SaO2), es la cantidad de oxgeno unida a las molculas de
hemoglobina en relacin a la cantidad total de molculas presente en la sangre arterial. Contenido/
capacidad x 100
La medicin de la saturacin arterial de oxgeno requera de mtodos invasivos, puncin
vascular arterial, que hacan difcil su utilizacin en estudios dinmicos y en estudios poblacionales. Esta
limitacin se ha superado en la actualidad gracias al advenimiento de mtodos no invasivos, como la
oxirnetra de pulso.
La oximetra permite medir la cantidad de hemoglobina que es capaz de unirse reversiblemente
al oxgeno [hemoglobina funcional u oxihemoglobina (HbO2)], en relacin a la totalidad de hemoglobina
presente en sangre (oxihemoglobina, deoxihemoglobina, carboxihemoglobina y metahemoglobina). En la
mayora de circunstancias clnicas la carboxihemoglobina y la metahemoglobina, forrnas disfuncionales
de la hemoglobina, constituyen tan slo una fraccin insignificante de la hemoglobina total. De tal forma
que la medicin de la saturacin arterial de oxgeno puede ser representada por la siguiente frmula:

[HbO2 ]
Saturacin (%) =

---------------------------- x 100
[HbO2] + [ Hb ]

La oximetra de pulso mide la fraccin de luz transmitida a travs de los tejidos. La


oxihemogobina absorbe ms luz cerca del infra-rojo (vg. 900 nm); mientras que la deoxihemoglobina
absorbe ms luz roja (vg. 660 nm). Por lo tanto, la absorcin de luz por la oxihemoglobina y la
deaxihemoglobina es diferente en estas dos longuitudes de ondas.

Los oxmetros de pulso (figura 1) basicamente estn constituidos por dos diodos que emiten luz
en forma intermitente, y una clula fotosensitiva, capaz de medir por separado y en forma secuencial la
luz transmitida a travs de la piel, en el orden de mil veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que
emite luz roja y luego el diodo que emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en
ambas longitudes de onda, son cuantificadas y cornparadas por la clula fotosensitiva para determinar el
porcentaje de la saturacin arterial de oxgeno.
La saturacin arterial de oxgeno normalmente vara entre 95 a 100% en sujetos de nivel del mar
y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes alturas. En recin nacidos vara entre
85 a 90%. Valores que se modifican con el ejercicio fsico y la altitud de residencia.
Experimento N 1:
MEDIDA DE LA SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO
Materiales:
- Oxmetro de pulso
- Sensores de Oxgeno (Fig. 2)
- Algodn
- Alcohol
Procedimiento:
1. Encender el oxmetro de pulso.
2. Limpiar y secar el dedo ndice, con algodn y alcohol.
3. Colocar el sensor de oxgeno en el dedo ndice.
4. Leer y registrar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca, tres veces.
Resultados:
Saturacin (%)
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
Promedio

Fr. Cardiaca

5.

Determinar si la saturacin arterial de oxgeno vara en los diferentes dedos de la mano derecha e
izquierda
Saturacin (%)
Fr. Cardiaca
Derecha

Izquierda

Derecha

Izquierda

Dedo Pulgar
Dedo ndice
Dedo Cardinal
Dedo Anular
Dedo Meique
6.

Determinar si la postura modifica la saturacin arterial de oxgeno.


Saturacin (%)

Fr. Cardiaca

Posicin Decbito
Posicin Sentado
Posicin de Pie

Experimento N 2: EFECTO DEL EJERCICIO FISICO SOBRE LA SATURACIN ARTERIAL


DE OXIGENO
Materiales:
- Oxmetro de pulso
- Sensor de oxgeno
- Algodn
- Alcohol
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)
Procedimiento:
1.

2.
3.
4.

Con el sujeto experimental cmodamente sentado, monitorizar registrar la saturacin arterial de


oxgeno y la frecuencia cardiaca, hasta lograr valores constantes con un + 5% de variacin
(Medicin Pre-Ejercicio).
Desconectar el oxmetro y solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rtmicamente ambas
manos durante 10 minutos.
Al final del ejercicio motorizar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca
(Medicin Post-Ejercicio)
Cada dos minutos monitorizar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca hasta obtener valores
similares a las condiciones basales (Pre-Ejercicio) (1ra.-10ma. Medicin).

Resultados:
Tiempo (min.)

saturacin (%)

Fr. Cardiaca

Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
4ta. Medicin
5ta. Medicin
6ta. Medicin
7ma. Medicin
8va. Medicin
9na. Medicin
10ma. Medicin

Experimento N 3: ISQUEMIA Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO


Materiales:
- Tensimetro
- Cronmetro.
- Oxmetro de pulso.
- Sensor de oxgeno.
Procedimiento:
1. El sujeto experimental deber sentarse cmodamente, colocando los brazos sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazn, medir la saturacin arterial de oxigeno en el dedo ndice de
ambas manos (1ra. Medicin).
2. Coloque el manguito del tensimetro, completamente desinflado, alrededor del brazo derecho, de
manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una presin de 200 mmHg.
4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rtmicamente la mano derecha hasta que el
sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la saturacin arterial en el dedo ndice de
la mano derecha y luego en el dedo ndice de la mano izquierda (2da. Medicin).
5. Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rtmicamente la mano derecha hasta
el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la saturacin arterial en ambas
manos (3ra. Medicin).
6. Disminuir rpidamente la presin del sistema abriendo la vlvula de la pera isuflora y retirar el
tensimetro.
7. Medir y registrar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos minutos durante 10 min.
hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. (4ta.-6ta. Medicin).

Resultados:
Saturacin (%)
ndice Derecho
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
4ta. Medicin
5ta. Medicin
6ta. Medicin

ndice Izquierdo

Frecuencia Cardiaca
ndice Derecho

ndice Izquierdo

SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO


INFORME DE PRACTICA

Nombre:............................................................................................................................Fecha:....../....../......
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ANTECEDENTES PERSONALES:
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Nombre:..................................................................................Sexo:.................. Edad:..............aos
Peso:............Kg
Talla:.............. mts
Peso Ideal:...............Kg
Lugar de Nacimiento:............................................................... T. Resd. Lima:.......................
Actividad Fsica: 1) Sedentaria: ..........
2) Ocasional: ..........
3) Frecuente: ..........
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------EJERCICIO FSICO Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO:
Saturacin (%)

Fr. Cardiaca

Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
Tiempo (min.) de Recuperacin
ISQUEMIA LOCAL Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO:
Saturacin (%)
BRAZO DERECHO:
Basal
Iniciar Dolor
Dolor Soportable
Tiempo (min.) de Recuperacin
BRAZO IZQUIERDO:
Basal
Inicia Dolor
Dolor Soportable
Tiempo (min.) de Recuperacin

Fr. Cardiaca

FISIOLOGIA DE LA SANGRE
HEMATOCRITO
Es la relacin porcentual entre la cantidad de glbulos rojos y el plasma sanguneo en relacin a la sangre total. Esta
determinacin es muy til para del diagnstico diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.

Reactivos , Material de Vidrio y Equipos


Anticoagulante de Wintrobe: Oxalato de potasio 0.8 gm y oxalato de amonio 1.2 gm y agua dest. csp. 100 ml.)
Colocar 0.5 ml en cada frasquito de vidrio y desecarlos en estufa a 56 C. Cada frasco as preparado servir para
anticoagular 5 ml de sangre.
Sangre venosa anticoagulada .
Pipetas Pasteur y Tubo de Wintrobe
Tubos capilares para microhematocrito con y sin heparina.
Jeringas y agujas descartables.
Desinfectante para piel..
Guantes descartables
Centrfuga Clnica
Centrfuga para Microhematocrito

Existen 2 mtodos: Macro y Micromtodo para determinar el Hematocrito.


Procedimiento: Macromtodo de Wintrobe.
Usando la pipeta Pasteur llenar con sangre el tubo de Wintrobe hasta la marca 100.
Evitar formacin de burbujas.
Centrifugar el tubo (contrapesado), a 3000 rpm. durante 30 minutos.
Lectura en la escala ascendente en el lmite del paquete globular, excluyendo los glbulos blancos y
plaquetas.
Expresar el Hematocrito en valor porcentual.
Valores Normales:
Hematocrito
Valores
Referenciales
%
Recin Nacidos
60
Infantes

35 a 44

Varones Adultos
Mujeres Adultos

41 a 52
38 a 46

-----------------------------Procedimiento: Mtodo MICROHEMATOCRITO.


Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre. Sellar el extremo inferior con plastilina.
Centrifugar a 12,000 rpm en la centrfuga para microhematocrito, durante 10 min. Lectura en la tabla Adhoc para este efecto. Expresar el valor porcentual.
------------------------------

HEMOGLOBINA
Es una molcula de estructura cuaternaria, tetramrica proteica, es el pigmento rojo portador del Oxgeno
de los hemates. Est formada por un ncleo Hem y una protena llamada Globina.
MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
Materiales:
Jeringa y agujas descartables.
Desinfectante.
Algodn.

Ligadura.
Alcohol.
Anticoagulante de Wintrobe.
Pipeta de Sahl de 0.02 ml
Tubos de prueba.
Solucin de HCl 0.1 N
Espectrofotmetro.

Procedimiento
Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la pipeta de Sahl (0.02 ml).
Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta.
Vaciar en contenido de la pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N
Mezclar, por inversin, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el Espectrofotmetro, en Long.
Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotmetro en 0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la
lectura de Absorbancia.
CALCULOS:
Absorbancia del Problema X Factor de Calibracin = gm Hb %
Valores Referenciales:
Hemoglobina
Valores
Referenciales
gm %
Recien Nacidos
17 a 25
Infantes
10 a 15
Hombre Adulto
l4a17
Mujer Adulto
12 a 16
Hombre de Altura
16.4 a 18.8

ndices Hematolgicos o Constantes Corpusculares


Los ndices hematolgicos, son elementos de juicio muy importantes para clasificar las anemias, en
relacin a su contenido de hemoglobina, volumen globular y valor porcentual de la concentracin de
hemoglobina en cada uno de los glbulos en promedio.
VOLUMEN GLOBULAR MEDIO
Volumen Globular Medio =
Valores Normales:
Al nacer :
Infancia:
Adulto:

Hcrito x 10 = micras cbicas


GR

105 micras cbicas


83 a 87 micras cbicas
83 a 95 micras cbicas

HEMOGLOBINA MEDIA GLOBULAR


Hemoglobina media globular = Hb x 10 = Micro microgramos
GR
Valores Normales: 27 a 32 Micro microgramos

CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA

C Hb Glob Media = Hb gr%


Hto

100

Valores Normales: 32 a 36%


Referencias Bibliogrficas:
Clinical Hematology Wintrobe ",. Lea Febiger. Phila USA 9 Edition. 1993
Medical Laboratory Technology. Lynch.Raphael Saunders USA 1989.
Manual of Clinical Hematology. Joseph Mazza. Little Brown 1998.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR


La Velocidad de Sedimentacin globular consiste en determinar la rapidez de cada sedimentacin de los
glbulos rojos de la sangre cuando est anticoagulada, esto se realiza en un tubo de caracteristicas
especiales llamado tubo de Wintrobe.
Materiales:
Tubo de Wintrobe
Algodn, alcohol, ligadura, agujas y jeringas descartables. Anticoagulante de Wintrobe.
Pipetas Pasteur.
Guantes de ltex descartables.
Gradilla tipo soporte vertical para el tubo Wintrobe, perpendicular a la mesa (plomada).
Procedimiento
Llenar el tubo con sangre venosa anticoagulada hasta la marca 0 de lectura de la Velocidad., empleando la
pipeta Pasteur. Luego dejar en reposo vertical, perpendicular, durante 60 min. Lectura en la escala de
valores descendentes para Velocidad de Sedimentacin.
Los Valores Referenciales de Velocidad de Sedimentacin, segn el mtodo Wintrobe son:
Hombres:
0 a 6.5 mm a la hora
Mujeres:
0 a 15 mm a la hora
Grfica de Wintrobe y Landeberg para corregir la Velocidad de Sedimentacin cuando existe Anemia
Policitemia. La V. S. tiende a ser ms rapida en la anemia intensa, y disminuir en la Policitemia. En
presencia de una de estas anomalias debe hacerse la correccin de los resultados obtenidos con la
grfica diseada por el mismo Wintrobe. Se corrgir la VS. en funcin del Hematocrito del paciente.
Valores Referenciales de Glbulos Rojos:
Recin Nacidos:
6 000.000
Nios:
4 000.000 a 5 500.000
Hombres adultos:
4 500.000 a 6 000.000
Mujeres adultas:
5 200.000 a 5 400.000

pmm3
pmm3
pmm3
pmm3

HEMOSTASIA Y COAGULACIN DE LA SANGRE


HEMOSTASIA: significa prevencin de la prdida de sangre. Cuando se lesiona o rompe un vaso la
hemostasia se consigue mediante:
A) ESPASMO o CONSTRICCION VASCULAR
B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO
C) COAGULACION SANGUINEA: FORMACION DE UN COAGULO DE
FIBRINA
DEBIDO A LA COAGULACION DE LA SANGRE
D) PROLIFERACIN FINAL DE TEJIDO FIBROSO DENTRO DEL COGULO SANGUNEO
PARA CERRAR DE FORMA DEFINITIVA EL AGUJERO DEL VASO.
A) ESPASMO O CONSTRICCION VASCULAR: Ante un corte o lesin de un vaso inmediatamente
se produce el espasmo vascular que es el resultado de un reflejo migeno local y factores humorales
locales de los tejidos traumatizados y de las plaquetas. Los reflejos nerviosos se inician por impulsos
dolorosos o de otro tipo originados en el vaso traumatizado o en los tejidos vecinos. La lesin directa de la
pared vascular genera la contraccin migena refleja de la pared vascular adems la adrenalina ejerce
accin vasoconstrictora.
En los vasos de menor calibre las plaquetas se acupan de la mayor parte de la vasoconstriccin al liberar el
vasoconstrictor Tromboxano A2.
Cuanto mayor es el vaso sanguneo mayor es el grado de espasmo, que en algunos casos puede impedir
una prdida mortal de sangre.
B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO: Ante un vaso daado las plaquetas se hinchan,
emiten pseudpodos y hacen pegajosas y se adhieren fuertemente al tejido colgeno expuesto y se unen al
Factor von Villebrandt, aumenta el ADP y se forma Tromboxano A2.
ADP Y Tromboxano activan las plaquetas y aumentan su "Adherencia" y se van "Agregando" en el sitio
lesionado y se forma el "Tapn plaquetario".
C) COAGULACION SANGUINEA: Formacin del cogulo de fibrina debido a la coagulacin de la
sangre:
Teora bsica:
En la sangre hay sustancias que favorecen la coagulacin:
PROCOAGULANTES
y sustancias que la inhiben: ANTICOAGULANTES.
La coagulacin de la sangre depende del equilibrio entre estos dos grupos de sustancias.
En el torrente sanguneo normalmente predominan los anticoagulantes de forma que la sangre no se
coagula mientras est circulando en los vasos. Sin embargo cuando se rompe un vaso, se "activan" los
Procoagulantes del rea de la lesin tisular y anulan a los anticoagulantes, con lo que se forma el cogulo.
MECANISMO GENERAL DE LA COAGULACION CASCADA de la Coagulacin.
La Coagulacin se realiza en TRES ETAPAS:
1.- Formacin del Complejo Activador de la Protrombina
2.- Conversin de la Protrombina en Trombina (conversin catalizada por el Activador de la
Protrombina).
3.- Conversin del Fibringeno en Fibrina (conversin catalizada por la Protrombina).
Los mecanismos de la coagulacin se ponen en funcionamiento por:
1.- Traumatismo pared vascular o tejidos adyacentes (endotelio)
2.- Traumatismo de la sangre
3.- Contacto de la sangre con las clulas endoteliales daadas con colgeno y otros elementos
titulares en el exterior del vaso sanguneo.

