Estudio fitoquimico y

UNIVERSIDAD
microbiolgico
en el extracto
VERACRUZANA
etanlico
Acalypha arvensis
FACULTADde
DE CIENCIAS
QUMICAS
y Acalypha
Alopecuroidaes
QUMICA
INDUSTRIAL

LABORATORIO DE FITOQUMICA
DOCENTE: QI. MARA MAGDALENA LUNA BARRADAS
TCNICO ACADMICO: MC. ODN CASTAEDA CASTRO
INTEGRANTES:
JESUS ANTONIO CRUZ NAVARRO
ALDO MARTNEZ HERNNDEZ
OSCAR ANTONIO SNCHEZ AGUIRRE

MARCO TERICO
Descripcin de Acalypha arvensis Poepp. & Endl

Los autores Standley y Steyermark, 1949; Stevens et al., 2001, describen a la hierba del
pastor como una hierba de vida corta (a veces perennes), a veces leosa en la base, que
llega a medir 70 cm de alto, su tallo es erecto o ascendente, simple o ramificado, con
pelillos cortos (a veces erguidos).

Sus hojas son alternas, rmbico-ovadas, de hasta 7 cm de largo y hasta 4 cm de ancho, con
el pice variable, los mrgenes aserrados, la base redondeada o angostndose, cubiertas de
abundantes o escasos pelillos. Los pecolos de hasta 3 cm de largo, con pelillos como en los
tallos, sin glndulas en el pice. En el tallo, junto a la base del pecolo, se presentan un par
de hojillas llamadas estpulas, muy angostas, de hasta 5 mm de largo.

Sus inflorescencias son Espigas en las axilas de las hojas. Las espigas masculinas estn
ubicadas en la parte media de la planta, de hasta 3 cm de largo y hasta 1.5 mm de grueso,
sobre pednculos de hasta 2.5 cm de largo y cubiertos de pelillos como los de los tallos,
estas espigas estn compuestas de flores masculinas dispuestas en grupitos en las axilas de
brcteas diminutas. Las espigas de la parte superior de la planta (de hasta 8 cm de largo y 2
cm de ancho cuando ya se han desarrollado los frutos) son femeninas, sobre pednculos de
hasta 3 cm de largo y cubiertos de pelillos que a veces son glandulares, estas espigas estn
compuestas por flores femeninas (a veces unas pocas masculinas) dispuestas en grupitos (1
a 3 flores) en las axilas de brcteas, stas densamente agrupadas (ocultando el eje de la
espiga), divididas en 3 a 7 lbulos triangulares con una larga y delgada punta (de hasta 5
mm de largo), cubiertas de pelillos largos y erguidos y pelos glandulares.

Sus flores masculinas son muy pequeas, casi ssiles, el cliz con 4 lbulos, ptalos
ausentes, estambres generalmente 8, libres. Las flores femeninas ssiles, el cliz de 3 a 5
lbulos, ptalos ausentes, el ovario con 2 a 3 estilos de hasta 4 mm de largo, unidos hacia la
base y divididos en delgados segmentos hacia el pice, rojizos. A veces se presentan
algunas flores femeninas ssiles o pedunculadas, que no van acompaadas de brcteas.
El fruto es una cpsula de hasta 1.5 mm de largo y ms o menos 2 mm de ancho, cubierta
de pelillos, y que al madurar se separa en 2 o 3 segmentos (quedando la columnela en el
centro).

Imagen 1. Inflorescencias de Acalypha arvensis Poepp. & Endl

Clasificacin taxonmica de Acalypha arvensis Poepp. & Endl
Se encuentra en el reino Plantae dentro del subreino Traqueobionta (plantas vasculares) con
superdivisin Spermatophyta (plantas con semillas) en la divisin Magnoliophyta (plantas
con flor) dentro de la clase Magnoliopsida, ubicada en la subclase Rosidae y finalmente se
ubica en el orden Euphorbiales.
Distribucin en Mxico

Se ha registrado en Campeche, Chiapas, Colima, Morelos, Oaxaca, Tabasco y Veracruz

(Villaseor y Espinosa, 1998).
Nombres comunes usados en espaol
Hierba del cncer, gusanillo, gusanito, mata-gusano, corrimiento, gatito, espinosilla, hierba
del gusano (Martnez, 1979; Standley y Steyermark, 1949).
Usos de Acalypha arvensis Poepp. & Endl
En Veracruz, los usos medicinales que se dan a esta planta la indican contra la diarrea y
como antiemtico, para lo cual se emplea la planta entera en cocimiento administrada por
va oral. Se prescribe: en buches para aliviar granos en la boca (aftas); de forma externa, en
lavados locales para sanar heridas y granos, o en baos para los nios recin nacidos.
Incluso se aconseja su uso contra las picaduras de capulincillo (picadura de araa capulina).
En Tabasco, para la aliviar la sarna se dan baos con la coccin de las hojas, o maceradas
junto con tabaco se aplican para el piquete de araa.
Efectos farmacolgicos de Acalypha arvensis Poepp. & Endl
nicamente se ha demostrado la actividad antibitica contra Staphylococcus aureus que
ejerce la tintura de las hojas, la cual fue probada tambin contra Escherichia
coli, Pseudomona aeruginosa y Candida albicans con resultads negativos. Adems se
investigaron, la actividad diabtica en rata y la accin citotxica de los extractos
metanlico, clorofrmico y etreo, en cultivos de clulas de carcinoma humano de colon
CO-115, sin resultados positivos.
El inicio de la Herbolaria y la Medicina Tradicional
El consumo sistemtico de plantas con atributos medicinales se remonta posiblemente a 2
millones de aos en algn lugar de frica, cuna de la humanidad. Los primeros prosimios,
probables ancestrales del hombre, buscaban en las imponentes selvas los paliativos para

eventuales disturbios orgnicos. A medida que la evolucin ensayaba y esculpa la

inteligencia en los primeros homindeos, el instinto fue cediendo lugar a la razn, y la
bsqueda de la flora, ahora emprica, pas a contar con un fuerte aliado: el espritu
investigador. (Chifa, 2010)
En los orgenes de la historia, cuando la sabidura popular fue emergiendo de las tinieblas,
la nocin de planta activa fue englobando tanto a la que alimentaba, a la que curaba como a
la que mataba. Brujos, magos y curanderos posean a la vez la ciencia de los venenos y de
las drogas, por lo que se les atribua un poder relacionado con los espritus y con lo
sobrenatural. La herbolaria, producto de una rica tradicin cultural de nuestros pueblos,
posee mayor antigedad que cualquier otra terapia. La eficacia teraputica intrnseca que
posee la herbolaria americana, se debe a las propiedades que derivan de los principios
activos de las plantas y que han sido utilizadas por generaciones enteras con el xito
deseado. Pero no solamente curan los metabolitos secundarios contenidas en las plantas, un
fuerte componente de carcter cultural se aade a la terapia para hacer de esta un
tratamiento exitoso (Chifa, 2010).
La interaccin del hombre con su variada naturaleza gener una gran cantidad de
conocimientos cientficos y empricos sobre el correcto aprovechamiento de los recursos
que nos ofrecen las plantas. Es por esta razn que la medicina tradicional encuentra en
Amrica Latina un lugar preponderante, pues la cosmovisin indgena valoriza las formas
naturales de entender y curar las enfermedades en contraposicin de lo que predica la
medicina clsica.
En Amrica, la medicina reconocida oficialmente para atender las distintas enfermedades
del pueblo es la aloptica, que reduce al enfermo como si se tratara de una mquina
descompuesta que ser restaurada. Utiliza para esto un despliegue impresionante de
tecnologa producida en los pases capitalistas avanzados y, por otra parte, se basa en el
consumo inmoderado o descontrolado de frmacos. La mayora de estos frmacos fueron
investigados y elaborados para atender las patologas de los pases desarrollados de acuerdo
a las necesidades propias de aquellos pases. Las corporaciones multinacionales que los
producen, invaden los pases que dependen de una economa de mercado circunscripta al

capitalismo internacional, en virtud de que en dichos pases existen pocas estrategias de

control.
Dentro de estas otras medicinas, se encuentran la herbolaria, la homeopata, la acupuntura,
el naturismo, el curanderismo, el chamanismo, el espiritualismo, y en general la medicina
indgena tradicional.

