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Agroscope RAC Changins

Station fdrale
de recherches agronomiques
Directeur: Andr Stubli
www.racchangins.ch

Microgreffage in vitro du chtaignier

Premiers rsultats
C.L. L, Agroscope RAC Changins, case postale 254, CH-1260 Nyon 1
S. ABDELHAMID, Laboratoire de botanique volutive, Universit de Neuchtel, CH-2000 Neuchtel

E-mail: cong-linh.le@rac.admin.ch
Tl. (+41) 22 36 34 422.

Rsum
Dans cet article, nous dcrivons la mthode de multiplication in vitro de
trois clones du chtaignier (Maraval CA-74, Lina et Verdanesa), la technique adapte pour leur enracinement, ainsi que celle que nous avons
dveloppe pour le greffage in vitro.
La composition du milieu de culture et le choix du stade physiologique
adquat pour le greffage jouent un rle important dans la russite du microgreffage.
Afin de sassurer de la compatibilit entre le porte-greffe et le greffon, un
examen histologique a t ralis sur des plantes greffes pour visualiser au niveau tissulaire le degr de compatibilit entre partenaires.

Introduction
La propagation et la domestication des
arbres fruitiers et forestiers sont assures par la multiplication sexue qui fait
intervenir des structures reproductrices
particulires, les organes floraux. Ces
derniers, aprs fcondation, forment
des graines. Le semis des graines donne
naissance des arbres diffrents de la
varit mre et diffrents entre eux. En
revanche, les plantes fruitires qui sont
multiplies par la voie asexue, par
laquelle un organisme est capable den
gnrer un autre sans intervention de
structures reproductrices spcifiques,
maintiennent les caractristiques de leur
parent. Ce mode de reproduction est
largement pratiqu par les arboriculteurs et comprend plusieurs techniques,
comme le marcottage, le bouturage et
le greffage; ce dernier est appliqu chez
la majorit des arbres fruitiers (COUTANCEAU, 1962).
Parmi les mthodes de propagation
asexue, on trouve aussi la culture in
vitro qui a t retenue par de nombreux
Revue suisse Vitic. Arboric. Hortic. Vol. 36 (2): 87-92, 2004

cultivateurs et slectionneurs afin de

propager intensivement et conformment leur matriel vgtal de base
(ALTMAN et LOBERANT, 1998). Lutilisation de cette biotechnologie est satisfaisante par rapport aux mthodes traditionnelles et offre plusieurs avantages,
notamment pour lobtention de matriel
sain et dans un temps relativement court.
A cet gard, plusieurs tudes ont montr lutilit du greffage dapex in vitro
pour la multiplication et lassainissement des arbres fruitiers (CORNAGGIA,
1986; DEOGRATIAS et DOSBA, 1986). A
lorigine, cette technique fut mise au
point pour les agrumes par MURASHIGE
et al. (1972) et NAVARRO et al. (1975)
pour tre amliore ensuite par ROISTACHER et al. (1986).
De nombreux programmes damlioration gntique des arbres fruitiers ont
utilis le greffage in vitro comme solution dappoint aux problmes de la reproduction vgtative et comme moyen
de rsoudre des problmes agronomiques majeurs tels que lenracinement, le
contrle de la vigueur, lassainissement

des arbres viross, la sensibilit des racines aux maladies du sol et ladaptation
des varits aux alas pdologiques et
climatiques (JONARD et al., 1988).
La technique de greffage in vitro a t
applique chez plusieurs espces fruitires ligneuses (NAVARRO, 1988), notamment chez les cerisiers (DEOGRATIAS
et DOSBA, 1986), les pommiers (HUANG
et MILLIKAN, 1980), les pchers (BARBA
et al., 1995) et les agrumes (GUO et
DENG, 1998).
Durant ces dernires dcennies, la culture du chtaignier a subi un fort dclin
en raison, dune part, du bouleversement socio-conomique entranant la
dpopulation des rgions montagneuses
et, dautre part, du changement dans
les habitudes alimentaires. En plus, le
chtaignier europen a srieusement
souffert, au niveau de ses racines, de la
maladie de lencre cause par les
agents pathognes Phytophthora cambivora et P. cinnamomi (CRADDOCK et
BASSI, 1999).
Rcemment, lintrt port la culture
du chtaignier a augment pour rpondre la demande du march en fruits et
en bois. Cela a entran la recherche de
nouveaux cultivars producteurs ayant
une architecture de la couronne approprie la rcolte et la slection de nouveaux porte-greffes permettant une
meilleure adaptation de larbre greff
lenvironnement de culture et lui offrant une meilleure rsistance la maladie de lencre (GOMES PEREIRA et al.,
1993).
En Suisse, des programmes de slection
et de croisement ont t raliss ds les
annes cinquante pour amliorer la rsistance de lespce europenne indigne (Castanea sativa) (BAZZIGHER et
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MILLER, 1987). Pour cela, des espces

