Manual de Practicas de Laboratorio Francisco

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO
Hematologa Inmunologa - Microbiologa
CENTRO DE ESTUDIOS TECNOLGICOS INDUSTRIAL

Y DE SERVICIOS NO. 57
Ignacio Allende
ndice:
Portada........1
ndice....3
Objetivo General....4
Norma Oficial 087 Ecol.........5
Prctica No. 1 Prueba de embarazo cualitativa.....6
Prctica No. 2 Prueba de embarazo cuantitativa........10
Prctica No. 3 Espermatobioscopia..........15
Prctica No. 4 Prueba de Simms-Hunher (Post-coito)...20
Practica No. 5 Tcnica de Faust o de flotacin con sulfato de Zinc..23
Practica No. 6 Reaccionmes Febriles...27
Practica No. 7 Examen general de orina...32
Practica No. 8 Amiba en Fresco.....37
Practica No. 9 Coprocultivo.40
Practica No.10 Urocultivo.45
Objetivo General
La prctica de laboratorio tiene como objetivos instructivos fundamentales que los

estudiantes adquieran las habilidades propias de los mtodos de la investigacin
cientfica, amplen, profundicen, consoliden, realicen, y comprueben los fundamentos
tericos de la valoracin clnica mediante la experimentacin empleando los medios de
enseanza necesarios, garantizando el trabajo en equipo e individual en la ejecucin de la
prctica.
Esta forma organizativa persigue objetivos muy similares a los de las clases prcticas, lo
que la diferencia es la fuente de que se valen para su logro. En las prcticas de
laboratorio los objetivos se cumplen a travs de la realizacin de experiencias
programadas con el apoyo de este manual.
Etapas para la realizacin de la prctica de laboratorio. Por su esencia el proceso de
realizacin de las prcticas de laboratorio constituye parte integrante del trabajo
independiente de los estudiantes, el cual est constituido por tres etapas:
Preparacin previa a la prctica

Realizacin de la prctica
Conclusiones de la prctica.
La preparacin previa a la prctica se desarrolla fundamentalmente sobre la base del

estudio terico orientado por el profesor como fundamento de la prctica, as como el
estudio de las tcnicas de los experimentos correspondientes.
El desarrollo se caracteriza por el trabajo de los estudiantes con el material de laboratorio
(utensilios, instrumentos, aparatos, y reactivos), la reproduccin de los fenmenos
deseados, el reconocimiento de los ndices caractersticos de su desarrollo, la anotacin
de las observaciones, entre otras tareas docentes.
Durante las conclusiones el estudiante deber analizar los datos de la observacin y
arribar a las conclusiones y generalizaciones que se derivan de la prctica en cuestin.
NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental - Salud

ambiental - Residuos peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y
especificaciones de manejo.
La presente Norma Oficial Mexicana establece la clasificacin de los residuos peligrosos
biolgico-infecciosos as como las especificaciones para su manejo.
Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria para los establecimientos
que generen residuos peligrosos biolgico-infecciosos y los prestadores de servicios a
terceros que tengan relacin directa con los mismos.
PRCTICA No. 1
PRUEBA DE EMBARAZO CUALITATIVA
(Qumica en seco)
OBJETIVO:
El alumno conocer la tcnica para la determinacin presencia de la hormona GCH en
suero o plasma para determinar si la paciente est embarazada.
FUNDAMENTO:
Bsqueda de la hormona GCH mediante un suero anti-GCH
INTRODUCCIN:
La prueba de embarazo mediante deteccin de un solo paso de GCH es un inmunoensayo
cromatogrfico para la deteccin cualitativa de gonadotropina corinica humana en la orina
para ayudar en la deteccin temprana del embarazo. La prueba utiliza una combinacin de
anticuerpos que incluyen un anticuerpo monoclonal de GCH para detectar selectivamente
niveles elevados de GCH.
El ensayo se conduce colocando una muestra de orina en la tira del reactivo y observando
la formacin de las tiras de colores. La muestra pasa a travs de la accin capilar a lo largo
de la membrana para reaccionar con el conjugado de colores.
Las muestras positivas reaccionan con el conjugado de color de GCH de anticuerpo
especfico para formar una lnea de color en la regin de lnea de prueba de la membrana.
La ausencia de esta lnea de color sugiere un resultado negativo. Como control del
procedimiento, siempre aparecer una lnea de color en la regin de lneas de control si la
prueba se realiz correctamente.La tira de prueba contiene partculas anti-GCH y
revestimiento anti-GCH en la membrana.
MATERIAL Y REACTIVOS:
Tira reactiva
Orina
Suero
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipeta Pasteur
5
Instrucciones para el paciente

Orina se recomienda la primera orina de la maana en un frasco limpio
Suero se le pide al paciente venir en ayuno, no haber ingerido bebidas alcohlicas ni
medicamentos en 48 horas
Procedimiento en el laboratorio
Suero
Nota: El paciente debe presentarse en ayuno
1.- Tomar una muestra sangunea y centrifugarla a 3500rpm a 5 min
2.- Colocar 2ml de suero en un tubo de 12x75
3.- Abra el sobre y tome la tira por el lado contrario al depsito de la muestra.
4.- Meter la tira reactiva en forma recta procurando que la parte de abajo se sumerja en el
suero o plasma
5.- Espere de 1 a 5 minutos y lea los resultados.
Orina
Nota: Antes de realizar la prueba permita que la muestra de orina se equilibre a
temperatura ambiente (18-30C).
1.- Colocar 2ml de orina en un tubo de 12x75
2.- Abra el sobre y tome la tira por el lado contrario al depsito de la muestra.
3.- Meter la tira reactiva en forma recta procurando que la parte de abajo se sumerja en el
suero o plasma
4.- Espere de 1 a 5 minutos y lea los resultados.
6
Nota
Los resultados positivos se pueden observar en 40 segundos.De cualquier manera, para
confirmar los resultados negativos, se necesita esperar el tiempo completo de reaccin (5
minutos),
No lea los resultados despus de 10 minutos.
INTERPRETACION DEL RESULTADO:
Resultados
POSITIVO: Aparecen dos lneas rojas
distintivas.
Lectura
NEGATIVO: Aparece una lnea roja.
NO VLIDA: Ninguna lnea roja
Conclusiones
Esta prueba es muy fcil y sencilla para su elaboracin ya que ahorro mucho tiempo ya
que es muy prctica para detectar la hormona GCH y poder determinar si la paciente est
embarazada o no, pero teniendo cuidado en el procedimiento y no tocar la tira reactiva ya
que puede ocasionar errores en los resultados.
BIBLIOGRAFIA:
Faustina Rubio Campal, Benjamn, Garca, Manuel Carrasco,

INMUNOLOGIA Aplicaciones prcticas en Hematologa y Microbiologa
Buenos Aires, Editorial Paraninfo , 1995
Pginas consultadas 136 a 143
PRCTICA No. 2
PRUEBA DE EMBARAZO CUANTITATIVA
(Inmunolgica)
Objetivo: El alumno determinara la cantidad de la hormona GCH en suero y orina y
determinara la evolucin o el tiempo del embarazo basndose en la cantidad de la
hormona GCH.
Fundamento: Bsqueda de la hormona GCH en orina y suero mediante un suero
con anti-GCH.
Introduccin
Existen dos tipos de test de embarazo de sangre: el test cualitativo y el cuantitativo.
La prueba de embarazo cualitativa slo sirve para ver si hay embarazo, mientras que
con la prueba de embarazo cuantitativa, se cuenta la cantidad de GCH existente en
la sangre y puede repetirse para vigilar el correcto desarrollo del embarazo. Durante
el inicio del embarazo, la GCH aumenta rpidamente, duplicndose cada 48 a 72
horas. Es por esto que en algunos casos la prueba de embarazo cuantitativa se repite
al cabo de dos o tres das para comprobar que si se est llevando el embarazo sin
problemas. Aunque las pruebas basadas en la aglutinacin son en principio
cualitativas
indican si son positivas o negativas
se pueden utilizar
cuantitativamente realizando diluciones de lo orina o suero: La ultima dilucin en
la que se observa claramente un resultado positivo nos indica la cantidad de HCG
presente en la orina . El aumento de las especificidad diagnostica se logr con la
obtencin de antisueros contra el pptido carboxiterminal de la subunidad de la
HCG. Los test actuales utilizan dos clases de anticuerpos monoclonales unos anti lo hacen con la subunidad -HCG. La sensibilidad de los test de este tipo puede
llegar a 50Ul/l. El radioinmunoensayo especfico para la valoracin de la HCG
proporciona un test de embarazo un 100 por 100 ms especfico que el urinario de
inhibicin de la aglutinacin. Con el RIA se pueden obtener el diagnstico del
embarazo a los 8-9 das postulacin adems de evitar los falsos positivos del mtodo
de inhibicin de la aglutinacin.
Material
20 tubos de 12x75
1 pipeta de 1ml
Gradilla
Reactivo
Ac-GCH
Equipo
Centrifuga clnica
Bao mara

Se le pide orina de 24 horas en recipiente limpio con taparosca (Indicaciones se desecha
la primera orina de la maana y se recolecta en un embase la orina del todo el da asta la
primera orina del siguiente da)
Suero se le pide al paciente venir en ayuno, no haber ingerido bebidas alcohlicas ni
Procedimiento en el laboratorio
1) Realizar diluciones de la orina tomando 1ml de orina y 1ml de solucin salina.
1:2
10
2) Tomar 1ml de la dilucin anterior y 1ml de solucin salina

1:4
3) Tomar 1ml de la dilucin anterior y 1ml de solucin salina

1:8
4) Realizar diluciones 1:16,1:32 y 1:64
1:16
1:32
1:64
5) Colocar dos gota de cada dilucin en tubos de 12x75 y etiquetarlas ,colocarle dos
gotas de reactivo anti-GCH
6) Incubar por 30 min a 37C
11
7) Centrifugar a 1500 rpm por 15 seg
8) Lee
Positivo
Negativo
9) Obtener el resultado de cantidad de la hormona GCH con la siguiente formula
Volumen de orina de 24 horas x Ultima dilucin positiva x Sencivilidad de

reactivo
Sustitucin
200x32x1=6400 GCH
10) Graficar la evolucin del embarazo y valores normales
12
Conclusin
Esta prueba es utilizada para determinar el tiempo que lleva el embarazo as como su
evolucin durante primeras semanas las cuales hay un aumento considerable de la
hormona hasta su punto mayor y hasta su descenso de la hormona para saber que el
embarazo va bien y no hay anomalas en el desarrollo del feto.
Bibliografa
Daz Portillo, Fernndez del Barrio Parede
Salido Aspectos bsicos de Bioqumica Clnica
Editorial Das de santo, Madrid Espaa, 1997
Pginas 297
Paginas Consultadas 189 a la 250
13
PRCTICA No. 3
ESPERMATOBIOSCOPIA
OBJETIVO: Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de realizar e interpretar el

recuento de espermas, y las diferentes anormalidades de los mismospara encontrar
anomalas que produzca infertilidad en el hombres.
FUNDAMENTO: Determinar las caractersticas fsicas, qumicas y microscpicas del
espermatozoide.
INTRODUCCION:
Tambin conocido como espermograma, espermiograma, espermatograma o
seminograma, es el estudio de la calidad de una muestra de esperma. El color del semen
es normalmente blancuzco o blanco lechoso o levemente amarillento, por las flavinas
provenientes de la vescula seminal. Si el lquido eyaculado presenta un color anaranjado
o rojizo, es posible que contenga sangre, signo que se conoce como hematospermia, que
puede indicar un trastorno urolgico. El semen suele tener una consistencia de cogulo,
debido a la facilidad de solidificacin que posee gracias al fosfato de espermina y otras
protenas similares al fibringeno. Es frecuente la aparicin de grumos ms slidos, pero
ello no es indicativo de ninguna clase de problemas. El olor es peculiar y variable en cada
individuo, en funcin de mltiples factores. Se trata de caractersticas que incluyen un fuerte
componente subjetivo y emocional. Para unas personas es desagradable y para otras es
excitante. Algunas personas reconocen un leve sabor dulce y afrutado, debido a las
protenas alcalinas. El aroma puede ser muy intenso. El pH del semen es de alrededor de
7,5. Esta ligera alcalinidad favorece a los espermatozoides cuando se encuentran en la
vagina, donde el pH es cido. Menos del 10% del volumen del semen de una eyaculacin
corresponde a los espermatozoides. Ms del 90% del volumen del semen de una
eyaculacin corresponde al lquido seminal. La densidad normal de los espermatozoides
en el semen vara de 50 a 150 millones por mililitro, por lo que cada eyaculacin contiene
entre 20 a 150 millones por milmetro cbico de espermatozoides. Para que se produzca la
fecundacin del vulo, el semen debe contener ms de 20 millones de espermatozoides
por mililitro. Debido a la composicin del semen, en condiciones adecuadas, los
espermatozoides pueden permanecer vivos fuera del organismo durante varios das.
Tambin sobreviven durante cierto tiempo en los conductos excretores despus de la
muerte. Se han llegado a encontrar gametos masculinos vivos en la trompa de Falopio y en
el tero de la mujer varios das despus del coito.
14
MATERIAL
Frasco de boca abierta

Pipeta de 1ml y de 5ml
Cmara de Neubauer
Tira reactiva de pH
Porta objeto
Cubre objeto
Caja petri
REACTIVOS:
Formol a 3%
Eosina al 5%
Indicaciones para el paciente