Estas prcticas alternativas de la medicina, muchas veces

denominadas medicinas paralelas, quedan ignoradas por la ciencia mdica oficial y por lo
tanto borrada de las preocupaciones de las dems ciencias, incluidas las sociales. No
obstante, en el panorama cotidiano, las medicinas marginales, especialmente la medicina
indgena tradicional, muchas veces llamada medicina popular, constituyen una realidad a la
que se debe conocer, respetar y contribuir a su preservacin de una manera positiva y
creativa.
La Medicina Tradicional ha desempeado un papel importante en el tratamiento de diversas
patologas, fundamentalmente en los pases en desarrollo. En ellos, el 80 % de la poblacin
acude a este tipo de medicina para satisfacer las necesidades primarias de salud. Si bien los
productos de origen vegetal, particularmente las drogas secas y los extractos, pasaron de
ocupar un lugar preponderante a un segundo plano, en las ltimas dcadas han vuelto a
alcanzar una presencia cada vez mayor en la Medicina Occidental. Este retorno ha sido
propiciado por el regreso hacia lo natural, pero tambin debido al desarrollo cientfico de
los fitomedicamentos y al mayor conocimiento del riesgo beneficio de los frmacos
sintticos. (Prieto-Gonzales, et al. 2002).
Muchos profesionales de la salud cuestionan esta medicina por el hecho de no contar con la
explicacin de algunos de los efectos que produce. El hecho de que no exista en este
momento un mtodo capaz de desentraar los fenmenos fsico/qumicos que expliquen los
cambios biolgicos que tienen lugar con la aplicacin de estas terapias, no invalida su
carcter cientfico, por lo que cada da hay ms investigacin sobre los principios activos en
plantas. (Barranco, 2009).
El estudio qumico de las plantas

Se estima que el nmero de especies de plantas con flores est situado entre 200000 y
250000, distribuidas entre 300 familias y 10500 gneros. Pese a la rpida expansin de la
literatura fitoqumica, solo un pequeo tanto por ciento de la totalidad de las especies se ha
estudiado y queda, por tanto, un amplio campo de investigacin (Trease y Evans, 1991).
Dependiendo la cultura y el pas, las plantas que se encuentran en dichas regiones han sido
utilizadas para fines curativos o remedios naturales, logrndose una coleccin vegetal
recopilada por siglos mediante tanteos y errores utilizando al propio humano como
conejillo de indias, sin saber cules fuesen las consecuencias y las reacciones secundarias.
A raz de ello, se sabe que plantas sirven para curar determinadas enfermedades y que parte
de la planta utilizar, logrando que este conocimiento sea transferido de generacin a
generacin, sin embargo, la poblacin desconoce cul es el principio activo o que ocasiona
que la enfermedad sea curada.
Este tema ha llamado la atencin considerablemente, y al cabo de muchos aos, ha llevado
al qumico hacia la investigacin bsica y aplicada en el campo de la botanica, logrando
que en los ltimos 40 aos se hayan aislado y caracterizado miles metabolitos secundarios
(alcaloides, hetersidos, etc), permitiendo una prospeccin de muchas muestras de plantas.
Un examen de la lista de frmacos derivados de fuentes naturales revela que la mayora
procede de Espermatofitas, plantas con semilla que predominan en el campo.
El anlisis fitoqumico tiene por objetivo determinar los metabolitos secundarios presentes
es una especie vegetal a estudiar, aplicando para ello una serie de tcnicas de extraccin,
separacin, purificacin y determinacin estructural (UV, IR, RMN, Masas, etc). (Look,
1994).

Se han desarrollado una serie de mtodos para la deteccin preliminar de los diferentes
constituyentes qumicos, basados en la extraccin de estos con disolventes apropiados y en
la aplicacin de pruebas de coloracin.
Uno de los mtodos clsicos de anlisis muy utilizado para el estudio qumico de una planta
son los ensayos a la gota o marcha fitoqumica (esquema 1), que consiste en una previa

maceracin de la parte de la planta a estudiar, para posteriormente realizar pruebas al

extracto utilizando diversos reactivos reportados en la bibliografa, con el objetivo de
conocer qu tipo de metabolitos secundarios estn presentes. Actualmente, esta
metodologa suele ser complementadas con tcnicas ms avanzadas como las tcnicas
cromatograficas, dentro de las cuales, las ms utilizadas son: cromatografa en capa fina
(CCF) la cual se utiliza para tener una nocin de la cantidad de metabolitos presentes en
una muestra, cromatografa liquida de alta eficiencia (HPLC, por sus siglas en ingls) que
se usa para cuantificar los metabolitos en un extracto de una planta, y la cromatografa de
gases, que se utiliza para la identificacin de metabolitos secundarios voltiles, como
aceites esenciales y diversos tipos de alcoholes.
Planta seca y pulverizada
Maceracin en caliente con
EtOH por 48 h

Extracto etanlico

Fraccin A

Taninos
Aminoacidos

Flavonoides

cc. a sequedad y ext con

150ml de HCl al 1% a 50C

Solucin acida

Insoluble
Lavar con agua y ext con
DCM.

Alcalinizar con NH4OH y

extraer con DCM

Fraccin B

Esteroles

Quinonas

Fase orgnica

Fase acuosa
Extraer con EtOH, DCM

Fraccin C

Lavar con agua, secar y llevar

a 50mL

3:2

Fase orgnica
cc. a sequedad + 4ml
de DCM

Esteroides

cc. a sequedad + 4ml

de HCl al 1%

Alcaloides

Fase Ac.

Fraccin E

Fraccin D

Esteroides
Flavonoides
Antocianinas

Alcaloides

Alcaloides

Antocianidinas

Esquema 1.

Metabolitos secundarios frecuentes en las plantas

Se llaman metabolitos secundarios a los compuestos qumicos sintetizados por las plantas
los cuales cumplen funciones no esenciales, de forma que su ausencia no es fatal para la
planta, ya que no intervienen en el metabolismo primario de la planta. Los metabolitos
secundarios intervienen en las interacciones ecolgicas entre la planta y su ambiente.
(Swain, 1973).
Los metabolitos secundarios se agrupan segn su origen biosinttico, y as podemos
mencionar a los terpenos, esteroides, flavonoides, saponinas, cromenos, benzofuranos,
coumarinas, quinonas, entre otros.
Alcaloides
Un diverso nmero de plantas contienen alcaloides, y tan solo las propiedades qumicas
debidas al nitrgeno bsico unifican las numerosas clases de alcaloides, por lo que su
importancia, taxonoma y biognesis son enjuiciadas de forma adecuada en relacin a una
determinada clase de alcaloides. (Trease y Evans. 1991).
Es un tanto difcil definir el termino alcaloide debido a que no existe una clara distincin
entre alcaloides y aminas complejas de origen natural, sin embargo, en la literatura se
encuentran diferentes definiciones del termino alcaloide, Pelletier (1982) citado por
Bauelos, et al. (2006) define a los alcaloides como compuestos cclicos que contienen
nitrgeno en un estado de oxidacin negativo, cuya distribucin est limitada en

organismos vivos, mientras que Korolkovas y Burchkalther (1983) definen a los alcaloides
como sustancias orgnicas nitrogenadas con carcter bsico.

Los alcaloides tpicos son de origen vegetal, bsicos, contienen uno o ms tomos de
nitrgeno (generalmente en un anillo heterocclico) y suelen poseer una marcada accin
fisiolgica en el ser humano y otros animales. En la prctica, las sustancias presentes a los
ensayos cualitativos descritos ms adelante son denominados alcaloides. Varios compuestos
nitrogenados derivados de bacterias, hongos y animales tambin son considerados como
alcaloides, entre ellos los aislados de las ranas del genero Phyllobates, que constituyen
algunas sustancias ms venenosas para el hombre, hasta ahora conocidas.
Derivados de lisina

Derivados de ornitina
N
N
O

OH

OH

Lobelina

Atropina

Cocaina

Derivados de tirosina y fenilalanina

H3CO

NH2

H3CO
H3CO
H3CO

OCH3
OCH3

Mezcalina

H3CO

HO
N
O
N
HO

Papaverina

Morfina

Imagen 2: Ejemplo de alcaloides.

