I Objectif de la validation

Mtrologie
Chimiomtrie

Selon l'ICH (International Conference on Harmonization of Technical

Requirements for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use.
Genve) l'objectif de la validation d'une procdure analytique est de
dmontrer qu'elle est approprie l'usage auquel elle est destine.

VALIDATION INTRALABORATOIRE
DES METHODES D'ANALYSE
Gnralits

M1S2 SM-APC

Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire

I Objectif de la validation

Validation interlaboratoire
Rptabilit
Reproductibilit

M1S2 SM-APC

Obligatoire pour le dossier d'AMM :

(module 3 (information chimique, pharmaceutique et biologique pour les mdicaments
contenant des substances chimiques et/ou biologiques actives) des exigences du dossier
standardis de demande dautorisation de mise sur le march (JO directive 2003/63/CE))

Slection
Choix des analytes
Type de mthode

Utilisation en routine
Essais d'aptitude
Cartes de contrle

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II Diffrents critres de validation

Problme analytique

Cycle de vie d'une

mthode d'analyse

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-preuves d'identification
-Dosage quantitatif des impurets. Vrification des teneurs limites des
impurets.
-Dosage de la partie active ou dune ou de plusieurs autres composantes de
la substance mdicamenteuse ou du produit fini.
Non ncessaire si mthode de la Pharmacope

Dveloppement
Rglage instruments
Mode opratoire normalis

Validation intralaboratoire
Linarit
Justesse
Fidlit (rptabilit interne)
Spcificit
Limite de dtection
Limite de quantification
Domaine d'utilisation
Robustesse

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Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire

II Diffrents critres de validation

II Diffrents critres de validation

Les diffrentes critres de validation d'une mthode d'analyse

Les diffrentes critres de validation d'une mthode d'analyse (suite)

Slectivit, Spcificit

justesse et fidlit

Linarit
Justesse
Fidlit

rptabilit
fidlit intermdiaire
reproductibilit

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II Diffrents critres de validation

M1S2 SM-APC

Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire

II Diffrents critres de validation

Les diffrentes critres de validation d'une mthode d'analyse (suite)

Caractristiques valider

Limite ou seuil de dtection

Limite ou seuil de dosage
Domaine d'utilisation
Robustesse

(1) Si la reproductibilit est value, il n'est pas ncessaire de dterminer la fidlit intermdiaire.
(2) Si la mthode est insuffisamment spcifique, cette dficience peut tre compense par la spcificit d'une ou de plusieurs autres preuves complmentaires
auxquelles l'chantillon est soumis.
(3) parfois ncessaire

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M1S2 SM-APC

Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire

II Diffrents critres de validation

II-1

II Diffrents critres de validation

Spcificit

II-1

"La spcificit est la proprit qui fait quune mthode danalyse rend compte
sans ambigut de la substance analyse en prsence dautres composantes
normalement prsentes. Ces dernires peuvent inclure des impurets, des produits
de dgradation, la matrice, etc.
Si une mthode danalyse est insuffisamment spcifique, cette dficience peut tre
compense par la spcificit de lune ou de plusieurs des autres analyses
complmentaires. (ICH Q2R1)"
"Slectivit : proprit d'un systme de mesure, utilisant une procdure
de mesure spcifie, selon laquelle le systme fournit des valeurs mesures
pour un ou plusieurs mesurandes, telles que les valeurs de chaque
mesurande sont indpendantes des autres mesurandes ou d'autres
grandeurs dans le phnomne, le corps ou la substance en cours d'examen
(VIM 2008) "
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Spcificit (suite)

-indispensable
-absence d'interfrence entre l'analyte et les composs de la matrice
-dpend de la matrice
-dpend de la mthode utilise (prparation des chantillons, dtection
slective)
-rsultats d'analyses identiques en prsence d'ajouts de substances interfrentes
potentielles
-tude d'chantillons "stresss"
-comparaison avec autre mthode valide
-analyse de la puret du pic en chromatographie (paulements, recueil du pic et
analyse, UV avec barrettes de diode, spectromtrie de masse)
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Spcificit : Analyse d'chantillons "stresss"

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10

Spcificit : puret du pic chromatographique (1)

- symtrie du pic

- "re"chromatographie du pic suspect

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11

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12

II Diffrents critres de validation

Spcificit : puret du pic chromatographique (2)

- utilisation d'un dtecteur barettes de diodes (idem avec spectromtrie de
masse fragmentation)