asiatiques ont t introduites en Europe
et surtout lespce japonaise (Castanea
crenata), relativement rsistante la
maladie de lencre et celle du chancre
de lcorce cause par lagent pathogne
Cryphonectria parasitica. Ces varits
exotiques ont t utilises comme gniteur pour des croisements contrls et
naturels, qui ont abouti la cration
des hybrides interspcifiques utiliss par
la suite comme porte-greffe (BREISCH,
1995).
Cependant, le greffage du chtaignier
est frquemment limit par des phnomnes dincompatibilit qui peuvent se
manifester au champ mme aprs plusieurs annes de croissance normale,
comme lont montr ORAGUZIE et al.
(1999) chez le chtaignier no-zlandais, PEREIRA-LORENZO et FERNANDEZLOPEZ (1997) chez le chtaignier espagnol et UFUK et SOYLU (1999) chez le
chtaignier turc.
Dans notre tude, lhybride interspcifique utilis comme porte-greffe est le
clone multipli in vitro Maraval CA-74,
qui prsente des caractristiques intressantes. Il offre aux varits greffer une
bonne rsistance lencre, une rsistance au gel prcoce, une bonne vigueur,
une rapidit de mise fruits et une
grande compatibilit (BREISCH,1995).
Nous rapportons ici les rsultats concernant la multiplication, lenracinement et le greffage in vitro dapex entre
le porte-greffe Maraval CA-74 et les
deux varits suisses Lina et Verdanesa
qui sont les plus rpandues sur le territoire du sud des Alpes.
Ce travail a t entrepris dans le cadre
dune collaboration entre le Service de
biologie vgtale (culture in vitro)
dAgroscope RAC Changins, la sousstation du sud des Alpes de lInstitut
fdral de recherches sur la fort, la
neige et le paysage (WSL, Birmensdorf) et le laboratoire de botanique
volutive de lUniversit de Neuchtel.

Multiplication in vitro
La multiplication in vitro du chtaignier
est reconnue difficile en raison de labsence dun protocole fiable pour cette
espce (BALLESTER et al., 2001). Dans
ce travail, nous avons choisi dessein
pour ces trois clones de chtaignier,
comme pour la majorit des espces ligneuses, la propagation in vitro par la
multiplication de bourgeons axillaires
(SNIR, 1982; DEOGRATIAS et DOSBA,
1986). Pour ce faire, des segments de
tige renfermant chacun un bourgeon
axillaire (env. 2-4 mm de longueur)
sont cultivs dans des conteneurs en
plastique contenant 60 ml dun milieu
nutritif de base DKW (DRIVER et KUNIYUKI, 1984) o la concentration de
CaCl2.2H2O et Ca(NO3).4H2O et NaFe
EDTA est respectivement de 147,950
et 40 mg/l. A ce milieu sont ajouts
0,2 mg/l de benzylaminopurine (BAP),
0,02 mg/l dacide 3-indolylbutyrique
(IBA), 4 mg/l de thiamine, 2 mg/l
dacide nicotinique,100 mg/l de myoinositol, 4 mg/l de glycine, 3% de fructose et 0,9% dagar (Bacto Agar).
Le pH du milieu nutritif est ajust 6,2
avec du NaOH ou du HCl 0,1 N avant
lautoclavage 121 C (1,1 kg/cm2 de
pression) pendant 15 minutes.
Les cultures sont maintenues dans un
environnement climatique avec un
clairement dont lintensit est de
50 umole/m2/s, fourni par des tubes
fluorescents de type Philips TLD
58 W/89, une temprature alterne
(25 1 C le jour, 18 1 C la nuit)
selon une photopriode de 16 heures
par jour. Lhumidit relative est de 60%
dans la chambre de culture pendant
toute la dure de lexprimentation.
Les nouveaux bourgeons obtenus in vitro
sont exciss et transfrs sur le mme
milieu toutes les quatre semaines afin
de produire du matriel exprimental.