Los alcaloides pueden clasificarse como primarios (mescalina), secundarios (efedrina) y
terciarios (atropina) o cuaternarios; aspecto que afecta, tanto a los derivados alcalodicos
que pueden prepararse como a los procedimientos de su aislamiento. En las plantas los

alcaloides pueden existir en estado libre, al estado de sales, como amina o como alcaloide
N-oxidos.

Clasificacin de los alcaloides

Debido a la gran diversidad de alcaloides que se han aislado y a su variedad de estructuras,
es difcil una clasificacin, sin embargo, Martnez (2007) clasifica a los alcaloides
dependiendo del aminocido de procedencia de la siguiente manera:

Alcaloides derivados de la ornitina y lisina

Alcaloides derivados de la tirosina y fenilalanina
Alcaloides derivados del triptfano
Alcaloides derivados del cido nicotnico
Alcaloides derivados de la histidina.

El metabolismo de la ornitina da origen a un conjunto de alcaloides denominados

pirrolizidnicos (procedentes de dos molculas de ornitina). Los alcaloides tropnicos se
caracterizan por tener un ncleo de tropano (biciclo formado por un anillo de piperidina y
uno de pirrolidina) adems de ser esteres entre el alcohol tropnico y un cido aromatico o
aliftico. Los alcaloides derivados de la lisina tienen un anillo de piperidina, de indol o
derivados de quinolinas. Los alcaloides de la tirosina y fenilalanina tienen un ncleo de
isoquinolina.
Los alcaloides del triptfano son derivados de un producto de descarboxilacin, la
triptamina. Se caracterizan por presentar un ncleo de tipo indol y se considera un grupo de
alcaloides con ms amplia variedad, dicho grupo tiene grandes intereses farmacolgicos,

teraputicos y qumicos. Entre estos alcaloides existen multitud de derivados que presentan
propiedades psicodislpticas.
Los alcaloides derivados de la ergolina presentan una estructura tetraciclica, llamada
ergolina, formada a partir de la insercin de un resto de isopreno al nucleo de indol, los
alcaloides ms activos de este tipo son los derivados del cido lisrgico.

Derivados de lisina

Derivados de ornitina
N
N
O

OH

OH

Lobelina

Atropina

Cocaina

Derivados de tirosina y fenilalanina

NH2

H3CO
H3CO

HO
N
O

H3CO
H3CO

OCH3
OCH3

Mezcalina

H3CO

N
HO

Papaverina

Morfina

Figura 3. Tipos de Alcaloides

Mtodos de identificacin
Las tcnicas de reconocimiento son basadas en la capacidad que tienen los alcaloides en
estado de sal (extractos cidos), de combinarse con el yodo y metales pesados como

bismuto, mercurio, tugsteno formando precipitados; estos ensayos preliminares se pueden

realizar en el laboratorio o en el campo.

En la prctica, se utilizan reactivos generales para detectar alcaloides como: la solucin de

yodo-yoduro de potasio (Reactivo de Wagner), mercurio tetrayoduro de potasio (reactivo de
Mayer), tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de Dragendorff), solucin de cido pcrico
(reactivo de Hager), cido slico tngtico (reactivo de Bertrand), p-dimetilamino
benzaldehido (reactivo de Ehrlich); nitracin de alcaloides (reaccin de Vitali-Morin se usa
para alcaloides en estado base).

El reactivo de Mayer: se prepara disolviendo 1.3 g de bicloruro de mercurio en 60 ml de

agua y 5 g de yoduro de potasio y se afora a 100 ml. Los alcaloides se detectan como un
precipitado blanco o de color crema soluble en cido actico y etanol. El reactivo de
Dragendorff: se prepara mezclando 8 g de nitrato de bismuto pentahidratado en 20 ml de
cido ntrico al 30% con una solucin de 27.2 g de yoduro de potasio en 50 ml de agua. Se
deja en reposo por 24 horas, se decanta y se afora a 100 ml. La presencia de alcaloides se
detecta por la formacin de un precipitado naranja rojizo cuando se le adiciona esta reactivo
a una solucin cida de alcaloides. Algunas sustancias oxigenadas con alta densidad
electrnica como es el caso de las cumarinas, chalconas, maltol, acetogeninas, etc. pueden
dar falsos alcaloides con el reactivo de Dragendorff.
Saponosidos
Los vegetales cuyo contenido de saponinas es alto, se han utilizado en diversas regiones del
mundo debido a sus propiedades tenso activas.
Las saponsidos se caracterizan por producir espuma en solucin acuosa, siendo esta
propiedad una prueba de identificacin para reconocer a estos compuestos, as mismo,
poseen propiedades hemolticas, es decir, si se inyectan al torrente sanguneo pueden
producir intoxicacin, tienen un elevado peso molecular y su aislamiento en estado puro es

difcil, ya que se hidrolizan en cidos dando una genina y diversos azucares y cidos
urnicos relacionados.
Los saponsidos tienen un gran inters por su explotacin industrial, ya que la industria
farmacutica utiliza diversas drogas con saponosidos para la obtencin de formas galnicas.
La biosntesis de las saponsidos se realiza mediante la ruta del cido mevalnico. La
ciclacin que sufre el escualeno (Imagen 4) da origen al colesterol, el cual a su vez, sufre
diversas modificaciones para generar diferentes sapogeninas (imagen 5).

Escualeno

HO
Colesterol

HO

Escualen-2,3-oxido

Zimosterol

HO

HO

Imagen 4. Ciclacin del escualeno y formacin del colesterol

Ciclocarotenol

Lanosterol

O
O

HO

HO
Diosgenina

Lycopersicum

O
O
Criptogenina

HO

ON

HO
Colesterol

HO

Tomatidina

HO

Solanidina

Imagen 5. Metabolitos del colesterol

Clasificacin de los saponosidos

Segn la estructura de la genina se conocen dos grupos de saponsidos; los tipo esteroide y
triterpenoide pentacclico (imagen 6 ).

O
C
A

E
D

Imagen 6. Saposido esteroidal (izquierda) y saposido triterpenoide pentacclico (derecha)

Los saponsidos esteroidales poseen un esqueleto de 27 tomos de carbono que consta

habitualmente de seis ciclos: los dos ciclos E (furnico) y F (pirnico) ocurren por
cetalizacin intramolecular causada por una oxidacin.
Los saponsidos esteroidales no se encuentran ampliamente distribuidos como las
triterpenoides pentacclicas, sin embargo, estos compuestos son de gran inters debido a su
alta relacin con las hormonas sexuales, cortisona, esteroides diurticos, vitamina D y
heterosidos cardiotnicos.
Los saponsidos naturales se diferencian por su configuracin en los tomos de carbono 3,5
y 25, en algunos casos, el anillo F se mantiene abierto para la formacin de glucsido.
Muchos saponsidos esteroidales se utilizan para la fabricacin de frmacos, un ejemplo
claro es el da la hecogenina, la cual se utiliza como producto de partida parta la sntesis de
corticosteroides, mientras que la diosgenina se utiliza para la fabricacin de anticonceptivos
orales. A diferencia de los saponsidos esteroidales, los saponsidos triterpenoides
pentacclicos abundan en muchas familias de dicotiledneas. En estas, la saponina se
encuentra unida a una cadena de azucares o de cido urnico, generalmente en la posicin
3.

Los saponsidos triterpenoides se han clasificado en tres grupos, representados por amirina, -amirina y lupeol (imagen 7).

H
H

H
H
HO

H
a)

H
HO

H
b)

H
HO

H
c)

Imagen 7. Tipos de saponsidos triterpenoides. a) -amirina, b) -amirina y c) lupeol

Esta ciclacin conduce a los dammaranos, molculas tetracclicas que existen al estado de
hetersidos en drogas como el ginseng, o, cuando dicha ciclacin implica una
conformacin diferente del precursor, a los cucurbitanos. Los cidos triterpenoides
relacionados se forman por sustitucin de un grupo metilo por un grupo carbonilo en
posiciones 4, 17 20 de dichas sustancias. Muchas plantas tienen cantidades considerables
de saponsidos triterpenoides, alrededor del 5-10%, sin embargo, la purificacin de estos
compuestos resulta una tarea difcil.
Mtodos de identificacin
Las saponinas esteroides se pueden reconocer fcilmente en los anlisis fitoqumicos
preliminares mediante los ensayos de la espuma, hemlisis de glbulos rojos, LiebermannBurchard y ensayos para carbohidratos.
Al agitar una solucin acuosa de una muestra que sea o contenga saponinas, se forma una
espuma estable como la obtenida al agitar la solucin acuosa de un jabn. Puesto que
existen otras sustancias que pueden formar tambin espuma, se debe asumir este ensayo
como una prueba presuntiva de la presencia de saponinas esteroides. (Muoz, 1956).

