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Obtencin
Etanol
y Biogs a Partir de Banano de Rechazo
Vol. 23(2), de
19-30
(2012)
Guevara
doi: 10.4067/S0718-07642012000200004
Resumen
Se desarroll un proceso fermentativo mediante hidrlisis endgena inducida para producir etanol
a partir de banano verde no apto para exportacin. El potencial de las vinazas tambin fue
evaluado para obtener biogs. A escala de 1 litro se compar la hidrlisis endgena inducida con
la hidrlisis exgena usando enzimas comerciales, y la hidrlisis cida tomando como punto de
referencia el etanol producido en la fermentacin. Con la hidrlisis endgena se obtuvo los
mayores rendimientos y con esta metodologa se realizaron fermentaciones a 15 litros Los
rendimientos de etanol en promedio fueron 0.065 litros por kilogramo de banano verde y los del
biogs fueron 2.24 litros por litro de vinaza. El proceso propuesto presenta rendimientos
comparables con los de la fermentacin de caa de azcar. Adems presenta ventajas, tales
como su bajo costo, fcil operacin y por ser una alternativa de solucin ambientalmente
compatible en el rea del manejo de residuos de cosecha.
Palabras clave: hidrlisis enzimtica; banano de rechazo, etanol, biogs, fermentacin
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INTRODUCCION
La industria bananera de exportacin en Colombia genera una importante cantidad de biomasa
residual denominada banano de rechazo, que tiene tres caractersticas importantes: 1) no se
exporta, 2) est concentrada en las empacadoras de fruta, 3) representa un volumen importante.
Estas condiciones hacen que este sustrato sea atractivo para emprender un estudio que permita
evaluar su uso como materia prima en la produccin de biocombustibles, teniendo en cuenta que
el esfuerzo energtico por concentrar la fruta se hizo con fines de exportacin, lo que reduce
significativamente su costo energtico como materia prima y con ello tambin se reduzca
ostensiblemente su huella de carbono. El banano para exportacin se cosecha verde, se
transporta hasta las empacadoras donde mediante criterios de tamao y apariencia se selecciona
en dos categoras bsicas: Fruta de exportacin y fruta de rechazo. Las cifras de banano verde de
rechazo, oscilan entre 6.5 y 10.8 t/ao/ha, por tanto el volumen total en Colombia es de unas
400.000 t/ao (Sierra, 2007). En el caso especfico de la zona de Urab -noroccidente del pas- al
ao se cuenta con unas 250.000 t de banano de rechazo (Augura, 2007).
Actualmente una tercera parte de la fruta que no se exporta se destina al consumo interno como
fruta fresca, otra tercera parte se emplea como sustrato en la produccin de fertilizantes orgnicos
(compost) para el cultivo de la misma fruta y, una tercera parte contina considerndose como
residuo. Son precisamente estas ltimas 2/3 partes del residuo las que potencialmente se pueden
usar en la produccin de biocombustibles.
Durante aos, esta biomasa se constituy en una de las problemticas ambientales ms
importantes de las zonas bananeras y en un intento de solucin, en 1987 el CIID (Centro
Internacional de Investigaciones y el Desarrollo) de Canad don un sistema de produccin de
alcohol con el que se estim la viabilidad del uso de estos residuos para la obtencin de etanol,
por medio de un proceso hidroltico/fermentativo seguido de una destilacin. El costo de la
hidrlisis cida (Canch-Escamilla et al, 2005), comparado con el valor para la poca de los
combustibles fsiles, hicieron que esta iniciativa fuera considerada como inviable. Sin embargo,
una alternativa no estudiada a fondo en su momento fue la conversin de carbohidratos a travs
de una hidrlisis enzimtica endgena inducida, y ms an si se consideran los costos actuales
del petrleo (Augura y Fbrica de Licores de Antioquia, 1990). En un trabajo realizado en la
Universidad de Texas A&M, se estudiaron el potencial de los bananos de rechazo para la
produccin de etanol en diferentes estados de maduracin, obteniendo para banano verde 0.090,
maduro 0.082, sobre madurado 0.069 L etanol/Kg de toda la fruta (Hammond et al., 1996)
Posteriores esfuerzos se han realizado en todos los frentes de investigacin y muchas de estas
experiencias se encuentran debidamente documentadas en la revisin bibliogrfica: El banano
verde de Rechazo en la Produccin de Alcohol Carburante (Afanador, 2005), en donde se
abordan aspectos tales como, la disponibilidad del material, tipos de hidrlisis, fermentaciones con
diferentes tipos de microorganismos, separacin y deshidratacin del etanol (Beckley et al, 2005).