Les conditions de strilisation et de

culture sont identiques celles de la
phase de multiplication in vitro (voir
ci-dessus).

Technique de greffage
in vitro
Au cours des essais prliminaires, linfluence du stade de croissance des
greffons a t examine. De ces rsultats, nous avons retenu des apex-greffons de deux semaines de culture in
vitro, qui, dans nos conditions dexprimentation, nous ont permis dobtenir
les meilleures rponses au greffage.
Aussi avons-nous poursuivi les essais
de microgreffage des varits Lina et
Verdanesa avec cette contrainte. Pour
le greffage in vitro, la greffe en fente
simple qui est la plus adapte notre
matriel a t retenue dans cette tude.
Des apex-greffons (env. 1 cm de longueur) sont coups et maintenus dabord
dans une solution de dithyldithiocarbamate de sodium (DIECA) pendant
cinq minutes, afin de prvenir loxydation des composs phnoliques rendant
toxiques les tissus endommags. Ensuite, dans des conditions dasepsie rigoureuses, les greffons sont taills en
biseau de manire viter une ouverture
trop large et trop profonde du portegreffe. Paralllement, on procde la
prparation du porte-greffe enracin de
Maraval CA-74 en crant une fente
simple pour recevoir le greffon. Tous
les bourgeons axillaires du porte-greffe
sont limins par la mme occasion.
Puis, sous une loupe binoculaire, on
procde lassemblage des deux partenaires laide de pinces fines. Les
plants greffs sont alors cultivs sur le
milieu denracinement et maintenus
ensuite dans la chambre de culture
dans les mmes conditions climatiques
que pendant la phase de multiplication.

Enracinement

Matriel et techniques
Matriel exprimental
Le porte-greffe est constitu par le
clone Maraval CA-74 qui est un hybride
interspcifique naturel issu dune pollinisation de Castanea crenata par Castanea sativa. Le matriel vgtal nous
a t fourni par le Ctifl, centre de Balandran (France).
Les greffons sont constitus par deux
varits suisses, Lina et Verdanesa. Ces
varits sont tablies et multiplies in
vitro dans le service de culture in vitro
dAgroscope RAC Changins (L, 1992).
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De jeunes pousses feuilles de quatre

cinq semaines de dveloppement cultives sur le milieu de multiplication sont
coupes leur base (env. 2-3 cm de longueur) et repiques sur un milieu denracinement, selon la technique BdR/
Ctifl-Balandran, France (BOURRAIN et
NAVATEL, 2000), contenant 2 mg/l
dacide 3-indolylbyturique (IBA). Les
pousses sont maintenues pendant sept
jours lobscurit, ensuite elles sont
transfres sur un milieu de base de
MURASHIGE et SKOOG (1962), sans rgulateurs de croissance, contenant de la
vermiculite pour permettre lmergence
des racines durant deux semaines.

Examen histologique
Lincompatibilit au greffage, aussi bien
intra- quinterclonale, est un phnomne
trs frquent chez le chtaignier (ORAGUZIE et al., 1999). Aussi, des examens
histologiques ont t raliss afin de
sassurer de laffinit entre les deux
cultivars et le porte-greffe. Lexamen
histologique consiste fixer des plants
de deux semaines greffs dans une solution de formaldhyde-acide actiquealcool (FAA). Ensuite, les chantillons
sont soumis une dshydratation graduelle dans lthanol de 20% 100%,
suivie dun enrobage par infiltration

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Fig. 1. Explants initiaux de chtaignier (Maraval CA-74) obtenus

aprs quatre semaines de culture partir de bourgeons axillaires.