El ensayo de hemolisis es ms confiable que el de la espuma. A una suspensin de glbulos

rojos en solucin salina diluida, se aade una solucin de la muestra que se presume que es
o que contiene saponinas. Si los glbulos rojos se rompen (lisan o hemolizan), se asume
que la prueba es positiva. Este ensayo puede realizarse en tubo de ensayo Cuando la
muestra contiene taninos, deben eliminarse antes de realizar la prueba ya que la interfieren.
Esto se logra por tratamiento repetido de la muestra con xido de magnesio, el cual forma
complejos insolubles con los taninos, por lo cual es fcil eliminarlos por filtracin.
Este ensayo, junto con el de la espuma, cuando ambos resultan positivos en una muestra
vegetal (extracto, fraccin sustancia pura) permiten establecer que la muestra contiene
saponinas. La sola prueba de espuma positiva no es concluyente para determinar la
presencia de saponinas. Adems hay sustancias que interfieren estas dos pruebas como son

los taninos. Si la muestra contiene taninos, estos pueden eliminarse pues se absorben en
MgO.
Por la porcin esteroide que poseen las saponinas esteroides, el ensayo de LibermanBuchnar puede confirmar su presencia por ejemplo en muestras y extractos vegetales, tal
como se indic anteriormente para los esteroles, pero debe tenerse en cuenta que al igual
que en el caso de los esteroles -y los esteroides en general- solamente dan un resultado
positivo los que tengan grupos dienos conjugados reales o potenciales. Sin embargo otras
saponinas como las triterpenoides tambin dan positiva la prueba. (Martinez, 2001)

Tcnicas cromatogrficas
La cromatografa es una tcnica que permite separar los componentes de una mezcla. Esta
separacin se logra utilizando un sistema bifsico: fase estacionaria donde se retienen los
compuestos a separar y fase mvil que desplaza de forma diferencial los compuestos a
travs de la fase estacionara.
Cromatografa en capa fina
Cromatografa de capa fina (CCF) es un mtodo de separacin y purificacin de
compuestos orgnicos que depende de la distribucin de ellos en la fase estacionaria. Para
efectuar una separacin cromatogrfica se requiere de una fase estacionaria slida (material

adsorbente como almina, gel de slice, carbn o celulosa) y de una fase mvil (eluyente).
La muestra se aplica en el adsorbente (en la placa) y luego se deja que pasen a travs del
adsorbente los componentes de la mezcla, que se desplazarn dependiendo de su
solubilidad relativa en el eluyente y en el adsorbente. Aquellos que son ms solubles y que
son menos atrados por la fase estacionaria se desplazarn ms rpido, mientras que
componentes insolubles quedan en el punto de aplicacin.Despus del proceso se tiene
como resultado un cromatograma en el cual los componentes separados se revelan, ya sea
por su color inherente o por medio de un mtodo fsico o qumico. La cromatografa
generalmente se usa como un mtodo cualitativo, pero tambin se puede usar para efectuar
anlisis cuantitativo. (Douglas A Skoog 2008).

Imagen 8. Ejemplo de una elucin

Cromatografa en columna
La cromatografa en columna (CC) es el mtodo ms utilizado para la separacin y
purificacin de compuestos orgnicos, slidos o lquidos, a escala preparativa. La fase
estacionaria (adsorbente) se coloca en una columna de vidrio que termina en un
estrechamiento con una llave y se impregna con el eluyente (fase mvil). La mezcla a
separar se deposita en la parte superior de la columna y la fase mvil atraviesa el sistema.
Los compuestos se van eluyendo disueltos en el eluyente, se van recogiendo
ordenadamente en fracciones de pequeo volumen (1,2,..) y se analizan por cromatografa
en capa fina (CCF). Los productos van saliendo de la columna segn su polaridad, primero
salen los menos polares que son los menos retenidos por el adsorbente y los ltimos los ms

polares por su mayor retencin en la fase estacionaria. El adsorbente ms utilizado para este
tipo de cromatografa es gel de slice y en segundo lugar la almina.
El tamao de partcula del adsorbente es importante para la separacin y su eleccin
depende en gran medida de que la elucin de la cromatografa se realice por gravedad o a
media presin (flash chromatography). En una elucin a media presin se pueden emplear
tamaos de partcula ms pequeos, que permiten una separacin ms eficaz. Sin embargo,
en una elucin por gravedad el uso de tamaos de partcula pequeos impedira el flujo del
disolvente. Antes de realizar una separacin en cromatografa de columna hay que elegir
adecuadamente el disolvente haciendo ensayos en CCF. (Dupont Durst H. 2007).
Antimicrobianos
Desde el siglo XVIII se han empleado sustancias qumicas para el tratamiento de las
emfermedades infecciosas. Paul Ehrlich, quien formulo los principios de toxicidad
selectiva, reconoci las reacciones qumicas especficas entre microorganismos y
medicamento, la aparicin de la resistencia a estos y el papel de la teraputica combinada
para combatirlos. Posteriormente se descubrieron las sulfonamidas y se acrecent el inters
en sustancias antibacterianas de origen microbiano, llamadas antibiticos, de ah surgi la
penicilina, estreptomicina, tetraciclina, cloramfenicol, etc. Las cuales tambin han sido
obtenidas sintticamente, a travs de modificacin qumica, total o parcial, de las molculas
por biosntesis (Manrique E, 1997).
El ataque a los microorganismos, por parte de los antimicrobianos, se pueden dar de
diferentes maneras: por inhibicin de la sntesis de la pared celular, de las funciones de la
membrana celular, de la traduccin de material gentico y de la sntesis de cidos nucleicos
(Manrique E, 1997).
El trmino antibitico, se refiere a un producto metablico de un organismo que es
perjudicial o inhibitorio para otros microorganismos en muy pequeas cantidades, estas
sustancias pueden actuar de dos maneras:

a. Como microbiocidas, es decir, que matan las formas vegetativas de los

grmenes, especficamente se denominan bactericidas, refirindose a bacterias y
fungicidas refirindose a hongos.
b. Como microbiostatico, es decir que inhibe el crecimiento de microorganismos y
se denominar, bacteriosttico o fungisttico, segn se refiera a bacterias o a
hongos, respectivamente (Barreto J, 1997).
Control qumico antimicrobiano
De acuerdo a lo que menciona (Madigan et al, 2004). Un agente antimicrobiano es un
compuesto qumico, natural o sinttico, que mata o inhibe el crecimiento de los
microorganismos. Los agentes que matan microorganismos se denominan agentes-cida, con
un prefijo que indica el tipo de microorganismos que mata. As, tenemos agentes
bactericidas, fungicidas y virucidas. Un agente bactericida mata bacterias; aunque puede
matar o no otros microorganismos.
Los agentes que no matan pero inhiben el crecimiento se denominan agentes-estticos; as,
se hablar de agentes bacteriostticos, fungistticos y virustticos.
Efecto de los agentes antimicrobianos sobre el crecimiento
Se observan tres tipos de efectos cuando se aade un agente antimicrobiano a un cultivo
bacteriano en fase exponencial de crecimiento: bacteriosttico, bactericida y bacterioltico.
Se observa un efecto bacteriosttico cuando se inhibe el crecimiento pero las clulas no
mueren. Con frecuencia, los agentes bacteriostticos son inhibidores de la sntesis de
protenas y actan unindose a los ribosomas. No obstante, dicha unin no es una unin
fuerte y, cuando disminuye la concentracin del agente, el antimicrobiano se libera de los
ribosomas y se reanuda el crecimiento. Muchos antibiticos actan segn este mecanismo.
Los agentes bactericidas matan las clulas pero no dan lugar a la lisis o rotura de las
clulas. Los agentes bactericidas son una clase de agentes qumicos que generalmente se
unen fuertemente a sus dianas celulares de accin.

