UNIVERSIDAD JUAREZ DEL ESTADO DE DURANGO

Facultad de Medicina y Nutricin

HISTOLOGIA I

RESUMEN DE UN ARTCULO EN INGLES

Las clulas madre pluripotentes humanas diferenciadas en un medio

totalmente definido para generar clulas progenitoras hematopoyticas
CD34+, CD34- con distintas caractersticas

Alumna: Marisela Macias Salazar

Maestra: Dra. Rosa Erndira Sierra Puente

Las clulas madre pluripotentes humanas diferenciadas en un medio

totalmente definido para generar clulas progenitoras hematopoyticas
CD34+, CD34- con distintas caractersticas.

INTRODUCCIN
Las clulas madre embrionarias (ESC) se derivan de la masa celular interna del blastocito
antes de la implantacin. Son pluripotentes, de auto-renovacin, y pueden diferenciarse
en las tres capas germinales embrionarias, que son el ectodermo, endodermo y
mesodermo. Define las condiciones de cultivo para dirigir la diferenciacin de ESC hacia
el linaje mesodrmico hematopoyticas y, ms concretamente hacia terminales de
eritrocitos y leucocitos los cuales se han generado a travs de estas estrategias.
Estos estudios utilizan fibroblastos embrionarios de ratn como apoyo alimenticio asi
como compuestos xenogenicos mas compuestos, incluyendo suero antes de la
diferenciacin de linaje especifico, entonces el suero esta repleto de varios factores de
crecimiento y de precursores del factor de crecimiento, lo cual produce contaminacin,
que impide el uso de las clulas generadas para su utilizacin clnica, entonces el uso de
ESC plantea preocupaciones polmicas, ticas e inmunolgicas, e impide su uso como
herramientas teraputicas. El proceso de reprogramacin de clulas somticas, lo cual
permite la generacin de clulas madre pluripotentes que exhiben propiedades similares a
ESC, pueden ayudar a evitar estos problemas. Entonces queda por determinar si los
compuestos xenogenicas son indispensables para la diferenciacin de ESC y el IPSC que
se mantuvo durante la mitosis inactivado por fibroblastos humanos del prepucio (HFF) los
cuales tambin se pueden diferenciar en el linaje hematopoytico en un medio definido
completamente sin protenas animales y expuestos a la protena morfogenica sea
recombinante BMP-4 asi como los factores hematopoyticos que comprende a la tirosina
quinasa similar al FMS-3ligando (FLT3-L), factor de clulas madre (SCF), trombopoyectina
(TPO) y el factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF). Dentro de 8 dias, las clulas
se establecen moduladas por OCT-4 asi como expresin de factores de transcripcin
hematopoyticas que generan colonias eritroides y granulocitos y macrfagos en
metilcelulosa. La ESC y clulas hematopoyticas IPSC derivados se mantuvo en la fase

temprana de la diferenciacin, que es hematopoyesis transitoria, primitiva, ya que solo se

expresa globinas embrionario y fetal, pero no para adultos
Resultados
La Diferenciacin de las clulas madre embrionarias (CME) hacia el linaje hematopoytico
durante la fase de induccin inicial de 4 dias con BMP-4 y bFGF en condiciones de
hipoxia, las ESC diferenciadas hacia principios de los progenitores mesodrmicos y la
induccin transitora de brachyury en el da 4. Despus de la induccin posterior de 4 dias
con el VEGF, bFGF, SCF, FLT3-L y TPO en la ausencia de BMP-4, OCT-4 de expresin
desapareci. Brachyury disminuyo considerablemente y las clulas cd34 +, fueron
indetectables en suspensiones de ESC llego al 16% mas menos 6%. La pureza media fue
de 73% ms menos 17% y para la fraccin CD34 enriquecido (ES34+) CD34 no
contaminantes. Entonces las clulas purificadas CD34+ pueden ser compatibles con las
clulas madre muy inmaduras hematopoyticas. En conjunto, estas observaciones
sugieren que el protocolo genera un nmero significativo de clulas comn fenotipo que
recuerda al de las clulas progenitoras hematopoyticas, sin embargo en una etapa muy
inmadura de la diferenciacin.

La modificacin de las ESC y la expresin del gen marcador de superficie durante

la
diferenciacin
in
vitro
en
un
medio
totalmente
definido.
ES34+ contiene clulas mieloides ms que la de ES34- ambos fueron probados
por su capacidad de proliferar en el medio de metilcelulosa. Despus de 14 dias
de cultivo, las colonias mieloides (CFU-GM) y las colonias eritroides, asi como
derivador de la ES34+ fueron morfolgicamente similares a las colonias
hematopoyticas derivadas de CD34+. Por el contrario ES34- producido casi
exclusivamente colonias eritroides de pequeo tamao, y las colonias mieloides
derivadas de ES34- eran escasas. La frecuencia de colonias hematopoyticas
obtenidas de progenitores hematopoyticos ESC fue de aproximadamente 160
veces ms bajo que los obtenidos a partir de CD34+. entonces la relacin
eritroide/mieloide en las colonias fue de 34% para CD34+ y 61% para ES34+ y
86% para ES34-.
Las clulas diferenciadas de ESC son funcionales progenitores hematopoyticos.
Las colonias derivadas de ES34+clulas progenitoras mieloides y eritroides, y en
cuanto a las colonias de CD derivadas de las clulas CD34+ no eran detectables,
junto con la diferenciacin de los progenitores las clulas tambin fueron probadas
para la expresin de genes de globina. UFC CD expreso embrionarias (e) fetal (y)
y adultos(b) asi como ARN m de globina, ES34+ expreso solo e. entonces ESC
diferenciadas in vitro les impide llegar a la misma etapa de CB-HSC.

