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CAMPUS GUANAJUATO
DEPARTAMENTO DE QUIMICA
TESIS
QUE PARA OBTENER EL TTULO DE:
QUMICO
PRESENTA:
ADN ULISES QUIROGA ALMAGUER
AGRADECIMIENTOS
Este trabajo es para ti, Ana, que a pesar de todo siempre me ayudas a tu manera, con
todo lo que necesito y sin vacilacin, gracias a ti doy un paso mas, eres la mejor madre que
pude haber deseado.
Al Dr. Gustavo Rangel Porras por su apoyo duran te la realizacin de este proyecto,
que me dio la oportunidad de combinar las reas de mi inters y que me dio a conocer el
rea de la qumica que mas me ha interesado hasta ahora, la ciencia de los materiales.
Muchas gracias a la Dra. Patricia Ponce Noyola, que adems de su total apoyo y
gua al este proyecto me abri las puertas de su laboratorio por bastante tiempo, y tambin
gracia a ello poder concluir mas rpidamente este proyecto. Mencionando tambin al Dr.
Alberto Flores que mientras surge una duda el con destreza resuelve sin problemas
Dedicado a las personas que hice como compaeros y amigos de laboratorios,
empezando por aquellos que se dedican a hacer materiales, como Pedro, que hace amena la
estancia en el laboratorio. No sin menos importancia, los futuros investigadores que
desarrollan su lucha incansable contra los hongos de la pudricin blanca; Coco, que fue la
que me inicio en la historia del ADN, Sandy y su espritu de gua, Csar y su inigualable
humor, Cristhian y su habilidad para distraerme en los ratos de estrs, Cristy y su
optimismo inagotable, Alicia y su alegra de la ovoazcar, sin olvidar a Cho, Elena, Edgar,
Irais y Elas, grandes personas con un carisma sin igual.
Tambin a mis amigos que conoc en Guanajuato, desde que ingrese me he
encontrado con grandes personas, como Adriana y Miguel, mis primeros y grandes amigos,
May una amiga que soporta mis quejas y me da nimos para todo, Dulce Tula que me
ayuda a resolver mis dudas. Sin olvidar a aquellos que por su manera de ser mejoran mi
humor, como Ral y Martn.
Especialmente gracias a esas personas que sin saber de qumica, me resuelven mis
dudas y me guan y apoyan en mis problemas; gracias a Josu por su apoyo incondicional,
Totoro y sus visitas, Jorge y sus regaos, Mariana y Luis Miguel siempre hasta en los
peores momentos.
Este paso tambin es para ti, que me dejaste grandes cosas y que siempre te llevo en
mi mente y corazn, se que a todos nos cuidas desde donde estas, vigila nuestros pasos y
nos veremos pronto Beto.
A mi papa y la familia Quiroga por su apoyo, sin olvidar a los Almaguer.
ndice
NDICE
ndice de figuras
III
ndice de tablas
Introduccin
Hiptesis
Objetivo General
Objetivos Particulares
Justificacin
Captulo 1
Antecedentes
17
18
20
20
22
22
22
~I~
ndice
Captulo 2: Desarrollo experimental
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36
37
~ II ~
ndice
3.2.3 Fisisorcin de nitrgeno de arcillas K10 y KSF modificada con
Na+
38
de
Biomolculas
de
ADN
con
arcillas
42
42
44
45
48
Conclusiones
51
Bibliografa
52
NDICE DE FIGURAS
Figura 1.1: Estructuras moleculares de las bases nitrogenadas que
conforman el ADN. El nmero sobre los tomos muestran su posicin
dentro del anillo.
12
14
~ III ~
ndice
Figura 1.5: Estructura laminar de la montmorillonita.
18
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31
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39
40
42
44
~ IV ~
ndice
Figura 3.13: Espectros FTIR en el rango de las muestras: a) K10
+ADN, b) KSF-Na+ADN, c) KSF+ADN y d) K10-Na +ADN.
Figura 3.14: Isoterma de adsorcin de N 2 a 77 K para las muestras
con ADN: a) K10 y b) KSF. Los slidos iniciales (lnea punteada) y
solidos modificados con Na+ (lnea slida).
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49
50
NDICE DE TABLAS
Tabla 1.1: Caractersticas estructurales de las diferentes
conformaciones del ADN.
13
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33
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~V~
ndice
37
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49
~ VI ~
Introduccin
INTRODUCCIN
La interaccin de molculas de cidos desoxirribonucleicos (ADN) con superficie
de slidos inorgnicos ha atrado mucha atencin desde el punto de vista de estudios
tericos como investigacin aplicada en varios campos. Por ejemplo, se ha reportado el uso
de ADN como plantillas de biopolmeros para la construccin de materiales inorgnicos
con estructura definida. Tambin, se han estudiado materiales porosos para la separacin de
este tipo de molculas, para estudios genticos o farmacuticos. De manera particular, la
interaccin de ADN con arcillas o minerales arcillosos es de particular importancia en el
campo de la prebitica, ya que se ha considerado que es el medio ideal para llevar a cabo la
polimerizacin de fragmentos pequeos para la produccin de macromolculas biolgicas.
En el medio ambiente se considera que la interaccin de estas molculas con las arcillas
determina un papel primordial en la transferencia de informacin gentica entre bacterias.
Varios autores han reportado estudios de adsorcin de ADN en arcillas localizadas en una
zona geogrfica determinada. Sin embargo, generalmente no se reporta las caractersticas
del mineral que tienen mayor influencia en la retencin de dichas molculas sobre su
superficie. En este trabajo se llev a cabo el estudio de la interaccin de molculas de ADN
obtenidas de la raz de ajo, sobre la superficie de dos arcillas comerciales. Las arcillas
utilizadas en el presente estudio son de tipo montmorillonita, pero con caractersticas
diferentes entre las que destaca el rea superficial y la naturaleza de sitios cidos en su
superficie. Las arcillas fueron modificadas mediante la incorporacin de iones de sodio en
un proceso de intercambio catinico. La presencia y preservacin de ADN al contacto con
el slido suspendido en agua, se determin mediante anlisis por electroforesis en un gel de
agarosa. El slido fue caracterizado antes y despus del proceso de adsorcin mediante
tcnicas como: microscopa electrnica de barrido (SEM) con estudios de energa de
dispersin de rayos-X (EDS), espectroscopa de infrarrojo con transformada de Fourier
(FTIR), adsorcin de nitrgeno a 77 K, y anlisis Termogravimtrico (TG).
