Nefelometra:

Introduccin al mtodo:
La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la dispersin de la
radiacin que atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz atraviesa un
medio transparente en el que existe una suspensin de partculas slidas, se
dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La
dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la
direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la misma en
cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partculas suspendidas,
su tamao, su forma, los ndices refractivos de la partcula y del medio
dispersante, y la longitud de onda de la radiacin dispersada. Cuando la
concentracin de una suspensin de partcula es baja es preferible medirla por
este mtodo.

Mtodos Raman:
La espectrometra Raman es una tcnica espectroscpica utilizada en fsica de la
materia condensada y tambin en qumica para el estudio de los modos
vibracionales, rotacionales y otros de baja frecuencia en un sistema. Se basa en la
dispersin inelstica, o dispersin Raman, de la luz monocromtica, que por lo
general procede de un lser en el rango visible, infrarrojo cercano, o ultravioleta
cercano. La luz lser interacta con fonones u otras excitaciones en el sistema,
por lo que la energa de los fotones lser se desplaza hacia arriba o hacia abajo.

Normalmente, la muestra se ilumina con un rayo lser. La luz del punto iluminado
se recoge con una lente y se enva a travs de un monocromador. Las longitudes
de onda cercanas a la lnea lser, debidas a la dispersin elstica de Rayleigh,
son filtradas, mientras que el resto de la luz recogida se dispersa en un detector.
La dispersin Raman espontnea es generalmente muy dbil, y como resultado la
principal dificultad de la espectrometra Raman es separar la luz dbil dispersada
inelsticamente de la luz intensa lser por dispersin de Rayleigh. Histricamente,
los espectrmetros Raman utilizaban rejillas de difraccin hologrfica y mltiples
etapas de dispersin para lograr un alto grado de rechazo lser. En el pasado, los
detectores de eleccin para las configuraciones de dispersin Raman eran los
fotomultiplicadores, lo que daba lugar a largos tiempos de adquisicin. Sin
embargo, la instrumentacin moderna en casi todo el mundo emplea filtros de
muesca o borde para rechazar el lser, as como espectrgrafos y detectores
CCD.
Hay diferentes tipos avanzados de espectrometra Raman, como la de superficie
potenciada, la polarizada, la estimulada, la de transmisin, la compensada
espacialmente y la hper-Raman.
El efecto Raman se produce cuando la luz incide sobre una molcula e interacta
con la nube de electrones de los tomos de esa molcula. El fotn incidente excita
uno de los electrones a un estado virtual. La molcula se excita desde el estado
basal a un estado de energa virtual, y se relaja a un estado vibracional excitado,
lo que genera la dispersin de Raman Stokes. Si la molcula ya se encontraba en
un estado elevado de energa vibracional, la dispersin Raman se llama entonces
dispersin Raman anti-Stokes.
Para que la molcula exhiba el efecto Raman es necesario un desplazamiento en
la polarizabilidad molecular, o cantidad de deformacin de la nube de electrones
con respecto a la coordenada vibracional. La cantidad del desplazamiento de
polarizabilidad determinar la intensidad de la dispersin Raman, siempre que el
desplazamiento Raman sea igual al nivel vibracional que est involucrado.
Fundamento:
Fenmeno de dispersin de luz
La dispersin (o difusin) de la luz es el fenmeno mediante el cual la radiacin
electromagntica, al chocar con pequeas partculas de tipo coloidal o incluso
molecular, es desviada en su direccin de propagacin, de forma aparentemente
catica, en cada uno de los ncleos de dispersin, por tener un ndice de
refraccin diferente al del medio. La medida de la luz dispersada (o difusa) da