Tambin se efectu un anlisis energtico y exergtico para evaluar el proceso de obtencin de
etanol a partir de banano; analizando el cultivo y transporte del material, hidrlisis del banano,
fermentacin de los azcares, destilacin del etanol y planta de utilidades. Finalmente se
demostr que el balance energtico es positivo pero debe mejorarse (Velsquez et al., 2009).
A veinte aos de la primera experiencia, es posible pensar en obtener etanol a partir de este tipo
de residuos agroindustriales, con dos aspectos claros para considerar: 1) Mejorar el rendimiento,
bajar el costo de la hidrlisis y desarrollar una metodologa adecuada de extraccin de los
azcares fermentables. 2) Disminuir el costo energtico de la produccin de etanol mediante la
obtencin simultanea otros biocombustibles y coproductos a partir de los residuos hasta llegar a
implementar el concepto de biorrefineria (Rabelo et al., 2011).
En ste estudio se pretendi abordar la problemtica desde una visin holstica. Considerando
todas las etapas del proceso a dos escalas diferentes. Fueron realizadas 5 etapas: hidrlisis,
extraccin y neutralizacin de jugos (Lee et al., 2006; Kyamuhangire et al., 2002; Kyamuhangire Et
al., 1999), la evaluacin fisicoqumica del jugo, fermentacin etanlica, destilacin y finalmente
produccin de biogs a partir de las vinazas, con el fin de obtener biocombustibles a partir de
banano de rechazo.
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METODOLOGA
Mtodos analticos
Bajo la Norma Tcnica Colombiana (NTC) fueron cuantificados Nitrgeno (NTC 370),
Fosforo (NTC 234). La capacidad de retencin de agua (CRA), humedad, pH, carbono orgnico,
cenizas y densidad se determinaron segn la norma (NTC 5167). Los azcares reductores fueron
cuantificados por un mtodo espectrofotomtrico, utilizando DNS (cido 3,5-dinitrosaliclico) y
adicionalmente los azucares solubles por refractometra, tcnica usalmente denominada Grados
Brix (Bx). Potasio, Sodio, Calcio, Magnesio, Zinc, Aluminio se cuantificaron por Electroforesis
capilar. Azufre por gravimetra bajo la norma AOAC 98002 (Association of Oficial Analytical
Chemists), Conductividad y pH bajo norma SSLMM-42-2-92: Soil Survey Laboratory Methods
Manual Reporte N42, Versin 2.0, 1992. Slidos totales por gravimetra bajo norma APHA
(American Public Health Association), AWWA (American Water Works Association) y WPCF
(Water Pollution Control Federation). La caracterizacin enzimtica, tanto cintica como de punto
final, fue estimada por determinacin de las velocidades iniciales segn los protocolos definidos
para valoraciones en heterofase (Pelez et al., 2004). La concentracin alcohlica fue estimada
por cromatografa de gases, usando un equipo Marca Agilent 6890 con detector FID, dotado de
una columna Carbowax 20 M de 50 m de longitud y 1 m de dimetro interno; el volumen de
inyeccin fue de 1 L y una divisin de 1:50. La Temperatura del inyector fue de 200 C y el flujo
de gas portador de 20 mL/min de H2 (ONeal, et al 1996). El contenido de biogs fue establecido
por volumetra y prueba de llama.