En todos los casos LO PRIMERO QUE SE FORMA ES EL "ACTIVADOR DE LA


PROTROMBINA" que transforma la Protrombina en Trombina e inicia los pasos posteriores de la
Coagulacin (Va final comn).
Se considera que el "Activador de la Protrombina" se forma por las dos Vas, aunque en realidad las dos
vas interactan constantemente:
LA VA EXTRNSECA: Comienza con el traumatismo de la pared vascular y de los tejidos subyacentes
(lesin tisular) o un tejido extravascular sufre un traumatismo y entra en contacto con la sangre circulante.
La clula endotelial vascular daada libera un Factor Tisular llamado Tromboplastina Tisular III,
fosfolpidos y un complejo lipoproteico y se desata as la va Extrnseca. As pues, el tejido lesionado ha
liberado esta serie de sustancias o complejo de factores (FACTOR TISULAR O TROMBOPLASTINA
III TISULAR) que trabaja como una verdadera enzima activando al Factor VII ----- VIIa. y ste en
presencia del Ca++ activan al Factor X ---- Xa, ste a su vez activa al V ----- Va el cual genera el
COMPLEJO ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA. (Observar las retroalimentaciones enzimticas en
el cuadro de la cascada). Luego Fribringeno ---- Fribrina cogulo.
VA INTRNSECA: Comienza con el traumatismo de la propia sangre o con la exposicin de la sangre al
propio tejido colgeno expuesto por el traumatismo del vaso sanguneo lesionado, hay contacto de la
sangre con epitelios distintos del vascular normal: Se Activa el Factor XII --- XIIa y se liberan fosfolpidos
plaquetarios que contiene el Factor Plaquetario 3. Luego se activa el XI --- XIa en presencia de
Ciningeno. Se activa luego el IX..IXa, y el IXa junto con el VIII..VIIIa activan al X ----- Xa.
El Xa junto con el V y factores tisulares generan el COMPLEJO ACTIVADOR DE LA
PROTROMBINA. Y sigue luego la va final comn de conversin de la Protrombina en Trombina y
Fibringeno en Fibrina y el cogulo es consolidado por el factor XIII.
Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulacin excepto en los primeros
pasos de la va intrnseca. Por lo tanto en AUSENCIA de iones de calcio la sangre no se
coagular por ninguna de las dos vas.

EVALUACION DE LA HEMOSTASIA
Y LA COAGULACION DE LA SANGRE
TIEMPO DE COAGULACIN
Se denomina as al tiempo que transcurre desde que la sangre es extrada hasta que pasa al estado de gel.
Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular en ausencia de factores provenientes de los
tejidos (factor tisular). El trauma que significa la obtencin de sangre venosa marca el inicio, y el intervalo
de tiempo entre la obtencin de la muestra y su coagulacin es lo que se denomina Tiempo de
Coagulacin. Esta es en trminos generales una prueba grosera de la coagulacin. Sirve para detectar
groseramente alteraciones de la coagulacin que puedan alargarla. La prolongacin del Tiempo de
Coagulacin puede deberse a varias causas;:
1.- Disminucin de la Tromboplastina,
2.- Disminucin de la Protrombina,
3.- Disminucin del Fibrigeno
4.- A la presencia en la sangre de algn anticoagulante.
METODO DE LEE WHITE
Reactivos y Aparatos:
Tubos de prueba de 8 mm dimetro, limpios y secos
Agujas y jeringas para uso endovenosos descartables, estriles.
Bao mara 37 C
Reloj cronmetro
Procedimiento:
Obtener 3 ml de sangre venosa, anotando la hora exactamente (Para controlar el tiempo de inicio)
Inmediatamente transferir 1.5 ml de sangre a cada uno de dos tubos y colocarlos en Bao Mara a 37C.
Luego de tres min. de reposo ir sacando cada uno de los tubos e ir inclinndolos suavemente en 90 cada
minuto, hasta que no se observe desplazamiento de sangre y pueda ser completamente invertido el tubo sin
caerse la sangre. Anotar el tiempo.
Valores referenciales:
Con este mtodo de Lee White los valores normales para hombres y mujeres vara entre: 5 a 8 min.
Los valores referenciales dependen del dimetro del tubo empleado:
Usando tubos de dimetro interno de 11 mm:
9 a 15 min.
Usando tubos de dimetro interno de 8 mm: 6 a 10 min.
Existen otros mtodos para determinar el tiempo de Coagulacin por ejemplo el mtodo del portaobjetos:
Valor normal de 2 a 8 minutos.
Mtodo del Tubo Capilar: Valor referencial de 3 a 7 min.
Tiempo de Sangra
El tiempo de sangra depende de la elasticidad de la pared vasos sanguneos y de la cantidad y capacidad
funcional de las plaquetas.
El tiempo de sangra es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una puncin standard
profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aqul en que la sangre deja de brotar de la herida.
METODO DE DUKE
Reactivos y Aparatos:
Cronmetro, lancetas descartables, desinfectante de piel, papel de filtro.
Procedimiento:
Desinfectar la yema de un dedo (anular) el lbulo de una oreja y punzar con la lanceta descartable
standard de manera que la sangre fluya libremente, gota a gota, sin necesidad de exprimir la piel. Anotar el
tiempo de aparicin de la primera gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30
segundos sin tocar la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido.
Valores Referenciales:
1 a 3 MINUTOS.

TIEMPO DE PROTROMBINA Y TIEMPO DE


TROMBOPLASTINA PARCIAL
En la presente prctica evaluaremos las dos vas de la coagulacin por separado:
Primero determinaremos la VA EXTRNSECA de forma global mediante la determinacin del
Tiempo de Protrombina o Tiempo de Quick, que determina los factores involucrados en esta va
como son: Factor VII llamado Proconvertina, el Factor II Protrombina, el Factor V Proacelerina y el
Factor X llamado Factor de Stuart-Prower. Cualquier alteracin de estos factores ser detectado por la
determinacin del Tiempo de Quick. Esta prueba no detecta deficiencias en los factores de la va
intrnseca (VIII, IX, XI, XII).
Para el TP usaremos un exceso de Tromboplastina Tisular o Factor III (de cerebro) y calcio. Puede usarse
Simplastin de Warner Chilcota. El mtodo que emplearemos para TP es el de la Casa Wiener que se
llama Soluplastn y que es una Tromboplastina tisular (de cerebro) de alta calidad e incluye cloruro de
calcio y cloruro de sodio.
Materiales:
Soluplastin (Tromboplastina clcica) Casa Wiener
Lab. (Rosario. Argentina)
Tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 mm.
Cronmetro
Bao Mara 37 C
Asa de alambre Nquel Cromo Nuevas (Bacteriolgicas)
Micropipetas 100 y 200 lambdas.
Muestra de plasma sanguneo:
En un tubo de ensayo contendiendo
0.5 mI de anticoagulante citrato trisdico 3.8 % u oxalato de sodio
aadir
4.5 ml de sangre venosa
Mezclar suavemente, centrifugar y separar el plasma.

Procedimiento para TP:


Usar tubos de 13 x 100 mm:
Pre incubar el plasma: en un tubo de ensayo, marcado (Px) colocar 1 ml del plasma en BM 37 C, por 3
min. (El saldo del plasma refrigerarlo). (No pre incubar mas de 10 min.)
Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0.2 ml de Soluplastin en cada uno y
colocar en BM a 37 C por 3 min. (No pre incubar mas de 10 min.).
Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y aadir rpidamente al tubo conteniendo los 0.2 ml de
Soluplastin, disparando simultneamente el cronmetro.
Soluplastin pre incubado 37C
( incluye calcio) ml

0,2

Plasma pre incubado 37C ml


Simultneamente,
de inmediato iniciar cronmetro

0.1 y ! cronmetro!!

Mezclar y esperar cogulo y de inmediato frenar cronmetro


Anotar tiempo en segundos.

Simultneo

Mantener el tubo dentro del Bao Mara cerca de una fuente de luz. Previo al tiempo estimado de
coagulacin sacar el tubo del bao e inclinar suavemente por una o dos veces por segundo y detener el
cronmetro en el momento exacto de la aparicin del cogulo, que se manifestara por la aparicin de muy
discretos hilos de fibrina, en ese instante precisamente para el cronmetro.
Repetir por triplicado esta prueba. Calcular el valor promedio en segundos.
Valores Referenciales:
11- 12 sgs. + - 2 segs del control Normal
El control Normal estar entre 10 a 13 segundos +- 0.5 2DS.
Con estos valores en segundos a travs de una curva de calibracin podemos expresarlos en porcentaje de
actividad protrombinica en relacin a los valores normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra
los valores porcentuales:
Tiempo Protrombina
en segundos

Actividad Protrombnica
Valores porcentuales
Respecto de lo Normal

11 - 12.5

100 %

13.5

60

15

50

17

40

19.5

30

22

25

24 36

20

37 40

10

55 65

El tiempo de Protrombina se encuentra alargado por defectos de Factor I (Fibringeno), Factor H


(Protrombina), Factor V (Proacelerina F. Lbil), Factor VII (Factor Estable Proconvertina), y Factor X
(Factor Stuart-Prower).
El TP se encuentra prolongado en pacientes con dieta deficitaria en Vit K, infantes prematuros, infantes
recin nacidos de madres que estn con deficits de Vit K (es la enfermedad hemorrgica del recin
nacido).
En la mala absorcin de las grasas, ictericia obstructiva, diarrea crnica, etc.
El TP est prolongado tambin en el dao heptico severo (envenenamientos, hepatitis, cirrosis).
Por Drogas (tipo coumarnico de la terapia anticoagulante)
Presencia de anticoagulantes circulantes, hipofibrinogenemia adquirida o hereditaria.
En resumen, debo decirles que el Tiempo de Protrombina es primariamente usado con TRES fines:
1.- Para la evaluacin de los desrdenes de la Coagulacin: para investigar la anormalidad de los
factores involucrados en la va Extrnseca V, VII, X, Protrombina y Fibringeno. Y debe ser
usada junto con el tiempo de Tromboplastina Parcial Activada.
2.- Para controlar la terapia anticoagulante oral a largo plazo con coumadinas y derivados
indanedionas.
3.- Evaluacin de la funcin heptica: el test del Tiempo de Protrombina es uno de los mas tiles para
evaluar la capacidad del hgado en la sntesis de los factores del complejo Protrombnico: II, VII,
yX .

DETERMINACIN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO.


(TTPA APTT PTT).
El TTPA es un mtodo de investigacin de la VA INTRNSECA de forma global XII, XI, IX, X, VIII, V,
II y I. En esta prueba APPT se usa un activador especfico de la Va Intrnseca (del Factor XII) y es un
Fosfolpido CEFALINA activado con caoln slice micronizado. El test de TTPA consiste en la
recalcificacin del plasma en presencia de un exceso de cefalina fosfolpido, (que es un sustituto de las
plaquetas y factor plaquetario) preparado a partir de cerebro de conejo y de un activador Kaoln
tamponado. Esta prueba usa este activador especfico de la va intrnseca que es el Factor plaquetario -3
sustituido por la cefalina fosfolpido de cerebro de conejo y que tiene adems un activador kaoln en
finsimas partculas slice micronizado (activador para el Factor XII) de la va intrnseca solamente y un
tampon de piperazida estanolsulfnico. Adems este reactivo tiene una especial reactividad con la
presencia de heparina lo cual lo hace especial para el monitoreo de la teraputica con heparina.
Emplearemos en esta practica el mtodo de la casa WIENER LAB. Que usa cefalina fosfolpido y que se
llama reactivo APTTEST
METODO DE CASA WIENER LAB.
PTT APT TEST
A. REACTIVOS: Cloruro de calcio, listo para usar (0.0125 mol/l y ClNa 0.1 mol/l)
B. Reactivo de APTT:
al vial del liofilizado, aadir el volumen de agua indicado en el rasco
que es 2.5 cc de agua destilada, tapar y mezclar suave por inversin, queda as listo el
homogenizado.
C. Obtencipn de la muestra de sangre:
A 4.5 cc de sangre venosa aadirle 0.5 cc del anticoagulante oxlato de sodio. Centrifugar para
separar el plasma.
D. Distribuir los reactivos en la lsiguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x 75 mm de
dimetro o 13 x 100 ml:
TUBO 1
Plasma desconocido
PLASMA
CONTROL
NORMAL O ESTANDAR
REACTIVO
DE
APTT
(HOMOGENIZADO)

TUBO 2

100 ul (LAMBDAS)
100 ul (LAMBDAS)
100 ul (LAMBDAS)

100 ul (LAMBDAS)

Mezclar e incubar por 3 minutos cada uno de los tubos a 37C.