Se le indica al paciente que recoja el semen eyaculando (por masturbacin) despus de
abstinencia sexual de 4 das, cuando menos (de preferencia una semana).
La muestra se recoge en un frasco de boca ancha, limpio y seco, preferiblemente estril.
Se le pide que lleve la muestra por lo mxime 2 horas despus de la eyaculacin
intentando tener el semen a temperatura corporal.
No se recomienda obtenerla la muestra mediante el preservativo, ya que contienen
espermaticidas y daran resultados alterados.
PROCEDIMIENTO
1) Tomar la muestra y revisar los aspectos de olor y color y reportarlo
15
2) Medir la cantidad de semen con una pipeta de 5ml y reportarlo
3) Tomar una tira reactivo de pH y introducirla en el semen y leerla reportar resultado
4) Tomar una gota de semen y realizar una fijacin en fresco observar la movilidad
en % y su morfologa y reportarlo en la morfologa si hay anormalidades mayores
aun 20% se reporta
Nota: La estructura del espermatozoide consta de una sola clula dividida en: Cabeza,
Cuerpo o Segmento intermedio, Cola y un segmento terminal o flagelo, generalmente
considerado como parte de la cola. Las alteraciones pueden ser las siguientes:
Anormalidades a nivel de la cabeza
Anormalidades a nivel del cuerpo
Anormalidades a nivel de la cola
5) Tomar dos gotas de semen y una gota de Eosina y mezclar con suavidad y
realizar una fijacin en fresco observar al microscopio y reportarlo en % la
mortalidad
6) Realizar un conteo de espermatozoides
6.1) Se aspira semen hasta la marca 0.5 de una pipeta te Thoma para el
recuento de Leucocitos; y despus liquido diluyente Formol al 10% hasta la marca
11.
Nota: La dilucin del semen en el tubo es de 1:20.
16
6.2) Se agita energticamente por 3 min la pipeta hasta que el lquido en el bulbo
de la pipeta sea homogneo.
6.3) Tirar las 3 primeras gotas y llenar la cmara de Neubaur dejar sedimentar
por 15 min en un ambiente hmedo dentro de una caja petri.
6.4) Se observa en el microscopio y se cuentan los espermatozoides presentes en
dos zonas cuadriculadas grandes (las reas de 1 mm2).
Clculos
El nmero de espermatozoides por ml se calcula de la siguiente manera:
N/2 x 10 x 20 x 1000 = espermatozoides/ml
Nota: El nmero de elementos contados (N)
Se dividen entre 2, para referirlo a 1 mm2
Se multiplica por 10 porque cada cuadro donde se hizo el recuento tiene 0.1 mm de
profundidad, tenindose as el volumen en que se cuentan los elementos
Se multiplica por 20 porque es el factor de dilucin.
Se multiplica por 1000 para convertir mm3 (ml) a ml.
Valores normales
Revisin
Valores Normales
pH
Color
Aspecto
Mortalidad
Vitalidad
Morfologa
Olor
N de espermas
Volumen
Mayor de 7.2
Blanco-Grisceo
Translucido u opalescente
Mayor a 50%
Mayor al 50%
Ms de 30% para reportar anomalas
No putrefacto
20 a 150 millones por mililitro
2 a 5 ml
17
Conclusin
Esta prueba es de gran importancia para encontrar causas de infertilidad en el
hombre ya sea por tener un conteo por debajo de los valores normales o tener
grandes ndices de mortalidad del espermatozoide, pero nos ayuda a saber que
hay u problema como una infeccin y as poderla detectar y tratar para que la
persona pueda producir espermatozoides los cuales prueba fecundar al ovulo.
:
BIBLIOGRAFA.
Espermatobioscopia post-coito y prueba de Simms-Huhner
Autor Ma. Del consuelo Rodrguez O.
Editor M. del C. Rodrguez O., 1962
Paginas totales 87
Paginas consultadas 50 a la 58
18
PRCTICA No. 4
PRUEBA DE SIMMS-HUNHER
OBJETIVO
El alumno aprender el procedimiento de la prctica antes y despus de la toma de
espermas en moco cervical para observar su comportamiento en la vagina y as poder
diagnosticar problemas de infertilidad.
FUNDAMENTO
Observar la mortalidad y la cantidad de espermatozoides en moco cervical y su
comportamiento.
INTRODUCCIN
La prueba poscoital (PCT o prueba de Simms-Hhner) fue descrita por Simms en 1866,
quien reconociendo la importancia de la motilidad del espermatozoide y del momento de la
prueba, llev a cabo pruebas inmediatas poscoitales en muchas mujeres, y hall
espermatozoides en el moco cervical al cabo de unos pocos minutos luego del coito.
Tambin observ la presencia de espermatozoides vivos en el crvix luego de 36 a 48 horas
despus del coito. El moco del cuello uterino es una secrecin que se produce en el cuello
del tero de la mujer. Este moco facilita el pasaje de los espermatozoides en su viaje hacia
la fertilizacin de un vulo. Hay slo unos pocos das del ciclo menstrual en los que el
esperma puede sobrevivir en el moco del cuello uterino. Este examen evala el moco del
cuello uterino alrededor del momento de la ovulacin. Cerca de este momento, el moco del
cuello del tero es delgado y acuoso. Si este moco se separa, entonces puede frenar a los
espermatozoides en ese momento frtil cuando se supone que deben llegar hasta el vulo.
El examen post-coito (PCT) evala no solamente el moco del cuello uterino, sino tambin
la interaccin entre el esperma y el moco. La PCT debe realizarse lo ms cercano posible
a la ovulacin. Se instruye a la pareja de abstenerse de relaciones sexuales en los das
anteriores a la prueba. La mujer no debe aplicarse duchas intravaginales 48 horas antes,
as como la pareja tampoco debe medicarse durante este tiempo. La PCT debe realizarse
lo ms cercano posible a la ovulacin. Algunos piensan que una PCT normal es de 10
espermatozoides o ms por campo, con motilidad rectilnea. Otros consideran como normal
la presencia de 5 espermatozoides mviles rectilneos. Jette y Glass indican que una PCT
con ms de 20 espermatozoides por HPF est asociada con un ndice alto de embarazo y
anlisis normal del semen.
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MATERIAL:
1 Especulo
1 Jeringa de tuberculina
1 Pipeta
5 Porta objetos
5 cubre objetos
EQUIPO:
Microscopio
PROCEDIMIENTO:
Indicaciones antes de la muestra
1) La prueba debe realizarse lo ms cercano posible a la ovulacin.
2) La pareja de abstenerse de relaciones sexuales en los das anteriores a la prueba
3) La mujer no debe aplicarse duchas intravaginales 48 horas antes
4) La pareja no debe medicarse durante este tiempo.
5) Se le pide al paciente tener relaciones sexuales
Criterios de toma de la muestra
a) Realizarla 2 a 3 horas despus, (el momento en que la concentracin de
espermatozoides es mayor)
b) Realizar la prueba entre 6 a 8 horas despus (para la evaluacin del
cuello
como reservorio de espermatozoides)
c) Realizar es de 10 a 16 horas.
Tcnica
6) Se inserta un espculo no lubricado en la vagina
7) Se aspira una muestra de secreciones del frnix vaginal
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8) Posterior con una jeringa de tuberculina sin aguja, o una pipeta o un catter con otra
jeringa, y se obtiene muestra del moco cervical del exocrvix y del canal
endocervical.
9) Cada muestra es colocada en un portaobjeto y cubierta con cubre objeto
10) Examinada con microscopio a 200 y 400 X.

11) Se determina el nmero de espermatozoides por campo,
Criterios de resultados
PCT normal es de 10 espermatozoides o ms por campo, con motilidad rectilnea.
PCT normal es de 5 espermatozoides mviles rectilneos.
PCT con ms de 20 espermatozoides est asociada con un ndice alto de embarazo y
anlisis normal del semen.
Conclusiones
El comportamiento de espermatozoide en el aparato reproductor de la mujer es de suma
importancia ya que el esperma debe tener las condiciones favorables para poder
fecundar el ovulo pero en ocasiones el espermatozoide no puede fecundar al ovulo por
anomalas en la vagina las cuales se pueden detectar si hay un comportamiento
inadecuado en la relacin de espermatozoide y moco cervical el cual se puede detectar
con la prueba de Sims- Huhner pero al tener varios criterios de toma de la muestra y de
valores normales esta prueba es mal vista ya que no pude dar un resultado concreto a un
valor normal o indicacin adecuada seguir.
BIBLIOGRAFAS
Fernando Bonilla Musoles, Reproduccin Asistida
Aborde a la prctica clnica, Editorial Panamericana
Buenos Aires Madrid, 2009. 443p
21
Practica N 5
Tcnica de Faust o de flotacin con sulfato de Zinc
concentracin y flotacin
Objetivo
El alumno a prendera a buscar en unas muestras fecales la presencia de los distintos
parsitos en su forma infectante o resistente e identificarlos por parmetros morfolgicas
para tener un conocimiento ms amplio sobre su deteccin.
Fundamento
Se basa en la sedimentacin y la flotacin de los quistes y/o huevos de los parsitos que
flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya
densidad es 1180.
Introduccin
Un examen coproparasitoscopico es el estudio de materia fecal para la bsqueda y
identificacin de formas parasitarias intestinales, puden ser tanto cualitativas como
cuantitativas . Las muestras fecales son seriadas con un mnimo de tres y deben
colocarse en frascos de boca ancha y guardados en un lugar fresco mientras que lleve
el tiempo de analizarlas , pues con el calor se aceleran los fenmenos de fermentacin
y con el frio se pueden destruir los quistes o trofozoitos de protozoos para conservar a
los parsitos puede utilizar refrigeracin a 10c.
Exmenes microscpicos Directo
En este estudio el material fecal ms utilizado es el recin obtenido por expulsin natural
del paciente , ya sean eses bien formadas o evacuaciones disminuidas de consistencia.
Con moco o sangre. En la suspensiones teidas con Lugol se pueden identificar con
facilidad quistes de protozoos una de estas tcnica de Faust o de flotacin con sulfato de
Zinc. Este es un mtodo en el cual la materia fecal se diluye en un lquido de alta densidad
y los parsitos que proporcionalmente son ms livianos van a la superficie. Para esta
tcnica se utiliza sulfato de zinc al 33% con densidad 1.180.( Para preparar dicha solucin
se aaden 331g de sulfato de zinc a un litro de agua tibia una vez disuelto el sulfato se
verifica con un densmetro que la densidad sea 1.180 si no es exacto se le aadir agua
o sulfato de zinc segn sea el caso esta tcnica se lleva a cabo por una cantidad de
materia fecal de aproximadamente 1g y se diluye en 10ml de agua y se filtra atreves de
una gasa cudruple se centrifuga a 2500 rpm durante un minuto se descarta el lquido
sobrenadante ( si la muestra es muy grasosa se repite el centrifugado cambiando de agua
y mezclando nuevamente) se mezcla el sedimento con 34 ml de sulfato de zinc al 33%
con densidad de 1.180 se centrifuga a 2500rpm
22
durante un minuto sin frenar la centrifuga se coloca el tubo cuidadosamente en una

gradilla se le coloca un porta objeto sobre el menisco durante 10 min de modo que en su
cara inferior quede adherida la gota que contiene huevos larvas y quistes.
Las preparaciones se montan en lugol y solucin salina y se llevan al microscopio para
buscar parsitos. Como los parsitos que flotan a la superficie de la solucin vuelven a
descender al cabo de la hora, se deben hacer preparaciones en porta objetos tan pronto
como termine la concentracin El contacto prolongado con el sulfato de zinc puede
deformar a los quistes y dificultar su identificacin , por lo tanto estas preparaciones deben
ser observadas lo antes posible. Esta tcnica es mejor para quistes de protozoos que para
huevos larvas de helmintos. El xito depende en la exactitud en la densidad del sulfato de
zinc. Cuando la materia fecal este fijada en formol al 5 10% debe utilizarse el sulfato
de zinc con densidad de 1.200. Grados Bawme
Material
Porta objetos.
Cubreobjetos.
Gasas.
Tubos de ensayo.
Embudo
Baso de precipitado
Abate lenguas
Agitadores
Reactivo
Solucin acuosa de sulfato de Zinc.
Muestra Biolgica
Materia Fecal
Se le pide que lleve un amuestra fecal de tamao de una nuez en un recipiente limpio de
boca ancha con tapa y que la mantenga a temperatura ambiente.
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Procedimiento
1) Calcular y tomar al tanteo un porcin fecal de aproximadamente 1g y diluirlo en 10

ml de agua (revolver bien)
2) Fltralo con una gasa cudruple
3) Centrifugar a 2500rpm durante un minuto y se decanta
4) Repetir el paso 3 dos veces ms
5) Se mezcla el sedimento con 34ml de sulfato de zinc al 3% (densidad 1.180)
6) Se completa con sulfato de zinc hasta llegar a 1 cm del borde del tubo y se centrifuga
a 2500rpm durante un minuto
7) Se coloca el tubo con cuidado en una gradilla
8) Elevar el nivel con sulfato de zinc hasta formar un menisco
9) Colocar un cubre- objeto sobre el menisco y se deja reposar por 10 min
10) Se le coloca una gota de lugol y se pone sobre un porta-objeto
11) Se observa a 10x y a 40 x
Nota se observa a 10x para abarcar ms campos, si se ve una figura circular se
enfoca a 40x para descartar o afirmar si es un quiste o huevecillo.
Resultados
Si se detecta un huevecillo o quiste es positivo y por su morfologa se detecta el
tipo de parasito que es para reportarlo y as se le pueda dar tratamiento.
Si no se observa ningn quiste o huevecillo es negativo.
Conclusiones
Esta tcnica es de suma importancia para la deteccin de parsitos en su forma
infectante ya que es muy sencilla y econmica lo cual es ideal para aplicarla, por
eso es la tcnica fundamental en la rea de parasitologa ya que por medio de la
flotacin de huevecillos y quistes por su densidad se logran fijar al porta objetos y
con ayuda de un colorante como el lugol permite su deteccin al microscopio.
24
Bibliografas
David Botero, Marcos Restrepo, Parasitosis Humana
Editorial CIB 4 Edicin, Colombia, 2003
Paginas totales 543
Evangelina Olivas Manual de prcticas de Microbiologa y Parasitologa

Mxico, C. Jurez, Editorial UACJ
Paginas totales 109
25
PRCTICA No. 6
Reacciones Febriles
Objetivo
Determinar y cuantificar atreves de estas tcnicas, la identificacin de anticuerpos
presentes en el suero sanguneo y dar el diagnstico serolgico de alguna enfermedad
bacteriana.
Fundamento
La prueba se basa en una reaccin inmunolgica entre los anticuerpos sricos y el antgeno
correspondiente
produciendo
una
reaccin
de
aglutinacin
macroscpica.
Introduccin:
Las llamadas reacciones febriles son un grupo de pruebas de aglutinacin que investigan
la presencia en el suero del paciente, de anticuerpos contra cepas bacterianas patgenas
que causan la fiebre de tifoidea, paratifoidea y brucelosis. Las reacciones febriles son un
conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo indica para diagnosticar enfermedades
que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea (Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante,
fiebre de Malta) y Rickettsiosis (Fiebre Q, fiebre manchada de las montaas rocallosas). Las
reacciones febriles son pruebas que han venido a caer en desuso, sin embargo en muchos
pases en vas de desarrollo como Mxico se siguen utilizando por ser pruebas baratas y
rpidas, pero en pases desarrollados son cada vez menos utilizadas por su poco valor
diagnstico. Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del
paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettsia (reaccin cruzada con Proteus OX19) Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es
invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra
ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo
especfico. El ttulo (valor) del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para
que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar, por lo que
se deben tomar 2 muestras separadas por un periodo de tiempo de 4 semanas para ser
comparadas. El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideracin la
dilucin ms alta que se observe en la reaccin positiva.
26
Material
Placa de vidrio
Pipeta de 1 ml
Aplicadores de madera
Equipo
Agitador
Bao Mara
Material Biolgico
Suero
Reactivos Febriles