Hidrlisis y extraccin
Los bananos verdes fueron adquiridos en la central de alimentos minorista de Medelln y
transportados inmediatamente al laboratorio. Tres procedimientos fueron empleados en la
hidrlisis y extraccin de los jugos: En la hidrlisis endgena, una cmara de maduracin
equipada con sistema de humidificacin, calentamiento y medidores de temperatura y humedad,
fue usada para la hidrlisis por induccin de enzimas endgenos. Para la induccin, la
concentracin de etileno en la cmara fue de 50 ppm, la temperatura de 25C y la humedad
relativa de 85% todo esto se mantuvo por 96 horas, segn una estandarizacin cintica realizada
previamente (Paull, 2000; Margossian et al 1988). La extraccin de los jugos se realiz en una
etapa por adicin de 300 mL de solucin acuosa de Ca(OH)2 al 10% por cada Kg de banano,
mezclado y dejado en reposo por 15 minutos y luego centrifugacin. Posteriormente el jugo fue
neutralizado con H2SO4 comercial, pasteurizado y nuevamente filtrado hasta obtener el jugo
clarificado. En la hidrlisis por enzimas exgenas se tomaron 80 g de banano verde que se
maceraron con 250mL de buffer acetato 0.05M y pH 5.0. El material resultante se someti a 2 atm
y 121C por 1 hora en autoclave (All American model N 25). El jugo pre tratado se llev a 55C
en bao mara, se someti a agitacin mecnica, y se le agregaron 0.250 mL de cada uno de los
enzimas amilolticos (Termamyl 120L y Amylase AG 300L), se dej transcurrir la hidrlisis por
espacio de 3 horas y finalmente se filtr. Este jugo clarificado fue utilizado para la fermentacin.
En la hidrlisis qumica se emple el mismo equipo empleado en el pre tratamiento anterior a las
mismas condiciones de volumen, presin y temperatura con cido sulfrico al 0.5% y durante 30
minutos (Baret, 2003). El jugo fue entonces neutralizado a pH 5.5, filtrado y utilizado para la
fermentacin. Todos los ensayos fueron realizados por triplicado. El ensayo con mejores
contenidos de alcohol fue repetido a una escala superior en un reactor con capacidad nominal de
20L hasta completar un total de 15 repeticiones.
Fermentaciones
Las fermentaciones se llevaron a cabo en dos niveles dependiendo del tamao del fermentador.
En el primer nivel se utiliz un fermentador de 1 L equipado con sistema de agitacin mecnico y
fue til para comparar las metodologas de hidrlisis y extraccin de jugos. Los ensayos fueron
realizados por triplicado.
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Nivel I y II
Microorganismo
Saccharomyces cerevisiae
Viabilidad inicial
98-100%
Viabilidad final
97%
Agitacin
Tiempo de fermentacin
48 horas
pH inicial
5.6
25 3 C
Produccin de biogs
Las vinazas resultantes de la destilacin del alcohol fueron analizadas y sometidas a digestin
anaerobia en un reactor discontinuo con capacidad de 5.0 L. La produccin de biogs fue
realizada con y sin inoculo. Cuando se utiliz inoculo, se empleo a una concentracin del 10% en
peso de porquinaza (excretas de cerdo) o rumen, con respecto a los slidos totales en la vinaza.
El proceso se realiz con y sin control de pH. Los ensayos fueron realizados por triplicado. El
biogas producido se hizo pasar por dos trampas (para cido sulfhdrico y CO2 y posteriormente se
le realiz prueba de ignicin.
RESULTADOS Y DISCUSION
Las caractersticas fisicoqumicas ms importantes de la materia prima (fruta verde), se aprecian
en la tabla 2.
Del anlisis de la tabla 2 se deduce que la fruta de banano se caracteriza por poseer alta
humedad y un significativo contenido de materia orgnica representado por una importante
cantidad de almidn (Aurorea, 2009; Prabha and Bhagyalakshmi, 1998). Hay poca presencia de
azcares fermentables tal y como lo demuestran los anlisis de Bx y los azcares reductores.
Adicionalmente el bajo contenido de nitrgeno indica una baja presencia de protena.