Al tubo N 1 aadirle solucin de cloruro de calcio pre incubado a 37 C . 100 ul.
Inmediatamente disparar el cronometro, agitar suavemente y mantenerlo en el bao mara por 25
segundos solamente y luego retirarlo para observar la formacin del coagulo, que se manifestara por la
aparicin de filamentos de fibrina inmediatamente detener el cronmetro, este es el tiempo de
Tromboplastina Parcial, valores normales de 33 a 48 segundos.
Al tubo N2 que es el control normal le aadiremos luego Cloruro de calcio 100 ul y procederemos
exactamente igual que el caso anterior y servir como control normal, cuyos valores normales van desde
33 a 48 segundos.

Tambin podemos emplear los reactivos de cefalina con caoln de la casa francesa que vemos a
continuacin.
Equipos, reactivos y materiales .-(idem que TP).-

Procedimiento para APTT:


Emplearemos CK Prest activado (Cefalina con Kaolin) (APTT) (Diagnostica Stago-Francia).
Reactivo N 1: Cefalina
Reactivo N 2: Kaoln tamponado :
Agitar el contenido del frasco N2 y transferido completamente dentro del frasco N1. Dejar
que repose 30 min. para embeber el gel. Y despus de la imbibicin, agitar
suave y circunferencialmente para homogenizar la mixtura.
Solucin de Cloruro de calcio (C12Ca): 0.025 M
Cl2 Ca anh
..1.38 gm
Agua destil ..500 ml
Pipetas automticas de 100 lambdas
En un tubo ensayo 13 x 100mm que est previamente en el BM a 37 C colocar:
Plasma paciente
0.1 ml
Plasma paciente duplicado

0.1

ml

Plasma paciente triplicado Control Normal

0.1

ml

React 1 Cefalina Bien Reconstituido


y resuspendido

0.1

ml

Mezclar y pre incubar 37C


Exacto

3 minutos

Simultneamente: Aadir Cl2Ca 0.025M


precalentado e INICIAR CRONOMETRO

0.1

ml

Mezclar y esperar cogulo. Parar cronmetro


inmediatamente que aparezca el cogulo
Anotar tiempo en segundos

EXACTO

Los valores referenciales varan de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relacin a un control normal
Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial est prolongado, pero el Tiempo de Protrombina es Normal nos
indica un a alteracin de alguno de los factores de la va intrnseca de tipo congnito: VIII, IX
(Hemofilias), XI, XII. Si todos estos factores estn normales, puede haber una deficiencia de HMWK
kiningeno (Factor Fritgerald). Tambin se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas
condiciones anormales como: Enfermedades hepticas, Coagulopata por consumo, anticoagulantes
circulantes, en la terapia anticoagulante oral, o en la heparizacin. en el tratamiento con inhibidores de
la trombina como hirudina, argatroban., etc

Va Intrnseca

Va Extrnseca

XII

FACTOR
Pre K

TISULAR

HMWK
VII
XI

Tiempo
Protrombina
Tromboplastinas
Tisulares:
Simplastin
Soluplastin

IX

VIII

VA FINAL
COMUN
X
V
PF -3

Protrombina

Trombina

Fibriongeno

Fibrina
XIII

Referencias Bibliogrficas:
Clinical Hematology Wintrobe. EJ. Lea Feboger. Phila. London. 1998
Technical Hematology Simmons. Lippincott. 1999.
Laboratory Methods by J. B. Henry. Saunders Co. 1999.
The Principles and Practice of Blodd Grouping Addine G Mosby Co 1993
Fisiologa Mdica W Ganong El Manual Moderno 2002
An Introduction to Inmunohematology N Bryant W B Saunders Co. Pfila. London 1997

GRUPOS SANGUNEOS Y FACTOR RH

Introduccin:
En 1900, Landsteiner descubri que el suero de algunas personas aglutinaba los glbulos rojos de otras y
que ste fenmeno podra ser usado para clasificar a las personas en diferentes fenotipos de grupos
sanguneos. Se reconocen 4 fenotipos cimunes: O, A, B, y AB. Tambin se han identificado antgenos de
los subgrupos del tipo A y B.
Cada tipo de glbulo rojo transporta un Antgeno determinado, especfico, que le es caracterstico. El
plasma de las personas tiene Aglutininas Naturales Anticuerpos diferentes al de su propio grupo, as por
ejemplo las personas del Grupo A tienen aglutininas Anti B. El plasma de las personas del Grupo B tiene
Aglutininas (Anticuerpos naturales) Anti A. El plasma de las personas del Grupo O tiene un ttulo bajo de
Aglutininas Anti A y Anti B. (Es muy importante saber que algunas personas del Grupo O pueden tener
un ttulo elevado de aglutinininas Anti A y Anti B y ser donantes peligrosos).
Es absolutamente necesario y obligatorio hacer siempre una prueba compatibilidad mayor y menor entre el
Donante y el Receptor antes de realizar una transfusin de sangre cualquier sea el tipo de sangre y/o Rh.
El fenotipo ABO de una persona es determinado mediante reacciones de aglutinacin de los hemates con
antisueros monoclonales Anti A, Anti B, Anti AB y antisueros de los Subgrupos correspondientes.
Determinacin del Grupo Sanguneo:
Este procedimiento se basa en la aglutinacin de los glbulos rojos (que transportan un Antgeno
especfico), que se produce cuando est en presencia de su correspondiente anticuerpo especfico.
Los reactivos usados para la tipificacin de los grupos del Sistema ABO contienen anticuerpos
monoclonales IgM. Estos reactivos producirn aglutinacin directa de los glbulos rojos que transporten el
antgeno especfico correspondiente. La determinacin del grupo sanguneo puede hacerse por el mtodo
del tubo de ensayo por el mtodo en lmina portaobjeto.
MTODO EN LMINA PORTAOBJETO:
Materiales y Reactivos:
Suero monoclonal Anti A
Suero monoclonal Anti B
Suero monoclonal Anti AB
Lmina excavada o lmina portaobjetos
Lancetas descartables
Muestra de sangre
Algodn y desinfectante
Procedimiento para Determinar el Grupo Sanguneo
1.- Dividir una lamina portaobjetos en 3 secciones: izquierda, central y derecha con lpiz de cera
marcador.
La muestra de sangre puede obtenerse de la yema del dedo o por venipuntura.
Colocar una gota suero Anti A en el lado izquierdo y una gota del suero Anti B en el centro y una gota del
suero Anti AB en la derecha de una lmina de vidrio plana.
Colocar una gota de sangre al lado de cada una de las gotas del antisuero correspondiente sin tocar los
reactivos !!, para evitar contaminacin cruzada, y luego mezclar bien usando aplicadores o baguetas
distintas.
2.- Hacer girar el porta objetos con la mano y observar si existe aglutinacin macroscpica. La
aglutinacin se producir en unos pocos segundos. La lectura deber hacerse antes de que se seque la
mezcla. El tiempo mximo habitual es de tres minutos.

INTERPRETACION DE LAS PRUEBAS CON ERITROCITOS


EN LA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUNEO

Grupo Sanguineo

Suero Anti
-A

Suero Anti
-B

Suero Anti
- AB

AB

+ : Indica aglutinacin macroscpica


- : Indica que no hay aglutinacin
-----------------------------FACTOR RHO (D)
Aparte de los Antgenos del sistema ABO, existe otro que es el sistema de Antigenos del Rh que son de
gran importancia fisiolgica y clnica.
El Factor Rh (Aglutingeno o Antgeno) llamado as por que fue estudiado por primera vez en los monos
del gnero Rhesius, es en realidad, un sistema compuesto por mucho Antgenos: Ver Tabla
Fisher-Race
Dce
DCe
DcE
Dce
dCe
dcE
dCE
DCE

Wiener
Rho
Rh1
Rh2
rh (hr)
rh
rh
Rhy
Rhz

El factor D, es con mucho, el ms antignico y el trmino Rh Positivo, como generalmente se usa,


significa que el individuo tiene Aglutingeno D.
El individuo Rh Negativo no tiene antgeno D y solo forma la aglutinina Anti D cuando se le inyectan
clulas D positivas. El suero que se emplea rutinariamente para tipificar el Rh es un suero Anti D.
El 85% de los caucsicos son Rh Positivos y el 15% restante Rh Negativos. Las personas Rh negativas (D
Negativas) que reciben una transfusin de sangre Rh Positiva (an muchos aos antes) forman
Anticuerpos Anti Rh y tienen ttulos Anti D apreciables y dan reacciones transfusionales graves cuando
reciben una transfusin de sangre Rh (D) Positiva.
Igualmente sucede cuando una madre Rh (D) Negativa concibe un hijo D positivo, porque pequeas
cantidades de sangre del feto se filtran a la circulacin materna en el momento del parto y desarrollan
ttulos elevados de aglutininas Anti Rh durante el post parto. Durante el embarazo siguiente las aglutininas
desarrolladas contra el antgeno RH cruzan la placenta y llegan al feto que ha heredado el antgeno Rh
positivo del padre y se produce la reaccin Antgeno-anticuerpo que produce hemlisis y la Enfermedad
Hemoltica del Recin Nacido (Eristroblastosis Fetal).

DETERMINACIN DEL FACTOR Rh.


Materiales y Reactivos:
Reactivo Antisuero Monoclonado Anti - Rho (Anti D)
Lmina portaobjeto
Varillas de vidrio aplicadores
Lancetas descartables
Desinfectante y Algodn
Lpiz de cera marcador.
Procedimiento:
En una lmina portaobjetos se colocan 2 gotas de la sangre problema.
Al costado de las gotas de sangre colocar una gota del Reactivo Suero Anti Rh. Mezclar bien. Observar
inmediatamente para ver si existe o no aglutinacin.
INTERPRETACIN:
Sangre total paciente +
Suero Anti- Rh (D)

RESULTADO

AGLUTINACIN

Rh (D) POSITIVO

NO AGLUTINACIN

Rh (D) NEGATIVO

INVESTIGACIN DE LA SENSIBILIZACIN DE LOS HEMATES


Cuando algn anticuerpo (por ej. Garnmaglobulina - IgG) se fija y recubre al glbulo rojo se dice que el
eritrocito est sensibilizado. Los eritrocitos pueden sensibilizarse in vivo, y esto ocurre por ejemplo en la
Eritroblastosis Fetal (EF), que es una enfermedad del Feto y del Recin nacido y se caracteriza por
aglutinacin y fagocitosis de los eritrocitos del feto, que se produce cuando una madre siendo Rh
Negativa y el esposo Rh Positivo, concibe un nio Rh positivo.
El nio hereda el Rh Positivo del padre. Durante el embarazo la madre desarrolla Aglutininas Anti - Rh
por la exposicin al antgeno (Aglutingeno Rh) del nio. A su vez, stas aglutininas Anti Rh de la madre
difunden por la placenta al feto y recubren los glbulos rojos del feto. Los hemates del nio estn ahora
sensibilizados y esto produce la aglutinacin y lisis de los hemates del propio hijo. Durante el primer
embarazo puede no producirse dao, pero durante el segundo embarazo el 3 % presentarn E F; durante el
tercer embarazo el 10 % presentarn EF, y as va aumentando la incidencia.
Se puede investigar la presencia de estos anticuerpos (IgG- anti Rh) que recubren a los hemates del nio
mediante el Test de Coombs Directo (test de Antiglobulina directo) y que es el objeto de la presente
prctica.
TEST DE COOMBS DIRECTO:
Esta Prueba se realiza en los hemates del paciente.
Fundamento
Esta prueba se fundamenta en la aglutinacin de los eritrocitos humanos sensibilizados por anticuerpos
gamma-globulnicos que se produce cuando se les coloca en presencia de un suero antihumano gammaglobulnico preparado en conejos. Este suero antiglobulnico puede ser especfico para globulina IgG,
tambin puede ser un preparado monoclonalmente obtenido.
Esta Prueba DIRECTAMENTE demuestra la sensibilizacin de los eritrocitos que se ha producido in
vivo.
Materiales y Reactivos:
Centrfuga Clnica y Microscopio Binocular
Suero Antiglobulnico de Coombs (Gamma IgG) (Monoclonal)
Hemates del paciente (Nio)
Solucin Salina 0.85 % Tubos de prueba de vidrio 13 x l00 mm y 12 x 75 mm; algodn, desinfectante de
piel (Alcohol iodado), ligadura venosa, aguja y jeringas descartables. Varillas de vidrio mondadientes de
plstico, pipetas Pasteur.

