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Centro Nacional de Referencia en Parasitologa

Elaboracin de la gota gruesa y el frotis a partir de sangre total (muestra extrada


con EDTA)

Elabore en una lmina portaobjetos, dos gotas gruesas con 10 ul de sangre con
EDTA cada una y en otro portaobjetos realice el frotis con 5 ul de sangre Como se
muestra en la figura en la parte inferior.
Procedimiento

Coloque los 10 ul de sangre con EDTA en uno de los extremos del porta objetos
dejando un espacio de un 1 cm del borde. Usando una lmina biselada coloque
una de las puntas en la gota de sangre y proceda a realizar una L del tamao de
de 1 cm para cada uno de los lados, si fuera necesario por que no se construy
un cuadrado de sangre de 1 cm2 de rea, proceda a subir con la punta de la
lmina biselada 1 cm hacia arriba. (observe el dibujo de ejemplo)

Tincin de gota gruesa


Para teir la gota gruesa colocarla hacia abajo en la bandeja de tincin. Teirla por
20 minutos con una mezcla de 3 gotas de solucin A y 3 gotas de solucin B, con
5 ml de buffer 4:5. Cabe destacar que en cada laboratorio se debe estandarizar la
tincin cada vez que se recibe un nuevo lote de reactivos.

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Tincin de frotis
Fijar el frotis durante 30 segundos con metanol introducindolo y sacndolo del
recipiente.

Teirlo por 20 minutos con una mezcla de 3 gotas de solucin A y 3 gotas de


solucin B, con 5 ml de buffer 4:5. Cabe destacar que en cada laboratorio se debe
estandarizar la tincin cada vez que se recibe un nuevo lote de reactivos.
La siguiente tabla muestra las cantidades de reactivos y buffer que deben
agregarse segn la cantidad

de

gotas gruesas

y frotis a colorear

con

Romanowsky modificado.

Colorante Romanowsky modificado


Nmero de gotas
A*
3
6
9
12
15
18
21
24
27
30
36
42
48
54

ml
B*
3
6
9
12
15
18
21
24
27
30
36
42
48
54

A*

1
1
1.25
1.5
1.5
1.75
2.00
2.50
2.75

ml

ml de
Buffer 4/5

B*

1
1

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
60
70
80
90

* La mezcla de solucin A +B se debe preparar al momento de colorear, descarte lo que sobra de


mezcla despus de su uso .Se recomienda preparar las soluciones A y B 24 horas antes de que
sean utilizadas, esto para se maduren y se obtengan mejores resultados .En caso de que se
presente contaminacin o precipitacin de estos reactivos se deben filtrar en botellas mbar
limpias.

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Recuento parasitario de malaria (gota gruesa o frotis)


Un diagnstico vlido y temprano permite un tratamiento oportuno de un paciente
con malaria, lo cual lleva a identificar la especie parasitaria y cuantificar el nmero
de parsitos presentes en la muestra.
Recuento parasitario en gota gruesa
Para realizar el recuento parasitolgico en

la gota gruesa, se procede a

establecer una relacin entre el nmero de parsitos presentes por cada 100
leucocitos y el nmero de leucocitos del paciente. Cuando se usa este mtodo y
no se cuenta el dato de recuento leucocitario se asume que es de 6000 leucocitos/
(6000 leucocitos / uL en promedio. Por tanto, la frmula establecida es la siguiente
(1):
# de parsitos / uL de sangre = # de parsitos contados x 6000 leucocitos / uL*
100 leucocitos
*o dato del hemograma
El diagnstico de infeccin mixta en la gota gruesa, se puede presentar de dos
maneras:

Formas parasitarias de P. vivax y gametocitos de P. falciparum.

Trofozotos de P. falciparum y formas de P. vivax.

Nota: Desde el punto de vista epidemiolgico el conocimiento de que en un rea


endmica hay un alto grado de transmisin, que coexisten diferentes vectores y
que existe un alto potencial migratorio con personas portadoras de una especie no
circulante, pueden permitir la insercin de misma o la presentacin de infecciones
mixtas.

Desde el punto de vista clnico y teraputico, el diagnstico de la

infeccin clnica es definitivo para el tratamiento y la evolucin del paciente. La


infeccin mixta ms frecuente es la asociacin de P. vivax y P. falciparum.

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Los siguientes son algunos ejemplos que nos ayudarn a comprender los clculos
que se realizarn para obtener las parasitemias.
Ejemplo 1.

En un paciente con malaria por P. falciparum, se observaron 10

trofozotos al contar 100 leucocitos en una gota gruesa .El recuento del paciente
se desconoce. Cul ser la parasitemia en parsitos / uL de sangre en el
paciente?
# de parsitos /uL de sangre = 10 Trofozotos x 6000 leucocitos / uL
100 leucocitos
# de parsitos / uL de sangre = 600 Trofozotos / uL
Ejemplo 2. En un paciente con malaria por P. falciparum , se observaron 2
gametocitos y 50 trofozotos al contar 100 leucocitos en una gota gruesa ; el
recuento leucocitario del paciente es 6000 leucocitos / mm 3 . Cul ser

la

parasitemia en parsitos /uL de sangre en el paciente?