Se le pide al paciente venir en ayuno, no haber ingerido bebidas alcohlicas ni
Procedimiento
METODO DE AGLUTINACION EN PLACA

1) Rotular con el antgeno correspondiente en la placa de vidrio
2) Depositar en cada ovalo 0.04 ml de suero del paciente para cada uno de los antgeno
que se vaya a utilizar
3) A cada gota del suero aadir una gota de cada antgeno
4) Mezclar con un aplicador limpio (Utilizar un aplicador limpio para cada antgeno)
5) Agitar suavemente la placa por rotacin (120 rpm) durante 2 o 3 minutos
27
6) Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara
7) Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se
obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma
METODO DE AGLUTINACION EN TUBO

1) Numerar 7 tubos de 13x75 mm del 1 al 6 y un (T) testigo para cada antgeno
2) Adicionar 0.9 ml de solucin salina al primero y 0.5ml a los restantes
3) Agregar 0.1 ml del suero problema al tubo 1
4) Mezclar y pasar 0.5 ml del tubo 1 al tubo 2 y as sucesivamente hasta llegar al 6
eliminando 0.5 ml de esta ltima disolucin. Obtenindose diluciones 1/10, 1/20,
1/40, 1/80, 1/160 y 1/320
5) Adicionar 0.3 ml del antgeno diluido previamente 1:20 con solucin salina en cada
uno de los tubos
6) Agitar enrgicamente en incubar el bao Mara en las siguiente condiciones:
* Salmonella B 18-24hrs de 48-50C

* Salmonella H 2hrs a 37C
* Paratficos A y B 2hrs de 48-50C
* Brucella 48hrs 37C
* Proteux 0X -19 18hrs a 37C
28
7) Tomar 2 o 3 tubos a la vez, agitarlos ligeramente frente a una fuente de luz que ilumine
partculas claramente.
Resultados
Placa
(-)
(+)
Tubo
1/10
1/20
1/40
29
1/80
1/160
Conclusin
Las Reacciones Febriles son pruebas diagnsticas que cada vez van cayendo ms en
desuso debido a su poco valor diagnstico. Con ninguna de las reacciones febriles se puede
hacer un diagnstico definitivo de cualquier enfermedad comprendida en ellas. Para todas
las enfermedades febriles que abarcan existen pruebas ms confiables y con las que se
pueden hacer diagnsticos definitivos. El uso inadecuado de estas pruebas o su mala
interpretacin generalmente derivan en el uso injustificado de antibiticos
Bibliografa
Adriana Garibay Escobar
Manual de prcticas de inmunologa,
Hermosillo Sonora editorial UniSon, 2006
Paginas totales 137 pginas consultadas 40 a la 55
30
PRCTICA No. 7
Examen general de Orina
(EGO)
Objetivo:
Conocer cada uno de los aspectos que conforman el anlisis general de la orina y reforzar
nuestro conocimiento en el procedimiento para poder detectar anomalas en el paciente.
Fundamento:
Se basa en la los anlisis en fsico, qumico y microscpico o anlisis de sedimento de
una muestra de orina
Introduccin:
Desde hace mucho tiempo se reconoce que las propiedades fsicas y qumicas de la orina
constituyen indicadores importantes del estado de salud. Es indispensable aprovechar al
mximo los datos reportados en el examen general de orina con el propsito de solicitar
estudios confirmatorios de las alteraciones encontradas. Examen general de orina consta
de tres parmetros de revisin fsico, microscpico y qumicos.Examen
Examen Fsico
Color: que depender de las sustancias que formen la orina, puede ser en condiciones
normales desde amarillo claro hasta oscuro, tornndose rojo o negro en caso de sangre,
blanco o pardo en caso de leucocitos, cristales de fosfato etc.
Olor: este parmetro es importante en contadas ocasiones, como por ejemplo en la
fenilcetonuria en donde la orina tiene un olor a cao, en la cetonuria en donde huele a
frutas, etc.
Aspecto: el aspecto de la orina normal va desde claro hasta ligeramente turbio, y la turbidez
se puede deber a la presencia de clulas, cristales, depsitos etc.
31
Densidad o peso especfico: es una medida indirecta de la capacidad de concentracin del

rin, pero esta medicin depender de la cantidad de solutos presentes en la solucin y
de su peso.
Examen qumico
pH: refleja el estado de equilibrio cido base del organismo en general, adems se ve
modificado por la presencia de bacterias, sustancias de radiocontraste, etc.
Cetonas: productos de la conversin de acetil CoA en aceto acetato y ac. beta hiroxibutirico
y acetona, que son libremente filtradas por el rin; en caso de exceso, aparecern en la
orina.
Glucosa: Aparece en la orina cuando el umbral renal a esta molcula es sobrepasado (160180mg/dl)
Protenas: es normal al excrecin de protenas por la orina (entre 80+24 mg/da), pero la
mayora de stas son protenas de bajo peso molecular y solamente una cantidad entre 530mg/da corresponde a la albmina (protena de alto peso molecular). Hay que tener en
cuenta que el 99% de las protenas filtradas son reabsorbidas por lo tbulos.
Nitritos: Prueba diseada para la identificacin de bacterias reductoras de nitratos a nitritos
(enterobacterias)
Bilirrubina: la bilirrubina conjugada es hidrosoluble por lo que es libremente filtrable por el
rin y en caso de aumento en la concentracin sangunea de esta, aparecer en orina.
Urobilinogeno: Producto de la accin bacteriana sobre la BD a nivel intestinal, se reabsorbe
y aumenta su concentracin en sangre cuando existe aumento en su produccin, es
libremente filtrado y aparece en orina.
Sangre: Permite la identificacin de glbulos rojos ntegros o lisados (hemolisis)
Leucocitos: reacciona ante la peroxidasa y esterasa leucocitaria y nos indica nmero
aproximado de leucocitos.
Anlisis del sedimento: bsqueda de leucocitos, glbulos rojos, cristales, cilindros, clulas
epiteliales, bacterias, hongos, parsitos etc.
32
Material
Tubos de ensaye
Gradilla
Pipetas.
Tiras reactivas para orina.
Porta objetos
Cubreobjetos
Equipo
Centrifuga
Microscopio.
Densmetro
Material Biolgico
Muestras de orina (pacientes del laboratorio)

Orina se recomienda la primera orina de la maana en un frasco limpio
Procedimiento
Examen Fsico
1) Observar el color de la muestra de orina y anotar
2) Percibir olores ftidos de la muestra y anotar
3) Tomar una gota de orina con la pipeta Pasteur y colocarla en el densmetro medir la
densidad y anotar
4) Colocar una cantidad aproximada a 10 ml de orina en un tubo de ensayo.
33
Examen Qumico
5) Sumergir la tira reactiva en la orina, procurando cubrir todas las zonas de reaccin.
6) Dejar secar y hacer la lectura comparando colores con el inserto de los reactivos.
ANOTAR Resultados
Examen Microscpico
7) Centrifugar el tubo 5 min a 1500rpm.
8) Decantar el sobrenadante y colocar el sedimento en un porta y cubrirlo con el
cubreobjetos
9) Observar al microscopio con seco fuerte (40x u objetivo azul)
10) Anotar observaciones.
Resultados
Valores Normales.
El color de la orina debe ser desde transparente hasta amarillo oscuro
La concentracin de la orina debe ser entre 1.015 a 1.025
El pH normal de la orina es 6
No debe haber presencia de: glucosa, cetonas, protenas.
Puede haber un pequeo nmero de hemates de 0-2
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No debe haber hemoglobina

No debe de haber bilirrubina
Puede haber trazas de urobilingeno en la orina normal
No debe de haber nitritos
Puede haber hasta 5 leucocitos
Conclusin
En esta prctica pudimos elaborar y aprender cmo se realiza en s, un examen general de
orina y los pasos a seguir para que este de concretos y buenos resultados.
As como la vista al microscopio del mismo anlisis, fue una prctica llena de emociones y
efectos por parte de nosotros los alumnos ya que para muchos el manejo de la orina se les
hace fuera de lo comn.
Bibliografas
J. Daz Portillo, Fernndez del Barrio, Parede Salido
Aspectos bsicos de la bioqumica clnica, Editorial Das de Santos,
1997, Madrid Espaa, Paginas totales 297
35
Practica N. 8
Amiba en Fresco
Objetivo
El alumno detectara si el paciente tiene amibiasis por la bsqueda de trofozoitos en una
muestra fecal mediante la tcnica de amiba en fresco para reforzar sus conocimientos en
el rea de parasitologa
Fundamento
La tcnica se basa en la toma directa del ano del paciente para la bsqueda de parsitos
mediante el microscopio
Introduccin
En el rea de parasitologa se emplean diversas metodologas para apoyar el diagnstico
de parasitosis e infecciones intestinales. Este asunto en nuestro pas es muy importante si
consideramos que en la actualidad todava se presentas casos de muerte asociados con
estas patologas. El diagnstico de las enfermedades parasitarias se establece
generalmente
por la demostracin morfolgica de parsitos, a travs de diferentes metodologas tiles
para la deteccin de una gran variedad de ellos y otras particularmente tiles para uno solo
o algunos parsitos, en Laboratorios contamos con una serie de pruebas para el
diagnstico de parasitosis o infecciones intestinales,
Ameba en Fresco: La amebiasis intestinal es una infeccin causada por la Entamoeba
histolytica. La forma infectante de E. histolytica es el quistemaduro tetranucleado. El hombre
no es el nico pero s el principal reservorio de E. histolytica y como portador sano o
convaleciente, es la principal fuente de excrecin de quistes patgenos. La forma bsica de
infeccin es la ingestin de quistes maduros, que se da en medios contaminados, mal
saneados y con malos hbitos de higiene, a travs de aguas o alimentos contaminados,
manos mal lavadas o insectos vectores (como moscas o cucarachas) que propician el cierre
del ciclo ano-mano-boca. La tcnica para la identificacin de la ameba en fresco, que
requiere el anlisis microscpico de una muestra de heces se utiliza para reconocer la
presencia de trofozoitos en pacientes con enfermedad diarreica aguda y se ha
recomendado desde hace varias dcadas para confirmar el diagnstico clnico de
amebiasis.
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Material
Hisopos estriles
Porta objetos
Cubre objetos
Bazo precipitado
Equipo
Microscopio
Bao mara
Reactivo
Formol al 10%
Solucin salina

1) Este estudio se realiza en nios menores de 1 ao, por las condiciones de la toma
de la muestra.
2) El paciente debe presentarse al laboratorio.
3) No es necesario que el paciente se encuentre en ayuno.
4) El paciente debe de evitar purgantes
PROCEDIMIENTO
1) La muestra se toma directamente del recto del paciente por medio de
rotacin delicada, para lo cual se emplea un hisopo estril de algodn delgado, o
una cucharilla rectal introduciendo unos cinco centmetros en el recto
Nota: No se debe realizar solamente una vez, es decir no se debe de estar metiendo y
sacando el hisopo
2) El hisopo se coloca en un tubo de ensayo con 2 o 3 ml, de solucin
salina estril a 37C.
3) Posteriormente se coloca un poco en el portaobjetos, se coloca el
cubreobjetos y se observa de inmediato al microscopio.
37
4) L o q u e s e b u s c a e s l a p r e s e n c i a d e trofozoitos
5) Tambin se puede utilizar formol al 10%, se introduce el hisopo en el

tubo y observar al microscopio agregando una gota de azul de metileno, los
trofozoitos se tien de color azul.
Presencia de amibas se reporta la muestra cmo ---------------- Positiva

Ausencia de amibas se reporta la muestra cmo------------------Negativa
Conclusin
Esta prueba es vital para la deteccin y observacin de trofozoitos y quietes pero por la
forma de la toma de la muestra se limita solamente a nios menores de un ao ya que es
incmoda para pacientes mayores lo cual provoca muchos malos entendidos y
complicaciones en la toma de la muestra.
Bibliografa
Romero Cabello Ral Microbiologa y parasitologa Humana
3ra edicin Editorial Mdica Panamericana
Mxico, 2007 paginas totales 1321
38
Practica N9
Coprocultivo
Objetivo
El alumno Identificar los microorganismos responsables de alguna enfermedad del
paciente en materia fecal para la identificacin de bacterias para su tratamiento as
como reforzar su mtodos de siembra anteriormente enseados
Fundamento
Se basa en la deteccin de bacterias patgenas al ser humano las cueles pueden ser
encontradas en una muestra fecal para su siembra, aislamiento e identificacin de la
bacteria patgena.
Introduccin
Se denomina coprocultivo a la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de
cultivo apropiados para el desarrollo de bacterias entricas patgenas. Muestra adecuada
es aquella que ha sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad, cuando es
ms fcil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administracin de
antimicrobianos. Para realizar el examen se emplean heces que no tengan ms de media
hora de obtenidas, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodn.
Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al
laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1 ml de un lquido
conservador, o bien, depositar en ste el hisopo rectal. Las heces y los raspados rectales
son muestras que se dispone con mayor facilidad. Debe anotarse, en el examen
macroscpico la presencia de sangre, moco o helmintos en la inspeccin inicial. Se
suspenden los especmenes en un caldo selectivo como el Caldo de Tetrationato y se
cultivan sobre medios ordinarios as como en medios selectivos diferenciales, por ejemplo
Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separacin de los bacilos gran
negativos que no fermentan la lactosa de otras bacterias entricas comunes.
Los frotis teidos pueden revelar una prevalencia de leucocitos y de ciertos
microorganismos anormales como Cndida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para
diferenciar las bacterias entricas patgenas de las de la flora normal, por lo que deben
realizarse otro tipo de pruebas para discriminar los tipos de bacterias presentes en la
muestra como son las pruebas bioqumicas.
39
Material:
Gradilla
Mechero
Vaso de precipitado
Porta objetos
Medios de cultivo
Papel Graf
Microscopio
Asa bacteriolgica
Medios de cultivo para coprocultivos
Agar Sangre
Agar Mc Conkey
Agar EMB
Agar S-S
Agar entrico Hektoen
Agar Christensen
Agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolato)
Reactivos:
Lugol,
Cristal violeta,
Fucsina bsica,
Alcohol acetona
Muestra biolgica:
Muestra fecal
Recomendaciones para el paciente
Llevar una muestra fecal en un frasco de boca ancha no mayor del tamao de una nuez
Mantener en temperatura ambiente y se recomienda llevarla de inmediato al laboratorio
40
Procedimiento:
1) Colocar el papel Graf en la mesa y encima prender el mechero colocando la muestra
y los medios de siembra cerca del mechero
2) Esterilizar el asa bacteriolgica con el mechero y embarrarlo de la materia fecal
3) Abrir el medio de cultivo (Agar Sangre o Agar Mc Conkey ) y sembrarlo con la siguiente
tcnica
A) Hacer un inoculo en una esquina de la caga
B) Hacer un cuadrante de izquierda a derecha
C) Girar la caja 90 y realizar otro cuadrante
D) Girar la caja 90 y realizar otro cuadrante
E) Girar la caja 90Aislar la muestra en el ltimo cuadrante como se ve en la imagen
41
4) Incubar el medio de cultivo ya sembrado por 24 horas por 37C
5) Sacar el medio de cultivo sembrado y incubado
6) Realizar un frotis de la rea de aislamiento por tincin de Gram reportar observaciones