Procedimiento:
Lavado previo de los glbulos rojos:
1.- Medir aproximadamente 0.4 ml de sangre y colocar en el fondo de un tubo de prueba de 13 x 100 mm,
aadir luego 6 ml de solucin salina 0.85 %. Mezclar suavemente por inversin.
2.- Centrifugar a 3400 rpm. Por 30 segundos hasta que las clulas se empaqueten al fondo del tubo.
3.- Decantar la solucin salina completamente, limpiando la boca del tubo con papel servilleta.
4.- Repetir el lavado dos veces mas, aadiendo una pequea cantidad de solucin salina al comienzo y
mezclar para suspender bien los eritrocitos; y luego aadir una mayor cantidad de solucin salina lavando
hacia abajo la pared interna del tubo de prueba. Despus del tercer lavado el sobrenadante debe estar
completamente limpio de sangre, absolutamente lmpido y transparente.
5.- Ahora, calcular (aproximadamente) el volumen de los glbulos rojos lavados, anotar este volumen, y
aadir una cantidad de solucin salina como para hacer una suspensin de glbulos al 2%
6.- En otro tubo de prueba colocar 2 gotas de esta suspensin al 2 % y aadir 1 gota de 1 suero de
Coombs.
7.- Centrifugar a 5000 rpm. durante 15 segundos.
8.- Muy suavemente, con gran cuidado, percuta con un dedo el fondo del tubo, lo suficiente para dislocar
el fondo celular y observar la aglutinacin tanto macroscpica como microscpicamente con objetivo en
seco a 40 X.
Resultado:
La presencia de aglutinacin indica una Prueba de Coombs Directa POSITIVA, demostrando que los
eritrocitos estn sensibilizados.
Ausencia de Aglutinacin: Test de Coombs Directo: NEGATIVO.
Interpretacin:
Esta Prueba Coombs Directa es POSITIVA en los casos de:
Eritroblastosis Fetal ,Anemias Hemolticas Autoinmunes y sirve tambin para el diagnstico de
reacciones transfusionales debido a Incompatibilidad sangunea.
TEST DE COOMBS INDIRECTO
Detecta los anticuerpos presentes en el suero del paciente (madre) y para ello deben sensibilizarse primero
in vitro algunos glbulos rojos de otra persona de grupo conocido (Tipo O por ejemplo) y luego de haber
sensibilizado los glbulos rojos escogidos se les aplica el Coombs Directo. Para sensibilizar a los para
glbulos rojos seleccionados (conocidos) se debe primero incubar el suero del paciente (madre) con los
eritrocitos seleccionados (grupo O por ejemplo) para que las clulas se sensibilicen (es decir, se recubran
con el anticuerpo srico) si es que est presente, y, despus averiguar si estn sensibilizadas aplicndoles
el test de Coombs Directo, tal como hemos descrito lneas arriba..
TEST DE COMPATIBILIDAD CRUZADA
MUESTRAS Y
REACTIVOS
Suero del Paciente
Receptor
Hemates del Dador
Suspensin al 2 %
En salina
Albmina Bovina
22%
Centrifugar (serofuga
a 1000 rpm) 1 minuto

TUBO A

TUBO B

2 gotas

2 gotas

2 gotas

2 gotas

----------

2 gotas

EXAMINAR ambos tubos por aglutinacin hemlisis.


Luego INCUBAR ambos tubos A y B, en BM a 37 C por 15 minutos
CENTRIFUGAR por 1 minuto a 1000 RPM. Lectura del tubo B por aglutinacin hemlisis.
Luego CONTINUAR con el tubo "A": Tres lavados en sol salina 0.9 %
Aadir suero de Coombs 2 gotas
Centrifugar a 1000 rpm durante 1 min
Lectura por aglutinacin hemlisis
Interpretacin de Anticuerpos:
TUBO "A": detecta incompatibilidad hacia: Sistema ABO , MN, P, Lewis
TUBO "B": detecta incompatibilidad: Antic. Rh, Duffy, Kidd, Cellano y Antic.calientes.

PRCTICA SOBRE LA FISOLOGA DEL APARATO INMUNE


FUNDAMENTOS.La definicin contempornea del trmino inmunidad incluye todos aquellos mecanismos que le dan al
animal la capacidad de reconocer tanto los materiales extraos a su propio organismo para neutralizarlos,
eliminarlos o metabolizarlos sin injuria a sus propios tejidos.
Las respuestas inmunes pueden ser clasificadas en dos categoras:
a) Respuestas inmunolgicas especficas:
Estas respuestas dependen de la exposicin a una partcula o sustancia de configuracin extraa,
el subsecuente reconocimiento y la reaccin hacia ella.
b) Respuestas inmunolgicas no especficas:
Se producen siguiendo a una exposicin inicial y subsiguiente exposicin a una configuracin
extraa.
La seleccin en diferenciar lo propio de lo no propio no depende de un reconocimiento
especfico.
En la actualidad se consideran que las respuestas inmunolgicas sirven a tres funciones:
Defensa, sostenimiento de la homeostasis celular y vigilancia celular.
Funcin
Naturaleza
del Ejemplo
Aberraciones
estmulo
Hiper
Hipo
Inmunolgico
Defensa
Exgeno
Microorganismos
Alergia
Deficiencia
Polen
inmune
Homeostasis
Endgena
Remocin de clulas Enfermedad
celular
Exgena
viejas o daadas
autoinmune:
Formacin de auto
anticuerpos
Artritis
reumatoidea, lupus.
Vigilancia
Endgena
Remocin de clulas
Enfermedad
celular
Exgena
mutantes.
maligna

FILOGENIA DE LA INMUNIDAD NO ESPECFICA.En los animales ms primitivos, como en los unicelulares, el mecanismo de resistencia es la fagocitosis la
cual es esencialmente una funcin nutritiva: y en las formas evolutivas ms elevadas involucra tambin un
mecanismo defensivo. A medida que evolucionan a formas ms complejas aprenden a reconocer los
cuerpos extraos. En los invertebrados superiores se desarrollan un sistema vascular en el cual la
fagocitosis se desarrolla adems por medio de clulas circulantes y en el ser humano por fin hay cinco
clulas circulantes (leucocitos), tres de los cuales son fagocitarias o fagocticas (monolitos, polinucleares y
eosinfilos). Entonces filogenticamente los elementos no especficos ms importantes, fagocitosis y
respuesta inmunitaria vienen desde la forma
ms primitiva de vida. Con la evolucin, estos mecanismos persistieron y fueron suplementados e
implementados por la adicin de nuevos componentes tales como la
inmunidad especfica y los sistemas de amplificacin de esta inmunidad, por ejemplo el complemento,
coagulacin, etc. Entonces, pues, en resumen, estos mecanismos antiguos no fueron reemplazados por la
evolucin de las especies sino que ms bien continuaron y fueron reforzados adicionalmente con nuevas
respuestas (amplificadoras).
FILOGENIA DE LA INMUNIDAD ESPECFICA.La primera evidencia de la inmunidad especfica apareci en los vertebrados primitivos que presentan un
sistema linfoide diseminado (elasmobrnquios) que generan inmunoglobulinas M. posteriormente en los

anfibios apareci la inmunoglobulina G, en los conejos aparece la Ig A y en el hombre se aaden la Ig D y


E.
Con la evolucin filogentico tambin aprendieron a desarrollar sustancias y sistemas de amplificacin y
reforzamiento de la eficiencia de la resistencia como el sistema complemento.
Invertebrados
Amebas
Fagocitosis

Vertebrados
En lampreas, ciclstomos, peces de rio, etc.
Ig M

Anfibios
Ig M
Ig G

Mamferos
Ig M
Ig G
IG A

Sistemas de
amplificacin
biolgicas

Ser humano
Ig M
Ig G
Ig A
Ig D
Ig E
Sistemas de
amplificacin
biolgicas

ONTOGENIA DE LA RESPUESTA INMUNE EN EL HOMBRE.La maduracin del sistema inmune en el hombre comienza durante el segundo a tercer mes de la gestacin
a partir de las clulas madres pluripotenciales o hemocitoblastos en la mdula sea se generan dos lneas
celulares:
Hematopoytica y linfopoytica, segn el siguiente esquema

ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS INMUNOGLOBULINAS


Ig

Funcin

Estructura

Cadena
pesada

Ig G

Fijacin del
Complemento

Monomrica

Ig A
(secretora)

Proteccin
Mucosas secreciones
externas lgrimas,
secrecin intestinal,

Monmero, dmero o
trmero, con cadena J

Gama 1
gama2
Gama 3
gama 4
Alfa 1
Alfa 2:

Cadena
Adicional

Concentracin
Plasmtica
mg/dl
700 - 1600

J, CS

70 -400

Ig M
Ig D

Ig E

bronquial
Fijacin del
complemento
Reconocimiento de
antgeno por las clulas
B.
Liberacin de
histamina por los
basfilos (alrgias) y
de reaginas (prot
inespecficas: sfilis,
pian)

Pentmero con cadena


J
Monomrica

Mu

40 -260

Delta

Monomrica

psilon

0.05

El rol fisiolgico de la inmunidad tumoral o respuesta bursal en la defensa del husped es la sntesis de
anticuerpos (cuadro anterior) ayudando a prevenir la infeccin y esto lo hace por medio de varios
mecanismos: opsonizacin, antitoxicidad, activacin del complemento, neutralizacin de los antgenos,
unindose al antgeno ( bacterias o virus) lo neutralizan impidiendo su accin ganndole la entrada a la
clula husped.

OBJETIVO DE LA PRCTICA.
En la presente prctica tiene por objeto determinar la respuesta bursal en personas normales y en
pacientes con inmunodeficiencia por desnutricin, a travs de la determinacin cuantitativa de Ig A, Ig M,
Ig G empleando anticuerpos especficos que formen inmunocomplejos insolubles, turbios, y su medicin
espectrofotomtrica.
MATRIALES Y REACTIVOS.
Solucin salina fisiolgica 9/1000ml
Solucin anticoagulante: heparina sdica, frasco por 5 ml, 500 U.I./ml (LIQUEMINE).
Jering descartabla por 5 ml y aguja de 20x1.
Antisueros: anti Ig A, anti Ig M, anti Ig G.
Buffers Ig A, IgM, Ig G.
Solucin patrn de protenas de concentracin conocida.
Suero sanguneo o plasma heparinizado normal
Suero sanguneo o plasma heparinizado de paciente desnutrido.
1 sapo grande para puncin intracardiaca
Equipo de diseccin completo y estilete para obtener animal espinal..
Espectrofotmetro y microcubetas.
Micropipetas automticas de 0 200 y de 0 a mil microlitos o lambdas.
Tubos de prueba 10x75 mm
Cronmetro
PROCEDIMIENTO.Se repartir el trabajo en 5 mesas diferentes del siguiente modo:
Mesa 1: determinara en un suero normal la Ig A
Mesa 2: determinar en un suero normal la IgM
Mesa 3. determinar en un suero normal la Ig G
Mesa 4: determinar en la sangre de un sapo la Ig A (puncin intracardiaca con anticoagulante).
Mesa 5: determinar en el suero de un paciente desnutrido la Ig G.

Distribuir las muestras y reactivos segn los siguientes protocolos para cada inmunoglobulina.
Nota: las muestras problemas para el dosaje de cada inmunoglobulina debern ser diludas al 1/10 antes
de empezar a trabajar:
Suero problema: ----------------------------- -------------- 0.1 ml
Solucin salina fisiolgica: (9 por mil) ------------------ 0.9. ml

DOSAJE DE Ig A
Suero diludo 1/10 :
50 ul
Buffer IgA
900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig A
80 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.

CLCULOS DE LOS RESULTADOS


Calcular la diferencia de absorbancia DO2 - DO1 correspondiente a cada muestra analizada. Interpolar el
valor de esta diferencia en la curva de calibracin para determinar la concentracin en mg/100 ml
correspondiente o multiplicar por el factor de calibracin .

VALORES DE REFERENCIA NORMALES:


70 400 mg/dl
DOSAJE DE LA Ig G
Suero diludo 1/10 :
40 ul
Buffer IgG
900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig G
160 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.

VALORES DE REFERENCIA NORMALES:


700 1600 mg/dl
DOSAJE DE LA Ig M
Suero diludo 1/10 :
60 ul
Buffer Ig M
900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig M
100 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.

VALORES DE REFERENCIA NORMALES:


40 260 mg/dl
DISCUSIN:
Los alumnos compararn los resultados en las distintas mesas en relacin a la respuesta bursal encontrada
para Ig A, Ig G e Ig M en las personas normales, desnutridos y en el sapo y explicarn las razones de las
diferencias encontradas

FUNCIN GLOMERULAR
DEPURACIN DE CREATININA ENDOGENA.
Es una medida muy aproximada de la funcin glomerular.
La filtracin glomerular es un proceso mecnico que se produce como resultado de un juego de presiones:
1. La presin hidrosttica dentro del glomrulo es
+ 60 mmHg (70% de la presin artica)
2. Se oponen a la filtracin:
a. La presin onctica proteica
32 mmHg
b. La Presin Inters. caps. Bowman
18 mm Hg
- 50 mm Hg
Presin Neta de Filtracin
+10 mmHg
El rin trata, dentro de ciertos lmites, de mantener una presin de filtracin eficiente mediante
mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente.
En 24 horas se filtran 180 litros de lquido por los glomrulos pero se excretan solamente 1 a 1.5 litros de
orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas.
No solamente hay reabsorcin de agua a nivel tubular sino tambin de muchas otras sustancias del filtrado
glomerular y que son tiles al organismo como glucosa, aminocidos, sodio, potasio, cloro, etc.
El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporcin que en el plasma sanguneo
exceptuando las protenas.
La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40.
Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la accin tubular el organismo perdera grandes cantidades
de agua, sales, elementos tiles como glucosa, aminocidos, etc. Junto con los productos finales del
metabolismo de las protenas como la urea, creatinina, cido rico, y otros.
Concepto de Clearance:
El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa depuracin o
limpieza y se entiende por Clearance o Depuracin renal de una sustancia al nmero de centmetros
cbicos de plasma que son liberados de dicha sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el rin. Si
una sustancia es nicamente filtrada por el glomrulo, y no reabsorbida, ni secretada por el tbuli, su
depuracin medir el nmero de ml que los glomrulos filtran en un minuto. Es el caso de la Inulina, el
manitol, thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomrulo, pero no se reabsorben ni secretan por los
tbulis renales.
La depuracin de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia excretada en la orina
en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha sustancia en un ml de plasma.
Llamemos V el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recoleccin en minutos (cc/min.))
U a la concertacin de una sustancia x en orina mg/ml y
P a la concentracin de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml
SI MULTIPLICAMOS U x V , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1
min. y LA FORMULA DE LA DEPURACIN SER:
C=UxV
P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.
Se escoge la CREATININA para medir la filtracin glomerular porque el manejo renal de este metabolito
es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuracin es una medida muy aproximada de la
filtracin glomerular, y se usa como ndice de funcin glomerular.
EJEMPLO UN SUJETO TIENE 55 Kg. DE PESO Y MIDE 1.65 m, EL DOSAJE DE CREATININA EN
LA SANGRE ES 0.9 mg/dl EN SUERO.
Es decir 0.009 mg/ml entonces P = 0.009 mg/ml
El volumen urinario fue de 1500 cc en 24 horas: 1500/1440 1.04 ml/min., es decir V = 1.04 ml/min.