HIPTESIS
La adsorcin de ADN en la superficie de una arcilla no solamente depende de la
estructura y del tipo de slido, sino tambin de caractersticas superficiales como el tipo de
sitios cidos del material, y la densidad de estos. La fuerza de los sitios de adsorcin puede
variar dependiendo del ion intercambiable presente, lo que causar variacin en la
interaccin del material con el ADN.
Introduccin
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS PARTICULARES
JUSTIFICACIN
El estudio de la interaccin de molculas de ADN y arcillas o minerales arcillosos
es de gran importancia debido a que son materiales presentes en el suelo y por lo tanto,
tienen un papel primordial en la dinmica de muchos procesos de difusin o transferencia
de compuestos orgnicos. Adems, las arcillas, por su estructura, tienen propiedades muy
interesantes que permiten la fijacin de especies qumicas mediante diferentes mecanismos.
Adicionalmente son materiales econmicos para ser utilizados en procesos de separacin o
purificacin. Este proyecto ayudara a comprender la interaccin del ADN en la superficie
de arcillas montmorillonita, principalmente el papel de los sitios cidos en el proceso de
adsorcin de estas biomolculas. Adicionalmente se pretende conocer la posibilidad que
tienen el uso de arcillas para la separacin y preservacin de ADN para su aplicacin en
estudios de biologa molecular.
Captulo I
CAPTULO I
ANTECEDENTES
1.1 Importancia de los procesos de Adsorcin de Biomolculas.
La adsorcin es un proceso de separacin y concentracin de uno o ms
componentes de un sistema sobre una superficie slida o lquida. Los distintos sistemas
heterogneos en los que puede tener lugar la adsorcin son: slido-lquido, slido-gas y
lquido-gas. Como en otros procesos de este tipo, los componentes se distribuyen
selectivamente entre ambas fases. La sustancia que se concentra en la superficie o se
adsorbe se llama adsorbato y la fase que va a adsorber se llama adsorbente. En
contraparte la absorcin es un proceso en el cual las molculas o tomos de una fase
interpenetran casi uniformemente en los de la otra fase constituyndose una solucin con
esta segunda. El proceso de cambio inico supone un intercambio de una sustancia o in
por otra sobre la superficie del slido. La principal distincin entre sorcin (adsorcin y
absorcin) y cambio inico es que las ecuaciones que describen la sorcin consideran
solamente una especie qumica, de manera que la distribucin del soluto entra la disolucin
y el slido responde a una relacin simple, lineal o no. Las ecuaciones para el cambio
inico tienen en cuenta todos los iones que compiten por los lugares de intercambio.
La adsorcin que tiene lugar debido a las fuerzas de Van del Waals se llama
generalmente adsorcin fsica o fisisorcin. En estos casos, la molcula adsorbida no est
fija en un lugar especfico de la superficie, sino ms bien est libre de trasladarse dentro de
la interfase. Esta adsorcin, en general, predomina a temperaturas bajas. Si el adsorbato
sufre una interaccin qumica con el adsorbente, el fenmeno se llama adsorcin qumica,
adsorcin activa o quimisorcin. Las energas de adsorcin son elevadas, del orden de las
de un enlace qumico, debido a que el adsorbato forma unos enlaces fuertes localizados en
los centros activos del adsorbente. Esta adsorcin suele estar favorecida a una temperatura
elevada. La mayor parte de los fenmenos de adsorcin son combinaciones de las tres
formas de adsorcin y, de hecho, no es fcil distinguir entre adsorcin fsica y qumica.
Captulo I
formular mediante ecuaciones relativamente sencillas, como la debida a Freundlich. Es
importante el carcter ms o menos polar de las molculas de adsorbato, as como el
tamao de las mismas. Se puede decir que el soluto se adsorber ms fcilmente cuando la
afinidad de aqul por la superficie sea superior a su afinidad por el disolvente. Por tanto, la
energa de unin entre la superficie y la sustancia considerada depende de la naturaleza de
los solutos que han de adsorberse. La adsorcin depende de tres factores fundamentales: 1)
las caractersticas del adsorbato, 2) propiedades superficiales de slido adsorbente y 3)
condiciones del medio de reaccin. Por lo tanto, para determinar si un compuesto podr ser
retenido en un slido especfico, es necesario conocer aspectos de la qumica y fsica del la
superficie del material. Estas caractersticas comprende la presencia de sitios cidos de
Lewis o Brnsted, el potencial Z a determinadas condiciones del sistema de reaccin, el
tamao de los poros, el rea superficial disponible, etc.
Captulo I
La biomolcula de ADN es un biopolmero constituido por monmeros llamados
nucletidos, estos monmeros estn conformados por una base nitrogenada, un grupo
fosfato y un azcar. Principalmente existen dos tipos de bases nitrogenadas, estas pueden
ser tipo pirimidnica o tipo prica, son llamadas de esta manera debido a que son molculas
anlogas a la pirimidina y a la purina, la base nitrogenada est unida a una molcula de
ribosa (azcar con conformacin de pentosa), para el ADN esta pentosa perdi el oxigeno
unido a su carbono 2 y es conocida como desoxirribosa.
La adenina (A) y guanina (G) son bases puricas, mientras que la timina (T) y
citosina (C) son las bases pirimidnicas que conforman la estructura del ADN (Figura 1.1).
Adenina (A)
Guanina (G)
Timina (T)
Citosina (C)
Captulo I
(I)
(II)
Figura 1.2: Representacin de (I) cadena sencilla de ADN con una cadena formada
por los enlaces fosfodiester entre los grupos fosfato y las pentosas y (II) las uniones que
tiene la doble cadena con el sentido de cadena 5 3 complementndose con otra cadena
en unida sentido 3 5 [Tomada y modificada de Yang y col,. 2010].
Captulo I
La estabilidad del ADN est fuertemente ligado con la cantidad de pares de bases
nitrogenadas que lo conforman pero las condiciones del medio puede modificar su
estructura, por ejemplo, el ADN en condiciones fisiolgicas se encuentra compactado en el
ncleo de las clulas por protenas, pero si el ADN se encuentra en solucin, dependiendo
de las condiciones de esta solucin, el ADN puede encontrarse en una conformacin
diferente en lo que respecta al acomodo de la doble hlice, este fenmeno depende de la
hidratacin o la fuerza inica del medio en el cual estn suspendidas las biomolculas
[Leningher, 1985].