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Expresado como
Mtodo
Norma
Valores
Nitrgeno
N total
Kjeldahl
NTC 370
0.19%
Fsforo
P2O5
Espectrofotomtrico
NTC 234
ND
CRA*
CRA
Volumtrico
NTC 5167
197.03 %
Humedad
Humedad
Gravimtrico
NTC 5167
80.9 %
pH
pH
Potencio mtrico
NTC 5167
5.94
Carbono Orgnico
C.O
Volumtrico
NTC 5167
38.8 %
Cenizas
Cenizas
Gravimtrico
NTC 5167
0.6 %
Densidad
Densidad
Gravimtrico
NTC 5167
0.6 g/cc
Brix
Refracto mtrico
Azcares reductores
Espectrofotomtrico
Azcares
1.5 Brix
No aplica
8.0 mM**
La hidrlisis del almidn presente en el banano debe ser considerado como el paso clave para la
produccin de etanol. En ste paso ocurre la conversin de amilosa y amilopectina a azcares
fermentables que posteriormente pueden ser convertidos a etanol por levaduras y bacterias
(Mojovic et al, 2006)
La figura 1 muestra los resultados que se obtienen al evaluar los diferentes procesos de hidrlisis
con respecto a los slidos solubles (Bx) y el etanol producido. Si se considera una concentracin
de carbohidratos en el banano completo, cercana al 29% (Aurorea, 2009). En trminos de los Bx
la hidrlisis cida ofrece aproximadamente un 95% de conversin de los carbohidratos, mientras
que la hidrlisis endogena alcanza un 60% y la exogena un 45%. En principio y a partir del
referente de la refractometra, dos de los procesos pueden ser tenidos en cuenta para un segundo
nivel de anlisis: La hidrlisis cida y la hidrlisis enzimtica endgena.
Dado que no adecuado tener como nico criterio de decisin el poder hidroltico, esto se
complement con la capacidad de convertir el producto hidrolizado en alcohol, evalundose
mediante cromatografa de gases, para as definir el protocolo ms adecuado. En este sentido, los
rendimientos de la hidrlisis cida son bajos, dado que no superan el 4% de alcohol, hecho que no
se compadece con lo esperado segn los Bx alcanzados en la hidrlisis. Esto se atribuye a la
degradacin de los azcares fermentables hasta llegar a furfural durante la hidrlisis (Davis. L., et
al 2005; Nigam J. N., 2001). Esto contrasta significativamente con lo que se presenta en el caso
de la hidrlisis endgena donde se obtienen valores de alcohol que en promedio se acercan al
7.0% (V/V).
En sta primera etapa cabe anotar que si todos los carbohidratos presentes en el banano fueran
convertidos a azcares fermentables y estos posteriormente a etanol con la mayor eficiencia, se
deberan obtener aproximadamente 0.170 L de etanol por cada kg de banano. Esto sin tener en
cuenta que parte de la celulosa (hemicelulosa) est conformada por varios tipos de pentosas que
no son susceptibles de degradar por la levadura Saccharomyces cerevisiae que fue utilizada
para ste estudio.
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Fig 1: Efecto del tipo de hidrlisis sobre los Brix y la concentracin final de etanol
Tomando como base estos resultados en la figura 1, se opt por continuar los experimentos con
un jugo formulado a partir de hidrlisis con enzimas endgenos y posterior extraccin con lechada
de cal (Ca(OH)2). No solo por el contenido de alcohol en el fermento, sino por viabilidad tcnica y
econmica ya que no es necesario comprar enzimas o equipos que trabajen a altas temperaturas.
Para realizar el escalado a volmenes de 20 L, se realiz la hidrlisis por induccin con enzimas
endgenas en una cmara de maduracin. El jugo fue obtenido siguiendo el protocolo
previamente al nivel de 1L y guardando las proporciones. Las propiedades fisicoqumicas del
jugo producido a partir del banano hidrolizado por los enzimas endgenos y extrado con lechada
de cal, se presentan en la tabla 3. Cabe destacar la baja concentracin de Nitrgeno y Fosforo y la
alta concentracin de Azufre y Calcio en el jugo, debida principalmente a la adicin de Ca(OH)2 en
el proceso de extraccin y posterior neutralizacin con H2SO4. La cantidad de slidos solubles
(15.5 Bx) en el jugo, fue considerada adecuada porque una fermentacin ptima producira
concentraciones de alcohol cercanas al 9.0% (V/V) en el fermento e impidiendo la inhibicin por
sustrato.