# de parsitos /uL de sangre = 50 Trofozotos x 6000 leucocitos /uL
100 leucocitos
# de parsitos /uL de sangre = 3000 Trofozotos /uL
# de parsitos/ uL de sangre = 2 gametocitos x 6000 leucocitos /uL
100 leucocitos
# de parsitos /uL de sangre = 120 gametocitos /uL

Ejemplo 3. En un paciente con malaria por P. falciparum, se encontraron 500


parsitos al contar 8 leucocitos en una gota gruesa. Cul ser la parasitemia en
parsitos /uL de sangre del paciente?
# de parsitos / uL de sangre = 500 parsitos x 6000 leucocitos / uL
8 leucocitos
# de parsitos / uL de sangre = 375000 parsitos /uL

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Recuento parasitario en frotis de sangre perifrica


Para el recuento parasitolgico en el frotis, se establece una relacin entre el
nmero de parsitos presentes en 10.000 eritrocitos y el nmero de glbulos rojos
del paciente. En los casos de parasitemias altas, esta estimacin tiene la ventaja
de ser ms precisa que la realizada con la gota gruesa.
# de parsitos / uL de sangre = # de parsitos x # de eritrocitos /uL de sangre
10.000 eritrocitos
Como nmero de eritrocitos /uL de sangre = hematocrito x 100.000
Reemplazando:
# de parsitos /uL de sangre = # de parsitos x hematocrito x 100.000
10.000 eritrocitos
Simplificando:
# de parsitos / uL de sangre = # de parsitos x hematocrito x 10
Un ejemplo puede ayudar a entender cmo se realiza el procedimiento.
Al observar un extendido positivo para P. falciparum, se encuentran las siguientes
cantidades de glbulos rojos en tres campos:
Campo 1:300
Campo 2:310
Campo 3:290

X =300 por campo

Para conocer cuntos campos microscpicos se deben examinar con esta


distribucin de glbulos rojos, es necesario conocer cuntos glbulos rojos hay en
un campo microscpico, por tanto, se determina el promedio .El promedio de
glbulos rojos para este ejemplo es 300; entonces, se plantea una relacin como
sigue:
300 glbulos rojos
10.000 glbulos rojos
X = 33 campos microscpicos.

1 campo microscpico
X

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Por consiguiente se necesitan, contar las formas parasitarias presentes en 33


campos microscpicos. Si se cuentan 20 Trofozotos de P. falciparum

y el

hematocrito del paciente es 40 %, entonces se reemplaza en la frmula as:


# de parsitos /uL de sangre = # de parsitos x hematocrito x10
# de parsitos / uL de sangre = 20 Trofozotos x 40 x 10 = 8.000 Trofozotos /uL

Clculo de la parasitemia en porcentaje.


Otra manera de informar la parasitemia es expresndola en trminos de
porcentaje de glbulos rojos parasitados, lo cual se considera como un indicador
para el pronstico del paciente que tiene paludismo por P. falciparum.
Los pacientes con ms de 1% de glbulos rojos parasitados tienen mayor
probabilidad de complicarse que los pacientes que tienen un porcentaje menor.

Esta estimacin se realiza a partir de un extendido cuando se conoce el nmero


de glbulos rojos parasitados en 10.000 glbulos rojos y se establece una relacin
frente a 100 glbulos rojos; de esta manera, se reporta la parasistema en
porcentaje.
Un ejemplo ayudar a comprender este aspecto:
Para el anterior ejemplo, se tena que, en 10.000 glbulos rojos observados, se
encontraron 20 trofozotos, entonces, se efecta la siguiente relacin:
10.000 glbulos rojos
100 glbulos rojos

20 Trofozotos
X
X = 0, 2 %

Parasitemia: 0, 2%

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Informe de resultados
Para el informe de resultados, se especifica tanto la especie presente como el
recuento parasitario. En el caso de P. falciparum, se debe hacer el recuento tanto
de las formas sexuadas como de las asexuadas e informarlo por separado. En el
caso de las infecciones mixtas se realiza el recuento de cada especie de manera
independiente y se reporta la especie predominante en primer lugar y la
subordinada en segundo lugar .Para el informe de los resultados, se puede
emplear tanto

el trmino de hemoparsitos

gota

gruesa

si la muestra

observada es una gota gruesa, pero cuando se ha examinado un extendido


solamente se debe emplear el trmino hemoparsitos.

Ejemplos de informe de resultados:

Ejemplo 1. Muestra negativa.


No se observan Hemoparsitos: Negativo o
Gota gruesa: Negativa
Ejemplo 2. Muestra positiva para Plasmodium vivax
Positivos para Plasmodium vivax
Recuento: 4.000 parsitos / uL
Ejemplo 3. Muestra positiva para Plasmodium falciparum
Positivos para Plasmodium falciparum
Recuento: 6.400 Trofozotos /uL
Ejemplo 4.Muestra positiva para P. falciparum, la cual presenta tanto formas
asexuadas como sexuadas.
Positivos para Plasmodium. falciparum
Recuento: 10.000 Trofozotos / uL y 80 gametocitos/ uL
Ejemplo 5. Muestra positiva para Plasmodium falciparum, la cual presenta formas
asexuadas (Trofozotos maduros y esquizontes) y formas sexuadas.

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Positivos para Plasmodium falciparum


Recuento: 40.000 Trofozotos / uL 5.000 formas maduras /uL y 100
gametocitos /uL
Ejemplo 6. Muestra positiva para P. falciparum en la cual solamente se observan
formas sexuadas.
Positivos para Plasmodium falciparum
Recuento : 180 gametocitos / uL
Ejemplo 7. Muestra con infeccin mixta
Positivos para infeccin mixta
Recuento: 10.000 parsitos /uL de Plasmodium vivax y 40 gametocitos
/uL de Plasmodium falciparum

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