Propiedades
Sentido de la hlice
Inclinacin (residuos por vuelta)
Longitud / residuos
Rotacin / residuos
Inclinacin de pb hacia el eje
A-ADN
derecha
11
2.55
32.7
22.6
B-ADN
derecha
10
3.4
36.0
2.8
Z-ADN
Izquierda
12
3.7
-60/2 pb
0.1
Captulo I
La molcula de ADN posee propiedades fisicoqumicas como [Leningher, 1985;
Acharya, 2006]:
Captulo I
La interacciones entre ADN y adsorbato depende de la naturaleza del slido con el
que entre en contacto, estudios tericos sugieren posibles mecanismos de interaccin entre
las bases nitrogenadas y diferentes slidos inorgnicos, adems de que se postulan teoras
sobre la fijacin que ocurriran con el ADN en diferentes tipos de slidos [Trevors, 1996],
tambin existen estudios realizados sobre la interaccin del ADN sobre materiales de
diferente naturaleza y estos reportes aportan datos sobre su adsorcin y sus posibles
mecanismos de conservacin, ya que la interaccin del ADN con diferentes solidos
delimita las caractersticas que un slido debe poseer para que se lleve a cabo una
interaccin eficiente con esta biomolcula y posteriormente generar informacin terica
sobre los mecanismos de fijacin que realiza el ADN para su estabilizacin y conservacin,
ya sea que se las biomolculas se fijen sobre la superficie del material o en los diferentes
espacios internos, como lo son los poros, de estos slidos adsorbentes.
Captulo I
retener el ADN en los espacios interlaminares por medio de intercambio aninico y el ADN
puede ser desorbido fcilmente por cambios de pH cidos [Choy y col., 2007; Carell y col.,
2007; Fornaro y col., 2013].
El MgO posee capacidad para adsorber bases nucleicas con el siguiente orden de
afinidad: adenina > uracil hipoxantina > citosina mientras que el TiO 2 posee mayor
afinidad por adenina y citosina en lugar de la hipoxantina y uracilo [Yang y col., 2010].
Los materiales que son utilizados como biosensor de ADN son costosos, por ellos se
buscan alternativas ms accesibles, uno de estos materiales es el grafeno, pero no solo es
utilizado como biosensor, en algunas investigaciones se utiliza el xido de grafeno para la
hibridacin de ADN por medio de la adsorcin de ssADN y despus la interaccin con
cADN planteando posibles mecanismos de interaccin, como el mecanismo de Langmuir-
10
Captulo I
Hinshelwood en el cual se adsorben los dos tipos de ADN y se hibridan en la superficie del
xido de grafeno, otra opcin consiste en la hibridacin por el modelo de Eley-Ridle en el
cual no se adsorbe el cADN y reacciona sobre la superficie con el ssADN para despus
liberarlo y por ltimo el mecanismo en el cual son adsorbidos los dos tipos de ADN pero se
hibridan en la solucin [Solberg y col., 2006].
Existe otra matriz inorgnica en la cual el ADN es retenido, esta matriz es el suelo,
que a pesar de que es una matriz compleja con una gran cantidad de sitios activos a los que
se puede unir el ADN, todo el tiempo se llevan a cabo procesos de adsorcin de ADN, sin
importar su naturaleza o propiedades otorgadas por la regin en la que se encuentra, la
informacin que aportan las interacciones de molculas con el suelo define las condiciones
y propiedades que son aptas para una retencin ptima e identificar las caractersticas que
un slido debe tener, en el caso del ADN, para evitar su degradacin y de esta manera
conservarlo para su posterior utilizacin por los organismos que viven en los diferentes
estratos del suelo [Saeki y col., 2011].
11
Captulo I
Al ocurrir el fenmeno de adsorcin, el ADN logra ser retenido con una mnima
degradacin o tambin es estabilizado y no presenta degradacin, es utilizado por
microorganismos competentes capaces de asimilarlo, las cadenas de ADN pueden ser
reutilizados por diferentes organismos del suelo o completamente degradado para ser
utilizado como fuente de C, N y P por organismos heterotrpicos [Elimelech y col., 2010].
Estudios de fijacin del ADN en el suelo proponen que esta biomolcula es utilizada
como material informtico que incorporan los diversos organismos para adaptarse a un
medio hostil. El suelo es una matriz muy compleja compuesta principalmente de materiales
inorgnicos, los componentes ms abundantes del suelo son los xidos metlicos,
principalmente de xidos de silicio y xidos de aluminio, estos xidos constituyen el
soporte del suelo, estos xidos metlicos poseen caractersticas que favorecen la retencin
de molculas orgnicas e inorgnicas. La retencin de estas molculas en el suelo depende
de la estructura de los adsorbatos, la carga que posea el adsorbatos, la cantidad de materia
orgnica en el suelo, tamao molecular del adsorbato, etc. [Pietramellara y col., 2007;
Elimelech y col., 2010].
El suelo se constituye de diferentes estratos (Figura 1.3), que a su vez actan como
un filtro que retiene o permite el paso de diferentes compuestos a las diferentes
estratificaciones, estas capas de suelo se clasifican dependiendo de su tamao de partcula,
las partculas con un tamao mayor a 2 mm se les llama grava, partculas con un tamao en
el rango de 2 mm hasta 0.05 mm es conocido como arena, las que poseen un rango de 0.05
hasta .002 mm es considerada como limo y finalmente las arcillas, que poseen un tamao
de partcula, que corresponde a un rango menor a .002 mm [Tan, K. H.; (1998), Flessner y
col., 2001].
12
Captulo I
Las diferentes partculas que forman las diferentes capas del suelo estn constituidas
por xidos de silicio y xidos de aluminio, aunque en los xidos de silicio se llevan a cabo
una mayor retencin de compuestos orgnicos e inorgnicos. Generalmente las molculas
de xidos de silicio poseen forma tetradrica, pero estos xidos pueden poseer estructuras
conglomeradas naturales muy variadas y diferentes entre s, una de las cuales se destaca un
tipo estructural en especfico que presenta el suelo abundantemente, este grupo son los
filosilicatos. Los diferentes tipos de silicatos se enlistan en la Tabla 1.2.
Caractersticas
Minerales
Ciclosilicatos
Tourmalina, beniotita
Inosilicatos
Amfibola, piroxeno,
hornablendita
Nesosilicatos
Tetraedros aislados
Filosilicatos
Hojas de tetraedros
Sorosilicatos
Epidota
Tectosilicatos
Arreglo de tetraedros
La tabla muestra que los silicatos poseen una conformacin estructural diferente a
pesar de que posean como unidad estructural el tetraedro de xido de silicio, estas
conformaciones les otorgan propiedades diferentes entre s.