Tincin de Gram
Fundamento: se basa en la pared celular de la bacteria que con el cristal violeta que
es un colorante primario y un figarque es el lugol tien a los Grm + , el alcohol
acetona que sirve como descolorante y la safranina como colorante de contrate para
los Gram -.
Tecnica
A) Cristal bioleta por 1 min
B) Lugol por 1min
C) Alcohol acetona por 15 seg
D) Safranina por 45 seg
7) Resembrar hasta que el medio se a puro mediante los frotis

8) Realizar morfologa colonial y reportarlo
42
9) Realizar pruebas bioqumicas para la identificacin de Genero y especie

10) Mediante las observaciones, morfologa colonial , morfologa microscpica y pruebas
bioqumicas determinar la bacteria
Conclusin
Es un buen mtodo de identificacin de un bacteria patgena del ser humano la cual
tiene que ser secretada por la materia fecal y gracias a eso nos permite sembrar la e
identificarla para su tratamiento esta tcnica es de gran utilidad lo cual tenemos que
seguirla practicndola hasta perfeccionarla para tener resultados confiables al pasiente.
Bibliografa

Paginas totales 109
43
Practica N10
Urocultivo
Fundamento
Se basa en la identificacin de bacterias presentes en la orina, mediante un medio de
cultivo especifico que nos permite sembrar, aislar e identificar la bacteria patgena
Objetivo
El alumno realizara toda la metodologa correspondiente de la tcnica de urocultivo para
la determinacin microorganismo en vas urinarias las cuales provoquen patologa al ser
humano as reforzar el conocimiento del alumno
Introduccin
El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infeccin sintomtica del tracto
urinario o infeccin asintomtica (bacteriuria asintomtica) en pacientes con riesgo de
infeccin.
Est basada en la presencia de un nmero significativo de bacterias (generalmente
>100.000 bacterias/ml.) La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para
el diagnstico de infeccin del tracto urinario, ya que prcticamente est presente en
todas las infecciones urinarias. Una excepcin es la bacteriuria asintomtica en la que la
piuria puede estar ausente.
Es necesario que el mtodo de recogida sea el adecuado siguiendo unos protocolos de
higiene evitando as posibles contaminaciones de la muestra. Para la identificacin del
nmero de bacterias, realizaremos un recuento bacteriano y para la identificacin de los
tipos de bacterias presentes en la orina y sus patologas, se realizara una siembra en
medios de cultivo diferentes con la tcnica de siembra comnmente utilizado en el
urocultivo, segn el tipo de microorganismo comnmente encontrado en la muestra.
Material
Mechero
Vaso de precipitado
Porta objetos
Medios de cultivo
Papel Graf
Microscopio
Asa bacteriolgica
Gradilla
44
Medios de cultivo para Urocultivo
Levine
EMB
Mac Conkey
Agar Chocolate
Reactivos:
Lugol,
Cristal violeta,
Fucsina bsica,
Alcohol acetona
Muestra biolgica:
Orina
Recomendaciones para el paciente

Llevar La primera orina de la maana en un frasco de boca ancha
No a ver ingerido bebidas alcohlicas ni medicamentos en 48 horas
Procedimiento:
1) Colocar el papel Graf en la mesa y encima prender el mechero colocando la
muestra y los medios de siembra cerca del mechero
2) Esterilizar el asa bacteriolgica con el mechero y
previamente agitada
Sumergirla en
la orina
3) Abrir el medio de cultivo (Levine EMB Mac Conkey Agar Chocolate y sembrarlo con
la siguiente tcnica
4) Hacer un inoculo que divida a la mitad el medio de cultivo
45
5) Sembrar de derecha a izquierda sobre todo le medio de cultivo

6) Girarla 90 y hacer lo mismo
7) Incubar el medio de cultivo ya sembrado por 24 horas por 37C
8) Sacar el medio de cultivo sembrado y incubado
46
9) Realizar un frotis
observaciones
Tincin de Gram
de la rea de aislamiento
por tincin de Gram reportar
Fundamento
Se basa en la pared celular de la bacteria que con el cristal violeta que es un
colorante primario y un figarque es el lugol tien a los Grm + , el alcohol acetona
que sirve como descolorante y la safranina como colorante de contrate para los Gram
-.
Tecnica
E) Cristal bioleta por 1 min
F) Lugol por 1min
G) Alcohol acetona por 15 seg
H) Safranina por 45 seg
10) Resembrar hasta que el medio se a puro mediante los frotis

11) Realizar morfologa colonial y reportarlo
47
12) Realizar pruebas bioqumicas para la identificacin de Genero y especie

13) Mediante las observaciones, morfologa colonial , morfologa microscpica y
pruebas bioqumicas determinar la bacteria
Conclusin
Esta tcnica es de gran utilidad y es un buen mtodo de identificacin de bacterias
patgena del ser humano la cual tiene que ser desechadas por la va urinaria y gracias
a eso nos permite sembrarla e identificarla para su tratamiento esta tcnica es muy
sencilla y de utilidad para el reconocimiento de bacterias patgenas al hombre para la
localizacin de gnero y especie.
Bibliografa
Paginas totales 109
48
Practica N
RASPADO ANAL (PRUEBA DE GRAHAM)
Fundamento
Bsqueda huevecillos de parsitos los cuales no son identificados por muestra
fecal expulsada ya que depositan sus huevos en el ano durante la noche y los
vaca en el tero por lo tanto no se encuentran en la materia fecal y se necesita
una tcnica especial.
Objetivo
El alumno aprender una tcnica especializada para la deteccin del parasito
Enteroblus-vermicularis ya que no se pueden encontrar sus huevecillos en la
materia fecal
Introduccin
El test de Graham es una prueba utilizada para detectar enterobiasis. Se trata
de un examen no rutinario, ya que dentro de la parasitologa es una prueba
especial que consiste en colocar una tira adhesiva de papel de celofn, de unos
20 mm de ancho, en el extremo de un depresor de madera o de un porta, de tal
forma que la zona engomada quede hacia el exterior y que a cada lado del
extremo queden unos 5 cm de tira adhesiva. Para realizar la prueba se debe
colocar la tira sobre la regin anal y perianal del paciente y luego extenderla
sobre un portaobjetos, de manera que la zona engomada quede adherida al
mismo. Seguidamente, observar al microscopio con pocos aumentos (10X). La
toma debe hacerse por la maana, antes de que el paciente se asee o defeque.
Para facilitar la observacin microscpica, entre el celofn y el portaobjetos
puede colocarse una gota de lugol o de xilol
Material
Cinta de celulosa transparente adhesiva de 12 mm de ancho (cortar una banda

ms corta que la longitud del portaobjetos).
Abate lenguas.
Portaobjetos
Equipo
49
Microscopio
Reactivo
Lugol
Procedimiento
1) Hacer la toma siempre que sea posible, por la maana al despertar el paciente, antes
de que ste haya defecado, efectuado su aseo personal (bao) o caminado.
2) Cubrir la extremidad redondeada de un tubo de ensaye o del abate lenguas con el
fragmento de celofn o cinta scotch, colocando la parte adhesiva hacia el exterior (
3) Hacer Inclinar al paciente hacia adelante (posicin genupectoral) exponiendo el
esfnter anal y perin al abrir los glteos con la mano izquierda
4) Despegar los pliegues perianales y aplicar la cinta adhesiva en la perifea del ano y
no dentro del canal anal, haciendo movimientos hacia arriba, hacia abajo y hacia los
lados.
5) Colocar la cinta sobre un portaobjetos limpio y desengrasado con alcohol etlico ter.
6) Apoyar fuertemente para que la adherencia sea perfecta para eliminar lo ms
posible las burbujas de aire
7) Agregar una gota de lugol en lugar del tolueno, para que se coloreen los huevecillos.
8) Examinar la muestra con el objetivo seco dbil y con poca luz, ya que los huevecillos
son muy transparentes.
9) Luego observar a seco fuerte para la identificacin de los huevos.
10) Reportar observaciones
Nota: Se puede detectar los siguientes parsitos con esta prueba Ascarislumbricoides, Trichuris-trichiura, Hymenolepis-nana e Enteroblus-vermicularis
50
Conclusiones
Esta prctica es una tcnica especializada para la bsqueda de parsitos los
cuales no se observan sus huevecillos en tcnicas bases como amiba en fresco
o tcnica de sulfato de zinc.
Bibliografa
51
Practica N
Hemoglobina
Fundamento
El reactivo de Drabkin lisa a los eritrocitos liberando la hemoglobina la cual reacciona
con el cianuro de potasio la cual se trasforma en metahemoglobina la cual reacciona
con el ferrocianuro de potasio y la trasforma en cianometahemoglobina la cual es una
solucin temporalmente estable que con mayor concentracin mayor absorbancia.
Objetivo
El alumno reforzara los conocimientos en la formula roja determinando la cantidad de
hemoglobina presente en una muestra problema.
Introduccin
La hemoglobina (HB) es una protena globular, que est presente en altas
concentraciones en lo glbulos rojos y se encarga del transporte del oxgeno al aparato
respiratorio hacia los tejidos perifricos; y de transporte de CO2 y protones (H+) de los
tejidos perifricos hasta los pulmones para ser excretados. Los valores normales en
sangre son de 13 18 g/ dl en el hombre y 12 16 g/ dl en la mujer.
La hemoglobina es una protena con estructura cuaternaria, es decir, est constituido por
cuatro cadenas polipeptdicas dos y dos la hemoglobina adulta (HbA) dos y dos g
la hemoglobina feta l(HbF). En el feto humano, en un principio, no se sintetizan cadenas
alfa ni beta, sino zeta (z ) y psilon (x) (Hb Gower I).
Al final del primer trimestre la subunidades a han reemplazado a las subunidades z (Hb
Gower II) y las subunidades g a los pptidos x. Por esto, la HbF tiene la composicin a2g2.
Las subunidades b comienzan su sntesis en el tercer trimestre y no reemplazan a g en su
totalidad hasta algunas semanas despus del nacimiento. Las cadenas polipeptdicas alfa
contienen 141 aminocidos, las no alfa 146 (b, g, d) y difieren en la secuencia de
aminocidos. Se conoce desde hace dcadas la estructura primaria de las cuatro cadenas
de Hb normales. La estructura secundaria es muy similar: cada una exhibe 8 segmentos
helicoidales designados con las letras A a la H. Entre ellos se encuentran 7 segmentos no
helicoidales. Cada cadena a esta en contacto con las cadenas b, sin embargo, existen
pocas interacciones entre las dos cadenas a o entre las dos cadenas b entre s. Las cuatro
cadenas polipeptdicas de la Hb contienen cada una un grupo prosttico, el Hem, un
tetrapirrol cclico, que les proporciona el color rojo a los hemates. Un grupo prosttico es
una porcin no polipeptdica que forma parte de una protena en su estado funcional. El
tomo de hierro se encuentra en estado de oxidacin ferroso (+2) y puede formar 5 o 6
enlaces de coordinacin dependiendo de la unin del oxgeno a la Hb (oxiHb, desoxiHb).
Cuatro de estos enlaces se producen con los nitrgenos pirrlicos de la porfirina en un
plano horizontal. El quinto enlace de coordinacin se realiza con el nitrgeno del imidazol
de una histidina denominada
52
histidina proximal. Finalmente, el sexto enlace del tomo ferroso es con el oxgeno, que
adems est unido a un segundo imidazol de una histidina denominada histidina distal.
Tanto el quinto como el sexto enlace se encuentran en un plano perpendicular al plano
del anillo de porfirina. La parte porfirnica del Hem se sita dentro de una bolsa hidrofbica
que se forma en cada una de las cadenas polipeptdicas. Cuando una protena esta con
su grupo prosttico se denomina holoproteina, y cuando esta sin este, se lo denomina
apoproteina. Adems por poseer un grupo prosttico se dice que la Hb es una protena
conjugada, es una hemoproteina.
Material:
Pipeta shali o pipeta automtica de 20 ul

Boquilla
Gradilla
Gasas
Celdillas
Pipeta de 5 ml
Reactivo
Reactivo de Drabkin
Equipo
Espectrofotmetro
Material biolgico
Sangre total con anticoagulante EDTA

Muestras patrn

53
Procedimiento
1) Tomar una muestra de sangre con anticoagulante
2) Colocar los siguientes valores para obtener patrn muestra y blanco
Patrn
Problema
Blanco
Muestra patrn
20ul
Muestra problema
20ul
Reactivo
5ml
5ml
5ml
3) Dejar reposar por 10 min
4) Leer al espectrofotmetro a 540nm
5) Obtener el resultado con la siguiente formula
Abs-Problema x Concentracion Patron/ Abs-Patron

Valores normales
Hombre: de 13.8 a 17.2 g/dL

Mujer: de 12.1 a 15.1 g/dL
Conclusin
Esta prctica es de gran ayuda para determinar anomalas en el eritrocito por deficiencia
de la hemoglobina ya que puede estar normales los niveles de eritrocitos pero con
problemas con la hemoglobina lo que provoca que no pueda trasporte oxigeno
correctamente esto se puede reconfirmar en un frotis sanguneo observan do la
coloracin del eritrocito.
Bibliografa
Muoz Zambrano, Mara E.; Morn Cortijo, Cecilia G.
Manual de procedimientos de laboratorio en tcnicas bsicas de hematologa
Editorial Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, 2005.
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Practica N
Hematocrito
Fundamento
Es el % de eritrocitos en una muestra problema centrifugada a velocidad constate y tiempo
determinado.
Objetivo
El alumno reforzara sus conocimientos en formula roja y determinara el hematocrito de
una muestra problema para poder observar si hay anemia o policitemia en el paciente.
Introduccin
El hematocrito es el porcentaje ocupado por glbulos rojos del volumen total de la sangre.
Los valores medios varan entre 30% a 52%. Estas cifras pueden cambiar de acuerdo a
diversos factores fisiolgicos como la edad y la condicin fsica sexo. Es una parte integral
de la biometra hemtica, junto con la medicin de hemoglobina, y el conteo de leucocitos
y plaquetas la elevacin o disminucin de este valor puede llegar al diagnstico de
anemias o policitemias.
Valores bajos de hematocrito:
La disminucin de glbulos rojos en la sangre es una anemia. Se puede relacionar con
diferentes condiciones, como hemorragia o leucemia hay numerosos factores que pueden
contribuir a desarrollar una anemia, con la baja ingesta de hierro, o pacientes con
enfermedad renal crnica, que no genera suficiente eritropoyetina para estimular la
produccin de glbulos rojos en la medula sea.
Valores altos de hematocrito:
Se puede asociar a deshidratacin o hipoxia.
Patologas como la policitemia vera consiste en una desmedida produccin de glbulos
rojos. En casos de enfermedad pulmonar obstructiva crnica, la hipoxia genera un
aumento de la produccin de eritropoyetina por el rin, lo que puede resultar en un
hematocrito alto.
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Material
Capilares
Gradilla
Mechero
Gasas
Regla
Equipo
Microcentrifuga
Muestra biolgica

