FOTOCOLORIMETRIA

Midiendo la absorcin de la luz

INTRODUCCION
Qu es la luz?
La luz es una radiacin que se propaga en forma de ondas. Las ondas que se pueden propagar en el vaco se denominan
ONDAS ELECTROMAGNTICAS. La luz es una radiacin electromagntica. Las ondas electromagnticas se propagan
en el vaco a la velocidad de 300000 km/s, que se conoce como "velocidad de la luz en el vaco" y se simboliza con la
letra c (c = 300000 km/s). La luz monocromtica es aquella que solo esta compuesta por componentes de un solo color. (A
diferencia de la luz blanca, que esta formada por muchos componentes). Es decir, que tiene una sola longitud de onda,
correspondiente al color. Ejemplo de ello son los leds, diodos lser, diodos infrarrojos, etc.
En espectrofotometra, la absorbancia es definida como:

es la intensidad de la luz con una longitud de onda especfica

transmitida)

luego de atravesarla la muestra (intensidad de la luz

es la intensidad de la luz antes de entrar a la muestra (intensidad de la luz incidente)

la absorbancia es proporcional al grosor de una muestra y la concentracin de la sustancia en sta, en contraste a
la transmitancia I / I0, la cual vara exponencialmente con el grosor y la concentracin.
La relacin de la absorcin de la luz en funcin de la concentracin se conoce como ley de Lambert-beer. La absorcin
de una solucin de cierta concentracin puede ser debida a as siguientes causas: 1) absorbe el diluyente
fundamentalmente y no la sustancia diluida (soluto); 2) no absorbe el diluyente pero si el soluto que forma la solucin 3)
absorben ambos. En el caso de que el diluyente no abosorba o absorba muy poco, la intensidad emergente (i) depende
de la concentracin de la solucin; a mayor concentracin , mayor ser la absorcin y menor ser la intensidad
emergente. Para soluciones diluidas (solucin muy alejada de la saturacin, poco soluto ) la ley de Lambert-beer se
-abc
expresa de la siguente manera :
0

I=I *e

I,I0, son las intensidades saliente y entrante respectivamente.

c es la concentracin del absorbente en el medio.
a : es el coeficiente de absorcin
b : el espesor

Fijando las condiciones de trabajo, los trminos a y b son constantes.

Para facilitar la tarea en el laboratorio se linealiza la funcin exponencial de la siguiente manera:
Siendo I=I0.e-abc y definiendo Transmitancia como I/ I0=T (transmitancia)
Quedar I/ I0=e-abc, o tambin I/ I0=e abc
Definiendo Absorbancia como el logaritmo decimal de la inversa de la transmitancia: log I/ I0 = A (absorbancia), es: log I/ I0 =
a.b.c. log e
donde el log e: 0,45 y el producto de a x b x 0,45 da un valor constante que representaremos con la letra P.
A = a.b.0,45.c (A no tiene unidades).
Finalmente ser:
A = P.c
Si representamos esta funcin en un grfico de A (absorbancia) versus C (concentracin), obtendremos una recta que pasa
por el origen. Este tipo de grfico permite calibrar el fotocolormetro para una determinada solucin diluida (por ejemplo urea
con agua) y para la misma longitud de onda.
La pendiente de este grfico corresponde al valor de P de la expresin matemtica. El valor P lleva unidades de
(concentracin)-1 y depende de la longitud de onda, del soluto y del espesor del tubo. El factor del fotocolormetro para una
determinada sustancia es la inversa de la pendiente. Sus unidades corresponden a unidades de concentracin
A=P. C A. 1/P =C A.f = C C= A. f
El fotocolormetro y el espectrofotmetro han llegado a convertirse en aparatos esenciales en todo laboratorio analtico.
Ambos se usan para determinar la concentracin de una sustancia diluida y cuyo soluto es coloreado. Si su soluto no es
coloreado, la solucin debe adquirir color por reaccin frente a un reactivo especfico. As pueden medirse elementos en
sangre y orina, sustratos o enzimas, actividad enzimtica, etc.
El fotocolormetro dispone de una lmpara de filamento como fuente luminosa. Para seleccionar la banda de longitudes de
onda deseada se utiliza un juego de filtros. Existen equipos de selector manual y otros que elijen el filtro ms adecuado para

la solucin ya que la sensibilidad de la medicin depende fundamentalmente del filtro usado. Generalmente se prefiere
emplear el color complementario al de la solucin problema y que d lugar a una absorbancia mxima.
La radiacin transmitida por la lmpara es detectada por una clula fotoelctrica que genera una diferencia de potencial que
es proporcional a la intensidad de la radiacin.
Objetivo:
Determinar la curva de calibracin del fotocolormetro y en base a ella determinar la concentracin de una solucin incgnita
de azul de metileno.
Materiales:
Fotocolormetro.
Tubos de ensayo.
Soluciones de azul de metileno.
Pipeta
Esquema del equipo utilizado:

Mtodos:
Primero se debe calibrar el fotocolormetro, para eso se debe poner un blanco, en nuestro caso agua destilada y ajustarlo en
absorbancia nula (0).
Para preparar el blanco se tomo 4 ml de agua destilada con una pipeta se introdujo en el portatubo del fotocolormetro con el
fin de calibrarlo a cero (0 de Absorbancia). Es importante aclarar que el blanco es el conjunto de sustancias de la solucin que
excluye aquella de la cual se quiere averiguar su absorbancia.
Con una pipeta se extrae 4ml de una solucin de azul de metileno (solucin testigo) de concentracin conocida: 0,08 g/l y se
la coloc en el portatubos obteniendo la absorbancia de ella.
En la siguiente medicin se deba obtener la absorbancia de una solucin de azul de metileno con concentracin de 0,04 g/l,
entonces se retir la mitad de la solucin testigo anterior y se agreg 2 ml de solvente (agua) para diluirlo y as obtener la
solucin requerida.
Una vez diluida y luego de calibrar nuevamente a cero el fotocolormetro con el blanco, se introdujo la solucin en el equipo y
se anotaron los datos arrojados.
Lo mismo se hizo para determinar la absorbancia de una solucin de azul de metileno de concentracin: 0,02g/l.
Por ultimo, se tom 4ml de la solucin incgnita con la pipeta, se lleno el portatubo, se introdujo en el equipo y se registr la
absorbancia.

CONCLUSION
Luego de realizar la experiencia de laboratorio, con los datos obtenidos pudimos realizar la curva de calibracin de la
concentracin versus la absorbancia de soluciones de azul de metileno.
A partir de la grafica realizada, obtuvimos la concentracin de la solucin incgnita conociendo su absorbancia. La misma fue
de aproximadamente 0,062 g/l. Analticamente, se obtuvo como concentracin de la solucin incgnita 0,0609 g/l. La mnima
diferencia entre estos dos valores puede deberse a factores experimentales, tales como asegurarse de que el equipo se
encuentre bien calibrado, tomar los tubos por la parte rugosa y que dichos tubos se encuentren correctamente enjugados con
agua destilada.