Las arcillas que son silicatos con estructura de hojas o tambin llamados
filosilicatos, otro componente principal son las zeolitas que son conglomerados de
tetraedros de xido de silicio o tectosilicatos, aunque en menor abundancia que las arcillas
[Tan, K. H.; (1998)]. Las estructuras de los compuestos conformados por xidos de silicio
son mostradas en la figura 1.4.
13
Captulo I
14
Captulo I
Algunas investigaciones reportan que las arcillas son los slidos que mejor
adsorcin de compuestos presentan, tanto de molculas orgnicas y molculas inorgnicas.
Existen investigaciones que hablan sobre la interaccin del ADN con algunos tipos de
arcilla y tambin reportan los factores que afectan su conservacin, por ejemplo: unos
autores comparan la selectividad de la adsorcin de ADN en presencia de impurezas
provenientes de restos celulares [Cai y col., 2008], algunos reportan, la eficiencia de
adsorcin dependiendo del catin intercambiado en el slido como puede ser Ca 2+, Mg2+,
Co2+ y Zn2+ [Choy y col., 2007], as como tambin la influencia del grado de hidroxilacin
con especies de aluminio [Cai y col., 2009], algunas investigaciones mencionan que la
retencin de ADN se favorece con la presencia de algunos metales, aun que este tipo de
interacciones modifica la estructura del ADN [Yvarson y col., 1982; Essington, 2004].
15
Captulo I
Tabla 1.3: Clasificacin de las Arcillas [Tomada de Rangel, 2010].
Dioctadricas
Bilaminares
Trioctadricas
Canditas
Caolinita
Serpentina
Antigorita
T:O
Nacrita
Crisotilo
1:1
Dickita
Lizardita
Halloisita
Bertierina
Trilaminares
T:O: T
Pirofilita
Esmectitas
2:1
Talco
Saponita
Esmectitas
Hectorita
Montmorillonita
Beidelita
Nontronita
Vermiculitas
Illitas
Vermiculitas
Moscovita
Micas
Biotita
Flogopita
Micas
Paragonita
Lepidolita
T:O: T: O
2:1:1
Fibrosos
Cloritas
Paligorskita
Sepiolita
16
Captulo I
Tabla 1.4: Compuestos inorgnicos pertenecientes al grupo de las esmectitas
[Tomada de Rangel, 2010].
Dioctadricas
+
3+
2+
Montmorillonita (M y nH2 O)(Al 2-y ,Mg y )
4+
Si 4 O10 (OH)2
Trioctadricas
+
2+
+
Hectorita (M y nH2 O)(Mg 3-y ,Li y )
4+
Si 4 O10 (OH)2
Beidelita
(M+xnH2 O)Al3+2
(Si4+4-x Al3+x)O10 (OH)2
Saponita
Nontronita
(M+xnH2 O)Fe3+2
(Si4+4-xAl3+x)O10 (OH)2
+
2+
Sauconita (M x nH2 O)Zn 2
(Si4+4-xAl3+x)O10 (OH)2
Volkonskoita
(M+xnH2 O)Cr3+2
(Si4+4-xAl3+x)O10 (OH)2
17
Captulo I
comparten entre los otros tetraedros (oxgenos apicales) y por grupos hidroxilo de las capas
octadricas.
Las arcillas tipo Montmorillonita se caracterizan por estar constituidas de dos capas
tetradricas de xidos de silicio y una capa octadrica de xidos de aluminio, con una
composicin qumica (Na, Ca)0.33 (Al, Mg)2 (Si4 O10 )(OH)2 nH2 O. Posee un espacio
interlaminar que oscila en los 14 y puede poseer intercambios isomorficos del aluminio o
magnesio en las capas octadricas que provocan una descompensacin de carga por metales
como el Fe2+ o el Fe3+, estas arcillas poseen iones como Mg2+, Fe2+, Ca2+, Na+ y K + que
cumplen la funcin de cationes intercambiables que estabilizan las cargas negativas
generadas por las sustituciones isomorficas metlicas, estas caractersticas le permiten
interaccionar con diferentes molculas y es utilizado como material adsorbente o
catalizador (Figura 1.5).
18
Captulo I
Los cationes y los sitios cidos crean interacciones intermoleculares y dependiendo
del nmero de sitios activos, mayor ser cantidad de molculas que se puedan adsorber en
esa superficie disponible, los cationes intercambiables que pueden ser desplazados por otras
molculas cargadas o por medio de la formacin de complejos, mientras que los sitios
cidos utilizan atracciones electrostticas de diferentes tipos como Van der Walls, puentes
de hidrogeno, etc.
Las arcillas tipo montmorillonita, son materiales muy accesibles, su costo es muy
bajo y su mtodo de obtencin es simple, por ello su uso se ha difundido en muchas reas
de la investigacin. En concreto las arcillas montmorillonita pueden usarse en la
purificacin de aguas [Zhou y col., 2008], en un gran nmero de reacciones como
catalizador acido [Bigi y col., 1999], para liberacin prolongada de frmacos [Junping y
col., 2007], purificacin de compuestos orgnicos [Chen y col., 2008], uso en
polimerizaciones [Strawhecker y col., 2000] e incluso estudios de adsorcin de
biomolculas, como enzimas o carbohidratos [Gopinath y col., 2007].
19
Captulo I
explicaran de una manera general los procesos ocurridos en la naturaleza y que
condiciones influyen en el medio ambiente para que el ADN pueda estar disponible
El rea superficial del material hace referencia a los conglomerados en los que estn
agrupadas las partculas de los slidos, los conglomerados dependiendo de su tamao o
porosidad pueden tener ms espacio para el alojamiento de partculas en su espacio
superficial, que se define como el rea de la superficie externa de las partculas
constituyentes por unidad de masa expresada en m2 /g. Un slido cambia su rea superficial
si los conglomerados son grandes y poco porosos, mientras que el rea superficial aumenta
si los conglomerados estn dispersos en partculas ms pequeas y aumenta an ms si los
poros del slido son abundantes y de tamao pequeo. Las arcillas K10 poseen mayor rea
superficial que las KSF, mientras que la K10 alcanza reas de hasta 200 m2 /g, el rea del
tipo KSF no es mayor a 40 m2 /g [Brigatti y col., 2006].
20
Captulo I
Tabla 1.5: Composicin qumica de las arcillas KSF y K10 [Tomada de Rangel,
2010].