lugar a tcnicas muy tiles en la determinacin de la concentracin de sustancias

en suspensin, as como en la caracterizacin de la forma y del tamao de las
partculas coloidales y macromoleculares. Estas tcnicas son de dos tipos:
Turbidimetria y Nefelometra.
La aparicin de turbidez en un medio en el que tiene lugar cierta reaccin qumica,
es un hecho que ha sido explotado, como medio de identificacin de determinadas
sustancias, desde muy antiguo. Se saba, por ejemplo, que la acidificacin de una
disolucin de protenas provoca su precipitacin (floculacin, coagulacin), y por lo
tanto, genera turbidez. La medida de esta turbidez se utiliza en la actualidad para
la determinacin cuantitativa de protenas en lquidos biolgicos.
Los mtodos turbidimetricos y nefelmetricos, con los que, de forma diferente pero
anloga, se mide la turbidez de un medio, se utilizan indistintamente en medidas
de concentracin. Cuando el objetivo es la determinacin de la forma y tamao de
las partculas en suspensin, los mtodos nefelometricos son indudablemente
mucho ms ventajosos.
Cualquier medio slido, lquido o gaseoso es capaz de dispersar luz en mayor o
menor grado. Este fenmeno se conoce como efecto Tyndall quien lo describi por
primera vez en 1854. Sin embargo fue Rayleigh en 1871 quien propuso el primer
modelo fsico que interpreta de forma notable el fenmeno de dispersin en
sistemas diluidos, y que constituye la base fundamental de los mtodos
turbidimetricos y nefelometricos.
Durante la propagacin de la luz en un medio cualquiera, la accin del vector
campo elctrico de la onda electromagntica produce la polarizacin del medio, es
decir, las molculas adquieren un momento dipolar cuya polaridad cambia de
forma oscilante con la misma frecuencia que la del campo. De acuerdo con las
leyes de la electrodinmica clsica, los dipolos oscilantes se convierten en fuentes
emisoras de radiacin. La radiacin emitida, sin embargo, puede tener la misma o
distinta frecuencia que la radiacin incidente.
En este sentido, la dispersin se describe como: Dispersin clsica, elstica o
esttica, si la frecuencia no cambia sensiblemente; Dispersin cuasi-elstica, o
dinmica, si la frecuencia se modifica ligeramente (normalmente en el margen de
unas decenas de Hz); y Dispersin inelstica o, ms propiamente, Raman, si la
frecuencia se modifica de forma importante, involucrando normalmente otros tipos
de energa molecular en el proceso.

TURBIDMETRO - NEFELMETRO PORTTIL HI 93703 C

Este nefelmetro realiza un anlisis

de agua casi completo: cloro libre
ytotal, bromo, pH, hierro, yodo y
cido cianrico. En el modo de
medicinde turbiedad puede elegir
entre los valores de calibracin
dados o losvalores definidos por el
usuario. Por medio del reloj de
tiempo

realintegrado

puede

recuperar presionando la tecla los

ltimos datos decalibracin. En el
rango de medicin de turbiedad se
puede poner unpunto de calibracin libre entre 0,0 y 50,0 NTU (NTU
NephelometricTurbidity Unit = FTU Formazin Turbidity Unit / Ratio 1:1). La
turbiedadse mide con el mtodo USEPA.
Este nefelometro mide por infrarrojos un rango de 0 a 1000 NTU (Unidades
Nefelomtricas de Turbidez) y dos escalas de medicin, de 0 a 50 y de 50 a 1000.
El equipo selecciona automticamente el rango apropiado, de acuerdo con la
turbidez de la muestra. Se ha diseado de acuerdo con el Standard internacional
ISO 7027. El microprocesador reconoce automticamente los valores fijos de 0 y
10 NTU para poder as efectuar una calibracin precisa por debajo de 1 NTU.
Adems: es el turbidmetro con el precio ms competitivo del mercado; fuente de
luz; LED de infrarrojos (ISO 7027).
Se suministra con maletn, 2 cubetas de medicin con tapa, solucin de
calibracin de 0 y 10 NTU (30ml), solucin de limpieza de cubetas, pao para
limpiar cubetas, pilas y manual de instrucciones.
Aplicaciones del mtodo.