La concentracin de creatinina en la orina fue de 100 mg %, es decir 1.5 mg/ml.


La depuracin ser:
C = 1.0x1.04 = 115 ml/min.
0.009
Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomrulo han sido liberados de toda su creatinina en 1
minuto. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg. Y TALLA: 1.65 m. le corresponde una ASC.
de 1.60 m2 de acuerdo al Nomograma segn la formula de Du Bois.
Depuracin corregida = depuracin sin corregir x 1.73 / ASC = ml/min./1.73 m2 de ASC
ASC
115 mlmin
1.60 m2
X
1.73 m2
X=

115 x 1.73 = 124 ml/min./1.73 m2 ASC (DEPURACIN CORREGIDA)


1.60

METODO PARA EL DOSAJE DE CREATININA EN SANGRE Y ORINA


En esta prctica emplearemos el Mtodo espectrofotomtrico colorimtrico de la casa comercial WIENER
LAB. Que es el mtodo de Jaff modificado empleando picrato alcalino en medio taponado con glicina,
previa desproteinizacin de la muestra de suero con cido pcrico directamente proporcional a la
concentracin de creatinina cuando se mide en 510 mm de Longitud de onda. Se comparar con la
absorbancia de un patrn de creatinina de concentracin conocida.
Equipos, Materiales y Reactivos
01 Espectrofotmetro y 01 Centrifuga clnica
Jeringa descartables de 10 ml con aguja 20 x 1
Algodn, alcohol yodado y ligadura
09 tubos de ensayo de 13 x 100 mm
en cada mesa
01 tubo de ensayo de 12 x 75 mm en cada mesa
06 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100
en cada mesa
03 Pipetas de 5 ml graduadas al 1/10
en cada mesa
Frasco con agua destilada 100 ml en cada mesa
Pipetas Pasteur de Vidrio (capilares) con chupn jebe, para separar sobrenadante.
Frascos de boca ancha de 1 litro de capacidad beakers de plstico de 1 litro para obtencin de muestras
de orina.
Reactivo N 1: cido Pcrico 41.4 mMol / Lt
Reactivo N 2: Buffer de Glicina / Na OH 1 mol/Lt (pH = 12.4). Muy custico (alcalino): Precaucin.
Sol. Standard de Creatinina: 2 mg/dl
Procedimiento
Recolectar muestra de orina de 12 24 horas para dosaje de creatinina urinaria. Si se recolecta en frasco
estril, la muestra guardada en refrigeracin puede durar 4 das. Medir exacto el volumen y tiempo de
recoleccin. Anotar
El mismo da de la recoleccin de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje de Creatinina srica.
1.- Primer paso.- DESPROTEINIZACION de la muestra de suero:
En un tubo prueba 13 x 100 mm 12 x 75:
Medir 0.7 ml de suero y aadir 3.5 ml Reactivo N 1 (cido pcrico)
Mezclar por inversin y reposo 10 minutos.
Centrifugar a 3000 RPM x 5 min.

Separar el sobrenadante del suero con la pipeta Pasteur y trasladarlo a otro tubo y
marcarlo: Sobrenadante suero (SS).
2.- Disponer los tubos de prueba 13 x 100 mm segn la siguiente tabla y marcarlos segn lo indicado:
Tubos
Blanco Standard Sobrenad del Orina Dilucin
Suero (SS)
1/50
Sobrenadante Suero SS
ml
3
Sol St. : 2 mg/dl
ml
0.5
Orina Dil 1/100
ml
0.5
Agua Destil.
Ml
1.0
0.5
0.5
React N 1 (Ac.Pcrico 41.4 mMol/l) ml
2
2
2
React N 2 (Buffer Glicina alcalino pH 12.4) ml 0.5
0.5
0.5
0.5
Mezclar por inversin. Reposar 15 min. a Temp. Ambiente.
3.- Lecturas: Colocar el Espectrofotmetro en 510 mm de Long. Onda, y colocando el espectofotometro
en 100% de T osea 0% de Absorbancia.
Leer la Absorbancia de cada uno de los tubos anotando las absorbancias de: Blank, estndar,
sobrenadante del suero (SS) y de la orina diluida.
4.-

Clculos.

a.- Creatinina Srica (Crs): mg/dl


Crs =

Conc St
X Abs suero =
Abs St Abs blank

2
X Abs suero Abs Blank = mg/dl
Abs St Abs Blank

b.- Creatinina en Orina (CrO): mg/dl


Exactamente igual al anterior, sustituyendo las absorbancias del suero por las de la orina y se multiplica
ademas por 100 (factor de dilucin de la orina).
c.- Calcular la Depuracin Creatinina Endgena (Corregida por el ASC):
Segn: Depuracin = U x V
P

1.73 m2
ASC m2

Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los clculos
Por ejemplo:
U = CrO en
mg/ml
V = Vol. Min
ml/min
P = Crs
mg/ml
Valores Referenciales
Depuracin de Creatinina endgena:
Hombres: De 97 hasta 137 ml / min. / 1.73 m2 ASC
Promedio 120 ml / min. / 1.73 m2 ASC (+/- 25)
Mujeres: De 88 hasta 128 ml / min. / 1.73 m2 ASC
Promedio 85 ml / min. / 1.73 m2 ASC
Creatinina Srica Adultos Varones: 0.8 a 1.2 mg / dl
Creatinina en Orina: 1.0 a 1.6 gm en 24 hs (15 a 25 mg/Kg. peso Corporal/24 hs)
Depuracin de Creatinina Aumentada:

Gestacin, Ejercicio fsico.


Depuracin de Creatinina Disminuida:
Insuficiencia renal glomerular Insuficiencia Cardiaca.
Edad avanzada: Disminuye aprox. 1 ml / min. / ao despus de los 40 aos.
Medicamentos nefrotxicos
Mala recoleccin urinaria

FUNCIONES DE CONCENTRACIN Y DILUCIN


Fundamento
El rin tiene una remarcable capacidad para regular el volumen urinario diario concentrado y diluyendo
la orina. Esta caracterstica fisiolgica es una de las ms importantes del rin normal, y se conoce desde
hace ms de 50 aos. Se realiza segn un mecanismo de flujo a contracorriente multiplicador.
Adaptando el principio fisicoqumico del flujo trmico a contracorriente, a la presin osmtica diremos
que en el asa de Henle ocurre un fenmeno similar, lo mismo que a nivel de la Vasa Recta, pero con
electrolitos y que estudiamos con detalle en nuestras clases tericas. Este mecanismo impide que se disipe
la gradiente de Osmolaridad llegando a tener as el intersticio medular y papila hasta 1200 mOsm/Kg.
agua. (El Plasma tiene 280 a 290 mOsm/Kg. agua). El trasporte activo de Cloro en el Asa de Henle es
tambin responsable del sostenimiento de esta alta osmolaridad en el interticio medular renal.
Esta prctica tiene por objeto aprender a medir estas capacidades de concentracin y dilucin de la orina
por el rin a travs de los parmetros fisiolgicos siguientes:
Densidad Urinaria, relacin Uosm/Posm, Cosm, TcH2O sometiendo a una persona sana a una dieta
hidropnica primero y luego a una sobrecarga acuosa.
Definiciones previas.Posm: Es la concentracin osmolar plasmtica, normalmente puede variar desde 280 a 290 mOsm/Kg
agua, es la concentracin de solutos en el plasma.
Uosm: Es la concentracin Osmolar urinaria concentracin de solutos en la Orina u osmolaridad
Urinaria. Generalmente la orina es tres veces ms concentrada que el plasma. El rin reabsorbe agua
hasta concentrar el filtrado glomerular unas tres veces ms que osmolaridad plasmtica. Los valores
normales pueden variar desde 50 hasta casi 1200 mOsm/Kg. agua.
Uosm x V: Es la excrecin de solutos por minuto, es la cantidad de solutos osmticos activos excretados
por minuto.
Cosm: Depuracin Osmolar: Uosm x V / Posm
Es el volumen de plasma que es depurado de sus solutos en la unidad de tiempo.
Representa la tasa a la cual las sustancias osmticas activas son aclaradas depuradas del plasma. La
depuracin basal endgena en el hombre tiene un rango del 1 al 3 % del filtrado glomerular.

CH2O: Es depuracin de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto.
Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar:
CH2O = V Cosm
La depuracin de agua libre es ese ncleo de agua en la orina en exceso de su depuracin osmolar.
Durante la diuresis de agua caracterizada por la excrecin de gran volumen de orina diluida debido a la
gran ingesta de agua, la diuresis se debe a la inhibicin de la hormona antidiurtica de la neurohipfisis.
Durante la diuresis de agua pura, de cualquier duracin magnitud, la orina consiste de una mezcla de
agua osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos que es igual a la depuracin osmolar,
mas un vol. de agua osmticamente libre, es agua libre de solutos, literalmente es agua qumicamente
pura, representada por CH2O. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos trminos:
V = Cosm + CH2O, de donde tenemos que: CH2O = V Cosm
Tc H2O: Durante la concentracin urinaria (Antidiuresis) la orina se concentra por encima de la
Osmolaridad Plasmtica por sustraccin dependiendo de la de agua libre de solutos del filtrado
glomerular, es agua que el organismo se reinfunde. En este caso el Vol. min. es menor que la dep.
Osmolar.
TcH2O = Cosm V representa el volumen de agua reabsorbido a nivel tubular, esto concentra la orina
tubular.

Procedimiento
Para esta prctica se seleccion a una persona a quien el da anterior se le hizo un dosaje de Osmolaridad
Plasmtica y luego al da siguiente se le someti a una prueba de hidropenia, es decir dieta seca, supresin
total de lquidos pero con una dieta normal en protenas, hasta conseguir en lo posible una disminucin del
3% del peso corporal.
A las 6 de la tarde miccion (vejiga vaca), y se descart esta orina y se anot la hora exacta. Luego
empez a recolectar toda la orina emitida, en un mismo frasco hasta las 6 am del da siguiente.
Dos horas mas tarde, 8 am, se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente a parte. En este
momento se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad Plasmtica. Aqu termina el test de
Concentracin.
Inmediatamente se inici la Prueba de Dilucin, para ello se le dio a beber 20 ml de agua x cada Kg. de
peso corporal, con el objeto de probar su capacidad para diluir la orina. Se recolectaron las muestras
emitidas, cada una en frascos separados, cada 20 30 minutos, segn el protocolo del cuadro adjunto,
numerndose todas las muestras emitidas durante casi tres horas.
Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para determinar las
Osmolaridades plasmticas, en el osmmetro. Para la prctica, a partir de estas muestras calcularemos las
Osmolaridades Urinarias a partir de las densidades y con los datos obtenidos de Volmenes urinarios,
tiempos de recoleccin, Uosm, y Posm se determinarn, para cada muestra, los valores de U/P, Cosm,
TcH2O, y CH2O.

Tabla-Protocolo de trabajo para las PRUEBAS de CONCENTRACIN


Y DILUCIN Urinaria
Tiempos Tiempo
de
Acumulat
Recolecc. min
(minutos)

Prueba
De
12 Hs
2 Hs
De

720
840

De
DILU
CION

30
25
20
22
20
18
15

Vol.
Minut
ml/
min

Posm Densi
mOsm Dad
Kg
H2O Urina
ria

Uosm U/P Cosm Tc


CH2O
mOsm/
H2O ml/
Kg
ml/ min
H2O
min

CONCEN
TRACIN
Supres
lquidos

Prueba
Inmedia
to
se hizo:

N
Vol.
de
Orina
Mues ml
tra

30
55
75
97
117
135
150

1a
2a
Inges
ta de
20
ml
agua/
Kg
Peso

432
60
Y se
Conti
Nu
Reco
leccion

298

3a
4a
5a
6a
7a
8a
9a

18
200
190
209
140
126
38

295

294

290

-----------

------------------------

A continuacin graficar en papel milimetrado:


Volumen Urinario (ordenada) vs Densidades (abscisa)
Cosm ((Ordenada) vs Vol. minuto (Abscisa), y determinar TcH20 y C H2O Interpretar los resultados de
cada prueba.

REGULACION RENAL DEL EQUILBRIO ACIDO I BASICO


Acidificacin y/o alcalinizaci6n urinaria.
Introduccin: Bases Fisiolgicas:
Existen tres grandes procesos de regulaci6n del pH en los lquidos del organismo: el mecanismo de
intercambio i6nico (entre las clulas y los lquidos), el mecanismo respiratorio y el mecanismo renal.
Los riones son los reguladores mas eficientes del equilibrio cido bsico, en vista de que realizan la
EXCRECION de los llamados cidos fijos propiamente dichos, los HIDROGENIONES H+; mientras
los H+ se excretan, circulan en la sangre en equilibrio con los aniones correspondientes como el HC03- ,
con lo cual impiden cambios importantes en el pH. La cantidad de Hidrogeniones producidos en el curso
del metabolismo es de hasta 100 mEq. diarios ( 4.1 mEq/hora), dependiendo de la dieta. El Rin se
encarga de excretarlos, al mismo tiempo que recobra el HC03- .La orina de un sujeto sano, con una dieta
normal mixta, es cida y su pH habitual es de 6.0; el filtrado glomerular tiene un pH de 7.40. Esta
disminucin en el pH urinario, se debe a que estn siendo eliminados los Hidrogeniones por el rin. La
magnitud de esta eliminacin es variable de acuerdo con las exigencias fisiolgicas del momento y se
refleja en el pH de la orina que puede variar de 4,0 hasta 8.0, segn las necesidades del organismo. Cmo
se logra excretar una orina cida ? Se logra por la adicin de H+ secretados por las clulas de los tbulis
renales hacia la luz tubular lo cual permite la modificacin de algunos cidos que estn disociados en el
plasma, pero que se convierten en formas no disociadas, al aumentar la acidez del medio. Por ejemplo las
relaciones entre el Na2HPO4 y el NaH2PO4 es de 4 a 1 en el plasma y en el filtrado glomerular donde el
pH es 7.40. Si se baja el pH por la adicin de H+ esta relacin disminuye hasta 4/100 (predominancia del
Fosfato cido), y el pH urinario baja a 5.4.
Si la relacin bajase hasta 1/99 (mayor predominancia an del fosfato cido) el pH llegar hasta 4.8.
El resultado neto de la produccin de una orina cida es la ganancia de un Na+ y SE RECUPERA EL
HCO3- La eliminacin del H+ a cambio de un Na+ permite as retener el HC03- y tener reserva de HC03para situaciones de emergencia. Puede as entonces el rin eliminar constantemente H+ sin vaciar el Na+
extracelular ni perder su bicarbonato en condiciones normales.
En el caso opuesto cuando hay alcalinidad aumentada se produce en el rin el fenmeno inverso:
Disminuye la excrecin tubular de H+, se reabsorbe menos bicarbonato, se excretar fosfato en la forma
Na2HPO4 y se pierden 2 Na+ y el efecto neto ser la perdida de 2 Na+ (base), disminucin del HC03- del
plasma y los cidos orgnicos sern eliminados a un pH ms alto en equilibrio con ms Na+ que se
pierden. En resumen, pueden Ustedes pues darse cuenta que las diferentes funciones del mecanismo renal
responden a requerimientos especficos: en el caso de la acidosis, hay un incremento de la excrecin de
cidos y una conservacin de base; en la alcalosis, hay un incremento de la excrecin de base y
conservacin de cidos y el pH de la orina cambiar correspondientemente y puede variar como les acabo
de sealar en muestras de orina random desde pH 4.5 hasta 8.2. Esta capacidad de excretar cantidades
variables de cido es de una gran importancia fisiolgica porque convierte al rin en el mecanismo de
defensa final contra cualquier cambia del pH corporal o de la composicin anin-catin.

