PRACTICA DE LABORATOTIO Nº 01

EXTRACCIÓN Y RECONOCIMIENTO DE PIGMENTOS VEGETALES.

Alumno (a): …………………………………………….……… Grado y Sección:

Docente: Díaz Ramos, Richard Antonio

I. INTRODUCCION
La clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde y que
absorbe la luz necesaria para la fotosíntesis. La clorofila absorbe principalmente luz
violeta roja y azul y refleja luz verde. La abundancia de clorofila en hojas y su
ocasional presencia en otros tejidos vegetales es la causa de que esas partes de las
plantas aparezcan verdes, pero en algunas hojas la clorofila es enmascarada por
otros pigmentos. La extracción y reconocimiento de estos pigmentos es interesante
para es estudio y conocimiento de sus propiedades.

II. COMPETENCIAS
 Comprende el papel imprescindible de los pigmentos vegetales,
fundamentalmente la clorofila, en el metabolismo vegetal.
 Usa técnicas de separación de sustancias.
 Reconoce los principales pigmentos de las plantas, a partir de sus propiedades
diferenciales respecto al color y la solubilidad.

III. MATERIAL

 Diferentes tipos de hojas sin nerviaciones.

 Diferentes tipos de pétalos sin flores.
 Mortero.
 Papel de filtro.
 Embudo.
 Vaso de precipitados.
 Gradilla.
 Tubos de ensayo.
  Cápsula de Petri.

REACTIVOS
• Benceno o gasolina.
• Alcohol etílico.
• Agua destilada
• Eter etílico.
• NaOH al 20 %

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Extracción de los pigmentos
1. En un mortero colocamos arena lavada, unos 10 ml de etanol y varios trozos de
hojas sin nerviaciones.
2. Trituramos sin golpear hasta que el líquido adquiera un color verde.
3. Filtraremos la solución usando un papel de filtro y la recogeremos en un vaso de
precipitado.
4. Obtendremos al final una disolución en alcohol de clorofila bruta. Después haremos
lo siguiente:

Observación del fenómeno de fluorescencia

Colocando el vaso frente a la luz se puede comprobar que la solución de pigmentos
presenta color verde; pero cuando el vaso, la luz y nuestra vista no forman una línea
recta, o iluminando fuertemente, puede observarse que la coloración adquiere
tonalidades de color púrpura. Este fenómeno denominado fluorescencia se debe a la
emisión de la luz absorbida previamente por las clorofilas.

Solubilidad diferencial de los pigmentos disueltos

De la solución de pigmentos contenida en el vaso se pondrán 8 ml en dos tubos de
ensayo (a y b).
En el tubo “a” añadiremos 4 ml de éter y agitaremos suavemente durante 30 s. A
continuación añadiremos 4 ml de agua destilada volviendo a agitar con suavidad.
Dejaremos reposar en la gradilla durante 3 min. Anotar lo que se observa.
En el tubo “b” añadiremos 4 ml de éter y agitaremos suavemente durante 30 s. A
continuación añadiremos 2 ml de NaOH al 20 % y se agitará suavemente.
Dejaremos reposar en la gradilla durante 10 min. El NaOH reaccionará con el grupo
fitol de las clorofilas. saponificandolo y provocando la precipitación de estos pigmentos.

Análisis capilar de los pigmentos disueltos

De la solución de pigmentos contenida en el vaso se pondrá en una cápsula de Petri una
cantidad suficiente que alcance unos 2 mm de altura. Los distintos pigmentos de la
mezcla se separan a partir de las diferentes velocidades con que se desplazan en un
medio poroso atravesado por el disolvente.
En la cápsula de Petri colocaremos verticalmente, durante unos 10 minutos, una tira de
papel de filtro doblada en V, de forma que se mantenga perpendicular a la placa. El
papel no debe tocar la pared de la cápsula. Aparecerán unas bandas, de arriba a abajo:
frente del disolvente, xantofilas clorofila b (verde oscura), clorofila a (verde azulada),
carotenos, restos de bandas anteriores no separadas
Concentración de la clorofila bruta
Ponemos en un tubo de ensayo una cantidad de la solución de pigmentos contenida en el
vaso de precipitado. Añadimos un poco de benceno o gasolina y agitamos. Luego
dejamos el tubo en reposo. Anota lo observado.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES
Describir todo lo que se ha observado en la experiencia y contestar a las siguientes
preguntas.
• ¿Cuántos métodos de separación de componentes de una mezcla hemos utilizado en
esta práctica?
• ¿Qué tipos de mezclas se han obtenido?
• ¿Por qué los pigmentos vegetales han pasado de la disolución de acetona o alcohol
hasta la disolución de gasolina o benceno?
• ¿La cromatografia será igual en cualquier especie vegetal?

