ASPECTOS MOLECULARES Y CELULARES DE LA ACCIN

DEL CALCIO EN LAS PLANTAS

Laboratory of Plant Molecular Biology and physiology Department of
Horticulture and Landscape Architecture, Washington State University,
Pullman, WA 99164-6414
B.W. Poovaiah (HostScience, Vol. 23(2), Abril 1988)
El calcio es conocido por ser un mensajero secundario en muchos de
los procesos de desarrollo animal, pero es recientemente que se conoce
la evidencia de que el calcio es un importante mensajero intracelular en
las plantas (9, 15, 22, 32-35, 41).
El nivel de concentracin de calcio libre en el citoplasma es
extremadamente bajo, y est influenciado por seales extracelulares
como la luz, gravedad y las hormonas. Investigaciones de nuestro
laboratorio indican que el calcio y su unin proteica, la calmodulina,
juegan un importante papel en el acoplamiento estmulo-respuesta,
regulando actividades enzimticas, especialmente a travs de la
fosforilacin proteica (33, 34, 48).
Tanto en estudios de fosforilacin proteica in vivo como in vitro, han
revelado los cambios dependientes del Ca en varios tejidos vegetales
(18, 37, 39, 49, 50).
Tambin se ha observado la influencia en varios procesos fisiolgicos
como la elongacin celular, abscisin, senescencia y tuberizacin por
alteracin de los niveles de Ca intra y extracelulares (33).
Otros ejemplos de procesos mediados por Ca en plantas son los
siguientes: a) divisin celular, b) geotropismo, flujo protoplsmico, d)
control estomatal, e) movimiento cloroplasto, f) secrecin, g) cambios
hormona-dependientes, h) activacin enzimtica y i) fosforilacin
proteica (9, 33).
El calcio es esencial para mantener la integridad de las membranas y
las paredes celulares (8, 11, 14, 20, 26). En plantas, la mayor porcin
del Ca est presente en el apoplasto, primeramente complejado con
mezclas de paredes celulares y membranas plasmticas (8, 11, 23-25,
30, 44).
El efecto cimentante se debe primeramente a los pectatos de Ca de la
lmina media. El Ca es esencial para mantener la estructura de la
pared celular, especialmente en frutos y vegetales que son almacenados
por perodos prolongados (30). Los tratamientos precosecha de Ca son
efectivos para mejorar la calidad global y vencer los desrdenes
fisiolgicos como bitter-pit en manzanas, blossom-en-rot en tomates,
tip-burn en lechuga, corazn hueco y centro marrn en patatas (23,

30). Sumergir o infiltrar en postcosecha, a vaco o presin con solucin

de Ca tambin es efectiva para mejorar la calidad de almacenamiento
en manzanas (30, 31).
CALCIO EXTRACELULAR
Concentraciones de 1 a 5 mM Ca2+ son conocidas que existen en la
regin de la pared celular. Estas concentraciones son esenciales para
proteger la membrana plasmtica y para mantener la integridad
estructural de la pared celular.
Se conoce que el calcio retrasa la senescencia en manzanas, resultando
una fruta ms firme (17, 23, 30, 31).
Durante la maduracin y la senescencia ocurre la disolucin de la
lmina media, resultando una separacin celular. Los frutos tratados
con calcio, los cuales permanecen muy firmes durante el almacenaje,
tienen una lmina media densamente manchada y la adhesin clulaclula incrementada. Para estudiar el efecto del calcio en la firmeza del
fruto y en los cambios en la ultraestructura de la pared celular, se han
realizado infiltraciones de Ca en postcosecha.
El calcio protege la lmina media de la rotura normal asociada con la
senescencia. Adems de la firmeza de frutos, las manzanas tratadas con
Ca poseen una menor permeabilidad de membrana y contienen ms
clorofila y cido ascrbico que los frutos no tratados.
La evolucin en la respiracin de CO2 y la produccin de etileno, las
cuales son normalmente altas en frutos senescentes, son menores en
frutos tratados con calcio (17, 31). Estos resultados sugieren que
algunos procesos bioqumicos relacionados con la senescencia en
manzanas se retrasan por el calcio (21, 23, 30).
Los mecanismos involucrados en estos cambios no se comprenden
claramente.
CALCIO INTRACELULAR
El ion Calcio libre es considerado ahora como un regulador mayor de
numerosos procesos biolgicos y fisiolgicos en las plantas (9, 22, 33,
41).
En los 5 aos pasados, se ha acumulado una larga lista de evidencias
que nos permiten proponer una hiptesis de trabajo para el modo de
accin del calcio.
Estas etapas hipotticas:
a)

la concentracin de Ca libre citoplasmtico es <1M y

bajo control metablico;

b)
c)

la concentracin de Ca citoplasmtico puede ser

regulada por varias seales extra o intracelulares como
son la luz, gravedad, y las hormonas;
el Ca citoplasmtico esta unido a la calmodulina,
activndola. En este estado de activacin, los enzimas
pueden unir el complejo calcio-calmodulina guindolo a
responder. Los compartimientos mayores de la clula
donde los mayores niveles de calcio podran ser
almacenado incluye orgnulos tales como el retculo
endoplasmtico, mitocondria, cloroplastos y las vacuolas
(Fig. 2).