En la produccin de orina cida: Resultado neto: Ganancia de un sodio a cambio de excrecin de de un


H+. Se recupera el NaHCO3. Eliminacin constante de H+ sin vaciar el Na+ del LEC.EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el rin es la EXCRECION DEL H+ EN LA
FORMA DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGNESIS, a partir del NH3 de la glutamina o los
aminocidos. El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado glomerular y por lo tanto proviene de las
clulas del tbuli renal. Sin embargo su excrecin no es rpida sino tarda y solo empieza a funcionar
despus de un lapso prolongado de acidosis .. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por
medio de la excrecin del NH4+. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+, el cual con el NH3
proveniente de la desaminacin de aminocidos o de la glutamina, se excreta como NH4+.
AMONIOGNESIS:

El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias cidas: NH3 + H+ NH4
Se conserva sodio por medio de la excrecin de NH4, el sodio ingresa en favor de la salida de H+
EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4. (ClNH4)
TEST DE SOBRE CARGA CIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres das)
Un da antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulacin Basal. Luego se le prescribe
una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso corporal, durante tres das consecutivos y se va
recolectando la orina de 24 horas cada da, durante tres das. En cada una de las muestras de orina se
medir el volumen y el pH, Acidez de titulacin fosftica y acidez amoniacal. Se determinar el pH
sanguneo basal y al final del test.
Fundamento de la prueba de sobrecarga cida de Cloruro de amonio para medir la capacidad de
acidificacin del tbuli urinario:
El Cloruro de amonio ingerido extrae H+ de la clula.
El Hgado depura el amonio que llega por la circulacin portal y se produce la siguiente reaccin que
libera H+:

2 NH4+
+ CO2 ----------- CO(NH2) 2 + 2 H+ + H2O
(La conversin de amoniaco en urea e
acidificante.)
Acidificante
El H+ liberado se combina con el Na2HPO4 de la orina tubular:
Na2HPO4

H+

NaH2PO4
Sal ms cida y baja el pH hasta
menos de pH 5.4 en la orina.

PRUEBA DE ACIDIFICACIN URINARIA MODIFICADA. (Durante de 6 horas).


Despus de un desayuno normal se recogen 2 muestras de orina con una diferencia de una hora, luego se
le administra al paciente cloruro amnico a la dosis de 0.1 gm / Kg. Peso corporal por la va oral. Se dar
en cpsulas de gelatina de 0.50 gm. De preferencia con tostadas y mermelada, recogiendo la orina durante

las 6 horas siguientes. Se extraen muestras de sangre antes y tres horas despus de la administracin del
Cloruro amnico. Con la carga administrada el pH urinario deber descender por debajo de 5.4
En nuestra prctica solamente haremos una prueba de corta duracin (2 horas) del siguiente modo:
Equipos, Materiales y Reactivos
pH Meter para determinacin de pH sanguneo
Potencimetro para determinar pH en soluciones.
Cinta para determinacin universal de pH
06 Cilindros graduados de vidrio o plstico de 500 ml
08 beakers de 50 ml
02 Pipetas de 5 ml graduadas al 0.1
02 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100
03 Buretas para titulacin qumica
03 Ehrlemeyers de 500 ml con agua destilada
Fenolsulfotalena indicador (PSP) sol alcohlica 1 % o Rojo fenol.
Sol. NaOH 0.1 Normal titulada, Formol 40 % 50ml.
Procedimiento
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de
orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 400 ml de una solucin de Cloruro de amonio al 0.5% en 15 minutos.
Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante dos
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal
urinaria con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la acidez amoniacal previo tratamiento con
formol taponado:
Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. Titular con NaOH 0.1N hasta rosado.
Anotar gasto.
Corresponde a la acidez del Fosfato cido. Cada ml NaOH gastado 0.1 mEq H+
Luego aadir 0.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez amoniacal.
Hacer la sumatoria de acidez fosftica + amoniacal, acidez total y luego calcular la (H+) urinaria en mMol
/ litro. Calcular la Depuracin de Hidrogeniones.
Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma prueba anterior
sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua hervida y fra por kilo de peso corporal
as:
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de
orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.
Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante 2
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal
urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la
acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado, todos los clculos tambin se harn
exactamente iguales al caso anterior.
CLCULOS:
En la prctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuracin de una sustancia, entonces si
hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo determinado podemos calcular el Volumen
minuto y si conocemos las concentraciones de H+ urinarias y pH, y adems se conocemos el pH

sanguneo estamos en condiciones de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuracin
del in Hidrgeno.
CONCLUSIONES:
En la condicin Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min
En la Acidosis como la concentracin de H+ urinaria es mucho mayor que la sangunea
tendremos:
Dep H+ ser > Vol. min.
en la Alcalosis ser la inversa: Vol. min. > Dep H+
Para estos clculos recordar que:
D=UxV/P
y

pH
(H+)

= -log (H+)
= antilog pH

(H+)

-pH
10

EXAMEN QUIMICO DE ORINA


INVESTIGACIN DE ALBMINA:
Excrecin normal: Menos de 75 mg en 24hs. No detectable por los mtodos habituales rutinarios.
Por mtodos especiales se detectan cantidades menores y se llama microalbuminuria.
Para detectar presencia de albmina se emplea el mtodo del cido Sulfosaliclico al 3% as:
Filtrar la orina a travs de papel de filtro.
Colocar 1 ml de orina filtrada en un tubo de ensayo
Aadir 1 ml de cido sulfosaliclico. Reposar 5 minutos.
Si no se produce enturbiamiento no hay albmina: Negativo
Si aparece enturbiamiento indica presencia albmina.
El grado de turbiedad est en relacin con la cantidad e albmina presente.
Hacer un control negativo sustituyendo el cido sulfosaliclico con 1 ml de
agua destilada y proceder exactamente igual. Comparar grados de turbidez.
Entre los mtodos rutinarios cualitativos, el ms simple: test de calor y acidificacin:
Filtrar la orina a travs de papel de filtro.
En tubo de ensayo hervir 3 ml orina filtrada, en mechero alcohol o Bunsen Bao Mara hirviente. Un
precipitado blanco floculante al hervir indica:
a) Protena fosfatos.
b) Para diferenciar:
Fosfatos: si al aadir cido actico 5% desaparece la turbidez:
Fosfatos (Los fosfatos son solubles en medio cido). Si hay
efervescencia: carbonatos presentes.
Protenas: si al aadir cido actico 5% la turbidez aumenta.
INVESTIGACIN DE GLUCOSA
Reaccin de Benedict Cualitativa: Por reduccin del cobre el solucin alcalina y calor.
Colocar 3 ml de Benedict Cualitativo en tubo de ensayo. Aadir 0.3 ml orina
Hervir por 3 minutos en BM hirviente. Enfriar por reposo de 5 min.
Positivo: Precipitado rojo ladrillo al fondo del tubo
Negativo: Permanece azul o color verdoso sin precipitado.
Dan resultado positivo: Glucosa, lactosa, levulosa, pentosas.
TEST PARA CIDOS BILIARES
Los cidos biliares reducen la tensin superficial de los lquidos que las contienen:
Colocar 3 ml de orina en un tubo 18 x 150 ml.
Espolvorese sobre la superficie peque cantidad de azufre pulverizado finamente (flor de azufre). Si el
azufre cae al fondo enseguida, la orina tiene cidos biliares en cantidad mayor de 0.01 % ms.
El cloroformo, alcohol, trementina, timol dan resultados falsos.

INVESTIGACIN DE CUERPO CETNICOS


En tubo ensayo colocar 3 ml orina, aadir 3 gotas cido actico. Mezclar.
Aadir 1 ml de agua oxigenada. Luego, aadir unos 500 mg de nitroprusiato en polvo y agitar suave para
disolver. Colocar en zona 1 ml de hidrxido de amonio. Anillo verde en la interfase: positivo a cuerpos
cetnicos.

Referencias Bibliogrficas:
Libro: Fisiologa Renal, Autores Manuel y Carlos Ramrez Velasco
Editorial Escomel. Arequipa. Per. 1a Ed. 1988.
Libro: Fisiologa Medica Guyton 1996
Physiology and Kidney Diseases, Brow, Londiniun EdCo.2002. First Ed.

ROL FISIOLGICO DE LA PTIALINA (DIGESTIN DEL ALMIDN)


Fundamento Fisiolgico
El alimento en la boca se mezcla con la saliva lo cual se favorece por la masticacin que fragmenta las
partculas grandes de alimentos y mezcla a ste con las secreciones de las glndulas salivales. En las
glndulas salivales los grnulos secretorios (cimgeno) que contienen las enzimas salivales se descargan
en los conductos a partir de las clulas acinosas. Diariamente se secretan 1500 ml. de saliva y el pH es
ligeramente menor de 7.0, pero se aproxima a 8.0 durante la secrecin activa. La saliva contiene dos
enzimas digestivas: la lipasa lingual, secretada por la glndula de la lengua, y la alfa amilasa salival
(ptialina) secretada por las glndulas salivales. La saliva tambin contiene mucinas, que son
glucoprotenas lubricantes del alimento y protectoras de la mucosa oral. Adems contiene IgA,
inmunoglobulina que viene a ser la primera defensa inmunitaria contra bacterias y virus. La alfa amilasa
salival ataca al almidn. Sin embargo, el pH ptimo para esta enzima es de 6,7 y su accin es inhibida por
el jugo gstrico cido en el momento del ingreso del alimento al estmago. El activador de la amilasa
salival es el cloro; siendo su substrato el almidn hidroliza los enlaces alfa 1 - 4 para producir dextrinas,
alfa-limitantes, maltotriosas y maltosa, siendo esta funcin hidroltica la accin cataltica que
estudiaremos en la presente prctica. El almidn, polmero de la glucosa da color azul con la solucin de
yodo. El almidn est constituido por un 15% - 20% de amilosa y un 80% - 85% de amilopectinas.
Objetivo
Estudiar la accin de la amilasa sobre el almidn y determinar los substratos y productos de la actividad
alfa-amilsica salival y el efecto del pH y activador enzimtico sobre esta reaccin enzimtica digestin
hidroltica.
Procedimiento
Digestin del substrato por la alfa-milasa salival:
Tubo No.

Sol. almidn 1 %

ml.

2,0

2,0

2,0

2,0

Tampn fosfato pH 6,8

ml.

1,0

1,0

1,0

----

HCI 0,3 N

ml.

----

----

----

3,4

CIN a 0,9%

ml.

3,0

2,4

----

----

Agua destil.
ml.
Bao Mara 37 C x 5'(Preincubacin,no aadir saliva
todava
Despus de los 5 minutos,recin aadir:

----

----

2,4

---

si

si

si

si

0,6

0,6

0,6

si

si

si

Sol. amilasa salival ( diluda 1/20)


Bao Mara 37C x 20'

---ml.
si

Luego se determinarn los substratos remanentes y los productos de degradacin intermedia del almidn
en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.

A. DETERMINACION DEL SUSTRATO


TUBOS N
5

DIGERIDO DEL TUBO 1:ml

0.5

DIGERIDO DEL TUBO 2:ml

0.5

DIGERIDO DEL TUBO 3:ml

0.5

DIGERIDO DEL TUBO 4:ml

0.5

HCl 0.05 N : mI

0.5

0.5

0.5

0.5

10

11

12

13

DIGERIDO DEL TUBO l:ml

0.5

DIGERIDO DEL TUBO 2:ml


DIGERIDO DEL TUBO 3:ml
DIGERIDO DEL TUBO 4:ml

0.5
-

0.5
-

0.5

SOLUCION DE BENEDICT: mI

SOLUCION DE GLUCOSA 1 %: ml

0.5

Sol. De Lugol: mI

Mezclar, reposar 15': Observar los resultados


B. DETERMINACION DEL PRODUCTO
TUBOS N

Bao hirviente: 100 X 5'


Enfriar en agua helada y observar los resultados.
Conclusiones:
Influencia del pH salival y gstrico en la digestin del almidn.
Influencia del Cloro sobre la actividad de la amilasa salival.
Verificar la ubicacin de los puntos de hidrlisis del almidn por accin de la alfa amilasa salival

FUNCIN DE LAS CLULAS PARIETALES DEL ESTMAGO.


