AO DE LA INVERSIN PARA EL DESARROLLO RURAL Y LA

SEGURIDAD ALIMENTARIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

Informe N 02

Bioqumica de Micrococcus y
Staphylococcus

CURSO

Microbiologa de Alimentos

DOCENTE

McBlga. Dorothy Torres.

ALUMNO

Silva Sandoval Maycke

Piura, 23 de setiembre del 2013

INTRODUCCION
Entre los cocos Gram positivos en sentido amplio se cuentan las
bacterias cocoidales del cido lctico (Streptococcus, Leuconostoc,
Pediococcus. Estas solo pueden obtener energa por fermentacin, no
contienen
pigmentos
heminicos
(con
excepciones),
y
son
microaerotolerantes. Frente a estos se encuentran los gneros aerbicos y
anaerbicos facultativos Micrococcus y Staphylococcus, as como los
gneros anaerbicos estrictos Sarcina, Peptococcus, Peptostreptococcus y
Ruminococcus. (Schlegel y Zaborosch, 1997)
AI genero Micrococcus pertenecen las bacterias pigmentadas cuyas
colonias amarillas o anaranjadas aparecen frecuentemente en las placas
expuestas al aire. Debido a la formacin de paquetes de clulas (ttradas)
se las incluye en el gnero Sarcina. Actualmente se ha reunido a Sarcina
lutea, S. flava, y S. aurantiaca, entre otras. En Micrococcus luteus. Tambin
se encuentra entre ellos la especie Micrococcus lysodeikticus, as!
denominada por A. FLEMING debido a su elevada sensibilidad frente a la
lisozima. Micrococcus es aerbico y se caracteriza por un contenido elevado
en GC (66-72%). (Schlegel y Zaborosch, 1997)
El nombre del gnero Staphylococcus se basa en su imagen
microscpica; las clulas se ordenan como uvas en un racimo (staphyle);
esta ordenacin se debe a la divisin celular irregular en distintos planos.
Staphylococcus es anaerbico facultativo, solo forma citocromos en
condiciones aerbicas y es relativamente resistente a la desecacin.
Staphylococcus aureus es patgeno (a travs de toxinas y exoenzimas;
pigeno). Otras cepas provocan intoxicaciones de alimentos ya que al
desarrollarse sobre alimentos no enfriados excreta una enterotoxina.
(Schlegel y Zaborosch, 1997).
Micrococcus y Staphylococcus son organismo con un metabolismo
respiratorio tpico, el primero es un aerobio obligado, mientras que el
segundo es un aerobio facultativo. Son catalasa positivo y esta prueba
permite diferenciarlos de los primeros y otros cocos gram positivos. Su
capacidad de crecer con altas concentraciones de sal (7.55 NaCL ofrece una
manera sencilla de aislamiento). Tienen una composicin de bases de DNA
nuy distinta Micrococcus tienen un porcentaje de GC muy alto, mientras
Staphylococcus el porcentaje es bastante bajo. (Torres 2008).

El objetivo de la prctica fue determinar las pruebas bioqumicas de

Staphylococcus y Micrococcus.
MATERIAL Y METODOS
Para el desarrollo de la presente prctica se requiri de cultivos
jvenes de cepas sospechosas para proceder a su coloracin de gram.

Se procedi a sembrar el M.O en tubos y placas con medios de

cultivo para las respectivas pruebas bioqumicas de identificacin.
a. Catalasa
- Colocar una fraccin del crecimiento bacteriano sobre un
portaobjetos limpio. Cubrir con algunas gotas de H2O2 al 3%.
- El desprendimiento gaseosos (burbujas) indica prueba
catalasa positiva.
b. Agar Manitol salado
- Con asa de Kolle sembrar por agotamiento en estra en la
superficie del medio de cultivo.
- Encubar las placas Petri con el medio AMS a 37C por 2448hrs.
- Hacer lectura de los medios en la forma siguiente:
Manitol (+): colonias con halo amarillo luminoso.
Manitol (-): ligero cambio de color o sin cambio.
c. Agar Baird Parker
- Con asa de Kolle sembrar por agotamiento en estra en la
superficie del medio de cultivo.
- Encubar las placas de Petri con el medio ABP a 37C por 2448hrs.
- Hacer lectura de los medios en la forma siguiente:
Considerar como staphylococcus patgenos: colonias negras
, redondas y rodeadas o no de lisis con o sin zona de
precipitacin.
d. DNasa
- Con asa de Kolle sembrar por agotamiento en estra en la
superficie del medio de cultivo.
- Encubar las placas Petri con el medio Agar DNasa a 37C
por 24hrs.
- Hacer lectura de los medios en la forma siguiente:
Cubrir la superficie del medio con HCl N/1.
Observar zonas claras alrededor del desarrollo microbiano,
presencia de desoxirribonucleasa, contrastando con el medio
de cultivo turbio. Sin formacin de halo son DNasa negativos.
e. Gelatinasa
- Con asa de Kolle sembrar por agotamiento en estra en la
superficie del medio de cultivo.
Encubar las placas Petri con el medio Agar gelatina a 37C
por 24hrs.
Hacer lectura de los medios en la forma siguiente:
cubrir la superficie del medio con solucin Clorh HgCL 2.
Eliminarla despus