Los agentes bacteriolticos provocan la muerte celular por lisis, la rotura celular se detecta
por un descenso en el nmero de clulas o en la turbidez, despus de que se haya aadido el
agente. Dentro de los agentes bacteriolticos se incluyen antibiticos que inhiben la sntesis
de la pared celular, como la penicilina y los compuestos qumicos que lesionan la
membrana citoplasmtica.
Mecanismos de resistencia a antibiticos
Una de las caractersticas importantes en las bacterias es su resistencia a los antibiticos. En
este sentido, los mecanismos de resistencia que presentan estos agentes frente a antibiticos
son muy diversos, sin embargo, Flrez et al. (2008) los clasifica en cinco tipos principales:
1) Bloqueo del transporte del antibitico, 2) expulsin del antibitico por un mecanismo
activo de bombeo, 3) la modificacin enzimtica del antibitico, 4) la modificacin del
blanco o sitio de accin del antibitico, y 5) la produccin de una enzima alternativa que
evita el efecto inhibitorio.
En estos mecanismos se encuentran involucrados procesos de mutacin, transduccin,
transformacin y conjugacin en las bacterias, que ayudan a que stas adquieran
resistencia, frente a los frmacos (Caldern, 2008).
Metabolitos secundarios con actividad antimicrobiana
Algunos de los metabolitos secundarios de las plantas presentan actividad biolgica contra
agentes patgenos de humanos (Ros y Recio, 2005; Barrera-Figueroa et al., 2011)
ofreciendo una fuente alternativa de los recursos disponibles en el combate de
enfermedades infecciosas. Los grupos de metabolitos que se han reportado como agentes
antimicrobianos, de acuerdo a Daciana y Bra (2007), son los siguientes:

Fenoles, polifenoles simples y cidos fenlicos. El cido cafico es un ejemplo de

estos compuestos, y es efectivo contra virus, bacterias y hongos. Los grupos
hidroxilo que tienen este tipo de compuestos, se cree que son los que son
responsables de su toxicidad contra microorganismos patgenos.

Quinonas. Grupo de compuestos aromticos altamente reactivos. La vitamina K es

una naftoquinona que tiene actividad antihemorrgica, lo que puede estar
relacionado con su facilidad de oxidarse en los tejidos.

Por otro lado, este tipo de compuestos se caracterizan por su compleja irreversibilidad al
combinarse con los aminocidos de las protenas, con lo cual la inactivan provocando que
pierda su funcin. As, el potencial antimicrobiano que se le atribuye a estos compuestos se
debe a la posibilidad elevada de adherirse a polipptidos de membrana, adhesinas y
enzimas de unin de membrana.

Flavonas, flavonoides, y flavonoles. Compuestos fenlicos con un grupo carbonilo,

los flavonoides tambin contienen grupos hidroxilo y se agrupan generalmente a un
anillo aromtico. Su actividad antimicrobiana probablemente se deba a su afinidad y
unin a protenas solubles extracelulares como las quinonas. Los flavonoides que
son lipoflicos tambin pueden romper las membranas microbianas.

Taninos. Estos compuestos tienen una propiedad muy particular ya que son
astringentes, son capaces de unirse a protenas y desnaturalizarlas. Se dividen en dos
grupos, hidrolizables y condensados. Se encuentran en casi todas las partes de la
plantas. Los taninos tambin se pueden formar por la polimerizacin de unidades de
quinonas.

Las actividades biolgicas que se les atribuyen son: capacidad de estimular a los fagocitos,
como antitumorales y con un espectro amplio de actividades anti-infectivas contra
bacterias, levaduras, hongos filamentosos, etc. Su capacidad antimicrobiana proviene de su
habilidad para inactivar adhesinas, enzimas, protenas de transporte, etc.

e. Cumarinas. Compuestos fenlicos resultado de la fusin de bencenos y pironas.

Las

actividades

ms

representativas

que

tiene

son

anti-inflamatorias,

vasodilatadoras y antitrombticas. Los reportes sobre su actividad antimicrobiana

son escasos, pero se ha reportado que algunos compuestos de este grupo tienen
actividades fungicidas.

f. Terpenoides y aceites esenciales. Los compuestos que le brindan los olores a las
plantas pertenecen a este grupo, su estructura base son isoprenos. Comparten su
origen con los cidos grasos, pero difieren de stos ltimos en que los terpenos
forman estructuras largas y cclicas. Se encuentran reportados como antibacterianos,
fungicidas, antivirales y antiparasticos.

g. Alcaloides. Grupo de compuestos de las plantas ms eficientes y

teraputicamente significativos qumicamente muy diverso. Las actividades
biolgicas ms representativas que tienen son como analgsico, antiespasmdico y
antibacteriano.

Bacterias patgenas en salud pblica

Las bacterias que pueden producir enfermedad se llaman patgenas (pathos: enfermedad,
afeccion) y se conoce como patogenicidad a la capacidad que tiene una bacteria para causar
enfermedad.
Las bacterias pueden ser patgenas para el hombre y para animales as como para las
plantas, por lo que son de gran importancia, no solo en salud pblica, sino tambin en el
campo econmico (Garca, 2005).

Staphylococcus aureus

Imagen 9. Staphylicoccus aureus

Son cocos Gram positivos de 0,5 - 1 mcm de dimetro, inmviles, aerobios o anaerobios
facultativos, caracterizados por su agrupacin en forma de racimo. Crecen a una
temperatura ptima de 37 C y se desarrollan mejor en un pH ligeramente alcalino de 7.6 la
adicin de glucosa favorece el crecimiento (Pearanda, 2003).
Forma parte de la flora normal de mucosas y piel e intervienen en procesos patolgicos
diversos como infecciones supurativas e intoxicaciones alimenticias (Arvalo A, 1996).
Ms del 95% de los Staphylococcus aureus producen protena A, la cual puede estar
asociada a la clula o al medio extracelular, con una importante afinidad. La presencia de
protena A o coagulasa es de gran utilidad clnica para diferenciar Staphylococcus aureus de
otras especies de Estafilococos (Uribe C, 2003). Staphylococcus aureus es una bacteria que
puede causar infeccin en todos los grupos de edad tanto en forma espordica como
epidmica y se ha identificado como una de las principales causas de infeccin de heridas
quirrgicas. Su principal forma de transmisin es por contacto (Uribe C, 2003).
La capacidad de S. aureus para fermentar los azcares como maltosa, manitol, trehalosa es
positiva. La produccin de una nucleasa termoestable es un buen indicador de la presencia
S. aureus, al igual que la conversin de nitratos a nitritos (Pearanda O, 2003)

Escherichia coli

Imagen 10. Escherichia coli

Es un bacilo de 1 3 m por 0.5 m, que se presenta slo, en pares, en cortas cadenas o

formando grupos. En general es mvil (por flagelos pertricos), aunque existen variantes
inmviles no flageladas. No forma esporas y por lo general es no cpsulado y Gram
negativo. En cultivos jvenes la forma cocobacilar es bastante frecuente; en los viejos se
presentan formas de una dimensin mayor (Pearanda O, 2003).
En agar forma colonias circulares de 3 a 5 mm convexas, de borde continuo o un tanto
ondulado, brillantes y de coloracin blanca un poco amarillenta. Con produccin de cido y
gas, fermenta la lactosa y un gran nmero de carbohidratos; algunas cepas son lactosa
negativas. Es indol positiva, rojo de metilo positiva, Voges Proskauer (VP) negativa y no
utiliza el citrato. Produce H2S en determinados medios.
Acidifica y coagula la leche. Pueden necesitarse pruebas adicionales en casos de E. coli
aislada de colitis hemorrgicas, las cuales son tpicamente negativas a sorbitol. Este bacilo
es aerobio y anaerobio facultativo. Su temperatura ptima de crecimiento es de 37 C, pero
posee propiedades de desarrollo en una gama bastante amplia de temperaturas; el pH
favorable es de 7 alguna cepas producen hemolisina (Pearanda O, 2003).
Se ha considerado inicialmente slo como un habitante del intestino, desde hace cerca de
tres dcadas se empez a estudiar su poder enteropatgeno. Se ha visto que las cepas
toxignicas de E. coli pueden producir una enterotoxina termolbil (TL), una termoestable
(TS) o ambas. La TL es una protena de alto peso molecular, que bioqumicamente es muy
similar a la toxina de Vibrio cholerae, activando la adenilciclasa. Es inactivada a 60 C. La
TS es una pequea molcula relativamente estable al ser hervida (Rodrguez V, 1995).