Muestra
Perdida de
ignicin
Total
K10
73.0
14.0
2.7
0.2
1.1
0.6
1.9
6.0
99.5
KSF
55.0
18.0
4.0
3.0
3.0
0.5
1.5
10.0
95
De los sitios cidos en las arcillas depende la naturaleza por las que pueda
interaccionar un compuesto entre los tomos que componen cada una de las capas, se
pueden clasificar en interacciones con sitios cidos Brnsted o interacciones con sitios
cidos de Lewis. Los sitios cidos de Brnsted se caracterizan por intercambiar protones a
otros tomos fuertemente electronegativos, el intercambio de estos protones propicia la
generacin de puentes de hidrogeno. Los sitios cidos de Lewis poseen una interaccin
entre molculas por medio de pares de electrones libres y orbitales vacos, por lo tanto las
interacciones las uniones se llevan a cabo por pares de electrones y estas interacciones son
ms fuertes que las interacciones por puentes de hidrogeno [Adams y col., 1983].
21
Captulo I
1.7.1 Espectroscopa Infrarroja FTIR.
El anlisis por medio de espectrofotmetros infrarrojos con transformada de Fourier
(FTIR) se llevan a cabo por la incidencia de luz con una longitud de onda cercana a 0,7 m
hasta los 1000 m, que corresponde a la fraccin infrarroja del espectro electromagntico
de la luz, sobre diversas molculas. Existen principalmente tres regiones infrarrojas; el
infrarrojo lejano que corresponde a 50 m a 1000 m, el infrarrojo medio, en el cual se
realizan principalmente los anlisis FTIR, tiene un rango de 2.5 m a 50 m y por ltimo el
infrarrojo cercano, que posee un rango de 0.8 m a 2.5 m.
22
Captulo I
Las isotermas se clasifican segn su forma, siendo los tipos de curvas siguientes las
reconocidas por la IUPAC (Figura 1.6):
.
Figura 1.6: Tipos de isotermas de adsorcin segn la clasificacin de la IUPAC.
23
Captulo I
Existe un modelo propuesto por Barrett, Joyner y Halenda en el cual se describe la
distribucin y el tamao de mesoporo. Este mtodo propone que un poro pierde adsorbato
condensado en estado lquido, conocido como el ncleo del poro, cuando se alcanza una
determinada presin relativa relacionada con el tamao del ncleo del poro mediante la
ecuacin de Kelvin. Una vez que el ncleo del poro se ha evaporado, la capa-multicapa de
molculas adsorbidas contina en las paredes del poro. El espesor de esta capa vara en
funcin de la presin relativa existente y se calcula en cada momento mediante la ecuacin
del espesor. Esta capa se va adelgazando a medida que la presin disminuye de manera que
la cantidad de gas desorbido detectado en un determinado escaln de presin resulta ser la
suma de dos cantidades: el lquido evaporado del ncleo del poro ms las molculas
desorbidas de las paredes de los poros que previamente han sido vaciados por evaporacin
de su ncleo en escalones de presin anteriores [Brigatti y col., 2006].
Para la determinacin del rea superficial se utiliza el mtodo BET, pero este
mtodo es una variacin del mtodo de Langmuir el cual propone que los gases forman una
nica capa molecular sobre la superficie del slido, la colisin de la molcula de gas con el
slido es considera inelstica, el periodo de tiempo de desfase entre el choque inelstico y
el retorno a la fase gaseosa es el origen del fenmeno de adsorcin.
24
Captulo I
El modelo BET propone un equilibrio entre la velocidad de la fase gaseosa y la
condensacin en los sitios disponibles es igual a la velocidad de la evaporacin de los sitios
ocupados. En el momento en que se obtiene un equilibrio entre las velocidades y
considerando un nmero infinito de capas, se obtiene la siguiente expresin, conocida como
la ecuacin BET [Brigatti y col., 2006; Beki y col., 2010]:
Dnde:
(
)
C se considera como
Donde: q1 es el calor de adsorcin de la
primera capa, qL es el calor de licuefaccin del adsortivo, (ql-qL) es el calor neto de
adsorcin, R es la constante de los gases = 8,314 J/molK, T es la temperatura
absoluta en K.
25
Captulo II
CAPULO II
DESARROLLO EXPERIMENTAL
2.1 Proceso de Intercambio Catinico.
Las arcillas se suspendieron en un matraz Erlenmeyer que contena una solucin de
NaCl 1 M en agitacin constante durante 24 horas, al terminar este tiempo de interaccin,
las arcillas se centrifugan a 2 192 RFC (fuerza centrifuga reducida) durante 10 minutos y se
elimin el sobrenadante, posteriormente se hicieron lavados con agua desionizada y los
slidos se centrifugaron a 2 192 RFC por 10 minutos, al terminar de centrifugar, se descart
el sobrenadante y los slidos se secaron a 80C.
25
Captulo II
La solucin reguladora CTAB se prepara con 10 % (V/V) de 2-Amino-2hidroximetil-propano-1,3-diol (Tris-HCl pH 8) 100 mM, 28 % (V/V) de NaCl 1.4 M, 4 %
(V/V) de EDTA 20 Mm, 2% (p/V) de CTAB y H2 O necesaria para el volumen deseado.
El secado del slido con ADN se realiz en el equipo de centrifugacin Speed Vac
Plus modelo SC210 A (Savant) en un tiempo de 1 hora.
26
Captulo II
(formo un gel), posteriormente se lleno la cmara con la solucin reguladora TAE 1X y se
colocaron las muestras con regulador de carga en los pozos del gel. Se le aplic una
corriente de 60 V hasta ver un desplazamiento del colorante del regulador de carga, de
aproximadamente 2/3 de la longitud del gel y se captur la imagen de la migracin del
ADN con un fotodocumentador (ChemiDoc, Bio-Rad).
El equipo utilizado fue un Termoanalizador modelo SDT Q600 Simultaneous TGADSC de la marca TA Instruments.
27
Captulo III
CAPTULO III
RESULTADOS Y DISCUSIONES
3.1 Caracterizacin de los Materiales de Partida.
Como se mencion en captulos anteriores, tanto K10 como KSF son arcillas del
tipo montmorillonita, lo que significa que contienen la misma estructura conformada por
dos hojas tetradricas y uno octadrica. Sin embargo, existen diferencias entre cada una de
ellas como son el tamao de sus aglomerados, los minerales arcillosos asociados, elementos
sustituidos isomrficamente, cantidad de cationes intercambiables, porosidad, rea
superficial y naturaleza de sitios cidos en su superficie. Por lo tanto, en esta parte del
trabajo se presenta la caracterizacin realizada a ambos materiales con la finalidad de
determinar las principales diferencias en la superficie, para posteriormente discutir en cul
de ellos se favorece una interaccin con molculas de ADN.