II-2

Domaine d'utilisation

"Le domaine dutilisation dune mthode danalyse est lintervalle entre la

concentration la plus leve et la concentration la plus faible (quantits) de la
substance analyse dont on a dmontr quelles pouvaient tre dtermines
avec un degr acceptable de fidlit, de justesse et de linarit. (ICH Q2R1)"

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II Diffrents critres de validation

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14

Exemple de non linarit

II-3

Linarit
"La linarit dune mthode danalyse est sa capacit de donner des
rsultats qui sont directement ( lintrieur de certaines limites) proportionnels
la concentration (quantit) de la substance analyse dans un chantillon.
(ICHQ2R1)"

Dosage immunologique de l'oestradiol

ELISA comptitif
Courbe d'talonnage
Absorbance 450nm en fonction de la concentration en oestradiol

- dosage de la teneur en PA et impurets

- value sur l'ensemble du domaine d'utilisation
- sur PA et/ou FPR
- examen visuel de la courbe
- outil statistique de rgression
- transformation mathmatique ventuelle autorise
- coefficient de corrlation, ordonne l'origine, somme des carrs des rsidus,
graphique des rsidus, graphique
- non linarit possible mais justifier (test immunologique par ex.)
- au moins 5 concentrations espacer rgulirement sur tout le domaine d'utilisation
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15

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16

II Diffrents critres de validation

II Diffrents critres de validation

II-4 Justesse
"La justesse correspond au degr de concordance entre la valeur de la mthode
obtenue et la valeur de rfrence ou la valeur considre comme vritable par
convention. La justesse est aussi dsigne comme lauthenticit. La justesse doit tre
vrifie dans le domaine dutilisation de la mthode danalyse. (ICHQ2R1)"
"justesse de mesure, justesse : troitesse de l'accord entre la moyenne
d'un nombre infini de valeurs mesures rptes et une valeur de rfrence
NOTE 1 La justesse de mesure n'est pas une grandeur et ne peut donc pas
s'exprimer numriquement, mais l'ISO 5725 donne des caractristiques pour
l'troitesse de l'accord. NOTE 2 La justesse de mesure varie en sens
inverse de l'erreur systmatique mais n'est pas lie l'erreur alatoire.
NOTE 3 Il convient de ne pas utiliser le terme exactitude de mesure pour
la justesse de mesure et vice versa. (VIM 2008)"

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II-4

- dosage de la teneur en PA et impurets

- value sur l'ensemble du domaine d'utilisation
II-4-1 Teneur en PA
II-4-1-1 Matire premire
- application mthode une substance de puret connue
- comparaison rsultat avec autre mthode
II-4-1-2 Produit fini
- application mthode FPR contenant une quantit connue de PA
- ajout de PA dans le produit fini
- comparaison rsultat avec autre mthode

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II Diffrents critres de validation

II-4

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Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire

18

II Diffrents critres de validation

Justesse (suite)
II-4-2 Dtermination quantitative des impurets
- application mthode chantillons enrichis de quantits connues
d'impurets
- comparaison rsultat avec autre mthode
- indiquer clairement comment les impurets sont doses
(individuellement ou globalement, en pourcentage du PA en poids
ou en pourcentage d'aire)
II-4-3 Recommandations concernant les donnes
- au moins 9 rsultats (3 concentrations avec 3 chantillons
chacune)
- expression de la justesse : pourcentage de recouvrement avec
intervalle de confiance
- recouvrement calcul proche de 100%
- recouvrement variable en fonction de la teneur

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Justesse (suite)

19

II-4

Justesse (suite)
II-4-3 Recommandations concernant les donnes (suite)

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20

II Diffrents critres de validation

II Diffrents critres de validation

II-5

II-5

Fidlit

"La fidlit dune mthode correspond au degr daccord (degr de dispersion)

entre les rsultats des mesures obtenues par lanalyse individuelle de plusieurs
prlvements dun mme chantillon homogne, prlevs dans des conditions
prescrites. La fidlit peut svaluer trois niveaux: rptabilit, fidlit
intermdiaire et reproductibilit.
Lvaluation de la fidlit doit se faire au moyen dchantillons homognes et
authentiques. Sil est impossible dobtenir des chantillons homognes, on peut
utiliser des chantillons prpars artificiellement ou une solution dchantillon.
La fidlit est gnralement exprime par la variance, lcart-type ou le
coefficient de variation dun ensemble de mesures. (ICHQ2R1)"

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21

Fidlit (suite)