Generalmente, la nefelometra se utiliza en el anlisis de la calidad qumica del

agua para determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento.
Estos mtodos pueden ser tambin apropiados para ensayos cuantitativos que
usan complejos antgeno-anticuerpo o para medir la cantidad de protenas en
fluidos. Las medidas nefelomtricas ocupan una posicin destacada en los
laboratorios clnicos. Se han aplicado para la determinacin de inmunoglobulinas,
protenas del complemento, protenas de fase aguda, protenas de coagulacin
entre otras.
Tienen una gran variedad de aplicaciones y permite trabajar con muestras
gaseosas, liquidas e incluso con slidos transparentes. La formacin de
precipitados difciles de filtrar, como por ejemplo los gelatinosos o los de tamao
de partcula muy pequeo, suelen proporciona suspensiones ideales para la
aplicacin de tcnicas basadas en la dispersin de la luz que sustituye a las
tcnicas gravimtricas. Este tipo de aplicaciones son frecuentes en laboratorios
analticos, laboratorios clnicos y en plantas de procesos. Uno de los principales
campos de aplicacin reside en estudios de polucin de aire y agua, donde se
usan para determinar la transparencia y controlar el tratamiento de aguas
potables, efluentes de plantas de tratamiento de aguas y otros tipos de aguas
ambientales. Las medidas de dispersin de la luz se utilizan tambin para
determinar la concentracin de humos, polvo, niebla, aerosoles, etc.
A pesar de que el trmino nefelometra suele restringirse a aquellas aplicaciones
en las que se mide la concentracin de partculas en suspensin existen tambin
otros tipos de aplicaciones basados en las medidas de dispersin de la luz. Entre
ellas podemos citar la determinacin de la forma y tamao de las partculas as
como la de los pesos, moleculares (especialmente en el caso de polmeros).
PROCEDIMIENTO ANALTICO
Se basa en la dispersin de la radiacin que atraviesan las partculas de materia.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensin de
partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se
observa turbia. La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante, solo
es afectada la direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es
la misma en cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partculas
sus pendidas, su tamao, su forma, los ndices refractivos de la partcula y del
medio dispersante, y la longitud de onda de la radiacin dispersada. Cuando la
concentracin de una suspensin de partcula es baja es preferible medirla por

este mtodo. En este caso la suspensin se coloca en una cubeta colocada como
se muestra en la figura siguiente.
Fuente.

Filtro

Cubeta.

Detecto

El instrumento permite la medida de la intensidad de la dispersin S, la cual est

relacionada con la concentracin. Las fuentes de radiacin que se utilizan son de
lser helio-nen, lmparas de halgenos y lmparas de xenn, siendo el ms
frecuente el primero.
Este consiste en un tubo largo y estrecho en el cual se introduce una mezcla de
gas formada por 7 partes de helio y 1 parte de nen al que se le aplica un voltaje
para producir una descarga elctrica.
Fuente.

Filtro

Cubeta
v.
superior

Colector de
radiaciones
negro

Tubo
fotomultiplicad
or.