Procedimiento
1)
2)
3)
4)
5)
Tomar una muestra sangunea con anticoagulante

Tomar el capilar y llenarlo a un 80% de sangre total
Sellarlo del lado contrario con la flama del mechero
Meterlo a centrifugar a 10000 rpm por 5 min
Medir con una regla los siguientes parmetros y obtener el resultado con la
siguiente formula
Datos
Volumen Total (VT)=
Volumen Globular (VG) =
Formula
Volumen total / Volumen Globular X 100%=
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Conclusin
Esta prctica es de gran utilidad para el diagnstico de anemias o polisitemias ya
que nos proporciona el dato si hay un aumento o una disminucin delos
eritrocitos en sangre.
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Practica N
Recuento de eritrocitos
Fundamento
El reactivo de Hayem que est compuesto de bicloruro de mercurio sulfato de sodio y
cloruro de sodio lisan a los leucocitos y plaquetas para poder observar a los
eritrocitos.
Objetivo
El alumno reforzara sus conocimientos en la formula roja y determinara el nmero de
eritrocitos en una muestra problema para encontrar anomalasen el pasiente.
Introduccin
Son las clulas ms numerosas de la sangre, su nmero flucta entre 4 a 5 millones
por milmetro cbico, se caracterizan por carecer de ncleo y organelos, tienen la
forma de un disco bicncavo de dimetro promedio de 7.2 a 7.8m, con un espesor
de 2 a 2.8m en los bordes y de 0.8 a 1m en la parte central. El eritrocito, tiene en
su citoplasma una protena bsica denominada hemoglobina, esta protena es afn
por la eosina por lo que el eritrocito se tie de color rosado claro o asalmonado. El
reticulocito es la clula predecesora del eritrocito, se caracteriza por ser una clula
sin ncleo y sin organelos, pero su citoplasma se ve con una fina red azulada que
viene a ser restos los ribosomas. Los eritrocitos son clulas elsticas, que tienen la
propiedad de pasar con facilidad por los pequeo capilares tienen un citoesqueleto
de espectrina que les permite contraerse. La vida de los eritrocitos alcanza en
promedio los 120 das, cuando llegan a la vejez, por la incapacidad de sintetizar
enzima, pierden su elasticidad y la capacidad de intercambio inico. En la superficie
de la membrana celular, aparece un grupo de oligopolisacaridos que marcan a las
clulas, de manera que al ser reconocidas por los macrfagos del bazo, hgado y
mdula sea son destruidas. Los eritrocitos que tienen un dimetro mayor a los
8m se denominan macrocitos. Los que tienen menos de 6m se denominan
microcitos. Cuando los eritrocitos se tien de un color plido se denomina
hipocroma, siendo una de las causas la baja concentracin de hemoglobina.
Cuando los eritrocitos son sometidos a soluciones hipertnicas se contraen y su
membrana adquiere una forma encogida e irregular, estos son los eritrocitos
crenados. Se denomina unisocitosis cuando tienen un elevado nmero de
eritrocitos con dimensiones anormales. Ultraestructuralmente el eritrocito est
formado por una membrana y un citoplasma sin organelos.
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La membrana del eritrocito es una bicapa de naturaleza lipdica compuesta por

50% de protenas integrales, 40% de lpidos y 10% de carbohidratos. Esta
membrana tiene una estructura continua interrumpida por canales inicos
interpuestos, por los que se transportan los aniones. La forma caracterstica del
eritrocito es mantenida por un citoesqueleto filamentoso que tiene la forma de una
red hexagonal cuyos vrtices estn formados por protenas de anquirina, banda
4.1, banda 3 y glucoforinas, donde anclan estructuras proteicas filamentosas de
Actina y Espectrina, que tienen propiedades contrctiles que le dan elasticidad del
eritrocito. La energa para realizar sus funciones y mantener la estructura de la
clula se obtiene de la degradacin de la glucosa por la va anaerbica en un 90%,
y solo un 10% la realiza por la va aerbica de la pentosa fosfato. Los canales
inicos tienen como funcin el transporte de aniones, la protena de la banda 3.1
participa en el intercambio de bicarbonato intracelular por el cloro extracelular. Las
protenas perifricas son principalmente espectrina tetramrica, actina, banda 4.1,
aducina, banda 4.9 y tropomiosina. La red est anclada a la bicapa lipdica por la
anquirina, que interacta con la banda 4.2 y con la banda 3. En la superficie de la
membrana celular se encuentran oligopolisacridos, glucoprotenas y glucolpidos
que permiten tipificar la sangre por el sistema ABO, otro sistema de tipificacin
sangunea es el sistema MN que est dado por una glucoforina especfica. Hay
anormalidades como por ejemplo: la esferocitosis hereditaria por defecto de la
espectrina, la eliptocitosis por defecto de la protena banda 4.1.
Material
Pipeta de glbulos rojos
Gradilla
Gasas
Cmara de Neubauer
Boquilla
Tubo de 12x75
Equipo
Microscopio
Agitador automtico
Material bilgico
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Procedimiento
1) Tomar una muestra de sangre con anticoagulante EDTA
2) Tomar sangre total con la pipeta de glbulos rojos hasta la marca de .5
limpiando con la gasa el exceso de sangre
3) Llenar la pipeta de glbulos rojos hasta la marca de 101 con reactivo de
hayem
4) Agitar por 3 minutos en el agitador automtico
5) Desechar las primeras tres gotas y llenar la cmara de Neubauer
6) Dejar reposar 3 min para dejar sedimentar a los eritrocitos
7) Observar al microscopio a 40X y realizar un conteo de eritrocitos en 5
cuadriculas como se observa en el ejemplo
8) Obtener resultado con la siguiente formula
60
Valores normales
Hombres de
4500000 a 5500000
Mujeres de
4000000 a 5000000
Conclusin
Esta prctica fue de gran utilidad para reforzar conocimientos sobre la morfologa
y funcin del eritrocito as como sus anomalas como anemias y policitemias para
un buen diagnstico y el reforzamiento de la prctica para dominar la formula
roja por completo y entregar resultados confiables al pasiente
Bibliografas
61
Practica N
Volumen de sedimentacin globular
(VSG)
Fundamento
Mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar por la relacin de paquete
globular y suero mediante la gravedad
Objetivo
El alumno reforzara el conocimiento en la formula roja y determinara la velocidad
de sedimentacin de una muestra problema para encontrar posibles anomalas
Introduccin
La sangre es un tejido lquido, al que puede considerarse como una variedad de
tejido conectivo, que circula por el aparato cardiovascular gracias al impulso que le
proporciona el corazn.
La sangre est compuesta por dos fracciones bien diferenciables clulas sanguneas
o elementos formes de la sangre
El conjunto de las clulas sanguneas suponen el 45% del volumen sanguneo. Hay
diversos tipos de elementos formes en la sangre Eritrocitos, Plaquetas, Leucocitos,
Granulocitos, Neutrfilos, Eosinfilos, Basfilos, Agranulocitos, Linfocitos y
Monocitos.
Plasma sanguneo es la sustancia intercelular lquida en la que nadan las clulas y
que puede asimilarse a la matriz extracelular en otros tipos de tejido conectivo. El
plasma sanguneo supone el 55% del volumen sanguneo y est compuesto por:
Agua Electrolitos Protenas (albmina, fibringeno, globulinas...) Nutrientes
(glucosa, lpidos, aminocidos) Sustancias nitrogenadas no proteicas (urea,
creatinina,...) Sustancias reguladoras (hormonas, vitaminas)
Hay diferencias importantes entre la matriz extracelular del tejido conectivo y el
plasma sanguneo que justifican el que la sangre sea considerada como un tipo de
tejido diferente al tejido conectivo. Estas diferencias estriban en el tipo de
compuestos qumicos que forman parte del plasma son muy diferentes a los que
componen la matriz del tejido conectivo los compuestos qumicos que forman parte
del plasma no son sintetizados por las propias clulas sanguneas, al contrario de lo
que sucede con los principales componentes del tejido conectivo que s son
sintetizados por las clulas propias del tejido (fibroblastos, osteoblastos, condrocitos)
el hecho de que buena parte de los componentes del plasma (agua, electrolitos,
molculas de pequeo peso molecular) puedan atravesar la pared de los vasos e
incorporarse al espacio intercelular conectivo.
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Material
Tubo de Wintrobe
Gradilla
Pipeta Pasteur
Material para puncin sangunea
Material Biolgico
Procedimiento
1) Tomar un amuestra sangunea con anticoagulante EDTA
2) Con la pipeta Pasteur llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca que se
indica con cuidado de no formar burbujas
3) Colocarlo en una gradilla en forma recta donde no all movimiento
4) Leer a la hora
Valores normales
Hombres: 0 - 5 mm/hora
Mujeres: 0 - 10 mm/hora
Conclusin
Esta prctica es de gran utilidad para observar la relacin entre paquete globular
y plasma en una muestra problema con la intervencin de la gravedad para
reforzar nuestros conocimientos sobre biometras hemtica y las caractersticas
de la sangre y sus componentes.
Bibliografa
Practica N
63
Recuento de Reticulocitos
Fundamento
Bsqueda de restos nucleares de eritrocitos jvenes por medio de Azul de
Metileno por 30 min a bao Mara
Objetivo
El alumno determinara la presencia de reticulositos en sangre perifrica para
saber si hay una regeneracin normal de eritrocitos
Introduccin
Los reticulocitos son glbulos rojos que no han alcanzado su total madurez. Se
encuentran en niveles elevados en el plasma sanguneo por causa de algunas
anemias, cuando el organismo incrementa la produccin de glbulos rojos y los
enva al torrente sanguneo antes de que sean maduros. Los reticulocitos se
caracterizan por presentar una red de filamentos y grnulos que hacen que se tien
en el frotis de sangre, distinguindose as de los glbulos rojos maduros.
Normalmente representan el 0,5-1,5% del conteo de glbulos rojos,pero pueden
exceder el 4% cuando compensan la anemia Su morfologa de los reticulocitos son
clulas anucleadas predecesoras de los eritrocitos con la diferencia de que poseen
grnulos de ribosomas y algunas mitocondrias que les son tiles para sintetizar el
35% de la hemoglobina restante. Este tipo de clulas esta en circulacin perifrica
aproximadamente un da para convertirse posteriormente en un hemate maduro
que cumplir con todas las funciones biolgicas de estas clulas. A diferencia de
los hemates o glbulos rojos maduros, los reticulocitos an poseen ARN. El
reticulocito es la clula roja que antecede en maduracin al eritrocito, es el resultado
de la prdida del ncleo que sufre el eritroblasto ortocromtico. Su tamao vara de
10 - 15 micras de dimetro. El reticulocito puede mostrar alteraciones en el tamao
y/o presentar cuerpos de inclusin (punteado basfilo, cuerpos de Howell Jolly). La
gnesis del aumento de tamao, involucra una respuesta normal de la mdula sea
a un estmulo intenso de la eritopoyetna. Dependiendo del grado de estimulacin
se pueden presentar los siguientes eventos.
Incremento del nmero de reticulocitos en sangre perifrica, normales y

aumentados de tamao, a expensas del pool medular. Esto implica una disminucin
de la permanencia de estas clulas en mdula sea.
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Presentacin en circulacin de reticulocitos que pueden alcanzar dos veces el

tamao normal, como resultado de la expulsin del ncleo del eritroblasto
policromatfilo, saltndose el estadio de eritroblasto ortocromtico.
Material
Tubo de 12x75
Material para puncin sanguina
Pipeta Pasteur
Porta objeto
Equipo
Microscopio
Bao Mara
Reactivos
Aceite de inversin
Azul de metileno

Procedimiento
2) Colocar cuatro gotas de sangre y cuatro gotas de Azul de Metileno en un tubo
de 12x75
3) Incubar en el bao Mara a 37C por 30 min
4) Realizar un frotis sanguneo y dejarlo secar
5) Observar al microscopio a 100x y realizar un conteo de 100 clulas
6) Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersin. Cuente
Cuidadosamente:
Cantidad total de glbulos rojos.
Nmero total de reticulocitos que haya entre ellos.
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Valores normales
Adultos 0,5 - 1,5%
Al nacer 2,5 - 6,0%
Conclusin
Este examen es de gran utilidad para poder saber si hay una destruccin excesiva
de eritrocitos lo cual provoca un aumento de nmeros de reticulocitos en sangre
perifrica.
Bibliografa
66
Practica N
Frotis Sanguneo
Fundamento
Obtencin de cuerpo cabeza y cola a la extensin de una gota de sangre
Objetivo
EL alumno reforzar su conocimiento en morfologa de las clulas sanguneas y a
cuantificar e identificar a los leucocitos.
Introduccin
Se define como frote, frotis o extendido, a la preparacin microscpica delgada y
transparente, extendida entre dos cristales (porta o cubreobjetos), obtenida de un
lquido orgnico espeso o tejido semilquido o pastoso
El frote perifrico se utiliza para el estudio de las caractersticas citolgicas de las
clulas de la sangre, lo cual permite valorar el funcionamiento general de la mdula
sea a travs de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluacin de las
lneas eritrocticas, leucocitaria y megacarioctica, determinando anormalidades en
forma, tamao, color e inclusiones citoplasmticas, dando una medida cuantitativa
y cualitativa de los elementos que lo conforman.
El mtodo de preparacin de extendidos con cubreobjetos es una tcnica ms
antigua, que en la actualidad slo se usa raras veces para los extendidos de sangre
perifrica. La nica ventaja de esta preparacin es su distribucin excelente de los
leucocitos, lo que a su vez permite obtener frmulas diferenciales ms exactas.
Deben usarse cubreobjetos de vidrio completamente limpios. No obstante, rotular,
transportar, teir y almacenar estos extendidos pequeos y frgiles plantea muchos
problemas. En la figura 3 se muestra la tcnica correcta para la realizacin de este
tipo de extendidos.
a) Coloque una gota pequea de sangre o de aspirado de mdula sea sobre un
cubreobjetos limpio (22 * 22 mm) y coloque otro cubreobjetos encima, para permitir
que la sangre se esparza por ambos.
b) Seguidamente se hacen girar uno sobre otro para crear dos extendidos delgados,
uno en cada cubreobjetos.
c) Separar los cubreobjetos rpido pero con cuidado. Esto se hace jalando
lateralmente en direccin opuesta uno del otro (no hay que levantar los
cubreobjetos). Los dos extendidos pueden teirse y montarse sobre un portaobjetos
de vidrio de 75 * 25 mm.
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Material
Porta objetos
Pipeta Pasteur de vidrio
Puente de tincin
Bazo precipitado
Mechero
Material para toma de sangre
Gasas
Equipo
Microscopio
Reactivos
Buffer
Colorante de Wright
Material bilgico