La distribucin intracelular del Ca juega un papel crtico en el

funcionamiento celular. Cantidades excesivas de Ca2+ libre en el
citoplasma son perjudiciales para la clula (9, 33). A niveles altos, el
Ca2+ reacciona con fosfato inorgnico para formar un precipitado
insoluble. Adems, si las concentraciones de Ca2+ citoslico fueran
permitidas para alcanzar los niveles milimolares presentes en la regin
de la pared celular, el metabolismo energtico basado en el fosfato sera
inhibido seriamente.
Las plantas han desarrollado un mecanismo para eliminar el exceso de
Calcio del citoplasma y mantener la concentracin de Ca2+ libre en un
rango submicromolar. Este mecanismo requiere un bombeo activo de
Calcio fuera del citoplasma.
En contraste con el nivel intracelular de calcio libre, el cual es
submicromolar, la concentracin del catin divalente, muy parecido al
Mg2+, est en un rango milimolar. A pesar de esta alta concentracin de
Mg2+ en el citoplasma, los procesos celulares con frecuencia disparan
una selectividad mayor por el calcio. Esto sugiere que el calcio acta
como un mensajero secundario en la respuesta de los tejidos vegetales a
las seales externas (9, 15, 32-35, 41).
Para comprender el papel preciso del Ca en estos procesos, uno debe
ser capaz de medir exactamente los cambios de la concentracin del
calcio libre citoplasmtico. El descubrimiento de los indicadores
fluorescentes de calcio tales como quin-2 y fura-2, han hecho posible
monitorizar las concentraciones de calcio libre (45, 47, 51). Estos
materiales trabajan muy bien en clulas animales. Sin embargo, en
clulas vegetales existen muchos obstculos para conseguirlo antes que
los cambios rpidos y transitorios en el Ca2+ libre sean determinados
exactamente.
Se conoce que un aumento de 10-veces en la concentracin del
mensajero (Ca) es necesaria para alterar el estado de una protena
control tal como la calmodulina.

CALMODULINA
La calmodulina es una protena calcio-modulada que ha sido aislada y
caracterizada a partir de una gran variedad de tejidos animales y
vegetales y est en cantidades ubicuas en eucariotas (1, 5).
Las propiedades fsicas y bioqumicas de las calmodulinas aisladas de
una variedad de fuentes son similares. Esta similitud sugiere un papel
fundamental para la calmodulina en los procesos de mediacin del Cadependiente tanto en plantas como en clulas animales (1, 5, 9, 15, 22,
33, 35, 41).
Hasta el descubrimiento de los enzimas dependientes de Ca y
calmodulina (1, 15, 18, 19, 41, 48) existe un inters creciente en el
estudio del papel del calcio como un mensajero celular en las plantas.
Siempre que existe un incremento transitorio en la concentracin de
Ca2+ citoplasmtico, el Ca2+ se une a la calmodulina, por tanto
activndola. El complejo calcio-calmodulina despus se une al enzima,
por ltimo dirigindolo a la respuesta (Fig. 3).
FOSFORILACIN PROTEICA MEDIADA POR CALCIO
En los ltimos aos, el mayor inters ha sido dirigido a la modificacin
post-traductora de las protenas (46) por una fosforilacin proteica
regulada por calcio en plantas y animales (6, 37, 48-50).
El papel de las protenas kinasas en la fosforilacin y las fosfatasas en
la desfosforilacin ha sido demostrado tanto en animales como en
plantas (6, 33). La fosforilacin proteica reversible ofrece una nica
ventaja en la regulacin celular, ya que un enzima activado despus de
la fosforilacin por una protena kinasa puede ser inactivado como un
resultado de la desfosforilacin por una fosfatasa.
Cuando la concentracin de calcio intracelular aumenta en respuesta a
estmulos externos, las protenas kinasas dependientes de calcio y
calmodulina son activadas, resultando la fosforilacin proteica.
Extractos de varios tejidos vegetales han demostrado la fosforilacin
dependiente de calcio y calmodulina de las protenas (1, 18, 19, 35, 38,
48, 50). Un ejemplo de la fosforilacin dependiente de Ca en coleoptilos
de avena a niveles micromolares de calcio libre se muestra en la Fig.4.
PAPEL DEL CALCIO EN LA ACCIN HORMONAL EN PLANTAS
Estudios previos de Poovaiah y Leopold (26-29) y Leopold et al. (12) han
demostrado que el calcio tiene efectos modificadores fuertes en las
funciones de cada cinco de las hormonas vegetales conocidas, en