"fidlit de mesure, fidlit : troitesse de l'accord entre les indications

ou les valeurs mesures obtenues par des mesurages rpts du mme
objet ou d'objets similaires dans des conditions spcifies NOTE 1 La
fidlit est en gnral exprime numriquement par des caractristiques
telles que l'cart-type, la variance ou le coefficient de variation dans les
conditions spcifies. NOTE 2 Les conditions spcifies peuvent tre, par
exemple, des conditions de rptabilit, des conditions de fidlit
intermdiaire ou des conditions de reproductibilit (voir ISO 5725-3:1994).
NOTE 3 La fidlit sert dfinir la rptabilit de mesure, la fidlit
intermdiaire de mesure et la reproductibilit de mesure. NOTE 4 Le terme
fidlit de mesure est quelquefois utilis improprement pour dsigner
l'exactitude de mesure. (VIM 2008)"
- dosage de la teneur en PA et impurets
- value sur l'ensemble du domaine d'utilisation ou 100% de la teneur
attendue
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II Diffrents critres de validation

Les diffrents niveaux de fidlit

II-5-1

Rptabilit

"La rptabilit est une expression de la fidlit de lanalyse lorsque celle-ci est
reprise dans les mmes conditions de ralisation, aprs un court intervalle de
temps. La rptabilit est aussi dsigne fidlit intra-analyse.(ICHQ2R1)"

Reproductibilit

"condition de rptabilit : condition de mesurage dans un ensemble

de conditions qui comprennent la mme procdure de mesure, les mmes
oprateurs, le mme systme de mesure, les mmes conditions de
fonctionnement et le mme lieu, ainsi que des mesurages rpts sur le
mme objet ou des objets similaires pendant une courte priode de temps.
NOTE 2 En chimie, on utilise quelquefois le terme condition de fidlit
intra-srie pour dsigner ce concept. (VIM2008)"

Fidlit intermdiaire

Rptabilit

Fidlit instrumentale

- au moins 9 mesures englobant le domaine d'utilisation de la mthode (3

concentrations de 3 chantillons chacune
ou
- au moins 6 mesures d'une concentration 100% de la teneur escompte
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22

23

M1S2 SM-APC

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24

II Diffrents critres de validation

II Diffrents critres de validation

II-5-2 Fidlit intermdiaire
"La fidlit intermdiaire correspond aux variations survenant dans un mme
laboratoire : analyses effectues des jours diffrents, par des personnes
diffrentes, au moyen dappareils diffrents, etc. (ICHQ2R1)"
"condition de fidlit intermdiaire : condition de mesurage dans un
ensemble de conditions qui comprennent la mme procdure de mesure,
le mme lieu et des mesurages rpts sur le mme objet ou des objets
similaires pendant une priode de temps tendue, mais peuvent
comprendre d'autres conditions que l'on fait varier NOTE 1 Les conditions
que l'on fait varier peuvent comprendre de nouveaux talonnages,
talons, oprateurs et systmes de mesure. NOTE 2 Il convient qu'une
spcification relative aux conditions contienne, dans la mesure du
possible, les conditions que l'on fait varier et celles qui restent inchanges.
NOTE 3 En chimie, on utilise quelquefois le terme condition de fidlit
inter-srie pour dsigner ce concept. (VIM 2008) "
- influence de phnomnes alatoires sur la fidlit
- plan d'exprience ventuellement
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II-5-3 Reproductibilit
"La reproductibilit correspond la concordance entre laboratoires (travaux de
collaboration visant gnralement luniformisation de la mthodologie).
(ICHQ2R1)"
"condition de reproductibilit : condition de mesurage dans un
ensemble de conditions qui comprennent des lieux, des oprateurs et des
systmes de mesure diffrents, ainsi que des mesurages rpts sur le
mme objet ou des objets similaires NOTE 1 Les diffrents systmes de
mesure peuvent utiliser des procdures de mesure diffrentes. NOTE 2 Il
convient qu'une spcification relative aux conditions contienne, dans la
mesure du possible, les conditions que l'on fait varier et celles qui restent
inchanges. (VIM 2008)"
-s'value lors d'analyses interlaboratoires
-non value dans un dossier d'AMM
II-5-4

25

- cart-type, cart-type relatif (CV%, RSD), intervalle de confiance.