Production de bourgeons axillaires

10
NBT: Nombre de bourgeons total
NBU: Nombre de bourgeons utilisables

8
6
4
2

r
rie
F
v

Ja

nv
i

er

e
D

c
e

br

br
e
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N

Se

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br

re

0
t

La multiplication in vitro des trois clones

de chtaignier selon la mthode mentionne ci-dessus a permis dobtenir
sans difficult plus de 95% dexplants
qui ont repris leur croissance et leur dveloppement normal par la suite, sans
ncrose apicale et sans chlorose (fig. 1
et 2). Le choix du milieu de culture solide et la prsence de la benzylaminopurine (BAP) et de lacide 3-indolylbutyrique (IBA) ( respectivement 0,2 mg/l
et 0,02 mg/l) dans le milieu nutritif ont
permis le dveloppement dun nombre
lev de bourgeons utilisables par explant pour le porte-greffe Maraval
CA-74 (fig. 3). La multiplication in
vitro du chtaignier est plus couramment pratique par le biais des bourgeons axillaires que par les apex, parce
que le pourcentage de bourgeons utilisables est plus lev. Cette mthode de
multiplication tait recommande par

lle

Multiplication in vitro

Ju
i

Rsultats et discussion

nombreux facteurs dordre nutritionnel,

hormonal et physique (consistance du
gel dagar) entrant dans la composition
du milieu nutritif pourraient tre
lorigine de ce dfaut dans la formation
des jeunes pousses feuilles (PQUES et
BOXUS, 1987).
Le nombre de bourgeons utilisables par
explant au cours des repiquages successifs est galement illustr dans la figure 3. On observe une variation importante du nombre total de bourgeons
(NTB) ainsi que du nombre de bourgeons utilisables (NBU) au cours de
ces repiquages. Le nombre de bourgeons utilisables est notamment plus
lev en juillet que durant les mois
dhiver. Cette variation dans le nombre
de bourgeons peut tre explique, selon
GONALVES et al. (1998), par lactivit
spcifique des peroxydases qui, en fonc-

plusieurs auteurs pour la famille des fagaces, reconnue difficile reproduire,

comme le chne et le htre (SAN-JOS
et al., 1988). Chez le chtaignier, la
diffrence entre les deux mthodes
peut tre explique par leffet de dominance produit par lapex, ainsi que par
le dveloppement maximal et lorientation morphogntique des bourgeons
axillaires qui sont utiliss pour la remise
en culture (SANCHEZ et al., 1997).
Toutefois, on remarque la prsence de
cals la base des bourgeons issus de
cette phase de multiplication et, dans
certains cas, de plantes feuilles vitreuses. Ce mme phnomne, observ
sur les jeunes pousses dveloppes in
vitro, a t relev auparavant par VIEITEZ et al. (1986) et MIRANDA-FONTAINA
et FERNANDEZ-LOPEZ (2001) sur les
clones de chtaignier espagnols. De

Nombre de bourgeons/explant

dans une solution de 50% dHistoresin

et de 50% dthanol absolu et enfin
dans une solution pure dHistoresin,
selon les indications de la firme Reichert-Jung (Heidelberg). Ils sont ensuite dcoups au microtome une paisseur de 5 m, colors par la raction de
lacide priodique de Schiff (PAS) et
contre-colors au Fast green. Enfin, les
coupes sont montes dans lEukitt puis
observes au microscope.

Fig. 2. Jeunes pousses feuilles du clone porte-greffe Maraval

CA-74 dveloppes partir dexplants initiaux. Barre = 1 cm.

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pt
e

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Ao
t

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Fig. 3. Nombre de bourgeons produits par explant au cours des repiquages successifs.

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tion des conditions climatiques environnantes, pourraient influencer la capacit de prolifration du chtaignier.
Par ailleurs, le problme majeur survenant lors de la multiplication in vitro
est le brunissement du milieu nutritif
caus par loxydation des composs
phnoliques librs par le tissu vgtal,
comme nous lavions observ auparavant (L, 1992) sur les clones de chtaignier suisses. Afin de remdier
cette difficult, les explants sont maintenus pendant quatre cinq jours
lobscurit lors de chaque remise en culture. A cet gard, SANCHEZ et al. (1997)
et MATO et VIEITEZ (1986) ont suggr
pour plusieurs espces ligneuses le
maintien lobscurit des explants frachement inoculs. Cela contribue
diminuer de faon importante la contamination du milieu nutritif par des
composs phnoliques exsuds lors des
repiquages.