INVIA CONFOCAL RAMAN MICROSCOPIO

Espectrmetro micro-Raman confocal, marca Renishaw, Modelo InVia,

equipado como 3 longitudes de onda (532, 633 y 785 nm), detector CCD y
microscopio ptico, marca LEICA, modelo DM 2500 M y plataforma motorizada
MS20 encoded stage 100 nm. Este instrumento de ltima generacin permite
realizar anlisis moleculares no-destructivo de diferentes materiales de origen
inorgnico y orgnico, gracias a sus tres fuentes de excitacin en el rango VIS/
NIR. Su sistema de automatizacin, ptico (microscopio) y software asociado, le
permite generar imgenes espectrales de las reas escaneadas. Adicionalmente,
el espectrmetro cuenta con una fibra ptica dilo que permite realizar registros
espectrales directamente sobre una pieza u objeto arqueolgicos sin necesidad de
efectuar muestreos o preparaciones especficas.
inVia es el grado de la investigacin definitiva confocal microscopio Raman. Es
simple de usar, pero ofrece un rendimiento excepcional y resultados fiables,
incluso para los experimentos ms difciles.
Producir ambos, imgenes ricas y detalladas qumicas y datos muy especficos de
puntos discretos.
Con una flexibilidad sin precedentes, los cientficos e ingenieros, en todo el
mundo, confa en inVia.
Rendimiento que puede confiar
El diseo ptico de alta eficiencia le da los mejores datos Raman, incluso de
pequeas trazas de material. Aplicar este poder a sus experimentos, corriendo
medidas tales como:

series de tiempo: cmo monitorear su muestra est alterando con el

tiempo

rampas de temperatura: utilizan una celda caliente / fro para ver los
cambios de fase

exploraciones de lnea: un perfil de su muestra, tanto por la superficie, o

en su profundidad

cartografa de reas: generar las imgenes, ya sea horizontal en foco fijo,

siguiendo la topografa de la superficie, o de las rebanadas verticales

exploraciones de volumen: producen vistas 3D de la estructura interna

de su muestra transparente

mediciones especializadas: la recopilacin de datos de disparo de su

propio equipo (como un sistema de control en una lnea de luz de sincrotrn)

Hacer pleno uso de software de alambre inVia: recoger los datos que desea, y
analizar y mostrar de la manera que ms le convenga.
Flexibilidad para satisfacer sus necesidades
Adapte su inVia para satisfacer mejor las necesidades de su investigacin y de
experimentacin. Elija entre una amplia gama de rayos lser, componentes
pticos, y accesorios, tanto en el momento de la compra y en el futuro.
Totalmente automatizado; deje inVia haga el trabajo
Con inVia usted tiene la flexibilidad y la capacidad, sin complejidad. Un diseo
robusto y montajes de precisin automatizada permiten inVia para completar
tareas tales como el cambio de longitud de onda del lser, el cambio de red de
difraccin, y la adquisicin de una imagen-Raman comunes rpidamente,
simplemente, de forma fiable, y sin la necesidad de intervencin manual.Esto es
esencial para los laboratorios ocupados con mltiples usuarios.
RA100 RAMAN ANALIZADOR
Con Raman de Renishaw RA100 Analyser puede
realizar mediciones a distancia Raman en su
laboratorio, en el campo, o en una lnea de produccin.
Un sistema completo consta de:

RA100 un alto rendimiento espectrmetro

hasta cuatro sondas de fibra ptica

lseres individuales o mltiples

un ordenador (o porttil)

Proporciona un mayor rendimiento espectral de los sistemas ms bsicos Raman

de mano y es lo suficientemente pequeo como para transportar al sitio de la
muestra o espcimen. Con una gama de opciones de sonda de fibra que puedas

ver su muestra, seleccione la regin de anlisis de inters y recoger datos, en

cualquier ampliacin que necesita.
Imagen: El anlisis de la Sbana Santa de Turn con el RA100 Renishaw Raman
Analyser
Grandes resultados
RA100 le da gran espectros Raman:

diseo ptico ptimo para el anlisis rpido (f eficiente / 1,4 ptica)

configurable para adaptarse a su aplicacin

detector CCD de grado investigacin enfriado para mediciones de alta

sensibilidad

hasta cuatro lseres (de la misma o diferentes longitudes de onda), cada

uno capaz de servir a uno o ms estaciones de muestreo

longitudes de onda de excitacin 488 nm son compatibles, 514,5 nm, 532

nm, 632,8 nm, 785 nm (otros a peticin)

fuente de referencia interna para la auto-calibracin

Fcil de usar
RA100 es fcil de usar:

utiliza los mismos estndares de datos y la interfaz de usuario como otros

productos de espectroscopia de Renishaw, la reduccin de las necesidades
de formacin del operador

llave en funcionamiento para facilitar su uso

software de control de conmutacin de la sonda

Paquete de Anlisis Personalizado (CAP) de software disponible para los

requisitos de anlisis idnticos repetidos

Seguro

Usted puede confiar en RA100:

componentes resistentes para una vida libre de problemas extendida

probado para soportar ambientes industriales

modular para permitir la rpida conmutacin de los componentes

fuente de referencia externa opcional para la transferencia de calibracin

Flexible

Hasta cuatro sondas de fibra ptica de longitud de onda especfica por

unidad de control para minimizar los costos

Las sondas pueden ser de hasta 100 metros de distancia del RA100

Un lser se puede utilizar para varias estaciones de muestreo. Los

espectros se puede adquirir desde todas las estaciones de forma
simultnea

Mltiples longitudes de onda de excitacin - varios lseres pueden

suministrar cada una sonda correspondiente. Los espectros se adquirieron
secuencialmente de cada conjunto de sondas como la excitacin de
longitud de onda.

APLICACIONES DEL MTODO.

La espectrometra Raman se utiliza comnmente en qumica, ya que la
informacin vibracional es muy especfica para los enlaces qumicos de las
molculas. Por lo tanto, proporciona una huella dactilar de la molcula que puede
ser identificada. La regin de huella digital de las molculas orgnicas est en el
rango de 500-2000 cm -1. Otra forma de uso de la tcnica es el estudio de
cambios en las uniones qumicas, por ejemplo cuando un sustrato se aade a
una enzima.
Los analizadores de gases Raman tienen muchas aplicaciones prcticas. Por
ejemplo, se usan en medicina para el seguimiento en tiempo real de las mezclas
de gases respiratorios y la anestesia durante la ciruga. En fsica del estado slido,
la espectrometra Raman espontnea se utiliza para, entre otras cosas,
caracterizar los materiales, medir la temperatura, y encontrar la orientacin
cristalogrfica de una muestra.
Al igual que ocurre con molculas individuales, un material slido tiene modos de
fonn caractersticos que pueden ayudar a identificarlo. Adems, la espectrometra
Raman se puede utilizar para observar otras excitaciones de baja frecuencia en
los slidos, como plasmones, magnones, y excitaciones de brecha en
superconductores.
La seal Raman espontnea proporciona informacin sobre la poblacin de un
modo fonn determinado en el rango entre la intensidad Stokes (desplazada hacia
abajo) y anti-Stokes (desplazada hacia arriba).
La dispersin Raman mediante un cristal anisotrpico da informacin sobre la
orientacin del cristal. La polarizacin de la luz de dispersin Raman en relacin
con el cristal, y la polarizacin de la luz lser, pueden utilizarse para conocer la

orientacin del cristal, siempre que la estructura cristalina sea conocida.

Las fibras activas Raman, como la aramida y el carbono, tienen modos
vibracionales que muestran un cambio en la frecuencia Raman con estrs
aplicado. Las fibras de polipropileno tambin exhiben cambios similares. El modo
de respiracin radial es una tcnica de uso habitual para evaluar el dimetro de los
nanotubos de carbono.
La espectrometra Raman compensada espacialmente (SORS), que es menos
sensible a las capas superficiales que la espectrometra Raman convencional, se
puede utilizar para descubrir la falsificacin de medicamentos sin necesidad de
abrir su embalaje interior, y para monitorizacin no invasiva de tejido biolgico.
La espectrometra Raman se puede utilizar tambin para investigar la composicin
qumica de documentos histricos, como el Libro de Kells, y contribuir al
conocimiento de las condiciones sociales y econmicas en el momento en que los
documentos fueron producidos. Esto es especialmente til porque la
espectrometra Raman es una forma no invasiva que permite preservar este tipo
de materiales.