Procedimiento
1) Tomar un amuestra de sangre con anticoagulante con EDTA
2) Colocar una pequea gota de sangre en un extremo del porta objeto
3) Colocar otro porta objeto enzima de la gota de sangre y esperar que se
extienda
4) Colocar el segundo porta objeto aun ngulo de 45
5) Deslizarlo a velocidad contante hacia el lado contario para obtener cabeza
cuerpo y cola.
6) Dejarlo secar y teirlo con tincin de Wright
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7) Colocar el porta objeto en un puente de tincin y colocar los siguientes tiempos

de reactivos
6 minutos de colorante de Wright
4 minutos de Buffer
Enjugar y dejar secar
8) Observar al microscopio a 100X la morfologa de los eritrocitos y buscar
anomalas
Resultados
Eritrocito Normal
Anormalidades en los eritrocitos

poiquilocitosis
69
Conclusin
Esta prctica es de gran ayuda para la observacin de la morfologa del eritrocito
para poder encontrar deformaciones tanto en el tamao color o en la
hemoglobina lo cual puede estar causando enfermedades al paciente
Bibliografa
70
Practica N
Recuento de Leucocitos
Fundamento
El colorante de Turk que est compuesto de cido actico glacial lisa a los
eritrocitos y el azul de metileno facilita la observacin de los leucocitos al
microscopio.
Objetivo
El alumno determinara la cantidad de leucocitos en una muestra problema y
reforzara sus conocimientos sobre la formula blanca.
Introduccin
Existen dos formas de contar los leucocitos presentes en la sangre perifrica del
individuo; por una parte podemos contar la totalidad de los leucocitos, sin distinguir
tipos, esto se denomina recuento de leucocitos totales, o bien, podemos contar los
leucocitos distinguiendo sus diferentes tipos, y es lo que se conoce como recuento
diferencial o frmula leucocitaria. El recuento de leucocitos es la determinacin del
nmero de estas clulas por unidad de volumen sanguneo. Esta tcnica es de
importancia vital para el diagnstico y seguimiento de gran nmero de patologas
tanto hematolgica como no.
Una de las principales caractersticas de la morfologa de los leucocitos es que
conservan su ncleo atendiendo a la morfologa del ncleo podemos dividir los
leucocitos en:
Mononucleares: linfocitos y monocitos, presentan un ncleo sin lobulaciones ni
estrechamientos.
En su citoplasma no aparecen granulaciones, o si lo hacen es en un nmero muy
bajo.
Polinucleares: tambin denominados granulocitos, aqu incluimos los neutrfilos,
basfilos y eosinfilos. Estas clulas poseen un solo ncleo pero a su vez ste
presenta diversas segmentaciones, por lo que parece que tienen varios ncleos.
Presentan multitud de granulaciones en su citoplasma y su nombre hace referencia
al tinte con el cual podemos teir estos grnulos: los basfilos se tien con
colorantes bsicos, adoptando tonos azules. Los eosinfilos se tien con colorantes
cidos, tomando tonos rojos, y los neutrfilos se tien con ambos tipos de tintes.
71
Material
Pipeta de glbulos blancos
Boquilla
Gasas
Gradilla
Tubos de 12x75
Cmara de Neubauer
Equipo
Microscopio
Agitador automtico
Reactivo
Reactivo de turk

Procedimiento
2) Tomar sangre total con la pipeta de glbulos blancos hasta la marca de
.5 limpiando con la gasa el exceso de sangre
3) Llenar la pipeta de glbulos blancos hasta la marca de 101 con reactivo
de Turk
4) Agitar por 3 minutos en el agitador automtico
6) Dejar reposar 3 min para dejar sedimentar a los eritrocitos
7) Observar al microscopio a 40X y realizar un conteo de leucocitos en 4
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Valores Normales
5000 - 10 000 leucocitos / mm3
Conclusin
Esta prctica es de gran utilidad para saber si no hay un aumento o una disminucin
de leucocitos en sangre las cuales pueden provocar enfermedades graves en el
paciente.
Bibliografa
73
Practica N
Recuento de plaquetas
Fundamento
El reactivo de procaina lisa a los leucocitos y eritrocitos permitiendo su
observacion al
microscopio
Objetivo
EL alumno obtendr el nmero de plaquetas en una muestra problema para
encontrar anomalas
Introduccin
Las plaquetas son fragmentos citoplasmticos anucleados que se producen como
consecuencia de la ruptura de los megacariocitos de la mdula sea, las cuales
son clulas extraordinariamente grandes, con un ncleo altamente poliploide y un
citoplasma subdividido por capas de membranas onduladas. Se forman a partir de
vesculas que se desprenden en grandes cantidades de las membranas externas
de los megacariocitos. Circulan en la sangre en forma de disco biconvexo de
aproximadamente 3 mm2 de dimetro, 4 7 mm3 de volumen y 10 pg de peso.
Poseen carga elctrica negativa en su superficie. Su concentracin normal en la
sangre es de 150 a 350 x 106/mL y su tiempo de vida media en sangre es de 7 a
10 das. Junto a los eritrocitos y leucocitos constituyen los elementos formes de la
sangre.2-4 Poseen algunos elementos comunes a otras clulas y otros que las
distinguen y caracterizan.
Las plaquetas son capaces de adherirse a superficies artificiales, sobre las cuales
se expanden. Utilizan como ligando al fibringeno, a travs de su unin a GPIIb/
IIIa. Tambin se adhieren al colgeno (fundamentalmente de los tipos I y III), vWF,
fibronectina, laminina. En condiciones de bajo flujo sanguneo, este evento es
mediado por la interaccin vWF-GPIb, pero en condiciones de alto flujo tambin se
requiere la participacin de GPIIb/IIIa. Se forman enlaces firmes que dependen de
la estructura fibrilar del colgeno y de la cantidad de subunidades RGD.
La adhesin plaquetaria al colgeno requiere de la interaccin del colgeno con
vWF del plasma, GPIb, GPIaIIa de la membrana plaquetaria que durante la
formacin del cogulo establecen enlaces plaquetafibrina. Se produce la
internalizacin de las mallas de fibrina o de colgeno, que son rodeados de
microfilamentos.
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Material
Pipeta de glbulos blancos
Boquilla
Gasas
Gradilla
Tubos de 12x75
Cmara de Neubauer
Equipo
Microscopio
Agitador automtico
Reactivo
Reactivo de Procaina

Procedimiento
2) Tomar sangre total con la pipeta de glbulos blancos hasta la marca de
.5 limpiando con la gasa el exceso de sangre
3) Llenar la pipeta de glbulos blancos hasta la marca de 101 con reactivo
de Procaina
4) Agitar por 3 minutos en el agitador automtico y dejar reposar por 15 min
6) Dejar reposar 15 min para dejar sedimentar las plaquetas en un ambiente
hmedo
7) Observar al microscopio a 40X y realizar un conteo de plaquetas en 5
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Valores Normales
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
Conclusin
Esta prctica es de gran utilidad para encontrar anomalas en la hemostasia
primaria
como reforzar el conocimiento en la morfologa de las plaquetas as
como en la trombopoyesis.
Bibliografa
76
Practica N
Recuento Diferencial de Leucocitos
Fundamento
Diferenciacin y conteo de 100 clulas leucocitarias
Objetivo
EL alumno determinara porcentaje de los leucocitos para por der diagnostico si
hay elevaciones por infecciones virales bacterianas o parasitaria as como reforzar
los conocimientos en morfologa de los leucocitos.
Introduccin
Neutrfilos
Son clulas redondeadas con un dimetro de 12-14 m. Presenta un ncleo
condensado y dividido en varios lbulos, normalmente tres (aunque oscila entre 2
y 5), unidos entre s por cordones de cromatina; sta ltima hace que se tia
intensamente. Este ncleo segmentado le permite mayor facilidad a la hora de
atravesar espacios pequeos, las clulas que presentan ncleos sin segmentar
tendrn mayor dificultad. En el citoplasma de los neutrfilos nos encontramos con
multitud de granulaciones con un tamao de 0'2 a 0'3 m y que se tien de color
rosado, marrn o azul negruzco; sus principales componentes son lactoferrina,
lisozima y fosfatasa cida.
Eosinfilos
En su estadio maduro son clulas redondas o ligeramente ovaladas con un
dimetro entre 12 y 17 m.
Su ncleo posee dos lbulos, generalmente en forma de gafas, (en ocasiones
excepcionales tres) y en su citoplasma podemos distinguir, aproximadamente, 20
grnulos con un tamao entre 0,5 y 1,5 m. Estos son brillantes y anaranjados
cuando los teimos con eosina.
Los principales componentes de estos grnulos son la fosfatasa cida,
mieloperoxidasa y arilsulfatasa. Si observamos estos grnulos con un microscopio
electrnico podemos ver que presentan el aspecto de una estructura cristaloide
slida. Los granulocitos eosinfilos, intervienen en las reacciones anafilcticas y
en el control de infecciones parasitarias.
77
Basfilos
Son clulas redondeadas, un poco ms pequeas que los anteriores, su dimetro
va de 10 a 13 m. Son los granulocitos ms pequeos. Su ncleo es bilobulado o
presenta slo una pequea "mella"; este ncleo es difcil de ver porque la gran
cantidad de granulaciones existentes se acomodan por encima de este y lo
ocultan.
Estos grnulos tienen un tamao entre 0,2 y 1 m y adquieren un color prpura
intenso o rojo violeta cuando los teimos con tintes bsicos. Estn formados
principalmente por mucopolisacridos cidos, histamina y glucgeno.
Son los leucocitos menos frecuentes. La funcin principal de los granulocitos
basfilos es intervenir en las reacciones de hipersensibilidad.
F. Monocitos
Son clulas que pueden adoptar formas diferentes: redondeadas, ovaladas o
irregulares, por la presencia de pseudpodos. Su tamao oscila entre 15 y 30 m.
Son las clulas de mayor tamao entre los leucocitos.
Su ncleo puede ser igualmente variado: redondeado, ovalado, con hendiduras o
forma de herradura, y su localizacin es central. La cromatina se dispone
formando hileras, de forma laxa. El citoplasma se tie con tonos azul-grisceo y
puede presentar granulaciones azurfilas o pequeas granulaciones que se tien
con tonos rojo-prpura. Tambin suelen presentar vacuolas fagocticas. Los
monocitos se transformarn en macrfagos o histiocitos al llegar a los tejidos,
formando parte del sistema mononuclear fagoctico.
Material
Porta objetos
Pipeta Pasteur de vidrio
Puente de tincin
Bazo precipitado
Mechero
Material para toma de sangre
Gasas
Equipo
Microscopio
Reactivos
Buffer
Colorante de Wright
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Material bilgico
Procedimiento
1) Tomar un amuestra de sangre con anticoagulante con EDTA
2) Colocar una pequea gota de sangre en un extremo del porta objeto
3) Colocar otro porta objeto enzima de la gota de sangre y esperar que se
extienda
4) Colocar el segundo porta objeto aun ngulo de 45
5) Deslizarlo a velocidad contante hacia el lado contario para obtener cabeza
cuerpo y cola.
6) Dejarlo secar y teirlo con tincin de Wright
7) Colocar el porta objeto en un puente de tincin y colocar los siguientes tiempos
de reactivos
6 minutos de colorante de Wright
4 minutos de Buffer
Enjugar y dejar secar
8) Observar al microscopio a 100X y realizar un conteo de 100 clulas
leucocitarias diferencindolas y anotando sus proporciones de cada una
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Valores normales
Conclusin
Esta prctica es de gran utilidad como un diagnostico si hay infecciones de virus
parsitos o bacterias ya que hay una elevacin de leucocitos dependiendo de la
infeccin.
Bibliografa
80
Practica N
Eusinofilos en Moco Nasal
Fundamento
Bsqueda de eusinofilos en moco nasal mediante un frotis
Objetivo
El alumno aprender a diagnosticar una alergia mediante la obtencin de una
muestra fecal al buscar la presencia o ausencia de eusinofilos u otras clulas
Introduccin
La aparicin de eosinfilos en secrecin nasal es un dato importante para la
confirmacin de algunas enfermedades alrgicas, por lo que para identificar
algunos padecimientos de origen alrgico como la rinitis alrgica realizamos una
extensin de secrecin nasal en un portaobjetos y teimos con colorante para
clulas sanguneas como lo es el de Wright-Giemsa e identificamos las distintas
clulas sanguneas de acuerdo a su morfologa microscpica para esto hacemos
una observacin con microscopio ptico en distintos campos de la muestra. Cuando
se es alrgico a algo, el sistema inmunitario percibe equivocadamente esa
sustancia como nociva para el cuerpo (las sustancias que provocan reacciones
alrgicas se llaman alrgenos). El sistema inmunitario, en un intento de proteger al
cuerpo contra algo que percibe como una amenaza, produce anticuerpos IgE contra
el alrgeno. A su vez, estos anticuerpos hacen que determinadas clulas del cuerpo
libren ciertas sustancias qumicas al torrente sanguneo, una de las cuales es la
histamina. Las reacciones alrgicas pueden ser leves, como el moqueo de nariz o
graves, como tener dificultades para respirar. Algunos tipos de alergia producen
mltiples sntomas, y en casos raros, las reacciones alrgicas pueden ser muy
graves, lo que se conoce como choque anafilctico o reaccin anafilctica. Hay
cuatro categoras bsicas de respuestas de hipersensibilidad 1) las de tipo1 o
mediadas por inmunoglobulinas de la clase IgE, que incluyen shock anafilctico,
fiebre del heno y asma bronquial, 2) Reacciones del tipo II o mediadas por
anticuerpos del tipo IgG dirigidos contra antgenos presentes en la superficie de
clulas que causan reacciones hemolticas transfucionales por ejemplo. 3)
Reacciones del tipo III que incluyen anticuerpos IgG e IgM y son resultado de la
formacin de complejos de antgeno-anticuerpo insolubles que se depositan en los
vasos sanguneos o los riones y causan lesiones tisulares localizadas, 4)
Respuestas del tipo IV o mediadas por clulas T en las que los linfocitos T
sensibilizados promueven una respuesta inflamatoria cuando se encuentran con el
antgeno sensibilizante
81
Material
Hisopos
Porta objetos
Puente de tincin
Bazo precipitado
Mechero
Equipo
Microscopio
Reactivos
Buffer
Colorante de Wraight
Procedimiento
1) Tomar el hisopo e introducirlo en la nariz del paciente hasta que el paciente
sienta dolor y girarlo
2) colocar el hisopo con la muestra en un porta objeto y desplazarlo en el porta
objeto en forma circular asindolo lo ms fino posible el frotis
3) Dejarlo secar y fijarlo a la flama del mechero
4) Teirlo con tincin de Wraight con los siguientes tiempos
6 minutos de colorante de Wraight
4 minutos de Buffer
Enjugar
5)Dejarlo secar y observarlo al microscopio en bsqueda de eusinifilos , clulas
epiteliales u otras clulas y reprtalas
Conclusiones
Este examen es de gran utilidad para la identificacin de alergias o de otras
infecciones en el paciente
82
Bibliografas
83
Practica N
Moco fecal
Fundamento
Bsqueda de clulas leucocitarias mediante un frotis de moco fecal
Objetivo
El alumno aprender a realizar un frotis de moco fecal y buscara la presencia de
clulas leucocitarias para el diagnstico de infecciones.
Introduccin
El moco fecal se compone de materia, desechos indigeribles, bilis, secrecin
intestinal, leucocitos que migran del torrente sanguneo, clulas epiteliales
desprendidas, bacteria y material inorgnico. Sirve para identificar el tipo de
glbulos blancos que contiene el moco fecal, de esta manera se puede tener
idea de las caractersticas del agente que est produciendo la diarrea. De igual
manera es una prueba de utilidad en la Investigacin de enterocolitis infecciosa,
observando la presencia de amibas o bacterias que provocan una inflamacin.
En condiciones normales, las heces no suelen contener clulas epiteliales, ni
leucocitos, ni eritrocitos. Es fcil apreciar la presencia de leucocitos. En la
deposicin mucosa de los que sufren alergia intestinal se observa un exceso de
eosinfilos. La presencia de clulas epiteliales es un indicador de irritacin
gastrointestinal La enfermedad diarreica infecciosa es un problema de salud muy
importante a nivel mundial. Millones de personas han muerto debido sobre todo
a las complicaciones asociadas como deshidratacin, sepsis, alteraciones
hematolgicas entre otras, y se identifica como la segunda causa morbimortalidad a nivel mundial en la poblacin general
El tipo de poblacin ms vulnerable y en la que se encuentra una mayor
prevalencia de la enfermedad es en los extremos de la vida (nios y adultos
mayores), inmunosuprimidos, estados socioeconmicos bajos, malas
condiciones de higiene y saneamiento, en las que se incluye una mal manejo de
heces y mal estado de alimentos y agua que se consumen; y los pases en vas
de desarrollo. Para entender mejor a las enfermedades diarreicas, existen
diversas nomenclaturas para poderlas clasificar; por ejemplo, por su tiempo de
evolucin en agudas, persistentes o crnicas segn su agente infeccioso en
virus, bacterias o parsitos, o de acuerdo al tipo de patogenicidad del agente
involucrado, la cual se clasifica en 2 distintos tipos de sndromes clnicos: diarrea
inflamatoria y diarrea no inflamatoria
84
Material
Porta objetos
Asa bacteriolgica
Gotero
Mechero
Puente de tincin
Equipo
Microscopio
Material biolgico
Materia fecal
Procedimiento
1) Colocar una gota de agua sobre un porta objeto
2) Tomar el hisopo y tomar una pequea porcin de materia fecal
3) Frotar en forma circular sobre el porta objeto hasta lograr que sea lo ms fino
posible
4) Dejarlo secar y fijarlo al mechero
5) Teirlo con tincin de Wraight con los siguientes tiempos
6 minutos de colorante de Wraight
4 minutos de Buffer
Enjugar
6) Dejarlo secar y observarlo al microscopio a 100x
7) Reportar lo observado
Conclusin
Esta prctica es de gran utilidad para el diagnstico de infecciones as como
reforzar el conocimiento de la identificacin de clulas sanguneas las cuales nos
pueden indicar una infeccin.
Bibliografas
85
Practica N
Coombs directa
Fundamento: Bus queda de anticuerpos pegados en la membrana del glbulo rojo