I. INTRODUCCIÓN
Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculas
químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez.
El color de un pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes
de onda de la luz y de la reflexión de otras. Constituyen el sustrato fisicoquímico
 donde se asienta el proceso fotosintético.
Hay diversas clases de pigmentos:
• Clorofilas (a, b, c, d y bacterioclorofilas) de coloración verde.
• Carotenoides (carotenos y xantofilas) de coloración amarilla y roja.
• Ficobilinas de coloración azul y roja presentes en las algas verdeazuladas, que
comprenden el filo de los Cianofitos.

La Clorofila, es el pigmento que da el color verde a los vegetales y que se encarga de

absorber la luz necesaria para realizar la fotosíntesis, proceso que posibilita la síntesis
de sustancias orgánicas a partir de las inorgánicas (CO2, H2O y sales minerales),
mediante la transformación de la energía luminosa en energía química. La clorofila
absorbe sobre todo la luz roja, violeta y azul, y refleja la verde. Generalmente la
abundancia de clorofila en las hojas y su presencia ocasional en otros tejidos vegetales,
como los tallos, tiñen de verde estas partes de las plantas. En ocasiones, la presencia de
clorofila no es tan patente al descomponerse y ocupar su lugar otros pigmentos de
origen isoprénico también presentes en los plastos como son los carotenos (alfa, beta y
ganma) y las Xantofilas.
Las algas verdeazuladas contienen la misma clase de clorofila que las plantas
superiores, pero la ausencia de cloroplastos hace que se distribuya por toda la célula.
Con frecuencia otros pigmentos como la ficobilina (presente también en los rodófitos)
enmascaran la clorofila y confieren a estas a las células, un color azulado o rojizo. Su
función es captar la luz y transferirla a la clorofila.
Las clorofilas presentan una estructura molecular de gran tamaño de tipo porfirinico,
estando formada en su mayor parte por carbono e hidrógeno; constituyendo un anillo
tetrapirrolico ocupado en el centro por un único átomo de magnesio, rodeado por un
grupo de átomos que contienen nitrógeno. Del anillo parte una larga cadena de 20
átomos de carbono, denominada fitol que constituye el punto de anclaje de la molécula
de clorofila a la membrana interna del cloroplasto, el orgánulo celular donde tiene lugar
la fotosíntesis.
Cuando la molécula de clorofila absorbe un fotón, sus electrones se excitan elevándose
a un nivel de energía superior. Esto es el punto de partida en el cloroplasto de una
secuencia compleja de reacciones químicas que dan lugar al almacenamiento de energía
en forma de enlaces químicos.
Los diversos tipos de clorofilas existentes, se diferencian en pequeños detalles de su
estructura molecular y que absorben longitudes de onda luminosas algo distintas.
Por cromatografia se pueden separar cuatro clorofilas distintas:
• La clorofila A constituye de manera aproximada el 75% de toda la clorofila de las
plantas verdes, estando presente también en las algas verdeazuladas y en células
fotosintéticas más complejas.
• La clorofila B es un pigmento accesorio presente en vegetales y otras células
fotosintéticas complejas; absorbe luz de una longitud de onda diferente y transfiere la
energía a la clorofila A, que se encarga de transformarla en energía química.
• Las clorofilas C y la D son propias de algas y bacterias.
Las clorofilas actúan como catalizadores, es decir, como sustancias que aceleran o
facilitan las reacciones químicas, pero que no se agotan en las mismas. Entre los
carotenoides hay también muchos catalizadores e intervienen como pigmentos
accesorios en la fotosíntesis, transfieren a la clorofila la energía de la luz que absorben
para su conversión en energía química.