TP 2 - NUTRITION ET TOXICOLOGIE

& R.G

1 Principe
1.1 Principe de lextraction solide-liquide
Il s'agit d'extraire lochratoxine A prsente dans la farine pour la faire
passer dans le chloroforme. Lochratoxine a plus daffinit avec le solvant
quavec la farine.

1.2 Principe de lvaporation

Il sagit de diminu le solvant chloroforme pour concentrer lchantillon en
le faisons vapor

1.3 Principe de la CCM

La chromatographie sur couche mince repose sur les phnomnes
dadsorption et dinteractions.

2 But
Analyse qualitatives et semi-quantitatives de lochratoxine A dans un
echatillon de farine de bl et la vrification de lefficacit de la methode
dextraction.

3 Mode opratoire
3.1 Prparation de lchantillon
Un mlange de 10 g de la farine de bl, 30 ml du chloroforme et 2,5 ml de
dacide sulfurique 0,1 M est mis en agitation pendant 30 minutes. Le
mlange est ensuite filtr et puis vapor sec 60C. Le rsidu est
reconstitu dans 500 l de mthanol avec 1ml de hexane. Aprs
centrifugation (6000 rpm, 20 min), la phase organique infrieure est
rcupre.

3.2 Chromatographie couche mince

3.2.1 Prparation du solvant
Le solvant est un mlange de 60 ml de tolune, 30 ml dactate dthyle
et 10 ml acide formique.
1

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3.2.2 Prparation de la couche mince

Aprs
migration
Solvant

Sous UV

Solution dochratoxine
chantillon dope
chantillon de la

Figure 1 : mode opration de la CCM et rvlation du rsultat probable

3.3 Prparation des dilutions pour la courbe dtalonnage

A partir dune solution initiale de concentration 5 PPM = 5000 PPB
Rgle applique

C1V 1=C 2V 2

Tableau 1 : prparation des dilutions pour la courbe dtalonnage

Concentration

souhait

dans

un 5 PPB 10

volume de 1ml
Volume de la solution en l
Volume deau distille en l

PPB
2
998

1
999

100

500

PPB
20
980

PPB
100
900

4 Rsultat et discutions
4.1 Courbe dtalonnage
Tableau 2 : valeur de la densit optique en fonction de la concentration de la solution en
ochratoxine en PPB

Concentration
PPB
DO
2

en 5
0.007

10

100

500

0.5

0.3

0.96

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0tan29a566029
0tan29a566029
0tan28a566028

f(x) = 0x + 0.04
R = 0.99

0tan28a566028
DO

ochratoxine

0tan28a566028

Linear (ochratoxine)

0tan28a566028
0tan28a566028
0tan25a566125
0tan28a566028
0tan24a566224
concentration en PPB

Figure 2 : courbe dtalonnage concentration en ochratoxine (PPB) en

fonction de la densit optique
concentration en oc h ratoxine ec h antillondop =

0.050.0432
=3.578 ppb
0.0019

3.578*10-3 ppm
Remarque puisque R2 est proche de 1 (0.9873) lquation obtenue est
fiable
Rendement de lextraction =

3.578
100=7.95
45

le rendement dextraction

tant trs faible la technique dextraction nest pas trs efficace.

4.2

Prvention

de

la

contamination

des

crales

par

lochratoxine A
Applique les principes de la BPA avant la moisson, lors de la moisson,
conservation, entreposage et transport. CX/FAC 00/17 Janvier 2000
Exemple : Scher les crales pour atteindre un degr dhumidit
correspondant une activit de l'eau de moins de 0,70 (moins de 14 pour
cent d'humidit dans les crales petits grains) aussi rapidement que
3

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possible. Pour viter la formation d'ochratoxine A, commencer le schage

immdiatement aprs la moisson et utiliser de prfrence un schoir air
chaud. En climat tempr, si le stockage intermdiaire est ncessaire en
raison d'une faible capacit de schage, s'assurer que la teneur en eau est
infrieure 16 pour cent, que le temps d'entreposage ne dpasse pas 10
jours, et que la temprature reste en dessous de 20C.