Salmonella typhi

Imagen 11. Salmonella typhi.

Es un bacilo Gram negativo, aerobio y anaerobio, flagelado, no encapsulado, muere por
ebullicin y pasteurizacin, produce una endotoxina, posee los antgenos somtico (O),
flagelar (H) y (Vi).
Los sntomas ms frecuentes son: fiebre de 40C a 41C que puede durar hasta tres semanas
en caso de no dar antimicrobianos, desciende alrededor del quinto da si se administran; la
diarrea se presenta en la mitad de los pacientes alternndose con periodos de constipacin,
otros sntomas que pueden presentarse son dolor abdominal, cefalea, fiebre sin sudacin,
embotamiento mental, vmitos, dolor farngeo (Chin, 2001).
Mtodos de evaluacin de la capacidad antimicrobiana de extractos de plantas

No existe una reglamentacin y/o estandarizacin de la metodologa para la evaluacin de

la capacidad inhibitoria de extractos de plantas (EP), como se establece para antibiticos.
La mayora de los mtodos estn basados en los mtodos utilizados para evaluar la
resistencia y/o susceptibilidad a antibiticos.
Los mtodos utilizados para evaluar actividad de extractos de plantas sobre bacterias y
hongos suelen ser similares, variando la preparacin del inculo, medio de cultivo,
temperatura y tiempo de incubacin (Cowan, 1966).
Los mtodos ms comnmente utilizados en laboratorio por su sencillez y rapidez, son: La
tcnica de difusin por discos en agar, es utilizada para generar datos cualitativos

principalmente, y los mtodos de dilucin en medio lquido de cultivo y en agar, ambos

mtodos nos permiten conocer datos cuantitativos (Hammer, 1999).
Mtodos en Agar
Entre estos mtodos el ms utilizados por su sencillez y rapidez en la lectura de resultados
es el mtodo de difusin por discos, basados en la metodologa utilizada por Bauer et al.,
1966. El principio del mtodo involucra la aplicacin de una cantidad determinada de un
antimicrobiano u otra sustancia en un sustrato, (usualmente discos de papel) en la superficie
del agar sobre el cual se ha distribuido un inculo del microorganismo en estudio; se
formar as, por difusin un gradiente de concentracin del producto alrededor del disco y
la sensibilidad del microorganismo estar indicada por el tamao de la zona de inhibicin
del crecimiento bacteriano.

Imagen 12. Ejemplo de inhibicin bacteriana

El dimetro obtenido depender no slo de la sensibilidad del microorganismo y la carga
del disco, sino tambin del espesor de la capa de agar, del pH y de la composicin del
medio de cultivo, de la capacidad de difusin del producto en ese medio, de la temperatura
y de la atmsfera de incubacin, de la velocidad de duplicacin bacteriana, y del tamao
del inculo y fase de crecimiento de la bacteria o microorganismos en estudio (INPPAZ,
2000).
Otro mtodo de evaluacin en agar es el de dilucin en agar, en ste mtodo se incorpora el
producto a evaluar a un medio con agar. El producto se aade cuando el medio an est
lquido. Para lograr el rango de dilucin deseado se prepara una serie de placas, cada una

con una determinada concentracin de producto. Las placas se inoculan con un replicador
una vez que se haya solidificado el medio de cultivo (Hammer, 1999).
Los resultados de las pruebas de dilucin en agar se expresan como concentraciones
mnimas inhibitorias (CMIs).
Mtodos en medios de cultivo lquidos
La cuantificacin de la actividad in vitro de los aceites esenciales se realiza habitualmente,
mediante alguna de las variantes de los mtodos de dilucin. Estos mtodos se basan en la
determinacin del crecimiento del microorganismo en presencia de concentraciones
crecientes del aceite esencial, que se encuentra diluido en el medio de cultivo (caldo).
Se pueden realizar determinaciones empleando series de tubos con caldo de cultivo con un
rango determinado de aceite (macrodilucin). Esta metodologa es muy engorrosa, por la
cantidad de material y de manipulaciones necesarias para su realizacin. La utilizacin de
micropipetas y de placas de microtitulacin facilita la utilizacin del mtodo de
microdilucin en caldo.
Este ltimo mtodo se ha venido usando para la determinacin de las concentraciones
mnimas inhibitorias (CMIs) de extractos de plantas (Carro, 2002), describen la CMI como
la menor concentracin que mantiene o reduce la viabilidad del inculo luego de 24 horas
de contacto. En la mayora de los casos se preparan diluciones del producto a evaluar en
progresin geomtrica en base 2 utilizando un medio de cultivo adecuado; posteriormente
se inocula dicho medio y tras la correspondiente incubacin para permitir el crecimiento del
microorganismo se realiza la lectura, determinando qu concentracin causa la inhibicin
del crecimiento del microorganismo.

HIPOT ESIS Y OBJETIVOS

Hiptesis
Los metabolitos secundarios de la planta Acalypha Arvensis y Acalypha Alopecuroidaes
podran identificarse mediante anlisis cualitativo, as mismo, las propiedades bactericidas
de estas planta podran utilizarse para la inhibicin del crecimiento de Staphylococus
aureus y Salmonella typhi
Objetivos
Obtener el extracto etlico de la hierba la Acalypha Arvensis y Acaplypha Alopecuroidaes y
confirmar su efecto inhibidor en las sepas Staphylococus aureus y Salmonella typhi, y
realizar pruebas cualitativas para la identificacin y un posible aislamiento de metabolitos
secundarios.
Objetivos particulares

Seleccionar la zona con mayor poblacin de Acalypha.

Muestrear en base a la norma de conducta.
Preparar correcta la muestra en estudio.
Obtener el extracto etanlico de la muestra.
Evaluar la Alelopatia en las sepas seleccionadas.
Ensayo fitoqumico preliminar en la hierba del pastor (Arcalypha arvensis) y su efecto
aleloptico en Staphylococus aureus y Salmonella typhi

METODOLOGIA

Toma y acondicionamiento de la muestra

La muestra se obtuvo en el mes de septiembre del 2014 en dos terrenos diferentes ubicados
en la avenida 37 y 39 en la colonia Lzaro Crdenas, del municipio de Crdoba Veracruz.
Posteriormente se determin el pH del suelo, las coordenadas y la temperatura, y otra
muestra ms, tomada en la avenida 23, calle 43, colonia Lpez Arias.

Imagen 14. Mapa de la zona de recoleccin

Materiales y reactivos
Los disolventes utilizados en este trabajo fueron de la marca JT Baker y se usaron sin un
tratamiento previo, para la separacin en columna se utiliz Silica Gel de la marca Merk,
los reactivos utilizados para llevar a cabo la identificacin de metabolitos fueron
proporcionados en el Lab. 113 de la Facultad de Ciencias Qumicas, Orizaba. Ver.

Extraccin de principios activos de Acalypha arvensis

Para la extraccin de los componentes del material vegetal se realiz un anlisis

fitoqumico preliminar la cual consisti en preparar extractos de las partes de Acalypha
arvensis y Acaplypha Alopecuroidaes (flores, tallo y hojas) tomando una pequea porcin
de ellas y por separado fueron depositadas en matraces Erlenmeyer de 250 mL, donde se
emple etanol como disolvente, llevndose a cabo la extraccin se realiz en caliente.

Hoja

Flor

Tallo y
raiz

Imagen 15. Distribucin de la extraccin.

Se realizaron pruebas fotoqumicas de los extractos de cada parte de la planta con el
objetivo de determinar cul extracto tiene la caracterstica de presentar un mayor nmero de
metabolitos, comprobando que la flor y la hoja presentaron dicha caracterstica
Posteriormente, se depositaron en un matraz Erlenmeyer de 1500 mL, 73 g del material
vegetal (Acaplypha Arvensis) previamente triturado y se le aadi etanol, asi mismo, se
aadi 200g de hojas y flor de Acaplypha Alopecuroidaes en otro matraz de 1500mL. Se
mantuvo en reflujo durante 12 horas con la finalidad de hacer una extraccin exhaustiva,
cambiando el disolvente cada determinado tiempo por disolvente limpio para continuar con
la extraccin.

