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Abstract: The micronuclei test allows to detect hazardous effects due to various chemical
and physical agents in the genetic material, and therefore may be useful for environmental
assessment. The micronuclei are organic structures originated either from chromosomal
fragments or entire chromosomes that during the anaphase do not migrate to the cell pole.
The goal of this study is to apply this test to evaluate the effects of hazardous pollutants in
the water on fishes from the Paranaba River. Samples were collected downstream and
upstream of the Paranaba River in the region of Patos de Minas County, in the state of Minas
Gerais, Brazil. We utilized the Pimelodus maculatus because it is a common fish in the region,
it is ease to capture, and it is a major food source for riverine human population. We
collected blood sample from gills, using needles. Blood spreads were fixed with pure
methanol for 5 minutes, after 24 hours. The material was stained 20% Giemsa diluted in
buffer phosphate (pH 6.8) for 10 minutes. The number of micronuclei was estimated from
2,000 analyzed erythrocytes for each specimen. The statistical analysis of the data was done
with the conditional test for detection of rare events (PEREIRA, 1991). The frequency of
micronuclei in peripheral erythrocytes was significant higher in the fishes from the Paranaba
River than in the fishes from the Caxambu creek. No significant differences were found
between the fishes from the upstream and downstream of the Paranaba River. We concluded
that the high frequency of micronuclei was caused likely by exposure to hazardous genotoxic
substances and other hazardous environmental conditions.
Key words: Fish. Micronuclei. Genotoxic. Micronucleus test.
Introduo
Desde que a vida surgiu na Terra, h cerca de 3,5 bilhes de anos, a gua foi
fundamental como base da alimentao dos organismos e como meio de
desenvolvimento de plantas e animais. Ela to bem aproveitada que, ao longo de
milhes de anos, o mesmo estoque original em movimento alimenta rios, lagos e
aquferos ou reservatrios subterrneos, atravs do ciclo hidrolgico (Pegorin, 2001).
Segundo Karmann (2001), a gua a substncia mais abundante na superfcie
do planeta, participando dos seus processos modeladores pela dissoluo de materiais
terrestres e do transporte de partculas. Ela cobre 70% da superfcie do planeta Terra,
porm irregularmente distribuda e, de toda a gua na Terra, 97,5% so salgadas e
menos de 2,5% so doces. Estas esto distribudas entre as calotas polares (68,9%), os
aquferos (29,9%), rios e lagos (0,3%) e outros reservatrios (0,9%) (HIRATA, 2001). S o
Brasil, segundo Garcia (2003), detm sozinho cerca de 12% de toda a gua doce de
superfcie do mundo, mas a distribuio tambm irregular pelo territrio brasileiro,
com regies como a Norte, que detm o maior volume, em contrapartida Nordeste,
em que h escassez. H excesso em alguns lugares, falta em outros e poluio em quase
toda parte. No Brasil, nas regies Norte e Centro-Oeste, jogam-se metais txicos nos
rios, como o mercrio usado no garimpo. No Sul e no Sudeste so os produtos
qumicos dos pesticidas agrcolas e o crescente aumento do volume de esgoto em
consequncia concentrao urbana (PEGORIN, 2001).
A contaminao da gua vem crescendo assustadoramente, sobretudo nas
zonas costeiras e em grandes cidades em todo o mundo. Os rios tm sido, ao mesmo
tempo, pontos de capitao de gua para abastecimento de reas metropolitanas,
servindo de receptores para os lanamentos de esgotos urbanos, de lixos e de efluentes
agro-industriais. Em vrias regies o meio ambiente tem sido incapaz de degradar
estes contaminantes e restituir o seu equilbrio natural (HIRATA, 2001).
Figuerdo (1999 apud ALVES, 2000) relata que a degradao das guas
superficiais causada principalmente pelos seguintes fatores: lanamento in natura dos
esgotos domsticos, lanamento de efluentes lquidos industriais, disposio
inadequada dos lixos urbanos, eroso do solo e assoreamento de material carreado e
usos indiscriminados de nutrientes e defensivos agrcolas.
Uma Pesquisa Nacional de Saneamento Bsico do IBGE aponta que 58,4% dos
distritos do Brasil no coletam esgoto, outros 27,5% tm rede coletora de esgoto, mas
no o tratam antes de lan-lo no ambiente. Em funo disso, rios que passam por
centros urbanos esto quase todos poludos (GARCIA, 2003).