Objetivo: Determinar la existencia de glbulos rojos recubiertos
con inmunoglobulinas o
complemento in vivo, en particular IgG y C3d
Introduccin
La prueba de Coombs es un mtodo desarrollado por Coombs en 1945 para demostrar la
presencia
de anticuerpos sub-aglutinantes o no aglutinantes (incompletos) contra
antgenos ABC o sistema Rh de los glbulos rojos, utilizando una anti-globulina como
segundo anticuerpo. Esta prueba tambin conocida como prueba de la anti-globulina
directa y su principio es determinar la sensibilizacin de los glbulos rojos en vivo por
anticuerpos no aglutinantes de tipo IgG o fracciones del complemento especficamente
Cd3.Esta prueba es til para confirmar el diagnostico de la enfermedad hemoltica del recin
nacido, la anemia hemoltica autoinmune, la anemia hemoltica inducida por medicamentos
y en la investigacin de las reacciones tras funcionales esto se lleva acabo por el suero
de antiglobulina el cual se prepara inyectando conejos con purificados de IgG humano y
fracciones del componente C3 del complemento (C3b-Cd3) por su parte si los glbulos
rojos humanos sensibilizados in vivo o invitro con IgG y Cd3 son puesto a reaccionar
con el suero de Coombs estos sern aglutinados en la reaccin de antgeno-anticuerpo.
El suero de Coombs puede ser adquirido con diferentes especificaciones pero el mas
usado es el de poliespecifico es decir que tiene tanto actividad de anti-Cd3 como de antiIgG.
Esta prueba puede ser positiva por la anemia hemoltica del recin nacido, la anemia
hemoltica autoinmune, la anemia hemoltica inducida por drogas y medicamentos y
reacciones trasfuncionales debido a anticuerpos.
86
Material
Pipeta pastear
Gradilla
Tubos de 12x75
Plumn para etiquetar
Equipo
Bao mara
Centrifuga clnica
Reactivo y material biolgico
Suero de Coombs
Solucin salina fisiolgica
Sangre total
Procedimiento
1.-Realiz un lava de glbulos rojos con solucin salina fisiolgica mnimo 3 veces
2.-Realisar una dilucin de glbulos rojos de 2 a 5 % con solucin salina
3.-Colocar dos gotas de la dilucin de glbulos rojos en un tubo de 12x75 y incubar a 37C
por 30min
4.- Colocarle 2 gotas de Suero de Coombs y centrifugar a 1500 rpm por 30seg
5.- leer si hay aglutinacin
Resultados
(+)
(-)
87
Conclusiones
Esta prueba es de gran ayuda en banco de sangre para determinar si el glbulo rojo
esta sensibilizado n antes de una trasfuncin sangunea y til para el diagnostico de
ciertas anemias como la hemoltica fetal y la autoinmune
Bibliografas
VICTOR HUGO DUEA, El banco de sangre, teora, principios y procedimientos
Editorial Universidad del Valle , 2 Edicin ,2003 Colombia, Pag-285
OSCAR ROJAS ESPINOZA Inmunologa de Memoria, Editorial Medica Panamericana, 3
Edicin. 2006 Mexico, Pag-529
88
Practica N
Coombs indirecto
Fundamento: Bsqueda de anticuerpos circulantes en el plasma o suero.
Objetivo: Determinar la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor.
Introduccin
Se cree que el principio de la prueba de la anti globulina fue inicialmente descrito por
Moreschi en 1908. Sin embargo la prueba solo fue introducida en medicina tras funcional
hasta el ao de 1945 cuando Coombs, Mourant y Race demostraron que por medio de
esta se poda detectar anticuerpos no aglutinantes anti-Rh en el suero.
Posteriormente los mismos autores demostraron la utilidad de la prueba para determinar
la sensibilizacin in vivo de los hemates por anticuerpos, en nios que sufran enfermedad
hemoltica.
En 1957 los trabajos de Ducie y sus colaboradores demostraron que la prueba era
igualmente buena para determinare la sensibilizacin de los hemates por fracciones del
complemento.
La prueba de Coombs indirecta se usa para detectar anticuerpos anti-Rh no aglutinantes
en el suero que se incuba primero con eritrocitos para posteriormente lavarse y remover
los no unidos y finalmente aadir la antimunoglobilina. La prueba indirecta de Coombs
permite probar incompatibilidad por Rh.
Los anticuerpos anti-inmunoglobulina son usados ampliamente en el campo de la qumica
clnica y la investigacin se produce en animales o en cultivos celulares utilizando las
tcnicas para la produccin de anticuerpos monoclonales. Estos reactivos pueden ser
poliespecificos) mezcla de anticuerpos contra IgG, complemento, cadenas pesadas y
ligeras) o monoespecifico (anticuerpo contra alguna inmunoglobulina especifica o
componentes del complemento)
89
Material
Pipeta pastear
Gradilla
Tubos de 12x75
Plumn para etiquetar
Equipo
Centrifuga clnica
Bao mara
Reactivo y material bilgico
Suero de Coombs
Suero problema
Dilucin de glbulos rojos O+ al 2 a 5 % previamente analizados
Procedimiento
1. Centrifugar la sangre total a 3500 rpm por 5 min para obtener el suero o plasma
2. Colocar 2 gotas de suero en un tubo de 12x75 y dos gotas de glbulos rojos tipo
O+ del 2 al 5 % previamente lavados mnimo 3 veces
3. Incubar a 37C a bao mara por 30min
4. Colocarle 2 gotas de suero de Coombs y centrifugar a 1500 rpm por 30 seg
5. Leer
(+)
(-)
90
Conclusiones: Esta prueba es importante para detectar anticuerpos contra Rh y as evitar

una reaccin trasfuncional
Bibliografas
GARIBAY ESCOBAR ADRIANA Manuel de Practicas de Inmunologia Editorial Unisn,
2006, Mxico, Pag-137
91
Practica N
Pruebas de Compatibilidad
Fundamento: Bsqueda de antgenos y anticuerpos del donador para ver si hay aglutinacin
in-vitro
Objetivo: Determinar la compatibilidad entre la sangre del donante y el receptor para que
posteriormente se a transfundida sin ocasionar reacciones.
Introduccin
La pruebas cruzadas son procedimientos relativamente sencillos pero de gran cuidado
que tiene como propsito garantizar la compatibilidad serolgica in vitro entre la muestra
de la sangre del receptor y la unidad de la sangre que se pretende trasfundir.
La valides de la prueba Cruzada radica en la correlacin que existe entre la prueba de
compatibilidad realizadas in-vitro y la sobrevida de los hemates en la circulacin del
paciente.
Como mencionamos
el objetivo de las pruebas
de compatibilidad
es prevenir
la
transfusin de la sangre incompatible desde este punto de vista las pruebas cruzadas
deben garantizar la compatibilidad de sistema ABO y Rh con el receptor y donador, que el
suero del receptor no existan anticuerpos de importancia clnica contra los antgenos del
glbulo rojo del donante y que en el plasma de la unidad de la sangre no existe anticuerpos
de importancia clnica contra los antgenos del receptor.
La pruebas cruzadas se han dividido en dos categoras la prueba mayor como su nombre
lo indica es la ms importante y tiene como propsito determinar que el suero del receptor
no existan anticuerpos
de importancia clnica contra los antgenos del glbulo rojo del
donador y la prueba cruzada menor es la que se pretende determinar que el suero o

plasma del donador no exista anticuerpos contra los glbulos rojos del donador
92
Materias
Pipeta Pasteur
Gradilla
Tubos de 12x75
Equipo
Centrifuga clnica
Bao mara
Sangre del receptor
Sangre del donador
Albumina
Suero de Coombs control
Suero de Coombs
Procedimiento
1.- Centrifugar las dos muestras de sangre y separar el paquete globular del plasma o
suero
2.- Marcar tres tubos A) Ac (autocontrol) B) R (Prueba Menor) C) D (Prueba mayor)
3.- En el tubo de Ac se lo colocara dos gotas de suero de receptor con dos gotas de glbulos
rojos del receptor centrifugar a 1500 rpm a 30seg (si aglutina hay problemas con el paciente)
4.-En el tubo de prueba menor se le colocan dos gotas de glbulos rojos del receptor y dos
gotas de suero del donador centrifugar a 1500 rpm por 30 seg (si aglutina se puede proceder
con la prueba mayor)
5.- En el tubo de la prueba mayor se le colocara dos gotas de glbulos rojos del donador
con dos gotas de suero del receptor centrifugar a1500 rpm por 30 seg (Si aglutina se para
la prueba)
6.-Los tubos que no fueron aglutinados se incuban a 37C por 30 min
7.- Se les coloca dos gotas de albumina se centrifuga a 1500 rpm por 30 seg y se observa
si hay aglutinacin
93
8.- Si no hay aglutinacin se le coloca dos gotas de Suero de Coombs se centrifuga a 1500
rpm por 30 seg
9.-Si no hay aglutinacin se le coloca dos gotas de clulas control de Coombs y se
centrifuga a 1500 rpm y deben de aglutinar en todos los tubos si no aglutinan se repite el
procedimiento.
Resultados
Conclusiones
Esta prueba es fundamental para la determinacin de compatibilidad para la trasfusin de
sangre ya que
nos puede detectar anomalas las cuales puede ocasionar raciones
trasfuncionales que pudieran matar al receptor.
Bibliografas
ABUL K. ABBAS, ANDREW H.LICHTMAN, SHIV PILLAI, Inmunologa cellular y
molecular, Editorial Elsevier, 6 Edicin 2003 ,Colombia, Pag-566
Paginas consultadas 525-538
94
Practica N
Tcnica de Elucin
Fundamento: Es la extraccin por mtodos fsicos y qumicos de los anticuerpos que

se encuentran pegados a los glbulos rojos
Objetivo: Poder despegar los anticuerpos del glbulo rojo para poder determinar el
grupo sanguneo
Introduccin
Hay varios tipos de tcnicas de elucin como el utilizado por Kidd en 1949 para eludir
anticuerpos de los glbulos rojos en pacientes con anemia hemoltica adquirida por
anticuerpos calientes ha sufrido desde entonces varias modificaciones que incluyen el
empleado por de ter de Voz Kelsay en 1956 , Weiner en 1957 y el de Robn en
1953. Hughes-Jones y cols
en 1953 valindose de anti-D compararron el efecto de
tres mtodos de elucin ya mencionados anterior mente con la tcnica de la elucin

a partir de estromas a pH 3.5 o 11.1
pero la mejor recuperacin se obtuvo con la
elucin a partir de estromas a pH 3.5 durante dos minutos se recupero el 80% de los
anticuerpos. El mtodo de original de Robn que la elucin se afecta solo durante 1
min a 20C proporcionando el 50% de los anticuerpos , pero al modificar la tcnica
diluyendo por 30 min a 37C se obtuvo el 70% de los anticuerpos. El mtodo de Weiner
as como de el de Landstainder y Miller dieron aproximadamente un tercio de la
cantidad inicial de anticuerpos presentes. Se debe destacar que los resultados de
Hughes-Jones y cols en 1963 se aplican a los anticuerpos de tipo IgG . Segn J. H.
Humphrey la elucin de anticuerpos IgM es mas satisfactoria a pH 10.5 que a 3.5 la
comparacin se hizo utilizando hemates tratados con formol pero no estroma.
95
Procedimiento de Lui
Material
Tubos de 12x75
Pipeta Pasteur
Papel perafil
Equipo
Centrfuga clnica
Bao Mara
Congelador de -80 C.
Sangre total
Solucin salina
Procedimiento
1.- Calentar la muestra de sangre a 37 C durante 30 minutos.