28
Captulo III
3.1.2 Microscopa Electrnica de Barrido (SEM).
En la Figura 3.1 se muestran las fotografas obtenidas por medio de Microscopa
Electrnica de Barrido, en donde se observa la diferencia en los agregados de cada uno de
los materiales de partida. Las partculas de la arcilla KSF tiende a formar aglomerados ms
grandes que la K10, lo cual puede ser reflejo de una mayor plasticidad ocasionada por las
diferencias en sus propiedades superficiales.
29
Captulo III
Tabla 3.2: Relacin en porcentaje masa de los elementos presentes en cada uno de las
arcillas de partida.
Elemento
K10
KSF
Magnesio
1.9
4.4
Aluminio
11.9
11.7
Silicio
76.4
33.4
Potasio
1.8
Hierro
22
Calcio
10.4
Azufre
18.1
30
Captulo III
3.1.3 Espectros Infrarrojos con transformada de Fourier (FTIR) de K10 y KSF.
La caracterizacin mediante FTIR permite observar los grupos funcionales en la
superficie del material. La Figura 3.3 muestra los espectros de infrarrojo correspondientes a
las arcillas K10 y KSF. En ambos espectros fue posible observar las seales caractersticas
del enlace Si-O localizada a 1030 cm-1 , as como las bandas correspondientes a las
vibraciones de Al2 OH a 939 cm-1 y AlMgOH a 809 cm-1 . Las bandas localizadas en el
rango de 950 cm-1 a 844 cm-1 se ha reportado que corresponden a estructuras dioctadricas
de las arcillas, as como las seales de 700 cm-1 a 600 cm-1 son asignadas a las lminas
trioctadricas. Las seales a 534 cm-1 y 467 cm-1 corresponden a las vibraciones Si-O-Al y
Si-O-Si respectivamente. Tambin existen seales cercanas a la longitud de 1660 cm-1 que
corresponden a la vibracin de OH provenientes de molculas de agua adsorbidas en los
slidos.
Las bandas asociadas a la vibracin de los grupos hidroxilos se observan dentro del
rango de 3000 cm-1 a 3700 cm-1 . La seal localizada a 3620 cm-1 corresponde a los
hidroxilos asociados a aluminios, ya sean aquellos sustituidos isomrficamente o los que
componen la capa octadrica. Los hidroxilos a 3423 cm-1 y 3250 cm-1 corresponden a OH
de hidratacin por retencin de agua e hidratacin asociada a los cationes intercambiables
respectivamente, seales identificadas anteriormente por diferentes investigadores [Xie y
col., 2007; Seki y col., 2006; Tyagi y col., 2006].
31
Captulo III
Sin embargo, el espectro de la arcilla KSF present una banda ancha de 2750 cm-1
hasta 3200 cm-1 , que no fue observada en la muestra correspondiente a K10. Este
desplazamiento puede ser asociado la presencia de sulfatos o especies de azufre que fueron
determinadas durante el anlisis semicuantitativo del material, y anteriormente sealadas
[Garca-Mano, 2008].
32
Captulo III
presenta a presiones relativas cercanas a 1.0. El comportamiento anterior es ms acentuado
en el caso de la arcilla KSF. Este tipo de isotermas es caracterstico de materiales laminares
que son conformados por placas paralelas y cuya separacin depender del tamao de los
aglomerados. El espacio entre placas tiene determinada flexibilidad, el cual aumenta
conforme se alojan molculas de N 2 . Por lo tanto, a presiones relativas de 1.0, la arcilla
continua con la adsorcin debido a la expansin de las placas. A diferencia de las
tradicionales isotermas del tipo III, cuya correspondiente desorcin es completamente
reversible, en estos casos se aprecia una histresis durante dicho proceso. Lo anterior es
atribuido a la difusin del adsorbato al interior del especio interlaminar, modificando en ese
punto los aglomerados, lo que provoca una difusin diferente de los mismos al momento de
la desorcin. En el caso de la arcilla KSF, la histresis de desorcin es ms abierta, lo que
se debe a aglomerados ms compactos.
Tabla 3.3: rea superficial y porosidad de los minerales de partida K10 y KSF
determinados a partir de los datos de adsorcin de Nitrgeno a 77 K.
Slido
rea superficial
(m/g)
rea de microporo
(m/g)
Volumen de
microporo (cm/g)
K10
267.5
10.28
0.00216
KSF
5.76
0.848
0.00037
33
Captulo III
Otra de las principales caractersticas texturales es el tamao de los poros. En la
Figura 3.5 se presenta la distribucin del tamao de los mesoporos, la cual fue generada a
partir de los datos de adsorcin y utilizando el modelo de BJH (Barret-Joyner-Halenda). La
figura muestra que la arcilla K10 contiene mayor volumen de estas cavidades, en un rango
ms amplio de valores en comparacin con la muestra KSF [Rangel, 2010].
Figura 3.5: Curva de distribucin de mesoporos (BJH) para la arcilla a) K10 y b) KSF,
obtenidos a partir de la curva de adsorcin de N 2 a 77 K.
34
Captulo III
localiza entre 200C y 500C; adicionalmente, en este rango diversos materiales
experimentan procesos de deshidroxilacin a temperaturas cercanas a 500C. Finalmente,
entre 500C y 800C se completa la mayor parte de los procesos de deshidroxilacin,
pudiendo existir cambios en la estructura de los minerales [Rangel y col., 2014].
35
Captulo III
Tabla 3.4: Prdida de peso registrada en TG para KSF y K10.
Slido
KSF
K10
(30-100) C
6.4
5.44
Total
19.93
10.73
La tabla 3.4 muestra los porcentajes de masa perdida por rango de temperatura para
cada uno de los minerales. Se observa que tanto la prdida total de masa, as como por cada
rango de temperatura fue mayor el slido KSF. Lo anterior se debe a que la KSF cuenta con
mayor cantidad de grupos hidroxilos sobre la superficie, mismos que le confieren una
mayor acidez, y por lo tanto tiene mayor capacidad de adsorber molculas de agua sobre su
superficie a travs de la formacin de puentes de hidrgeno. Por lo tanto, la KSF
experimentar mayor prdida de masa relacionada con los procesos de deshidratacin y
deshidroxilacin. Sin embargo, en la curva de TG se puede observar que la KSF continua
perdiendo masa an cerca de los 800 C, lo que puede deberse a que, adems de los
procesos de eliminacin de grupos OH, se lleva a cabo la eliminacin de las especies
asociadas a los compuestos con azufre [Cai y col., 2006b; Theiss y col., 2012].