Segundo Hirata (2001), os efluentes domsticos municipais tm elevadas
concentraes em carbono orgnico, cloreto, nitrognio, sdio, magnsio, sulfato e
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Teste do Microncleo
Matter e Schmid (1971) verificaram em roedores a correlao entre aberraes
cromossmicas e o aparecimento de anomalias nucleares (microncleos) em eritrcitos
jovens, aps a expulso do ncleo. Os autores, utilizando vrias doses de Trenimon,
concluram que a incidncia dessa anomalia era dose dependente, e que a sensibilidade
para este ento chamado teste do microncleo era similar s tradicionais anlises
citogenticas, considerando-o como um teste rpido e simples na deteco de
mutagenicidade.
O teste do microncleo baseia-se na observao de clulas que sofrem
alteraes na distribuio de suas cromtides (efeito sobre o fuso) ou quebra de
cromtides. Durante a anfase, momento em que h a segregao dos cromossomos, os
fragmentos provenientes das quebras e de cromossomos inteiros, e que no esto
ligados pelo fuso, no acompanham a migrao para os plos da clula. Aps a
telfase, tais fragmentos cromatdicos no so includos nos ncleos das clulas filhas,
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Avaliao da frequncia de microncleos | Admilson da Costa e Silva & Jlio Csar Nepomuceno
e numeradas usando teste cego, sendo analisados um total de dois mil (2000) eritrcitos
por peixe.
A anlise estatstica dos dados foi feita de acordo com o teste condicional para a
deteco de eventos raros (PEREIRA, 1991), por meio do qual possvel dizer se a
diferena na frequncia de microncleos entre os grupos significativa.
O nmero de eritrcitos analisados, utilizando peixes como biomonitor,
bastante variado: Hooftman e Raat (1982) utilizaram 5000 eritrcitos por animal; Das e
Nanda (1986) analisaram 4000 eritrcitos por animal; Hose et al. (1987) utilizaram 1000
eritrcitos por animal; Nepomuceno (1993) analisou 6000 eritrcitos por animal e
Grisolia (2002) utilizou 3000 eritrcitos por animal.
Resultados e discusso
O nmero de microncleos e de clulas micronucleadas foi mais elevado nos
grupos amostrados no rio Paranaba do que no grupo amostrado no crrego Caxambu,
local de referncia (Tabela 1). O mesmo observado para a freqncia mdia de
microncleos e clulas micronucleadas, expressa por mil. A frequncia mdia
microncleos e de clulas micronucleadas no grupo amostrado jusante do rio foi
menor que a frequncia mdia no grupo amostrado montante. A incidncia de
microncleos foi 4,8 e 4,5 vezes maior nos grupos do rio, montante e jusante, que no
grupo amostrado no crrego, respectivamente.
A anlise estatstica dos resultados demonstrou que a frequncia de
microncleos e clulas micronucleadas foi significativamente maior nos grupos
amostrados no rio, montante e jusante, quando comparado com o grupo amostrado
no crrego Caxambu (Figura 1). O grupo de peixes amostrado montante da cidade de
Patos de Minas apresentou maior incidncia de microncleos do que o grupo
amostrado jusante da mesma cidade. No entanto, esta diferena na foi significativa.
Os nveis de significncia descritos para todas as comparaes tiveram valor de P<
0,05, evidenciando o potencial genotxico do meio ambiente aqutico do rio.
Local
No. de
Total de Total de Total de
indivduos clulas MN
CMN
11
6
10
22000
12000
20000
56
144*
226*
55
144*
222*
X (%o) SD
MN
CMN
2,5 1.01
12 3.38
11,3 3.74
2,5 1.06
12,0 3.38
11,1 3.52
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Concluses
O teste do microncleo, utilizando o peixe mandi-amarelo (Pimalodus
maculatus), mostrou-se um teste rpido e prtico para o monitoramento da poluio de
ambientes aquticos.
A frequncia de microncleos, significativamente superior nos peixes do rio
Paranaba, evidencia a presena de substncias poluentes capazes de causar dano ao
material gentico destes peixes.
Agradecimentos
Polcia Especializada do Meio Ambiente de Minas Gerais (PMMG), pelo
apoio tcnico em algumas etapas do estudo.
Referncias
ALVES,
BUCKER,
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