de 5 minutos y lavar con agua corriente

Reaccin +: zona clara rodea la estra.
f. Difosfato de fenolftalena
- Con asa de Kolle sembrar por agotamiento en estra en la
superficie del medio de cultivo.
- Encubar las placas Petri con el medio Agar Difosfato de
fenolftalena a 37C por 24hrs.
- Hacer lectura de los medios en la forma siguiente:
- Exponer las colonias a los vapores del amoniaco
- Observar las colonias de fosfatasa (+) que aparecen color
rojo brillante.
g. Coagulasa :
- Sembrar al microorganismo en estudio en el Caldo ICC
- Encubar a 37C por 18hrs.
- A partir de ese cultivo efectuar la prueba coagulasa
- Mezclar 0.5 ml del cultivo con 0.5 ml del plasma oxalatado
de conejos o plasma desecado, controlado previamente
- Encubar a 37C por 1-2-24 hrs.
- Observar perdida de fluidos del plasma o coagulo ms o
menos grande.
DIFERENCIACION DE MICROCOCCUS Y STAPHYLOCOCCUS
a. Agar cisteinado
- Regenerar el medio antes de la siembra (10/ B.M hirviente)
conservar a 50C. sembrar por picadura profunda con pipeta
Pasteur, una traza de suspensin espesa emulsionando en la
totalidad del tubo. Enfriar en agua helada en posicin
vertical.
- Encubar a 37C por 48hrs.
- Observar Staphylococcus: desarrolla en la totalidad del tubo.
Micrococcus: desarrolla solo en la parte superior
(Forma de disco
neto).
b. Agar Manitol con PBC
- Regenerar el medio antes de la siembra (10/ B.M hirviente)
conservar a 50C. sembrar por picadura profunda con pipeta
Pasteur, una traza de suspensin espesa emulsionando en la
totalidad del tubo. Enfriar en agua helada en posicin
vertical.
- Encubar a 37C por 2 a 4 das.
- Observar Staphylococcus: producen acido tanto en
anaerobiosis (fermentacin) o sin accin.
Micrococcus: produce cidos solo en aerobiosis
(oxidacin) o sin accin.

c. Hugh Leifson
- Sembrar por puntura profunda dos tubos con Agar en
columna del medio Hugh Leifson. cubrir uno de los tubos con
una capa de vaselina
- Encubar a 37C por 48hrs.
- Observar :
Inerte: no hay cambio en el color del medio.
Oxidante: viraje al amarillo en la superficie del medio sin
vaselina.
Fermentadores: se observa viraje al amarillo en ambos
medios.
Alcalinizantes: cuando el medio no cubierto con vaselina al
virado al azul.

CUADRO 01: Procedimiento de Pruebas Bioqumicas

1.
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CUADRO 02: Procedimiento para Coliformes

RESULTADOS
Tabla 01: Resultado de las pruebas bioqumicas.