36
Captulo III
hidroxilados creando centros cidos de Brnsted, o tambin desplazando algunos protones
de superficies hidroxiladas para ocuparlos como sitios de intercambio. Para la arcilla KSF,
la diferencia en la disminucin de centros cidos es mucho mayor, lo que es consecuencia
de la eliminacin de las especies de azufre que le confieren determinado valor a este
parmetro en la arcilla original. Lo anterior est basado en el hecho que se ha comprobado
que al suspender la arcilla KSF en agua destilada, disminuye considerablemente la acidez
de la misma. En la Figura 3.7 se muestra un esquema que representa el proceso de
intercambio catinico en la superficie del slido, teniendo como consecuencia la
disminucin de centros cidos en el material.
Tabla 3.5: Densidad de sitios cidos para de KSF y K10 modificadas con el intercambio
con sodio.
Slido
K10-Na
0.983
KSF-Na
0.525
3.2.2 Espectros Infrarrojos con transformada de Fourier (FTIR) de arcillas K10 y KSF
modificadas con Na+.
La Figura 3.8 contiene los espectros de infrarrojo de las arcillas que contienen
esencialmente sodio intercambiable. Dichos espectros mostraron idnticas bandas de
vibracin a las analizadas anteriormente para las muestras iniciales. Entre las diferencias
principales, se observa que el slido KSF no presenta la banda ancha localizada entre 2900
y 3000 cm-1 , debida a las vibraciones de las especies de azufre, lo que indica que dichos
37
Captulo III
compuestos fueron removidos de las montmorillonita. Por otra parte, se ha reportado que la
seal de alargamiento del enlace Si-O observada en la regin de 1100-1000 cm-1 se
desdobla en cuatro bandas, con un notorio incremento en la intensidad del pico a 1080 cm-1
que indica un deslaminado de las estructura de la arcilla montmorillonita [Rangel, 2013;
Garca-Mano, 2008; Xie y col., 2007; Seki y col., 2006; Tyagi y col., 2006]. Lo anterior no
es apreciado en alguno de los espectros de infrarrojo para las arcillas con sodio, por lo que
dicho proceso no ocurri durante el intercambio catinico con dicho metal.
Figura 3.8: Espectro infrarrojo de las arcillas modificadas con Na+; a) KSF-Na y b) K10Na.
38
Captulo III
ocasionado por el bloqueo de las cavidades porosas por tomos de sodio con mayor
molculas de agua en su esfera de hidratacin que los cationes inicialmente presentes en la
arcilla K10. Los iones ms pequeos y con mayor carga tienen un nmero mayor de
molculas de agua en las esferas de hidratacin que iones ms grandes y carga menor, en
donde el sodio puede contener hasta seis molculas por cada catin.
39
Captulo III
Tabla 3.6: rea superficial y porosidad de las arcillas K10 y KSF modificadas con sodio,
determinados a partir de los datos de adsorcin de Nitrgeno a 77 K.
Slido
K10-Na
rea superficial
(m/g)
221.77
rea de microporo
(m/g)
-
Volumen de microporo
(cm/g)
-
KSF-Na
118.67
15.97
0.006918
Figura 3.10: Curvas de distribucin de mesoporos para: a) K10 y b) KSF. Los slidos
iniciales (lnea punteada) y solidos modificados con Na + (lnea slida).
40
Captulo III
En el caso de la arcilla KSF se observ que el proceso de intercambio catinico
produjo un slido con mayor rea superficial e incremento del volumen de microporos. Lo
anterior como consecuencia de la eliminacin de especies como sulfatos, inicialmente
presentes en el mineral de partida, adems de que posiblemente los iones de sodio
provocaron un cambio en arreglo de los agregados, y por consiguiente una dispersin de las
particular con la consecuencia de un incremento del rea superficial expuesta. Aunque la
microporosidad se increment, los mesoporos mostraron una tendencia a disminuir de
tamao.
3.2.4 Anlisis Termogravimtrico (TG) de las arcillas K10 y KSF modificadas con Na +.
En la Figura 3.11 se muestran las curvas obtenidas durante el anlisis
termogravimtrico de las arcillas modificadas con el intercambio con sodio. En cada caso
se observ una disminucin en la cantidad total del porcentaje de masa perdida. Para la
arcilla K10, la diferencia en el porcentaje se present principalmente durante el
calentamiento dentro del rango de 30 a 200 C, que corresponde a la eliminacin de agua
adsorbido en la superficie del material o de hidratacin (Tabla 3.7). A temperaturas
mayores a 200 C, la diferencia fue mucho menor, en donde K10-Na pierda ms masa que
la K10. Dicha disminucin en la prdida de peso durante el calentamiento de K10 se
atribuy a la menor cantidad de sitios cidos en las muestras con sodio, disminuyendo su
capacidad de retener molculas de agua a causa de menor sitios para la formacin de
enlaces puentes de hidrgeno. En el caso del mineral KSF, la masa perdida fue mucho
menor en cada una de las etapas del calentamiento, en donde la curva de TG mostr un
comportamiento similar a la K10. Lo anterior se explica considerando las suposiciones
hechas anteriormente, en donde se expuso el hecho que la KSF contiene especies de sulfato
en su composicin, las mismas que le confieren acidez, pero son removidas durante el
proceso de intercambio catinico, por lo tanto disminuye la afinidad del agua por la
superficie, as como el comportamiento trmico por arriba de 500 C se debi
principalmente a los procesos de deshidroxilacin [Madejov, 2003, Pietramellara y col.,
2001].
(30-100) C
(100-200)C
(200-500)C
(500-800)C
Total
4.14
5
0.4
0.96
2.42
2.41
1.87
2.44
9.59
10.94
41
Captulo III
42
Captulo III
por la corriente elctrica. Las bandas difuminadas en posicin vertical muestran ADN
fragmentado, ya que el ADN al poseer cadenas de diferente tamao, se desplazan con
diferente velocidad. Los marcadores utilizados para la identificacin aproximada de pesos
moleculares son obtenidos cortando el ADN del fago con la enzima Pst. I. La muestra de
ADN extrado de la raz del ajo presenta principalmente fragmentos de tamao de 11501
bp, y en menores proporciones cadenas por debajo 2556 bp que se observa en el gel de
agarosa como una franja difusa.