Para las 15 fermentaciones ms representativas a volmenes de 15 L, se obtuvieron los
resultados que se presentan en la tabla 4.
Al correlacionar las diferentes variables estudiadas, se obtienen los valores que se presentan en la
matriz de correlacin que corresponde a la figura 2. De aqu se desprende dos hechos a destacar:
1) En la correlacin de las variables Bx y %Alcohol, para valores altos en Bx se pierde la
linealidad. Esto implica que la produccin de alcohol no es de dependencia nica del nivel de
azcares presentes en el jugo y que existen otras variables como por ejemplo vitalidad celular,
que juegan un papel determinante en la optimizacin de los procesos de fermentacin (RodrguezPorrata et al., 2008). 2) El comportamiento asinttico en la produccin del jugo a partir de la fruta
disponible, se interpreta como una tendencia a la saturacin en la capacidad extractante del
solvente, lo que tiene trascendencia en la estimacin del rendimiento mximo. Una forma ms
expedita de visualizar estos hechos se da mediante la formulacin de las variables derivadas, tal y
como se indica en la tabla 5.
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Mtodo
Norma
Resultados
de
Unidades
N total
Kjeldahl
NTC 370
0.52 0.10
g/L
Fosforo
P2O5
Fotomtrico
NTC 234
N.D
g/L
Potasio
K2O
E.C.*
No aplica**
8.34 0.41
g/L
Sodio
Na
E.C.*
No aplica**
N.D
g/L
Calcio
CaO
E.C.*
No aplica**
7.54 0.25
g/L
Magnesio
MgO
E.C.*
No aplica**
N.D
g/L
Zinc
Zn
E.C.*
No aplica**
N.D
g/L
Aluminio
Al
E.C.*
No aplica**
N.D
g/L
C.O
Volumtrico
NTC 5167
80.64 3.67
g/L
Gravimtrico
AOAC 98002
2.12 0.16
g/L
No aplica
No aplica
No aplica
153.60
SSLMM-42-2-92
5.64 0.00
SSLMM-42-2-92
8.17 0.02
mS/cm
Parmetro
Nitrgeno
Carbono org.
Azufre
Relacin C/N
pH
pH
Potencio
mtrico
Potencio
mtrico
Conductividad
Conductiv
Densidad
Densidad
Gravimtrico
NTC 5167
1.05 0.01
g/mL
Slidos
totales
No aplica
Gravimtrico
APHA-AWWA WPCF
2540B
163.4 0.98
g/L
Brix
Refracto
mtrico
No aplica
15.5
Brix
g/100mL
Azcares
Jugo
(L)
Bx
Alcohol en
vino
% (v/v)
15
15
15
15
Promedio
15.1
13.8
12.4
6.7
Desviacin Estndar
5.1
5.5
4.1
2.3
Coeficiente variacin
33.9%
40.1%
33.5%
34.3%
Valor Mnimo
4.25
4.5
4.0
1.7
Valor Mximo
20.3
22.0
16.0
10.3
Intervalo
16.05
17.5
12.0
8.6
Parmetro
Estadstico
N de Ensayos
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Guevara
Jugo (L)/
Banano ( Kg)
Alcohol (L)/
Banano (Kg)
Alcohol (g)/
Vino (L)
Alcohol (g)/
Banano(g)
15
15
15
15
Promedio
0.96
0.065
53.3
0.051
Desviacin Estndar
0.31
0.031
18.3
0.025
Coef. Variacin
32%
48.6%
34%
48.6%
Mnimo
0.54
0.018
13.4
0.014
Mximo
1.47
0.118
81.4
0.093
Intervalo
0.93
0.1
68
0.079
Numero de Ensayos
De la tabla 5 se tiene que por cada kilogramo de fruta se formula en promedio 0.96 litros de jugo y
que por cada litro de jugo se obtienen en promedio 53.3 g de alcohol; lo que en principio se puede
considerar un rendimiento significativo. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la produccin
de etanol es funcin de la presencia de azcares fermentables y que estos a su vez se relacionan
con los Bx.