Enracinement in vitro
Au cours de multiples repiquages sur
le milieu de multiplication contenant
0,2 mg/l de BAP, nous avons isol les
pousses feuilles et les avons transfres sur un milieu denracinement appropri pour quelles dveloppent de
nouvelles racines adventives. Cela a
permis de reconstituer des plantes entires capables de subir des expriences
de greffage in vitro (fig. 4). Lexamen
des rsultats aprs deux semaines de
culture montre quun taux denracinement important (env. 95%) a pu tre ob-

tenu avec une concentration de 2 mg/l

dIBA. On dnombre en moyenne quatre nouvelles racines produites par explant et par cycle de culture, avec une
longueur de 12 15 mm environ. Elles
sont vigoureuses et dotes parfois de racines secondaires. Une forte concentration dauxine (1 5 mg/l) pour induire
la formation de racines adventives sur
le porte-greffe du chtaignier est, dans
le cas prsent, indispensable, comme
lont dmontr XING et al. (1997) pour
la micropropagation du chtaignier
amricain. A ce propos, des travaux antrieurs montrent que lenracinement
du chtaignier peut tre obtenu soit par
la culture de jeunes pousses feuilles
sur un milieu contenant 1 5 mg/l
dacide-3-indolylbutyrique (IBA), soit
par un trempage des bourgeons axillaires dans une solution dIBA forte
concentration (0,5 1,0 g/l) pendant 30
120 secondes (SANCHEZ et al., 1997;
CHAUVIN et SALESSES, 1988).
Cependant, linconvnient majeur qui
apparat au stade de lenracinement est
la prsence de ncroses apicales. En effet, nous avons relev une partie non ngligeable (env. 25%) de pousses feuilles prsentant ce dfaut aprs le cycle
denracinement. Des observations similaires ont t galement faites par XING
et al. (1997). VIEITEZ et al. (1989) ont
aussi constat ce dfaut physiologique et
ont tent dexpliquer ce phnomne par
une dficience en calcium, le manque
de cytokinines dans le milieu de culture
et par une connexion vasculaire incomplte entre les bourgeons et les racines
dveloppes in vitro. Cela empche,

Fig. 4. Clones de Maraval CA-74 enracins sur le milieu denracinement selon la technique
BdR.

90

par consquent, labsorption des lments nutritifs indispensables leur

croissance. Afin de parer ce dfaut
physiologique, divers moyens ont t
suggrs lors de la phase denracinement, tels que lapport de calcium (SHA
et al., 1985; YANG et al., 1985; SINGHA
et al., 1990), des cytokinines (KATAEVA
et al., 1991; PIAGNANI et al., 1996) ou
encore lincorporation des vitamines
dans le milieu nutritif jouant le rle
dantioxydant lencontre des composs phnoliques (L, 2001). Dans cette
tude, nous avons utilis des plantes
dont lapex prsentait une croissance
normale pour lopration de greffage
ultrieure.

Greffage in vitro
et examen histologique
La technique de greffage in vitro dcrite
plus haut permet dobtenir les plantes
greffes avec les cultivars Verdanesa et
Lina ncessaires lexamen histologique (fig. 5a et b).
La reprise de greffes effectues sur des
plantes ges de deux semaines de
culture montre que nos conditions
dexprimentation sont favorables au
dveloppement des plantes greffes. La
dtermination des conditions physiologiques de deux partenaires est primordiale pour tablir un certain quilibre
entre la vigueur du porte-greffe et du
greffon, facilitant la reprise de croissance ultrieurement. Dans notre exprience, lassemblage du greffon, g de

Fig. 5a. Plant greff du clone Lina sur Maraval CA-74. Arrt de croissance (flche)
montrant lincompatibilit des partenaires
aprs deux semaines en culture in vitro.