M1S2 SM-APC

II Diffrents critres de validation

II-6

II-6

II-6-1 Sensibilit

26

Sensibilit, limites de dtection, de quantification

II-6-2

"sensibilit : quotient de la variation d'une indication d'un systme de

mesure par la variation correspondante de la valeur de la grandeur mesure
(VIM 2008)"

Limite de dtection (LD)

"La limite de dtection dune mthode danalyse individuelle correspond la plus

faible quantit de la substance analyse que la mthode permet de dtecter, sans
ncessairement fournir la valeur exacte. (ICHQ2R1)"
"limite de dtection : valeur mesure, obtenue par une procdure de
mesure donne, pour laquelle la probabilit de dclarer faussement
l'absence d'un constituant dans un matriau est , tant donne la
probabilit de dclarer faussement sa prsence NOTE 1 L'UICPA
recommande des valeurs par dfaut de et gales 0,05. NOTE 3 Le
terme sensibilit est proscrire au sens de limite de dtection. (VIM
2008)"

Pente de la droite d'talonnage

Dtermination non obligatoire

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II Diffrents critres de validation

Sensibilit, limites de dtection, de quantification

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Recommandations concernant les donnes

27

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28

Limite de dtection : examen de l'enregistrement graphique

(CLHP par ex)

II Diffrents critres de validation

II-6

Sensibilit, limites de dtection, de quantification

II-6-2

- blanc d'analyse hmax

Limite de dtection (LD) (suite)

- paramtre des essais limites

- plusieurs mthodes proposes

valuation visuelle

examen de l'enregistrement

valeurs du blanc

droite d'talonnage
- indication de la limite de dtection en prcisant la mthode utilise
(joindre l'enregistrement graphique le cas chant)

- injection de dilutions
- dtermination de la limite de dtection

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29

M1S2 SM-APC

II-6

valeurs du blanc
- analyse de n blancs (n6)
- calcul de sblanc
avec p=pente de la droite d'talonnage

droite d'talonnage
- sblanc remplac par l'cart-type de l'ordonne l'origine ou l'cart-type des
rsidus

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30

II Diffrents critres de validation

Limite de dtection : absence d'enregistrement graphique

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31

Sensibilit, limites de dtection, de quantification (suite)

II-6-3 Limite de quantification (LQ)

"La limite de quantification dune mthode danalyse individuelle correspond
la plus faible quantit de la substance analyse que la mthode permet de doser
avec un degr acceptable de fidlit et de justesse. La limite de dosage est un
paramtre des analyses quantitatives des composs prsents en faibles quantits
dans les matrices dchantillon; elle est plus particulirement utilise dans le
dosage des impurets et (ou) des produits de dgradation. (ICHQ2R1)"
-dtermination identique prcdemment en remplaant le facteur 3 ou
3,3 par 10
-indication de la limite de quantification en prcisant la mthode utilise
(joindre l'enregistrement graphique le cas chant)
-vrification de la fidlit et de l'exactitude pour un chantillon de teneur
proche de la LQ (calcul des recouvrement (justesse) et rptabilit (fidlit) sur n
analyses d'un mme chantillon (n6))
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32

II Diffrents critres de validation

II Diffrents critres de validation

II-7 Robustesse
"La robustesse dune mthode danalyse est une mesure de sa capacit
supporter sans consquences de petites variations apportes dlibrment aux
paramtres de la mthode; elle donne une ide de la fiabilit de la mthode aux
conditions normales dutilisation. (ICHQ2R1)"
- effectuer durant la phase de mise au point
- dmonstration de la fiabilit lors de variations de paramtres opratoires
critiques
- lie la notion de reproductibilit
- paramtres opratoires considrer = paramtres quantifiables dont
l'cart par rapport la valeur nominale est susceptible d'influer sur le
rsultat final

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33

II-7

Robustesse (suite)

stabilit des solutions

dure dextraction
CLHP
variations du pH de la phase mobile

variations de la composition de la phase mobile

colonnes diffrentes

temprature

dbit de la phase mobile
CPG
colonnes diffrentes

temprature du four

dbit du gaz vecteur
- grand nombre d'essai raliser technique des plans factoriels (plan
d'exprience) permet de diminuer le nombre (4 essais pour 2 paramtres,
8 essais pour 3 ou 4 paramtres)

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34

II Diffrents critres de validation

II-8

Mtrologie
Chimiomtrie

Vrification de la comptence du systme

"La vrification de la comptence du systme fait partie intgrale de nombreuses

mthodes danalyse. Elle suppose que lquipement et llectronique, les oprations
danalyse et les chantillons constituent parties prenantes du systme et peuvent tre
values comme telles. Les critres en fonction desquels on dtermine si le systme
est appropri dpendent de la mthode valider. Les pharmacopes donnent de plus
amples dtails ce sujet. (ICHQ2R1)"
USP (N, Rs, T, rptabilit injections)
Ph.Eur. (As, rptabilit injections,
quantification)

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FIN DE
VALIDATION INTRALABORATOIRE
DES METHODES DANALYSE
Gnralits

limites

de

dtection

Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire

et

de

35

M1S2 SM-APC

Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire

36