Imagen 16. Maceracin en caliente

Decoloracin y disminucin del volumen del extracto etanlico de Acalypha arvensis
Al trmino de la extraccin, se tom una pequea cantidad de los extractos y se depositaron
en tubos de ensaye para escoger el mejor mtodo para eliminar las clorofilas.
Se realizaron pruebas con arcilla de tonsil y carbn activado, para ello se calent el
extracto hasta su punto de ebullicin seguidamente se le aadi arcilla de tonsil a uno de los
tubos y al otro carbn activado, se continuo calentando por unos momentos ms y se filtr
en caliente a travs de papel filtro Whatman no.1, observndose que el carbn activado
tiene una mayor adsorcin de clorofilas. Una vez decolorado el extracto, se concentr a
50ml en un rotovapor.

Imagen 18. Evaporacin en rotavapor

Pruebas fitoqumicas
Teniendo el extracto previamente decolorado, se procedi a realizar pruebas fotoqumicas
mediante ensayos a la gota para identificar alcaloides, flavonoides, coumarinas, esteroles,
quinonas,

saponinas,

glicosidos

cardiotnicos,

sesquiterpenlactonas,

polifenonesl

fenilpropanoides e iridoides, siguiendo las presentes metodologas.

Alcaloides
Se realizaron las pruebas fitoqumicas al extracto etanlico de Acalypha arvensis de
acuerdo a la metodologa de Dominguez, 1983, para la identificacin de los metabolitos
secundarios. Las cuales consisten en reacciones de precipitacin y coloracin.
Para la identificacin de alcaloides, se utiliz la prueba de Mayer y de Dragendorff. Para la
prueba de Mayer, se utiliz una muestra de extracto previamente acidulada con cido
sulfrico o cido clorhdrico diluido, se trat con unas gotas de reactivo de Mayer, mientras
que para la prueba de Dragendorff, se us una muestra de extracto previamente acidulada
con cido sulfrico o cido clorhdrico diluido y se trato con unas gotas del reactivo de
Dragendorff.
Como mtodo adicional, se utiliz la prueba de Wagner, en la cual se manej una muestra
del extracto acuoso o etanlico previamente acidulada, y se trat con el reactivo de
Wagner.
Flavonoides
Para la identificacin de flavonoides se utiliz la prueba con vapores de amoniaco y otra
metodologa utilizando NaOH al 5%. Se someti una muestra del material a estudiar, a
dichos reactivos con el objetivo de observar cambios de coloracin en la muestra vegetal.

Como mtodo adicional, se utiliz la reaccin de Shinoda, usando una porcin de extracto
alcohlico incoloro o ligeramente amarillo, con una viruta de magnesio y 3 gotas de cido
clorhdrico concentrado con la finalidad de observar un cambio de coloracin.
Coumarinas
Para la identificacin de coumarinas, se utiliz la reaccin de formacin de hidroximato,
donde se utiliz una gota de extracto etanlico a la cual se le aadi una gota de solucin
de metanol 2N de clorhidrato de hidroxilamina y una gota de solucin metanlica 2N de
KOH. Se calent la mezcla durante unos minutos y se enfri para posteriormente acidular
con HCl 0.5 N y aadir una gota de cloruro ferrico al 1%, con la finalidad de observa la
formacin de una coloracin violcea.
Se utiliz como complemento la prueba de Legal, donde se disolvi una pequea muestra
de extracto con tres gotas de piridina y se adicion una gota de solucin de nitroprusiato de
sodio al 0.5% y posteriormente cuatro gotas de KOH 2N, con el objetivo de observar un
cambio de coloracin a rosa-rojo.
Finalmente se us la prueba de Erlich para grupo furano, donde a una muestra del extracto
etanlico, se le agregaron unas gotas de p-dimetilaminobenzaldehido al 5% en etanol y se
aadi HCl concentrado, con el propsito de observar un cambio de coloracin.
Esteroles
Para determinar la presencia de esteroles se utiliz la prueba de Liebermann-Burchard,
mezclando 1mL de anhdrido actico y 1mL de cloroformo, posteriormente se aadi una
gota de cido sulfrico concentrado. Una porcin de esta mezcla se puso en contacto con
una muestra de extracto etanlico con el objetivo de observar cambios de coloracin.
As mimo, se utiliz la prueba de Rosenheim, donde una muestra del extracto etanlico se
puso en contacto con cido tricloroactico en agua.

Finalmente se us la prueba de

Salkowski, donde una muestra del extracto etanlico se trat con un volumen igual de cido
sulfrico concentrado.
Glicosidos cardiotnicos
Para la identificacin de glicosidos cardiotnicos se utiliz la prueba de Kedde, donde se
mezclaron cantidades iguales de cido 3,5-dinitrobenzoico y de potasa solucin y se
aaden 2 gotas del material. Adicionalmente se manej la prueba de Legal, donde una
pequea muestra se disolvi en 3 gotas de piridina y se agreg una gota de solucin de
nitroprusiato de sodio y 3 gotas de sosa.
Quinonas
Para la identificacin de quinonas se utiliz la reaccin de Borntrager, que consisti en
acidular una muestra de extracto alcalino y extraer con benceno. El extracto bencnico se
trat con un volumen igual de KOH del 2 al 5%, esto con el objetivo de observar un cambio
de coloracin
Saponinas
Para determinar la presencia de saponinas, se manej la prueba de la espuma, donde se
agit una muestra de extracto etanlico en agua con el motivo de observar la formacin de
espuma, as mismo se realiz la prueba de Molisch, donde una gota del extracto se mezcl
con dos gotas de alfa naftol en etanol al 5%. Por la pared del tubo se agreg cido sulfrico
concentrado, con la finalidad de presenciar una coloracin.
Sesquiterpenlactonas
La prueba de Tollens fue utilizada para la identificacin de estos metabolitos, la cual
consisti agregar unas 3 gotas de nitrato de plata al 5%, una gota de NaOH al 10%.
Posteriormente se aadi hidrxido de amonio al 2% hasta disolver precipitado. Un
mililitro de esta mezcla se agreg a una muestra del extracto libre de disolvente.

Polifenoles
Para la identificacin de polifenoles se us la prueba de Folin-Ciocalteu, donde en un
microcono se coloc 0.5 mL de extracto con cinco gotas del reactivo Folin-Ciocalteu, ms
dos gotas de carbonato de sodio al 7.5%.
Fenilpropanoides
Se adiciona 1 mL de extracto etanlico ms 2 mL de HCl 0.5 N, posteriormente se aadi
2 mL de la solucin acuosa de nitrito de sodio al 10% y finalmente se agreg 2 mL de la
solucin acuosa de NaOH 2N.
Iridoides
Se coloc 0.5 mL del extracto vegetal y se mezclaron con 3 mL de vainillina (4% p/v en
metanol) y con 1.5 mL de HCl concentrado. La muestra se protegi de la luz durante 1-2
horas para obtener el resultado de la reaccin.
Cromatografa en capa fina
Se realiz un ensayo en CCF para determinar la presencia de metabolitos secundarios,
utilizando las muestras de extracto etanolico sin diluir, y usando diferentes fases mviles,
con la finalidad de obtener la fase correcta para separar los metabolitos en columna. Se
utiliz un cromatofolio de silica gel 20 x 20 marca Merck. Como revelador se emple luz
UV obtenida de una lmpara porttil (254 365 nm).

Imagen 19. Cromatografa en capa fina

Cromatografa en columna
Para separar los metabolitos se realiz cromatografa en columna al extracto, utilizando
arena de otawa para fijarlo dicho extracto, y silica gel parta la columna. Se utiliz como
fase mvil, la mezcla 7:2:1 de ter de pretroleo, butanol y metanol.