ACIDEZ GSTRICA TOTAL ESTIMULADA Y DBITO
ACIDO/HORA.
El Gastroenterlogo A. W. Kay describi un mtodo con el objeto de lograr una estimulacin mxima de
las clulas apritales del estmago.
En el contexto de la fisiologa gstrica, se considera condicin basal aquella en la cual el paciente est en
completo ayuno despus de haber dormido unas 6 horas tranquilamente, sin estar expuesto a ningn
estmulo visual, ni olfativo, ni auditivo.
Bajo control fluoroscpico debe insertarse una sonda naso-gstrica de modo que la punta de la sonda se
encuentre en la parte ms baja del cuerpo del estmago. En seguida el paciente se coloca en decbito
lateral izquierdo y escupe toda saliva que tenga durante toda la prueba. En estas condiciones la sonda se
conecta a una bomba de succin continua elctrica y el contenido del estmago es aspirado continuamente
a presin negativa de 30 a 50 mmHg, se aspira primero todo el contenido gstrico de la noche anterior y se
descarta. Se recolecta luego J.G. durante los primeros 30 minutos y se mide el volumen y se conserva esta
primera muestra para trabajarla, es la muestra llamada BASAL. El flujo Gstrico debe ser chequeado a
menudo lo mismo que la succin. Luego debe inyectarse un antihistamnico como Clorotrimetn 20 mg
Intramuscular (para disminuir en lo posible los efectos colaterales de una fuerte dosis de Histamina que
recibir luego). Se usa como estimulante de la clula parietal.
Fosfato de Histamina a una dosis de 0.04 mg x Kg. de peso, va subcutnea, mejor Pentagastrina: 6
microgramos x Kg. peso.
Se contina recolectando las muestras de jugo gstrico durante los lapsos de tiempo de 15 min. cada uno y
que son los siguientes:
0 a 15 min.; 15 a 30 min.; 30 a 45 min. y 45 a 60 min.
Se medir la acidez de titulacin e cada una de las muestras empleando NaOH 0.1 Normal, hasta la
neutralizacin, empleando indicador de Fenoltalena solucin alcohlica al 1%.
Procedimiento
Identificacin de las Muestras
Descripcin de los tiempos

I
Primera
Muestra
(Basal)

Inyectar
Antihistamnico y
luego Histamina
Pentagastrina

II
0 a 15
min.

III
15 a 30
min.

IV
30 a 45
min.

V
45 a 60
min.

Tiempos de recoleccin
Anotar los volmenes
Recolectados cada vez (ml)
De cada una de las muestras
anteriores medir:

30 min.

15 min.

15 min.

15 min.

15 min.

Jugo Gstrico (ml)


Agregar:
Agua Destilada (ml)
Indic. Fenoltalena (gotas)
Agitar suavemente
Anotar la cantidad gastada de
NaOH 0.1 N en la titulacin

10 ml

10 ml

10 ml

10 ml

10 ml

10 ml
II
s

10 ml
II
s

10 ml
II
s

10 ml
II
s

10 ml
II
s

Resultados segn Clculos


(expresados en mEq/litro)

Luego se titularn cada una de las muestras obtenidas por separado, empleando Solucin de NaOH 0.1
Normal, gota a gota, agitando suavemente despus de la adicin de cada gota de NaOH, hasta la aparicin
de un color rosado muy tenue y persistente, color que indica la completa neutralizacin del cido del Jugo
Gstrico.
CALCULOS:
Ejemplo: Se gast 2.40 ml en la titulacin de una de las muestras
Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulacin indica 0.1 mEq. H+
2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarn -----------X mEq. H+
2.4 x 0.1 = 0.24 mEq.H+
1
0.24.10 ml de Jugo Gstrico usado
x .............................1000
0.24 x 1000 = 24 mEq.H+ / lt de Jugo Gstrico
10
En este caso hemos calculado la concentracin cida expresada en mEq.H+/cada litro de jugo gstrico,
estas son unidades de expresin qumica en rigor. Pero en fisiologa expresamos la acidez en dbito acido
Es decir la cantidad de acidez generada en un tiempo determinado, por ejemplo cada 24 horas.
En el ejemplo anterior encontramos 0.24 mEqH+ en el volumen de 10 ml de jugo gstrico usado, si en los
primeros 15 minutos se obtuvieron 30 cc de jugo gstrico tendremos:
En 10 ml jugo gstrico = 024 mEqH+
En los 30 ml obtenidos en los primeros 15 minutos tendremos: X
X=

30 x 024 / 10 = 072 mEqH+ en 15 minutos.

Esto se llama debito acido. Y es el dbito acido de los primeros 15 minutos, asi continuaremos en la
misma forma calculando el dbito acido para los 30, 45 y 60 minutos. La sumatoria de estos 4 valores ser
por consiguiente el dbito acido/ hora o gasto acido de la clula parietal.
Valores Referenciales
Residuo Gstrico Despus de 12 hs de ayuno: 20 a 100 ml (generalmente menos de 50 ml)
pH: 1.5 a 3.5
Acidez sin Estmulo: 1 a 4 mEq H+ / litro
Acidez post estmulo (Kay) Pentagastrina: 10 a 120 mEqH+ / litro
Dbito cido Basal/hora: Normal
Hombres: 1 a 10.5 mEq/hora
Mujeres: 1 a 5.6 mEq/hora
Dbito cido Mximo/hora: Normal
Hombres: 12 a 60 mEq/hora
Mujeres: 8 a 40 mEq/hora

MOTILIDAD INTESTINAL
1.
Introduccin
El esfago, el estmago y los intestinos tienen inervacin parasimptica predominante. La acetilcolina es
el neurotransmisor de este sistema y acta como un agonista de la motilidad intestinal.
2.
Material
Equipo para rganos aislados
Conejo
Quimgrafo
Equipo de diseccin
Solucin de Ringer para mamiferos
Suero fisiolgico
Baomara a 40 C
Baln de oxgeno

Algodn embebido en aceite


Acetilcolina
Pilocarpina
Adrenalina
Atropina
Tesmostato

3.
Mtodo
3.1. Experimento No. 1
Se sacrifica al animal y se realiza una laparotoma para resecar una segmento de intestino delgado de unos
20 centmetros. Se marca el extremo proximal. Se lava la pieza operatorio con suero fisiolgico, se le
sumerge en un bao de solucin de Ringer a 40 C y se fija a la palanca inscriptora de1 quimgrafo. Se
mantiene oxigenado e! medio por burbujeo constante.
Se realiza el registro de la actividad intestinal basa1.
.
3.2. Experimento No. 2
Se aade unas gotas de acetilcolina en el baornara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.3. Experimento No. 3
Se aade unas gotas de pilocarpina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.4. Experimento No. 4
Se aade unas gotas de adrenalina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.5. Experimento No. 5
Se aade unas gotas de pilocarpina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.6. Experimento No. 6
Se aade unas gotas de atropina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.7. Experimento No. 7
Se suspende la oxigenacin y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.8. Experimento No. 8
Se introduce un pedazo de algodn embebido en aceite en el extremo proximal intestinal y se observa su
progresin.
4.

Discusin

MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL
Objetivo
El objeto de esta prctica es estudiar los movimientos peristlticos rtmicos del aparato gastrointestinal y el
control que el Sistema Nervioso Autonmico tanto Simptico como Parasimptico ejercen sobre la
motilidad gstrica e intestinal; adems demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y
adrenalina sobre las funciones de contraccin y relajacin de la musculatura lisa gastrointestinal.
Introduccin
La actividad motora del estmago est gobernada fundamentalmente por dos tipos de inervacin redes
de fibras nerviosas: una intrnseca a la va gastrointestinal y otra extrnseca.
a.-La inervacin intrnseca del estmago comprende dos plexos interconectados el plexo Mientrico de
Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la pared estomacal, como lo hacen a travs de toda
la va intestinal. Estos plexos son directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como
este sistema es continuo entre el estmago y el duodeno, la peristalsis del antro influencia la peristalsis del
bulbo duodenal.
b.- La inervacin extrnseca es autonmica dual y proviene del Sistema Nervioso Autnomo: la Simptica
de actividad noradrenrgica inhibidora, va plexo celaco; y la Parasimptica de actividad colinrgica
excitatoria, va del Nervio Vago.
La inervacin simptica inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfnteres; y la parasimptica estimula la
contraccin de la fibra m. lisa pero relaja los esfnteres. Estos dos sistemas juntos modifican la actividad
motora coordinada que se origina independientemente en el sistema intrnseco.
Existe adems un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del estmago dentro de la capa
muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable del ritmo y frecuencia de las contracciones gstricas
y genera una onda excitatoria que tiene un ritmo elctrico basal (REB) de una frecuencia de 3/min. y una
velocidad de 1 cm./seg. cuando pasa por el cuerpo del estmago, y aumenta hasta 3-4 cm./seg. cuando
pasa por el antro.
El sistema nervioso entrico se conecta con el SNC mediante fibras simpticas y parasimpticas, pero es
capaz de funcionar de manera autnoma sin estas conexiones. El plexo mientrico inerva las capas de
msculo liso circular y longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo
submucoso inerva el epitelio glandular, las clulas intestinales endocrinas y los vasos sanguneos de la
submucosa y adems est involucrado sobre todo en el control de la secrecin intestinal. Los
neurotransmisores en el sistema nervioso entrico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina,
Gaba, ATP, Oxido ntrico, CO y numerosos pptidos, CCK, endotelina 2, SustanciaP, Neuropptido Y,
VIP, etc.
El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino se elonga por el
contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la va gastrointestinal desde el esfago hasta el
recto. Esta elongacin inicia una onda de contraccin circular detrs del estmulo y una de relajacin en el
frente de ste. Esta onda de contraccin se mueve en direccin oral-caudal para impulsar hacia adelante
los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg.
Aunque la actividad peristltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad autnoma del
intestino, su presencia es independiente de la inervacin extrnseca.
El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez activan el plexo
mientrico. Las neuronas colinrgicas que pasan en direccin retrgrada en este plexo mientrico activan a
las neuronas liberadoras de la sustancia P, as como de acetilcolina y dan lugar a la contraccin del
msculo liso. Al mismo tiempo, las neuronas que pasan en direccin antergrada activan a las neuronas
secretoras de NO, VIP, Y ATP para producir la relajacin que precede al estmulo.
El REB del msculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65 y - 45 mV. Este
REB se inicia en las clulas intersticiales de Cajal, que son clulas mesenquimatosas estrelladas similares
al msculo liso y actan como marcapasos, estas clulas de Cajal envan mltiples prolongaciones hacia el
msculo liso intestinal. .El REB por s solo rara vez produce contraccin muscular, pero los potenciales de
espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del REB incrementan la
tensin (contraccin) muscular. Las despolarizaciones se deben al ingreso del Calcio y las

repolarizaciones a la salida del K. Muchos polipptidos y neurotransmisores afectan esta onda de ritmo
elctrico basal por ejemplo la acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensin (contraccin de la
F m lisa) en tanto que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensin. En el estmago la
frecuencia del REB es de 4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min., ciego 16/min. Por lo tanto el rol
fisiolgico del REB es coordinar la actividad peristltica y otras actividades motoras gastrointestinales.
Las contracciones se producen solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una
vagotoma el peristaltismo estomacal de hace irregular a veces catico. La motilidad gastrointestinal y la
secrecin es regulada tambin por polipptidos biolgicamente activos que son segregados por las clulas
nerviosas y las clulas glandulares de la mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama
hormonas gastrointestinales, aunque sus efectos fisiolgicos son discretos, sin embargo sus alteraciones
pueden producir enfermedades del trnsito intestinal (ejemplo algunas diarreas motoras).
Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos:
Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK ( CCK-PZ: Colecistoquinina-pancreocimina)
Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona.
Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.
Materiales, equipos, animales de experimentacin y reactivos.- Para cada mesa de trabajos prcticos:
Reactivos:
Materiales:

01 sapo vivo
Tabla de corcho para soporte y fijacin anfibio
Alfileres para sujecin extremidades
01 par guantes descantables
Equipo de diseccin quirrgico
Estilete para seccin medular y tijera, algodn
04 jeringas descartables de 3 ml
01 Aguja descartable de 18 G x 1
01 Aguja descart. doblada en 90
3 hilos blancos de 15 cm. largo N 50 para las
ligaduras
Cnula de vidrio 2mm dim. ad-hoc

Solucin de Ringer para anfibio fresca a 30 C


Col. Azul de metileno
Sol. Acetilcolina 1%
Sol. Adrenalina 1%
Sol. Atropina 1%
Prostigmine (Neostigmina): 0.5 mg / 1ml ampolla
parasimpticomimtrico.

