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Teora Electrocintica
La velocidad de migracin de un soluto a travs de un lquido conductor por la
accin de un campo elctrico, despreciando efectos gravitacionales y difusivos,
est influenciada por algunos fenmenos fsicos microscpicos como: la carga
de la partcula, la fuerza de arrastre que se opone al movimiento de la
Figura2. Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada. Adaptada de: Ivory, 1990.
Fenmenos de Dispersin
Cuando se realiza una operacin de electroforesis se requiere que los solutos
presentes en la solucin de inters se separen formando bandas bien definidas,
es decir se obtenga una resolucin apropiada. Sin embargo, existen varios
fenmenos que provocan la dispersin de la muestra, trmino que engloba
tanto los efectos de difusin molecular, como los efectos microscpicos de
mezclado que se agrupan en la llamada difusividad de remolino. Algunos de
estos efectos se describen a continuacin.
Difusin
En una electroforesis generalmente existe algo de dispersin de la mezcla
debida a la difusin molecular, sin embargo este fenmeno normalmente no es
la causa principal de la dispersin.
Electrosmosis
Esta es el resultado del movimiento de la capa difusa de iones en la proximidad
de la superficie cargada fija de la celda por accin del campo elctrico, lo que
se traduce en el desplazamiento neto de solvente hacia uno de los polos (en
direccin opuesta al movimiento electrofortico). Este efecto microscpico
puede alterar el patrn de flujo macroscpico dependiendo de la configuracin
de la celda electrofortica, alterando el desplazamiento de la muestra.
Efectos Inicos Regulatorios
La diferencia de movilidad entre el soluto de inters y los iones del bufer donde
se efecta la electroforesis, puede generar dispersin durante la electroforesis.
Para atenuar este efecto en la interfase delantera la muestra debe presentar
una menor movilidad que el bufer, mientras que en la posterior es conveniente
que la movilidad de la muestra sea mayor.
Gradientes de Conductividad
Si la conductividad de la muestra es mayor que la del bufer, cuando el campo
se incrementa arriba de un valor crtico, puede provocarse una distorsin en
"forma de puntas" de la interface. El bufer puede presentar una menor
conductividad que la muestra por efecto de los iones que contiene.
Sobrecalentamiento: Efectos Trmicos
Cuando una, corriente elctrica se hace pasar a travs de un medio con una
determinada resistencia parte de la energa se convierte en calor, este
fenmeno es conocido como efecto de Joule. En una operacin electrofortica
el calor generado es proporcional al cuadrado del campo aplicado y al
cuadrado del espesor del gel, de tal manera que la cantidad de muestra est
limitada por este espesor.
La existencia de gradientes trmicos puede desnaturalizar solutos lbiles,
daar el gel o estimular la evaporacin de solvente.
Electroforesis de zona
En este tipo de electroforesis la muestra es pequea y diluida, entonces es
posible lograr la su resolucin completa. Este tipo de electroforesis puede ser
empleada para resolver mezclas de cargas diferentes.
Isotacoforesis
En una separacin por isotacoforesis la muestra se inserta entre un electrolito
rpido y uno lento (Figura 5), formando una banda finita. En estado
estacionario todos los constituyentes se mueven a la misma velocidad, en un
orden impuesto por sus movilidades, con la ventaja de que cada banda
contiene slo un tipo de electrolito (el ancho de la banda es una medida de la
concentracin de la especie en la muestra original).
Figura5. Isotacoforesis de cinco especies inicas(antes y despus). Tomada de: Ivory, 1990.
Enfoque isoelctrico
Cuando la separacin electrofortica es por medio de enfoque isoelctrico (IEF)
se requiere un gradiente de priven el medio donde se realiza la electroforesis
(Figura 6). En el medio continuo de pH las molculas como las protenas se
ordenan conforme a su punto isoelctrico, es decir al migrar llegan a un punto
donde su carga neta es cero y por lo tanto su movilidad es nula.
El enfoque isoelctrico es una operacin gobernada por el equilibrio, mientras
que las otras operaciones son controladas por la velocidad de transporte.
Figura6. Enfoque isoelctrico de solutos polianfolticos (antes y despus). Tomada de: Ivory,
1990.
Electroforesis capilar
Una de las tcnicas de mayor uso recientemente para la determinacin de
antimicrobianos es la electroforesis capilar (CE) esto gracias a su simplicidad
operacional, versatilidad, capacidad en la separacin de una gran variedad de
especies, adems de que requiere un menor volumen de muestra.
Bsicamente el proceso de electroforesis cuenta con las siguientes etapas:
Avance de la corrida
Referencias
Tejeda, M.A., Montesinos C,R. , Guzmn, Z.R. (1995). Bioseparaciones, Editorial
Unisol, Hermosillo, Sonora. Mxico.