Imagen 20. Cromatografa en columna

Pruebas de inhibicin del extracto
Preparacin del inoculo
Para la preparacin del inoculo se llev a cabo en medio lquido utilizando como medio de
cultivo caldo nutritivo, para el experimento se emplearon las cepas de Staphylococcus

aureus que se encontraba en caldo nutritivo y Escherichia coli en medio EMB y

Salmonella thypi en el medio Salmonella shigella, estos fueron proporcionados por el
laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Qumicas, de la Universidad
Veracruzana.
En tres tubos de ensaye con 2 mL de caldo nutritivo se coloc 2 colonias de cada cepa
respectivamente y se dej incubar a temperatura ambiente por 24 h. Transcurrido el tiempo
se observa el crecimiento de cada tubo.
Mtodo de difusin en agar
Se tomaron 3 mL de los extractos etanlicos concentrados de Acalypha arvensis y
Acaplypha Alopecuroidaes y se deposit en un vial previamente tarado, este extracto se
redisolvio con 3 mL de etanol para conocer la concentracin de la dosis a emplear en los
sensidiscos.
Utilizando un hisopo estril, fueron sembrados los microorganismos a estudiar por estriado
en agar nutritivo, enseguida se colocaron sobre la placa los sensidiscos impregnados del
extracto de inters, con una concentracin de 0.00134mg.mL-1 equivalente a 20 L.
Como control positivo se emple el ciprofloxacino el cual es un antibitico de amplio
espectro y con diversos usos a padecimientos patolgicos, adems se utiliz etanol para
comprobar que la inhibicin existente sea por los principios activos del extracto y no el
efecto del etanol.
Las cajas Petri fueron incubadas a 35C por 24 h en una estufa de incubacin, seguidamente
se procedi a la observacin y medida de los halos de inhibicin de crecimiento con ayuda
de un vernier.

RESULTADOS Y DISCUCIN
Anlisis del suelo
Se realiz una examinacin al suelo de los dos terrenos de los cuales se obtuvo la planta, se
observ que ambos terrenos tenan diferente tierra, una de color naranja oscuro
(vulgarmente conocida como tierra roja y el otro terreno present tierra de color caf
oscuro (imagen 21).

Imagen 21. Tipos de suelo

Utilizando tiras de pH, se determin el pH de los suelos, disolviendo 10g de suelo en 100ml
de agua, obtenindose los siguientes resultados:
Tipo de tierra
Tierra roja
Tierra caf oscuro

pH
8
6

La variacin de pH en la tierra es debida al contenido de Fe2O3, lo que le otorga un carcter

ms bsico a la tierra roja.
Obtencin de coordenadas
Con la ayuda de un GPS de bolsillo marca Garmin se determin las coordenadas de los
terrenos en los cuales se obtuvieron las pruebas, obtenindose los siguientes datos
Terreno
Col. Lzaro Crdenas (1)

Coordenadas
18 52 11.7 N,

96 55 47.2 E

Col. Lzaro Crdenas (1I )

Col. Lpez Arias (III)
Anlisis fitoqumico

18 52 11.4 N, 96 55 39.1 E
18 52 22.8 N, 96 55 41.7 E

Se realiz un anlisis fitoquimico preeliminar a los tres primeros extractos de Acalypha

Arvensis y Acaplypha Alopecuroidaes realizados con diferentes partes de la planta,
obtenindose los siguientes resultados.
Acaplypha Arvensis
Metabolitos secundarios
Alcaloides

Extracto de hojas

Extracto de flor

Extracto de tallo

+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+

Sapogeninas
Polifenoles

amoniaco
lcali
Shinoda
Kedde
Legal
Keller-Kiani
Baljet
Rosentaller
Folin-

+
+
+
+

+
+
+
+

+
+

Sesquiterpenlactonas
Esteroles

Cicalteu
Tollens
Lieberman-

+
-

+
-

+
-

Burchard
Rosenheim-

+
-

+
-

+
-

Extracto de hojas

Extracto de flor

Extracto de tallo

+
+
+
+
+

+
+
+
+
+

Quinonas
Saponinas
Coumarinas

Flavonoides

Glucosidos cardiotnicos

Prueba
Mayer
Dragendorff
Wagner
Borntrager
Espuma
Molish
Hidroximato
Legal
Erlich
Vapores de

Salkowski
Fenilpropanoides
Iridoides

Acaplypha Alopecuroidaes
Metabolitos secundarios
Alcaloides

Quinonas
Saponinas

Prueba
Mayer
Dragendorff
Wagner
Borntrager
Espuma
Molish

Coumarinas

Hidroximato
Legal
Erlich
Vapores de

+
+
+

+
+
+

Sapogeninas
Polifenoles

amoniaco
lcali
Shinoda
Kedde
Legal
Keller-Kiani
Baljet
Rosentaller
Folin-

+
+
+
+

+
+
+
+

Sesquiterpenlactonas
Esteroles

Cicalteu
Tollens
Lieberman-

+
-

Burchard
Rosenheim-

+
-

Flavonoides

Glucosidos cardiotnicos

Salkowski
Fenilpropanoides
Iridoides

Cromatografa
El anlisis por cromatografa en placa fina realizado para el extracto de la planta se llev a
cabo con la fase 7:2:1 ter de petrleo/N-Butanol/Metanol dando un resultado aceptable en
la separacin de los metabolitos presentes.
Este resultado fue aplicado para realizar una separacin en cromatografa por columna, sin
embargo, no se logr separar los metabolitos, probablemente a la alta polaridad de la fase
mvil utilizada, la cual no permiti separar los metabolitos de una manera eficiente.
Pruebas de inhibicin antimicrobiana
Mediante la tcnica de difusin de discos se evalu la actividad antimicrobiana de los
extractos de Acalypha arvensis frente a microorganismos patgenos tales como

Escherichia coli, Salmonella typhi y Staphylococcus aureus se realizaron las pruebas

suceptibilidad del extracto vegetal para comparar su capacidad inhibitoria, se usa como
control positivo el ciprofloxacino, teniendo en cuenta que es un antibitico de amplio
espectro activo en tcnicas in vitro contra un gran nmero de microorganismos Gram
positivos y negativos.
Se midi la capacidad antibacteriana a travs
del dimetro del halo de inhibicin, el cual
puede ser afectado por las exigencias del
microorganismo en estudio y la composicin
qumica del extracto vegetal.
En la siguiente figura se observa el efecto
inhibitorio de los extractos etanlicos de
Acalypha arvensis donde solo hubo inhibicin
frente a Salmonella typhi y Escherichia coli,
sin embargo en el caso de Staphylococcus aureus no se desarroll en ninguno de los casos
esto es debido a que la cintica de crecimiento de este microorganismo es ms lenta a
comparacin a las anteriores.

Para el caso del gusano largo el comportamiento fue igual solo se observ inhibicin en
Salmonella typhi y Escherichia coli. Staphylococcus aureus NO CRECIO.

La evaluacin de la prueba de actividad antimicrobiana frente a bacterias patgenas de

salud pblica se presenta en la Tabla X, donde se observa el valor de inhibicin; se puede
sealar que la adicin de 20 L de extracto etanlico de Acalypha arvensis los sensidiscos,
originan una actividad antimicrobiana en la mayora de las especies estudiadas.

Replica
1
2
Replica
1
2
3

Acalypha Arvensis
Salmonella typhi
Escherichia coli
0.3
0.1
0.2
0.3
Acalypha Alopecuroidaes
Salmonella typhi
Escherichia coli
0.10
0.15
0.125
0.25
0.07
0.07

Ciprofloxacino
0.75
0.90
Ciprofloxacino
0.6
0.4
1.05

Los resultados sealan que Escherichia coli es el microorganismo que ms sensibilidad

presento
Escherichia coli forma parte de las bacterias Gram negativas estas, adems del
peptidoglicano, poseen una capa adicional en su pared que est compuesta de
lipopolisacridos. Esta capa representa una segunda bicapa lipdica, que no consta
solamente de fosfolpidos como la membrana plasmtica, sino que contiene polisacridos y
protenas. Los lpidos y polisacridos estn estrechamente unidos en la capa externa
formando estructuras lipopolisacridas especficas (Lizcano, 2008).

Los mecanismos de resistencia de estas bacterias pueden presentarse como alteracin del
sitio blanco o diana de antimicrobianos, disminucin de la permeabilidad de la pared por
poseer una pequea capa de peptidoglicano, la cual es ms sensible, adquisicin de
mecanismo de eflujo y cambio de va metablica externa (Lizcano, 2008), lo anterior
podra sugerir que el extracto etanlico de Acalypha arvensis puede poseer sustancias
capaces de contrarrestar los mecanismos de resistencia del microorganismo.