algunas instancias amplificando la respuesta hormonal y en otras

suprimindola.
Recientemente, el papel del calcio en la mediacin del efecto citokinina
fue estudiado para depleting Ca de discos de hoja de maz por un
pretratamiento de EGTA y despus transfiriendo los discos a un medio
que contiene citokinina con o sin calcio.
Despus del pretratamiento de EGTA, la citokinina no es muy efectiva
en retrasar la prdida de la protena, un parmetro clave de la
senescencia (Fig.5). El efecto de la citokinina es restaurado, sin
embargo, por la adicin de Ca. Este efecto sugiere que la respuesta a la
citokinina es mediada por el calcio.
Investigaciones previas por Saunders y Hepler (42) han mostrado que el
ionforo de Ca A23187 podra imitar el efecto de la citokinina en la
formacin de brotes de Funaria. Sus resultados indican que la pareja
estmulo-respuesta involucra un flujo de Ca dentro del citoplasma.
Los antagonistas de la calmodulina inhiben la elongacin inducida por
auxina en maz y el coleptilos de avena, sugiriendo la involucracin del
calcio y la calmodulina en la elongacin inducida por auxina (36).
Evidencias recientes indican que los cambios regulados por auxina y
dependientes de calmodulina en la fosforilacin proteica (39), los cuales
enfatizan ms el significado global del control hormonal del calcio y de
la calmodulina en plantas. La tuberizacin en patata ha sido tambin
mostrada por estar influenciada por el Ca. (2).
El cido abcsico (ABA) es conocido por inducir el cierre estomatal (13).
Estudios recientes muestran una interaccin sinrgica entre el Ca2+ y el
ABA en prevencin de la apertura estomatal (10). Estos resultados son
consistentes con la hiptesis que el ABA aumenta la permeabilidad de
la clula guardia al Ca2+. El calcio por tanto podra operar como un
mensajero secundario para regular los flujos inicos que determinan la
apertura de la clula guarda.
PAPEL DE LOS FOSFOINOSITOLES-DERIVADOS EN EL SISTEMA
MENSAJERO CLCICO
En los ltimos aos, se ha prestado una gran atencin al movimiento
de los fosfoinositoles-derivados en la membrana. El diagrama
esquemtico mostrado en la Fig. 6 ilustra el movimiento de los
fosfoinositidos y la movilizacin del calcio guiando a la respuesta
celular.
Como se indica en este modelo, el estmulo primario tales como
hormonas, luz y gravedad interacta con el receptor. Esta interaccin
resulta en la activacin de la fosfolipasa C y la adhesin de los lpidos

fosfatidilinositol-4,5-bifosfato
trifosfato inositol (3, 33, 34).

de

la

membrana

en

diacilglicerol

Despus el inositol trifosfato libera Ca del retculo endoplasmtico (7,

40). Esta liberacin de Ca puede activar los enzimas dependientes de
calmodulina, tales como protena kinasa C, finalmente guiando a la
fosforilacin proteica y a la respuesta celular (3, 16, 33, 34).
La presencia de fosfoinositoles-derivados ha sido mostrada en tejidos
vegetales (4), y las evidencias recientes sugieren que algunas similitudes
existen en la ruta de la fosforilacin en plantas y animales (33, 34).
La movilizacin del calcio inducido por inositol trifosfato de la fraccin
microsomal ha sido observada en nuestro laboratorio (40) y en otros (7).
La protena kinasa C ha sido recientemente publicada en plantas (43).
Tambin tenemos la evidencia para mostrar la involucracin de los
fosfoinositoles-derivados en la promocin de la fosforilacin de
protenas solubles (33).
Se necesita mayor informacin para clarificar el significado de esta ruta
en plantas.
CONCLUSIN
El mecanismo de la accin del Ca est justo comenzando a
comprenderse a nivel molecular. Un dramtico despliegue de
informacin durante los pasados 5 aos sugiere que el Ca no es solo un
micronutriente, tambin tiene un control metablico mayor y un control
del desarrollo en plantas.
Una comprensin detallada de los procesos bioqumicos mediados por
calcio y calmodulina ayudaran a entender los procesos involucrados en
el crecimiento y desarrollo de la planta. Aunque los procesos
bioqumicos mediados por calcio y calmodulina as como el movimiento
de los fosfoinositoles-derivados ha sido estudiado mejor en sistemas
animales, tales estudios estn comenzando en plantas.
Sin embargo, la regulacin de los procesos de crecimiento de la planta
por Ca apunta a un papel de mensajero secundario para el calcio,
similar al ya conocido en los sistemas animales. La necesidad en la
investigacin en plantas es la informacin a nivel molecular de cmo el
transporte de Ca desde las membranas, orgnulos, y pared celular est
controlado y cuales son los sucesos iniciales que desencadenan los
procesos bioqumicos que dependen de los cambios de la concentracin
de calcio citoplasmtico.

Necesitamos tcnicas perfeccionadas para medir precisamente los

cambios transitorios en los niveles de calcio libre citoplasmtico. La
evidencia acumulada sugiere un papel mayor para el calcio en la
funcin celular y en la traduccin de las seales en plantas.

FIGURAS INCLUIDAS EN EL TEXTO

LITERATURA CITADA EN EL TEXTO