El valor mximo de alcohol obtenido en la fermentacin fue de 0.12 L de alcohol/ Kg de banano lo
que no est lejano del 0.17 propuesto como mximo terico dado que representa el 70%. Si bien
es difcil pensar en superar este mximo experimental obtenido, si se tiene en cuenta que la
hidrlisis endgena afecta principalmente al material amilceo y no al celulsico presente en la
cscara, se requiere trabajar en mejorar el valor promedio (0.065 L de etanol / Kg de fruta) dado
que este valor solo representa el 40% del valor estequiomtrico. Adems debe tenerse en cuenta
que la extraccin de los azcares fermentables es susceptible de mejorar.
En la figura 3 se evidencia que dadas las condiciones de la fruta se pueden obtener jugos de muy
diferente concentracin de azcares, lo que se traduce en sistemas de alta, media y baja
productividad de alcohol. La alta productividad est representada por fermentaciones que en
promedio obtienen 0.11 (L) de alcohol por cada kilogramo de fruta, siempre y cuando el jugo en
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promedio posea 15.5 Bx. Un hecho significativo que tambin est relacionado con la figura 3 es
que el alto contenido de azcares fermentables no es garanta de una buena fermentacin. Este
hecho es actualmente objeto de estudio para tratar de establecer las razones por las cuales a
pesar de poseer un adecuado nivel de azcares fermentables y condiciones ptimas de
fermentacin tales como agitacin, pH, temperatura, poblacin de levaduras y viabilidad, en
algunos casos se obtienen rendimientos significativamente menores de alcohol.
Cabe recordar que la cantidad de etanol obtenido a partir de caa de azcar es de 0.086 L de
etanol por Kg de caa de azcar (BNDES y CGEE, 2008), por lo tanto los rendimientos obtenidos
en el caso del banano son muy promisorios.
Fig 3: Anlisis de clster para las relaciones entre Brix y % etanol en las fermentaciones
Las vinazas producidas durante la destilacin del fermento estuvieron en una proporcin de 12 a
14 L de vinaza por Litro de alcohol producido. Este volumen de vinaza es muy parecido al
obtenido cuando se emplea jugo de caa para la formulacin del mosto (BNDES y CGEE, 2008).
Para la produccin de biogs, se procedi a determinar la composicin de la vinaza de banano y
adems compararla con la de caa de azcar cuando se emplea miel en la formulacin del jugo.
En la tabla 6 se muestran parmetros fisicoqumicos de ambas vinazas.
Tabla 6. Anlisis fisicoqumico de vinazas de caa y banano. ST: slidos totales; CO: carbono
orgnico
pH
%ST
%CO
%N
%P
%K
Caa
4.07
16.82
4.85
0.45
0.080
2.61
Banano
4.15
2.70
1.14
0.07
0.006
1.12
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Guevara
Rumen
0.920.05
2.090.13
2.240.13
0.770.03
0.870.10
0.930.08
Los rendimientos de biogs (2.24 L) por cada litro de vinaza de banano son proporcionales al
biogs obtenido de vinaza de caa en donde para slidos de 16.8% se obtienen como mximo 9 L
de biogs (BNDES y CGEE, 2008).
CONCLUSIONES
La hidrlisis endgena y la extraccin con cal, presenta grandes ventajas con respecto a las otras
hidrlisis y extracciones evaluadas, porque este tipo de proceso puede ser utilizado a mayor
escala por su bajo costo y viabilidad. La concentracin promedio de alcohol alcanzada en los
ensayos, permite concluir que los rendimientos son levemente ms bajos que los obtenidos con
caa de azcar. El volumen de biogs obtenido a partir de las vinazas de banano es comparable e
incluso proporcionalmente superior al obtenido a partir de las vinazas de caa de azcar.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a Colciencias, al Ministerio de Agricultura de Colombia y a la Universidad
de Antioquia la financiacin del presente trabajo.
REFERENCIAS
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