Reprogramar las clulas somticas (IPSC) generan progenitores hematopoyticos

en la diferenciacion de colonias, sin protenas.
Reportado
IPSC se ha reportado para recapitular las principales funciones de las ESC,
incluyendo su capacidad para diferenciarse en varios linajes celulares in vitro asi
como de generar teratomas. Estas se comportan como ESC, en particular cuando
estan expuestas a un protocolo de induccin hematopoytica. IPSC estar
modulada por OTC-4 y de forma transitoria Brachyury expresado en el da 4, esta
expresin posteriormente disminuyo al BMP-4 fue sustituido a principios de calidad
sin factores de crecimiento hematopoytico. Entonces se asocio con la aparicion
en el 8 da de CD34+ KDR+. La gran variabilidad observada en los experimentos
de UFC, no permiten establecer una diferencia significativa de la eficacia del
clonado entre estos 2 grupos.

Discusin
La generacin de progenitores hematopoyticos humanos de ESC y el IPSC inducidos
por la exposicin secuencial de BMP-4 y bFGF asi como una mezcla de factores
hematopoyticos en ausencia de cualquier compuesto xenogenico y clulas
alimentadoras. Algunos protocolos han reportado la generacin de clulas progenitoras
hematopoyticas de humano de ESC con otras condiciones en su suero, bueno pero
estos protocolos se basan en un principio en el efecto de BMP-4 para inducir el
comportamiento hematopoytico temprano, adems demostr que el potencial
hematopoytico es estrictamente dependiente de dicha sealizacin, sin embrago la
mezcla de citocinas difieren entre ambos procedimientos. Se cree que la eleccin de los
primeros resultados de cantidad de las citocinas en la diferenciacin general es ms
consistente con lo observado in vivo. Flt3-L es fundamental para el mantenimiento de
CD34+ clulas madre en los cultivos a largo plazo y su nivel srico se correlaciona con
personas que sufren graves trastornos hematopoyticos crnicos tales como la anemia de
Fanconi, los cuales presentan niveles elevados de suero de FLT3-L en respuesta a la
enfermedad.
Despus de 8 dias de diferenciacin, el protocolo producido de ESC comprende de
clulas CD34+ y CD34-, ambos son capaces de generar colonias hematopoyticas en
cultivos semislidos de metilcelulosa. ES34+ fueron CD45-, CD38-, KDR+ y CD31+, que
presentan un fenotipo, de hemangioblastos inmaduros y tambin expresan Brachyury asi
como CD43, que ha sido previamente se ha reportado como un marcador precoz para
definir progenitores hematopoyticos en los cultivos de ESC, ES34+no expresa CD117.
Una fraccin significativa de ES34* expresa CXCR4, que es un receptor para el factor

derivado del estroma SDF-1/CXCL-12, que se asocia con el mantenimiento de las clulas
madre hematopoyticas en la medula sea.
Sorprendentemente los factores de transcripcin hematopoytica SCL/Tal1 y Runx1
fueron detectables exclusivamente en la fraccin CD34+ como expresin de SCL en la
hematopoyesis primitiva, mientras que Runx1, se requiere para la hematopoyesis
definitiva, la expresin de ambos marcadores es bastante contradictoria.
ES34- contiene SCL, Runx1 diferenciadas en su mayora en eritrocitos, lo que sugiere que
fueron encontrados en una etapa bastante primitiva de la hematopoyesis, por la
morfologa de las colonias eritroides generados a partir de clulas Es34-, asi como su
capacidad para generar B-globina. Entonces probablemente representan a clulas
progenitoras de la hematopoyesis definitiva primitiva.las colonias macrofagica son poco
observadas en ES34.
A pesar de la identificacin de una frecuencia considerable de progenitores
hematopoyticos, despus de los ensayos de clonacin en la metilcelulosa, la eficacia del
protocolo sigue siendo baja i y por el momento, incompatible para la eventual aplicacin
clnica. En efecto no se puede discernir si la frecuencia observada del nmero de clulas
progenitoras que es baja se debe a la ausencia real de esas clulas o si se relaciona con
su incapacidad, probablemente debido a la falta de diferenciacin suficiente. Por otra
parte los datos publicado recientemente, la eficiencia hematopoytica es particularmente
bajo de iPSC tambin puede ser debido a un aumento en la sensibilidad de la apoptosis,
en comparacin con ESC in vitro.
Opinin
Como estudiante, opino que el articulo en si es muy interesante ya que puede ser de gran
utilidad para en caso de algn da necesitar de alguno de estos precursores
hematopoyticos tendramos la posibilidad de poder obtenerlo, sin embargo, es una
investigacin que todava necesita otras investigaciones asi como algunos otros enfoques,
pero estoy segura de que en algunos aos esta investigacin ya estar terminada.