2.- Lavar los hemates seis veces con abundante solucin salina precalentados a 37 C.
3.- A un tubo de hemlisis, aadir 16 gotas de hemates concentrados y 4 gotas de solucin
salina isotnica
4.- Agitar y esparcir la suspensin de hemates por las paredes del tubo. Cerrar con papel
parafilm.
5.- Colocar el tubo en el congelador a < -30 C, en posicin horizontal durante un mnimo
de 30 minutos.
6.- Descongelar colocando el tubo bajo un chorro de agua del grifo
7.- Centrifugar el tubo 3000 rpm x 10 minutos y recoger el hemolizado sobrenadante prestar
especial cuidado a no aspirar los estromas de hemates conviene dejar 1-2 mm de
sobrenadante sobre el fondo del tubo.
8.- Realizar le grupo sanguneo y Rh con la prueba directa no es necesaria la confirmacin
con la prueba inversa
96
Procedimiento Cloroformo-Tricloroetileno
.
Material
Pipeta Pasteur
Tubos de eluido (vidrio con tapn de rosca)
Papel perafil
Filtro de 10 microm
Gradilla
Jeringa de 2 ml
Equipo
Centrifuga clnica
Bao mara
Material biolgico y reactivo
Solucin salina
Sangre total
Cloroformo-tricloroetileno
1.- Calentar la muestra de sangre a 37 C durante 30 minutos.

2.- Lavar los hemates seis veces con abundante solucin salina precalentados a 37 C
centrifugar a 3000 rpm por 5 a 7 minutos.
3.- Tras el ltimo lavado, se aadir al concentrado de hemates un volumen similar de
solucin salina fisiolgica y dos volmenes de cloroformo-tricloroetileno.
4. La mezcla se agitar durante un minuto (con el tubo tapado).
5.- Centrifugar el tubo a 3000 rpm x 10 minutos. Debern quedar tres capas bien definidas
una inferior de cloroformo-tricloroetileno, el botn de restos de estromas y la capa eluido
(hemolizado).
6.- Con una pipeta Patear aspirar el sobrenadante hemolizado y transferirlo a un tubo de
vidrio. La aspiracin debe realizarse lentamente, con el tubo en posicin vertical y detenerse
2-3 mm antes de llegar al botn de estromas, con el fin de no aspirar cloroformotricloroetileno.
97
7.- Cargar el eluido en la jeringa de 2 mL conectada a un filtro de 10 micro y filtrarlo hacia

otro tubo de vidrio si se nota resistencia, cambiar el filtro, pues ste puede romperse y
esparcir el eluido.
8.- Una vez filtrado, el eluido se incubar con el tubo destapado durante un mnimo de 60
minutos a 37 C para que se evapore el cloroformo-tricloroetileno (o toda la noche a 4 C)
9.- Realizar grupo sanguneo ABO y RH no es necesario comprobar el grupo con la prueba
inversa
Tcnica del Despegado de los Anticuerpos A 45C (Bao Maria)

Material
Pipeta Pasteur
Gradilla
Tubos de 12x75
Equipo
Centrifuga clnica
Bao mara
Procedimiento
1) Lavar los eritrocitos 6 veces con solucin salina

2) Agregue la mitad del volumen de eritrocitos con solucin salina
3) Mezcle perfectamente bien
4) Coloque el tubo en un bao mara de 45C durante 20 min
5) Agite la mezcla vigorosamente de 4 a 5 veces durante la incubacin
6) Centrifugue la mezcla durante 5 min a 4000 R.P.M.
7) Separe cuidadosamente el sobrenadante (Ac eluido o despegado).
8) centrifugue el sobrenadante durante 3 a 4000 R.P.M.
9) Coloca el eluido sobre un tubo limpio.
98
10) Realizar grupo sanguneo ABO Y RH no es necesario la confirmacin con la prueba

inversa
Conclusiones
Estas pruebas de separacin de anticuerpos son necesarias para la determinacin de
grupo sanguneo en pacientes que necesitan una trasfusin sanguneo pero tienen
problemas los cuales ocasionan resultados errneos en su grupo sanguneo y pueden
ocasionar reacciones tras-funcionales
Bibliografa
99
Practica N
Prueba directa
Fundamento: Bsqueda de antgenos desconocidos con anticuerpos conocidos
Objetivo: Determinacin de grupo sanguneo ABO y RH para futuras pruebas
Introduccin
Un sistema de grupo sanguneo consiste en un grupo de antgenos que estn

codificados por alelos de un solo gen o por fragmentos de este y una coleccin
antignica bioqumica , fenotpica o genticamente relacionados pero cuyos genes no
son allicos. En la actualidad se conocen ms de 22 grupos sanguneos y siete
colecciones antignicas.
La historia de la medicina transfuncional cambio en la forma muy importante con el
advenimiento descubrimientos de Karl Landsteiner en 1901 los mismo que valieron la
obtencin del Premio Novel en Medicina y Fisiologa en 1930.
Landsteiner demostr que netre la sangre de los individuos haba diferencia y en la
publicacin de sus resultados de su investigacin descubri que la adicin de suero de
varios individuos causaba la aglutinacin de unas muestras de glbulos rojos con la cual
inicialmente identifico tres grupos sanguneos que llamo A,B y C. Dos aos despus
Descastellano y Sturli ambos pupilos de Landsteiner describieron el grupo AB.
La terminologa que actualmente conocemos para kla descripcin de los grupos
sanguneos llamado ABO fue adaptado en 1937 en el congreso de la sociedad
Internacional de la trasfuncin sangunea en Pars.
Landsteiner y Levine describieron tambin el sistema antgeno MN y el P en 1927 y en
1940 Alexander Weiner describi el sistema RH despus de evaluar el caso de una
mujer con historia de u embarazo el cual el producto presento eritroblatosis fetal.
100
Material
Pipeta Pasteur
Gradilla
Tubos de 12x75
Equipo
Centrifuga clnica
Hemoclasificadores
Sangre total
Procedimiento
1.- Centrifugar la muestra de sangre a 35000 rpm por 5 min
2.- Separar el suero y el plasma en dos tubos
3.- Realizar una dilucin de 2 al 5 %
4.- Etiquetar cuatro tubos con A, B, AB y RH
5.- Colocarle dos gotas de la dilucin de glbulos rojos a cada tubo
6.- Colocarle dos gotas de hemoclasificadores segn el tubo correspondiente
7.- Centrifugar a 1500 rpm por 30 seg
8.-Observar aglutinaciones e interpretar resultados
RESULTADOS
101
Conclusiones
Esta prueba es de suma importancia para determinar el grupo sanguneo y el Rh pero no
es confirmatoria se tiene que confirmar el grupo con la prueba inversa
Bibliografas
BEST Y TAYLOR, Bases fisiolgicas de la Practica Medica,
Panamericana, 13 Edicin, 2003, Mxico
Pag-1145
Editorial Medica

102
Practica N
Prueba inversa
Fundamento: Bsqueda de anticuerpos desconocidos con antgenos conocidos
Objetivo: Confirmacin del grupo obtenido en la prueba directa
Introduccin
La determinacin de grupo del sistema ABO es la prueba simple de laboratorio ms
importante realizada en el banco de sangre y es la base fundamental de la
determinacin de la compatibilidad sangunea. Esta se puede llevar a cabo mediante dos
mtodos
La prueba directa consiste en la aplicacin de un reactivo comercial con anticuerpos ya
conocidos anti-A y otro anti-B a una suspensin de eritrocitos por identificar y evaluara
la presencia de aglutinacin . Su presencia indica al antgeno o anticuerpo presente en
la superficie del glbulo rojo
La prueba indirecta se lleva acabo utilizando glbulos rojos A y B como reactivo para
detectar la presencia o ausencia de anticuerpos IgM contra antgenos A y B en el
suero del paciente.
Sistema Rh es in sistema altamente complejo ya que de esta forma por ms de 45
antgenos si embargo son cinco los de mayor importancia la herencia de este
antgeno esta determinada por un complejo de dos genes estrechamente relacionados
en el brazo corto del cromosoma 1, uno de ellos codifica el antgeno D y otro para las
protenas C o c y la especialidad E o e . As la persona que son Rh + tiene tanto
antgeno D como el Ce a diferencia del Rh que solo tiene CE dependiendo de las
combinaciones de estos genes existen ocho posibles genotipos para el antgeno RH
La prueba de determinacin de antgeno Rh es la segunda prueba de compatibilidad
ms importante realizada en banco de sangre y d todos los antgenos del sistema el
mas inmunogenico es el D por ello la persona con antgeno D positiva son llamados Rh
+ y los antgenos D son Rh negativos
103
Material
Pipeta Pasteur
Gradilla
Tubos de 12x75
Equipo
Centrifuga clnica
Sangre total
Diluciones de 2 a 5 % de glbulos rojos A1, A2, B y O
Procedimiento
1.-Centrigugar a 3500 rpm a 5 min la sangre total
2.- Separa el plasma en un tubo de 12x75
3.-Marcar cuatro tubos con A1, A2, B y O
4.-Colocar 2 gotas de plasma en cada tubo
5.-Colocar 2 gotas de la dilucin de glbulos rojos del 2 a 5% en su tubo correspondiente
6.- Centrifugar a 1500 rpm por 30 seg
7.-Observar aglutinaciones e interpretar resultados
Resultados
Conclusin
104
Esta prueba es importante para la confirmacin de grupo sanguneo de la prueba directa

para evitar errores de grupos y as poder realizar las pruebas cruzadas para poder
trasfundir sangre a un paciente sin reacciones trasfuncionales por errores del sistema
ABO y Rh.
Bibliografas
BEST Y TAYLOR, Bases fisiolgicas de la Practica Medica,
Panamericana, 13 Edicin, 2003, Mxico
Pag-1145
Editorial Medica

105

Manual de Practicas de Laboratorio Francisco

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MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

Hematologa Inmunologa - Microbiologa

CENTRO DE ESTUDIOS TECNOLGICOS INDUSTRIAL

La prctica de laboratorio tiene como objetivos instructivos fundamentales que los

Preparacin previa a la prctica

La preparacin previa a la prctica se desarrolla fundamentalmente sobre la base del

NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental - Salud

Instrucciones para el paciente

NEGATIVO: Aparece una lnea roja.

NO VLIDA: Ninguna lnea roja

Faustina Rubio Campal, Benjamn, Garca, Manuel Carrasco,

Instrucciones para el paciente

2) Tomar 1ml de la dilucin anterior y 1ml de solucin salina

3) Tomar 1ml de la dilucin anterior y 1ml de solucin salina

4) Realizar diluciones 1:16,1:32 y 1:64

6) Incubar por 30 min a 37C

7) Centrifugar a 1500 rpm por 15 seg

9) Obtener el resultado de cantidad de la hormona GCH con la siguiente formula

Volumen de orina de 24 horas x Ultima dilucin positiva x Sencivilidad de

OBJETIVO: Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de realizar e interpretar el

Frasco de boca abierta

Indicaciones para el paciente

2) Medir la cantidad de semen con una pipeta de 5ml y reportarlo

3) Tomar una tira reactivo de pH y introducirla en el semen y leerla reportar resultado

6) Realizar un conteo de espermatozoides

9) Cada muestra es colocada en un portaobjeto y cubierta con cubre objeto

10) Examinada con microscopio a 200 y 400 X.

durante un minuto sin frenar la centrifuga se coloca el tubo cuidadosamente en una

Solucin acuosa de sulfato de Zinc.

Indicaciones para el paciente

1) Calcular y tomar al tanteo un porcin fecal de aproximadamente 1g y diluirlo en 10

Evangelina Olivas Manual de prcticas de Microbiologa y Parasitologa

Indicaciones para el paciente

METODO DE AGLUTINACION EN PLACA

6) Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara

METODO DE AGLUTINACION EN TUBO

* Salmonella B 18-24hrs de 48-50C

Densidad o peso especfico: es una medida indirecta de la capacidad de concentracin del

Muestras de orina (pacientes del laboratorio)

Indicaciones para el paciente

No debe haber hemoglobina

Instrucciones para el paciente

5) Tambin se puede utilizar formol al 10%, se introduce el hisopo en el

Presencia de amibas se reporta la muestra cmo ---------------- Positiva

Recomendaciones para el paciente

4) Incubar el medio de cultivo ya sembrado por 24 horas por 37C

5) Sacar el medio de cultivo sembrado y incubado

6) Realizar un frotis de la rea de aislamiento por tincin de Gram reportar observaciones

7) Resembrar hasta que el medio se a puro mediante los frotis

9) Realizar pruebas bioqumicas para la identificacin de Genero y especie

Evangelina Olivas Manual de prcticas de Microbiologa y Parasitologa

Medios de cultivo para Urocultivo

Recomendaciones para el paciente

5) Sembrar de derecha a izquierda sobre todo le medio de cultivo

7) Incubar el medio de cultivo ya sembrado por 24 horas por 37C

8) Sacar el medio de cultivo sembrado y incubado

por tincin de Gram reportar

10) Resembrar hasta que el medio se a puro mediante los frotis

12) Realizar pruebas bioqumicas para la identificacin de Genero y especie

Cinta de celulosa transparente adhesiva de 12 mm de ancho (cortar una banda

Pipeta shali o pipeta automtica de 20 ul

Sangre total con anticoagulante EDTA

Indicaciones para el paciente