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deux semaines, sur le porte-greffe racin parat correspondre aux exigences

dordre pratique pour russir le greffage in vitro chez le chtaignier. En ce
qui concerne les plantes ligneuses,
FRANCLET (1981) montre que le greffage dapex prlev sur des explants
cultivs in vitro est avantageux parce
quil entrane un rajeunissement du
matriel adulte.
De mme que lors de lopration denracinement, nous avons constat que le
problme majeur du greffage in vitro
tait la prsence de ncroses sur les
apex des greffons de la varit Lina.
Ce phnomne peut tre la manifestation des symptmes dincompatibilit
dite localise (HERRERO, 1951) entre
varit et porte-greffe. Les coupes histologiques (fig. 6a et b) montrent bien
lexistence dune barrire constitue
par un prcipit dense et labsence de
connexion entre les deux partenaires.
Des rsultats similaires ont t aussi
trouvs par HUANG et al. (1994) qui relvent le mme phnomne dincompatibilit de greffage chez les chtaigniers
asiatiques. Ces auteurs montrent quil
ny a pas de relation troite entre lactivit des peroxydases dans lapex et son
dveloppement aprs le greffage. En
fait, cette incompatibilit localise
semble tre due une diffusion des
substances inhibitrices provenant des
cellules de deux partenaires (BRIAN et
DURON, 1971) ou du greffon, qui empchent le dveloppement des cellules du
porte-greffe comme le montre MOORE
(1986) dans ses travaux portant sur la
compatibilit entre poirier et cognas-

pg

pg
g

pg
Fig. 6a. Coupe longitudinale dun
plant greff aprs deux semaines
de culture. g = greffon Lina; pg
= porte-greffe Maraval CA-74.
Grossissement 5.

Fig. 6b. Ligne dense montrant la sparation des deux

partenaires et matrialisant leur incompatibilit. Grossissement 40.

sier. De mme, le stade physiologique

de la plante (DEOGRATIAS et al., 1991)
ainsi que loxydation des polyphnols
produits la surface des coupes par les
deux partenaires jouent galement un
rle important dans la russite du greffage (RAMANAYAKE et KOVOOR, 1999).
Contrairement la varit Lina, aprs
deux semaines de greffage in vitro entre
Verdanesa (greffon) et Maraval CA-74
(porte-greffe), les tissus sinterpntrent
et entrent en division active de part et
dautre (fig. 7a et b). Les observations
histologiques montrent des zones de
prolifration plus larges et plus nombreuses, alors que ces zones demeurent
en petit nombre et peu dveloppes
chez Lina. Les tissus vasculaires entrent en contact avec les tissus cambiaux, offrant la possibilit dune connexion vasculaire ultrieure, comme la
observ HERRERO (1951) sur le pcher
(var. Hales early) greff sur le portegreffe Brompton. Lauteur signale quun
contact est trs rapidement tabli entre
les deux partenaires et que lactivit
des tissus vasculaires respectifs contribue produire une connexion continue
entre le porte-greffe et le greffon: cest

un cas de compatibilit entre les deux

partenaires. A ce propos, BRIAN et
DURON (1971) ont aussi rapport que
lorsquune combinaison entre le poirier
(var. Passe-Crassane) et un cognassier
(Cydonia oblonga) est compatible, un
cambium continu se met en place,
constituant une vritable diffrenciation
histologique, et la combinaison volue
alors normalement.
Ainsi, le greffage in vitro nous permet
dobtenir des plantes greffes et de dtecter prcocment les incompatibilits
qui se manifesteront au champ, parfois
trs tardivement aprs plusieurs annes,
entranant par consquent des pertes
considrables pour les producteurs (JONARD et al., 1983). Cete constatation
permet damliorer les conditions de
greffage traditionnel, en recourant
dune part des plants de C. sativa slectionns issus de semis et en plantant
dautre part directement des hybrides
interspcifiques slectionns et compatibles avec plusieurs varits. Ces deux
moyens peuvent tre utiliss efficacement par les slectionneurs de plants
du chtaignier pour russir le greffage
au champ.

pg

Fig. 5b. Plant greff du clone Verdanesa sur

Maraval CA-74. Reprise de greffe (flche)
montrant la compatibilit des partenaires
aprs deux semaines en culture in vitro.

Fig. 7a. Coupe longitudinale dun

plant greff aprs deux semaines
de culture. g = greffon Verdanesa.
pg = porte-greffe Maraval CA-74
(flche = zones de connexion).
Grossissement 5.

pg
Fig. 7b. Zone montrant le dbut de la connexion des
deux partenaires (flche). Grossissement 40.