Procedimiento
l.- El alumno realizar la preparacin de sapo espinal segn lo aprendido para producir el shock espinal en
el sapo (Ver prctica de reflejos en animal espinal) y realizar la hemostasia con algodn por compresin.
2.- Diseccin: Sujetar luego el animal en posicin decbito dorsal en la tabla de fijacin con los alfileres y
realizar un corte en toda la lnea medio abdominal y seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.
3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estmago cardias, estmago, ploro e
intestinos. Observar de inmediato y muy cuidadosamente los movimientos peristlticos espontneos del
estmago e intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes estimularlos
mecnicamente.
4.- Con un algodn mojado en Ringer-Batracio a 30 mantener en todo momento la preparacin bien
hmeda con instilaciones abundantes de la sol. Ringer.
5.- Aplicar sobre el estmago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de las siguientes soluciones en
el orden: a, b, c, d, e siguiente:
a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
c.- Fisostigmina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
d.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
e.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer.
Graduar las observaciones visuales de relajacin o contraccin con cruces, comparando con los
movimientos peristlticos espontneos del inicio del experimento.
Conclusiones y Comentario

EFECTOS DE LA HORMONA TIROIDE EN RATONES


Introduccin
EI trabajo biolgico tiene como fuente de energa a los enlaces intramoleculares y puede ser medido en
condiciones de actividad o reposo. A esta ltima condicin se le denomina METABOLISMO
BASAL, que puede ser medido directamente por el mtodo calorimtrico o indirectamente por el

consumo de oxgeno.
Las hormonas tiroideas incrementan el metabolismo basal, el consumo de oxgeno por los tejidos y
la produccin de calor por el organismo. Estas hormonas activan los procesos oxidativos celulares.
En humanos, extirpacin de la glndula tiroidea disminuye el consumo de oxgeno a cifras inferiores, del
30 a 50% de lo normal. En los hipertiroideos aumenta el consumo de oxgeno.
EI aumento o disminucin del metabolismo basal a partir de la determinacin del consumo de oxgeno se
emple como un mtodo diagnstico del hipertiroidismo y del hipotiroidismo. En los sujetos
hipertiroideos con sintomatologa definida el metabolismo basal est incrementado en 40 a 60% y puede
superar ms del 100%. Al aumentar el metabolismo disminuyen las reservas de carbohidratos y se emplea
grasas para cubrir las necesidades metablicas. Este produce prdida de peso y aumento de la temperatura
corporal. Debido a que los mecanismos de disipacin de calor estn sobrecargados, los sujetos
hipertiroideos toleran muy mal los ambientes clidos. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia
cardiaca y la presin arterial sistlica.
EI sujeto hipotiroideo presenta sntomas opuestos: metabolismo bajo, temperatura inferior a la normal,
depsito de grasa y reacciones lentas.
En la presente prctica se comparar los metabolismos de ratones hipotiroideos e hipertiroideos con
ratones eutiroideos ( normales).
Diez a quince das antes del experimento se toma ratones machos adultos jvenes, de la misma edad y
similar peso. Se los coloca en jaulas separadas, que se rotulan eutiroideo, hipertiroideo e hipotiroideo. Los
ratones sern pesados todos los das.
EI ratn hipertiroideo recibe diariamente 15 ug. D levotiroxina. EI ratn hipotiroideo recibe diariamente
1.25 g de metimazol.
Material
Ratones
Jaulas
Jaulas cmaras
metab1icas
Cal sodada
Metimazol
Levotiroxina
Termmetro
Plastilina

Mtodo
Experimento N 1
Se coloca en tres jaulas metab1icas a un ratn eutiroideo, uno hipertiroideo y uno hipotiroideo.
Las jaulas o cmaras metab1icas deben contener cal sodada. Se recomienda que los animales reciban
luz, ya que esta permite que se mantengan quietos, pues los ratones son muy susceptibles a los ruidos a los
movimientos bruscos.
Se coloca un termmetro dentro de cada jaula metablica. Se espera cinco minutos para que se equilibre la
temperatura dentro de la jaula y se registra.
Se humedece el interior de la pipeta colocada en la tapa de la jaula metab61ica con agua jabonosa.

Se coloca una pelcula de espuma de jabn al final de la pipeta y se observara como, a que medida que el
animal va consumiendo el oxgeno, la pelcula de jabn va moviendo a lo largo de la pipeta. EI CO2
producido ser absorbido por la cal sodada.
Con un cronmetro se determina el tiempo requerido para consumir 1 cm3 de oxigeno y se convierte los
segundos en fraccin centesimal.
A continuacin se calcula en consumo de oxgeno por minuto del animal y se convierte litros por hora.
Este volumen calculado se encuentra en condiciones ATPS y debe ser convertido en condiciones STPD de
acuerdo a la siguiente frmula:

o
Vo STPD = {[Vol ATPS x (Pb - PH2O / Ts)] / 760} x [273 / (273 + Ts)]
Donde:
Vol = L/h
Pb= presin baromtrica.
PH2O= presin de vapor de agua Ts= temperatura del aparto
EI valor cal6rico del oxigeno varia segn el cociente respiratorio. Con una dieta promedio el cociente
respiratorio es 0.8 y el equivalente cal6ricodel Oxgeno es 4.8 Kcal/l, por 1o que el nmero de caloras
por hora ser:
Cal/h = 4.8 cal/l x L/h
Dado que el nmero de caloras es proporcional al peso y a la superficie corporal, entonces:
S=K x W 2/3
o
S = K x logW X 2/3
Donde:
S = superficie corporal
K = constante de von Muralt

Equivalentes calricos a diferentes


Cocientes respiratorios (R)
R no proteico
0.70
0.75
0.80
0.85
0.90
1.00

Equivalente calrico en cal/L


4.69
4.74
4.80
4.86
4.92
5.05

Animal

Constante de von Muralt

Hombre
Conejo
Caballo
Ratn

12.3
11.2
8.5
11.4

EI resultado esta expresado en centmetros cuadrados y debe convertirse a metro cuadrados:

m2 = cm2/10000
EI metabolismo es igual:
Metabolismo = (cal/h) / S en m2
o
Metabolismo = cal/m2/h

Consideremos un ejemplo prctico:

MEDICIN DE LAS Kcal PRODUCIDAS EN UN RATN EN SU


METABOLISMO
Peso del ratn: 28 g
1) Consumo de O2 en ml/min
Si el ratn en 40 seg
en 60 seg

xml O2

consumi
cosumir

1ml de O 2
x ml de O 2

(60 seg ) (1 ml de O2 )
1,5 ml de O2 / min
40 seg

2) Consumo de O2, en ml/h , en condiciones ATPS


El ratn consume
1,5 ml de oxgeno
en
El ratn consumir x ml de oxgeno
en
Consumo de O2 en 1 hora = x ml O2 / h

1 min
60 min

(1,5 ml de O2 ) (60 min)


1 min

90 ml de O2 / h en

condiciones ATPS
3) Consumo de O2 en ml/h en condiciones STPD
a) 90 ml/h = 0,09 L/h
b) Encontrar el factor de conversin: Si la presin baromtrica fue de 754 mm de Hg y la
temperatura fue de 37C encontramos en la tabla que el factor de conversin es 0,867.
c) Multiplicando el consumo de O2 en ml/h por el factor de conversin tendremos:
(0,09 L/h) (0,867)= 0,078 L de O2/h como consumo en condiciones STPD.
4) Cuntas Kcal se habrn producido cuando el ratn en su metabolismo consumi 0,078 L/ de
oxgeno, en condiciones STPD?
a) Sabemos que en una dieta mixta el equivalente calrico del O 2 es de 4,825 Kcal/L de oxgeno.
b) Entonces podemos calcular las Kcal/h producidas por nuestro ratn, razonando as:
1L
de 02 .equivale a
4,835 Kcal
0,078 L de O2
equivale ax Kcal
O sea:

x Kcal
c)

0,078 L de O2 / h (4,825 kcal)


1 L de O2

0,367 kcal / h

Pero para poder comparar un indivduo con otro debemos referir este resultado al rea de
superficie corporal (ASC).
i) Calculo del ASC: peso del ratn de 28g de peso

ASC =

11,4( peso 2 / 3 )
segn Mulralt la K=11.4

ii) Aplicando la frmula en nuestro ratn:

ASC 11,4 (282 / 3 ) 11,4(3 282 ) 11,4 (3 784) 11,4(9,22) 105,11cm2


iii) Convertir los cm2 a m2:
1 m2 tiene 100 cm(100 cm)= 10.000 cm2
Luego nuestro ratn tiene como ASC:

105 cm 2
10 .000

0,01 m 2 como ASC en m2

iv) Entonces nuestro ratn produce 0,376 kcal/h/0,01 m2

5) Cuntas Kcal por m2/h produce nuestro ratn?


Si el animalito produce 0,376 kcal
Entonces producir
x Kcal

X Kcal/m2/h=

por
por

0,01 m 2
1,00 m 2

(0,376Kcal ) (1m 2 )
37,6 Kcal / mm m 2 / h (RESPUESTA)
N2
0,01m

ATPS: Ambient Temperature Pressure saturated (con vapor de agua)


STPD: standard temperatura and pressure dry
El consume de Oxgeno y CO2 producido son estandarizados a la temperatura standard (0C) a la
presin baromtrica a nivel del mar (760 mm de Hg) y a condicin de gas seco.
Profesor Enrique Avila Zamora
Lima 13 de noviembre del 2010

GONADOTROFINA CORIONICA HUMANA


CORION PLACENTARIO Embriol y Estructura Liso y Frondoso (Vellosidades) DIBUJO PRACTICA
hCGH crv 2013: Fases : Fecundacin Blastmero de dos clulas a las 24 hs; luego 4 clulas a las 6 hs;
16 clulas al 4 da ; Sigue la multiplic celular hasta MORULA; Luego Blastociste y Blastocele;
Luego viene la IMPLANTACION del blastocisto en mucosa uterina a los 6 das de la fecundacin;
Luego numerosas clulas del citotrofoblasto se convertirn en sincitio trofoblasto y ste en el Corion
Liso y otras corion frondoso o velocidades , es el Corion velloso.. As la Placenta tendr dos partes Fetal
(Corion ) y Materna (mucosa uterina). Veamos pues las figuras para mejor repasar la embriologa del
CORION , antes de entrar a la Fisiologa de la hormona hCGH: Son 4 figuras de la Embriologa :
Fig N 1

FIG N 1

Fig N 2

FIG N 2

Figura N3

Fig N
3

Fig N 4
La Gonadotrofina aperece precozmente y desde ya funciona:

El Corion Placentario secreta a partir del TERCER mes la PROGESTERONA, hCG , Relaxina,
Somatotrofina o Lactgeno placentario humano (HPL)

Fig.

TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Introduccin
La glicemia en condiciones basales, vara entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L. )En la diabetes
mellitus se presenta elevacin de la glicemia en ayunas
En la prctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el llamado test de
Tolerancia a la glucosa..

Material
Sujeto de prueba en ayunas.
Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua ms zumo de tres limones.
Glucmetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.
Balanza.
Tallmetro.
Tubos de prueba.
Pipetas.
1 fiola de 100 ml.
Matraz de 1000 ml.
Reactivos para anlisis de glucosa en orina:
Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3 g
Citrato de sodio o potasio (cristalizado) 173.0 g Carbonato
de sodio (cristalizado) 200.0 g
Agua destilada, c.s.p.
1000.0 ml

Peso previo:
Colocar el chip del glucmetro.
Encender y ver el nmero de cinta reactiva que reconoce para su uso.
Colocar la tira reactiva en el glucmetro para su reconocimiento.
Mtodo
Experimento N 1
Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas.
Hacer una determinacin de glicemia en ayunas y despus administrar una solucin de 75 gr de glucosa.
Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y determinar la glicemia. Simultnea buscar
presencia de glucosa en orina. Construir el grfico correspondiente.
EXPERIMENTO N 2: Test de Benedict
EI test de Benedict puede detectar concentraciones tan pequeas como 0.15 a 0.2 por ciento de glucosa. La
solucin de Benedict no es reducida por el cido rico, la creatinina, c1oroformo aldehdos.

DIABETES EXPERIMENTAL ALLOXANTICA


Introduccin
En la prctica la Diabetes Mellitus se presenta en dos modalidades. Insulina Dependiente (tipo 1) e
Insulina No Dependiente (tipo 2). Estudiaremos la Diabetes de Tipo I por medio de la destruccin
experimental de las clulas beta del pncreas por medio de la administracin intraperitoneal de una
sustancia txica Alloxan en la rata , es la Diabetes experimental. Diferenciaremos la glucosuria diabtica
de la glucosuria renal y para ello emplearemos adems, en esta prctica otra sustancia txica, el Phlorizin
(Floricina) que es un glucsido que provoca glucosuria en el mamfero . La floricina es un veneno
enzimtico que disminuye la cantidad de energa disponible para el transporte activo de la glucosa desde la

luz del tbuli proximal al interior de la clula tubular y desde sta a la sangre y disminuye la reabsorcin
tubular de glucosa., es decir, intoxica al tbul renal produciendo glucosuria renal, (que es una afeccin
tubular en la cual aparece glucosa en la orina con niveles normales de glucosa en la sangre). Sabemos que
los estudios con micropuncin han demostrado que la glucosa es reabsorbida completamente en el tubo
proximal y su depuracin es cero. La administracin del txico floricina produce aclaramiento de la
glucosa y esta tasa de aclaramiento de la glucosa va aumentando hasta igualar a la inulina, esto
demuestra que la floricina disminuye la reabsorcin tubular de glucosa y puede llegar a producir un
bloqueo completo de la reabsorcin tubular de la glucosa y as se explica presencia de glucosuria renal
por floricina. En la Diabetes Mellitus el orgen de la glucosuria es diferente siendo el mecanismo primario
la hiperglicemia y cuando la glucosa en el plasma va incrementando hasta llegar a un nivel en que las
clulas tubulares proximales alcanzan su mxima capacidad de reabsorcin de la glucosa; y es cuando la
carga de glucosa filtrada por los glomrulos rebasa la capacidad mxima de reabsorcin de los tbulis que
aparece glucosa en la orina. El valor medio de la TmG es de 375 mg/min/1.73 m2 para los hombres y 303
mg/min/1.73 m2 para las mujeres.
En la Diabetes Mellitus existe un nivel elevado previo de glucosa en la sangre antes de que aparezca
glucosuria.

Materiales y Reactivos y Animales de experimentacin.


3 Animales de experimentacin: ratas de 200 a 300 gr. De peso, bien hidratadas en ayunas.
3 Jaulas metablicas.
3 Jeringas de insulina
3 Jeringa con aguja de 5 ml.
Alloxan en solucin 4% (4000 mg en 100 ml de suero fisiolgico).
1 glucmetro con cintas reactivas.
Insulina cristalina
Phlorizin ( Floricina ) en solucin al 4% en solucin
salina.
1 tijera.
2 tubos de prueba.
Reactivos de Benedict
Procedimiento
Identificar tres ratas A, B, y C .
Determinar la glicemia basal en las tres ratas previamente pesadas (la muestra de sangre se obtiene de la
cola a travs de un corte en el extremo).
Administrar va intraperitoneal:
- A la rata A (control) se administra va intraperitoneal
1.5 ml de Suero fisiolgico.
- A la rata B: se administra va intraperitoneal Alloxan en solucin al 4% a la dosis de 200 mg. par
kilogramo de peso corporal.
- A la rata C: se administra va intraperitoneal Phorizin en solucin al 4% a la dosis de 200 mg. por
kilogramo de peso corporal.
En la rata B hacer control cada 5 minutos hasta que se haga diabtica, y luego cada 20 minutos.
A la rata diabtica administrar Insulina intraperitoneal a la dosis de 1 U! por cada 100 gramos de
peso.
Discusin