Tabla 02: Resultado de las pruebas para Coliformes

DISCUSION
Las colonias de Staphylococcus son generalmente opacos y
puede ser blanco o crema y a veces de color amarillo a naranja en
agar sangre. La hemlisis puede ser detectado. Aparecen como
amarillo-verde, 1 - 2 mm, fermentan la lactosa colonias en CLED.
Especies
de
Micrococcus
producir
colonias de color amarillo o rojo-pigmentadas en agar sangre.
Especies Rothia son redondos, convexos, mucoide y cumplir con el
agar. Morfologa de las colonias vara segn la especie y no se
describe
completamente
aqu (Bannerman, 1991). Staphylococcus aureus en medio de Baird
Parker, despus de 24 horas se observ colonias negras brillantes,
con halos blancos en los bordes.
La
identificacin
Staphylococcus
aureus
ha
sido
tradicionalmente identificadas por tubo de coagulasa pruebas que
detectan staphylocoagulase o "coagulasa libre". Sin embargo, la
deteccin de la superficie de las protenas como la aglutinacin factor
y / o protena A (comercial pruebas de ltex) puede ser utilizado para
una rpida identificacin. Ante unas pruebas erronas, se puede
confirmar mediante un tubo de prueba de la coagulasa (Christensen,
et al., 1983 ). Se observ la formacin del coagulo (+++) despus de
incubarlo por una hora a 37C, es una prueba que ayuda a determinar
cepas que se desconoce el tipo de microorganismo, concluyendo que
se trata de una cepa de Staphylococcus aureus.
El objetivo de la prueba catalasa es buscar la presencia de la
enzima catalasa. El perxido de hidrgeno se produce al utilizar la
bacteria el azcar por va oxidativa. Al ser ste un compuesto muy
oxidante las bacterias lo eliminan mediante la produccin de la
enzima catalasa (H2O2 -> H2O + O2) (Baker JS., 1984). Se observ
burbujas, lo que ocurri fue que el perxido de hidrgeno al actuar la
enzima se obtiene como producto agua y oxgeno.
Oxidacin fermentacin: Las bacterias utilizan los hidratos de
carbono por uno de dos procesos metablicos, fermentativo u
oxidativo. Algunas bacterias pueden metabolizar un hidrato de
carbono (como se demuestra la produccin de cido) solo en
condiciones aerobias, mientras que otras producen cido tanto
aerobio como anaerobio. La fermentacin es un proceso anaerobio
que requiere la fosforilacin inicial de la glucosa antes de la
degradacin a una mezcla de cidos relativamente fuertes, mientras
que la oxidacin en ausencia de compuestos inorgnicos como el
nitrato y el sulfato, es un proceso aerobio estricto que involucra la

oxidacin directa de una molcula no fosforilada de glucosa

(inicialmente). La fermentacin produce mayor acidez que la
oxidacin. La principal diferencia entre el metabolismo fermentativo y
metabolismo oxidativo de un hidrato de carbono es el requerimiento
de oxigeno atmosfrico y la fosforilacin inicial (Jarlov J., et al, 1996). Con
la prueba de Hugh Leifson, al virar de verde a amarillo los dos tubos
se concluye ye la cepa de Staphylococcus aureus es una bacetria
fermentativa.
Prueba del Manitol: Sirve para detectar si los grmenes son
capaces de fermentar el manitol liberando productos cidos que
sern detectados gracias al indicador rojo de fenol que cambiar a
color amarillo. Para esta prueba el medio manitol movilidad incluye
7,5 g/l de D-Manita. Bacterias manitol (-) son, dentro de las
enterobacterias, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris y Shigella
dysenteriae. Entre las bacterias de importancia clnica, la prueba del
manitol sirve para diferenciar Staphylococcus aureus (+) de
Staphylococcus epidermidis (-) (Jarlov J., et al, 1996). Se comprob que la
cepa fue Staphylococcus aureus, ya que es una bacteria capaz de
fermentar el manitol, generando productos cidos y se observa por el
indicador rojo de fenol.
CONCLUSIONES
Se confirm que la cepa de estudio fue Staphylococcus aureus, siendo
su bioqumica catalasa (+), crecimiento en agar manitol salado (+),
agar Baird Parker (colonias negras con halos), agar Hugh Leifson
(fermentativo).

Staphylococcus, a diferencia de Micrococcus, es un

microorganismo ms tolerante a condiciones tanto fsicas
como qumicas.
Micrococcus, es un microorganismo aerobio por excelencia
a diferencia de las especies del gnero Staphylococcus que
pueden crecer donde haya o no ambiente areos.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Baker JS. 1984. Comparison of various methods for differentiation of staphylococci and
micrococci. J Clin Microbiol.
Bannerman TL, Wadiak DL, Kloos WE. 1991. Susceptibility of Staphylococcus species
and subspecies to teicoplanin. Antimicrob Agents Chemother.
Christensen G, Parisi J, Bisno A, Simpson W, Beachey E. 1983. Characterization of
clinically significant strains of coagulase-negative staphylococci. J Clin Microbiol.
Jarlov J., Hojbjerg T, Busch-Sorensen C, Scheibel J, Moller JK, Kolmos HJ, et al. 1996.
Coagulasenegative. Staphylococci in Danish blood cultures: species distribution
and antibiotic susceptibility. J Hosp Infect..
Panreac, 2003. Manual Bsico de Microbiologa. Ed. Ultimed.
Schlegel, H y Zaborosch, Ch. 1997. MICROBIOLOGIA GENERAL 7ma edic.
Universitat de les Illes Balears. EDICIONES OMEGA, S.A. Barcelona

ANEXOS