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Conclusion
Lensemble des rsultats exprimentaux concernant les conditions
de multiplication, denracinement
et de greffage du chtaignier in
vitro raliss dans ce travail permettent de tirer les conclusions
suivantes:
il est possible de faire prolifrer
des pousses feuilles utilisables
de trois clones de chtaignier
(Maraval CA-74, Verdanesa et
Lina) grce laction conjugue de la benzyladenine (0,2
mg/l) et de lacide-3-indolylbutyrique (IBA 0,02 mg/l);
lenracinement des pousses
feuilles (clone Maraval CA-74)
servant de porte-greffe peut tre
obtenu avec le traitement
lIBA 2 mg/l;
le greffage in vitro des cultivars
Verdanesa et Lina sur portegreffe Maraval CA-74 est ralisable en utilisant des greffons
gs de deux semaines;
lexamen histologique effectu
sur des sujets greffs permet de
visualiser, au niveau de la greffe,
le degr de compatibilit entre
les deux partenaires.
Des travaux ultrieurs effectus
sur dautres gnotypes slectionns sont en cours de ralisation,
afin de vrifier lefficacit de cette
nouvelle technique, cela en rapport avec le contrle au verger.
Dans cette tude, le protocole exprimental mis au point notre connaissance pour la premire fois
peut constituer, en labsence dune
technique de dtection fiable et reproductible sur la compatibilit (ou
incompatibilit) au greffage du chtaignier, une alternative avantageuse permettant dviter de longues
annes dobservation au champ.

Remerciements
La direction dAgroscope RAC Changins est vivement remercie pour avoir
autoris la ralisation de cette tude
Changins, dans le cadre dune collaboration avec lUniversit de Neuchtel et
lInstitut fdral de recherches sur la
fort, la neige et le paysage (WSL, Birmensdorf). Nos remerciements sadressent galement au professeur Philippe
Kpfer, de lUniversit de Neuchtel,
pour nous avoir accueillis dans son laboratoire de botanique volutive et avoir
facilit le dveloppement dun nouveau
sujet de recherche, et M. Marco
Conedera (WSL, Birmensdorf) pour son
intrt port cette tude et pour ses
conseils aviss. Notre gratitude sexprime galement lAction COST 843
(OFES) pour son encouragement au d-

veloppement des biotechnologies vgtales appliques en Suisse. Notre reconnaissance va aussi Mme Maria Lafargue
(INRA-Bordeaux), Mme Laurence Bourrain et M. Jean-Claude Navatel, Ctifl,
centre de Balandran (France) pour la
mise disposition du matriel vgtal
indispensable la ralisation de ce travail. De mme, nos remerciements sont
adresss MM. Alberto Sassella et
Mauro Jermini (RAC-Cadenazzo) pour
leur intrt port ce travail, ainsi qu
tous nos collgues du service de culture in vitro pour leur prcieuse collaboration permettant le bon droulement
de cette tude.

Bibliographie
La liste complte des rfrences bibliographiques
peut tre obtenue auprs du premier auteur.

Summary
In vitro micrografting of chestnut (Castanea sativa Mill.)

A method for in vitro propagating, rooting and grafting of three clones of chestnut
(Maraval CA-74, Lina and Verdanesa) is described in this paper.
The composition of the nutrient medium and the choice of the physiological stage
suitable for grafting can play an important role for the successful result in the micrografting process.
To ensure the compatibility between scion and rootstock, an histological study was
realized on the grafted plantlets in view to visualize the compatibility degree between
partners at the tissue level.
Key words: Castanea crenata Castanea sativa, chestnut, in vitro grafting, apical
necrosis, compatibility.

Zusammenfassung
In vitro Mikro-Veredelung des Kastanienbaums (Castanea sativa Mill.)

In diesem Artikel wird eine Methode zur Massenvermehrung, Wurzelbildung und

Veredelung von drei Kastanien-Klonen (Maraval CA-74, Lina und Verdanesa)
beschrieben.
Die Zusammensetzung des Nhrmediums und die Wahl der fr die Veredelung
geeignete physiologische Phase knnten eine wichtige Rolle spielen fr den Erfolg
des Mikro-Veredelungs-Prozesses.
Um auf dem Niveau des Gewebes den Kompatibilittsgrad der Sorte mit der Unterlage
sicherzustellen wurde eine histologische Studie durchgefhrt.

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