43
Captulo III
[Yang y col., 2010; Meunier, 2003; Park y col., 2012; Pietramellara y col., 2001, Cai y col.,
2006].
Figura 3.12: Electroforesis para el estudio del contenido de ADN en los slidos: 1)
K10, 2) K10-Na, 3) KSF, 4) KSF-Na; as como el correspondiente anlisis de sobrenadante
obtenido en el caso de: s1) K10, s2) K10-Na, s3) KSF, s4) KSF-Na.
transformada
En los espectros FTIR de las arcillas con ADN se determinaron las seales
principales de las arcillas montmorillonita. Por ejemplo, en el rango de 3000 cm-1 a 3600
cm-1 corresponde a bandas de los grupos hidroxilos. Las bandas de Si-O corresponden a
1030 cm-1 y vibraciones de los componentes de aluminio como Al2 OH a 939 cm-1 y
AlMgOH a 809 cm-1 . Se registraron bandas caractersticas a las estructuras dioctadricas de
950 cm-1 a 844 cm-1 y para estructuras trioctadricas de 700 cm-1 a 600 cm-1 [Bala y col.,
2000].
44
Captulo III
Adems de las seales para Si-O-Al a 534 cm-1 y Si-O-Si a 467 cm-1 . Sin embargo,
existen reportes que mencionan que la longitud de onda del espectro infrarrojo donde se
detectan mayor nmero de seales del ADN corresponde de los 800 cm-1 a los 1800 cm-1
(Figura 3.13). En base a lo anterior, las muestras de arcillas, tanto K10 y KSF y las
modificadas con Na+, no presentaron seales claras a esta longitud de onda, quiz debido a
que las seales cercanas a los 800 cm-1 estuvieron enmascaradas por las seales
caractersticas de las arcillas. Lo anterior es probablemente debido a la baja cantidad de
ADN adsorbido en el slido, que no es detectable en el espectro de FTIR. Sin embargo, los
espectros FTIR presentan seales de C-H de materia orgnica a seales de 2930 cm-1 ,
aunque son dbiles en comparacin con las seales atribuidas a los hidroxilos [Moncada,
2011; Bala y col., 2000].
Figura 3.13: Espectros FTIR en el rango de las muestras: a) K10 +ADN, b) KSFNa+ADN, c) KSF+ADN y d) K10-Na +ADN.
45
Captulo III
que indica que la arquitectura de los poros, as como la estructura laminar de los slidos se
preserva despus del proceso de adsorcin.
Figura 3.14: Isoterma de adsorcin de N 2 a 77 K para las muestras con ADN: a) K10 y b)
KSF. Los slidos iniciales (lnea punteada) y solidos modificados con Na + (lnea slida).
46
Captulo III
en diferentes valores del rea superficial de las muestras con ADN. La tabla 3.8 presenta
los valores de las reas superficiales de las arcillas con la inclusin de ADN.
Figura 3.15: Curvas de distribucin de mesoporos para las arcillas con la inclusin de
ADN: a) K10 y b) KSF. Los slidos iniciales (lnea punteada) y solidos modificados con
Na+ (lnea slida).
47
Captulo III
Tabla 3.8: rea superficial y porosidad de las arcillas K10 y KSF modificadas con
sodio, despus de la incorporacin de molculas de ADN.
Slido
rea superficial
(m/g)
rea de microporo
(m/g)
Volumen de
microporo (cm/g)
K10+ADN
261.7
6.71
0.000373
K10-Na+ADN
250.8
KSF+ADN
23.2
KSF-Na+ADN
122.8
22.25
0.010139
48
Captulo III
Figura 3.16: Curvas de anlisis TG de las arcillas con la incorporacin de ADN: a) K10 y
b) KSF. Los slidos iniciales (lnea punteada) y los slidos con iones de sodio
intercambiados (lnea continua).
Tabla 3.9: Datos del Anlisis Termogravimtrico para las muestras con la inclusin de
ADN.
Slido
KSF
KSF+ADN
KSF-Na
KSF-Na+ADN
K10
K10+ADN
K10-Na
K10-Na+ADN
(30-100) C
6.4
9.3
5
10.49
3.34
11.62
4.14
11.32
Total
19.93
18.36
10.94
17.47
8.43
16.71
9.59
16.03
49
Captulo III
Por ejemplo, la adsorcin de cafena, cido saliclico y catecol, provoca su
desorcin a temperaturas cercanas a 100 C de acuerdo a los anlisis por TG; mientras que
los amino cidos y protenas se desorben en un rango de temperaturas de 200-300 C,
quedando compuesto orgnico en la superficie para su posterior eliminacin y/o
descomposicin a temperaturas cercanas a 500 C. Lo anterior indic que los amino cidos
y protenas interaccionan con mayor fuerza sobre la superficie de la arcilla que la cafena,
cidos orgnicos y fenlicos.
Figura 3.17: Esquema que representa la posible interaccin de una molcula de ADN con
la superficie de una arcilla.
50
Conclusiones
CONCLUSIONES
La adsorcin y estabilizacin de una biomolcula en la superficie de una arcilla tipo
montmorillonita depende de las caractersticas fsico-qumicas del material. La presencia,
naturaleza, y cantidad de sitios cidos en el slido son uno de los factores ms importantes
a considerar en la adsorcin de ADN en las partculas de una arcilla. Slidos con mayor
cantidad de sitios cidos, retienen mayor cantidad de molculas de ADN.
La densidad de sitios cidos en la arcilla montmorillonita es disminuida cuando el
mineral es tratado mediante un procedimiento de intercambio catinico con sodio,
posiblemente debido a que desplaza cationes parcialmente hidroxilados, u ocupa centros
que se protonan o desprotonan en suspensin acuosa. En el caso de la arcilla KSF, la
disminucin considerable de la cantidad de sitios cidos se debe probablemente a la
remocin de especies sulfatadas contenidas en la arcilla original. El proceso de intercambio
catinico modifica algunas caractersticas del material, tales como el rea superficial
expuesta y el volumen de poros.
Las arcillas KSF y K10 intercambiadas con sodio interactan con menor fuerza con
el ADN, lo que permite su movilidad a travs del gel de agarosa al aplicar el potencial
elctrico.
Las arcillas K10 retienen menor cantidad de ADN, en donde el lquido remanente
conserva la estructura de la macromolcula, mientras que el retenido tiende a fragmentarse.
Es probable que la preservacin de la estructura y cadena de ADN est en funcin de la
cantidad de agua que adsorba la arcilla sobre su superficie.
51
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