Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
2006
Introduo
A pinha (Annona squamosa L.) e a graviola
(Annona muricata L.) so anonceas que produzem
1
2
3
4
Monografia da primeira Autora, Curso de Bacharelado em Cincias Biolgicas, Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), Brasil
Bolsista de Iniciao Cientfica-PIBIC/FACEPE/CNPq (robertalane@bol.com.br)
Bolsista de Iniciao Cientfica-PIBIC/CNPq/UFRPE
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Departamento de Biologia, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Dois Irmos, 52171-900 Recife,
PE, Brasil (elineidebs@yahoo.com)
Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Micologia, Centro de Cincias Biolgicas, Av. Prof. Nelson Chaves, s/n, 50670-420
Recife, PE, Brasil
Autor para correspondncia: umaaze@yahoo.com.br; umaaze@hotmail.com
650
Silva, Luz, Silveira & Cavalcante: Fungos endofticos em Annona spp.: isolamento, caracterizao enzimtica...
Material e mtodos
Isolamento de fungos endofticos Foram utilizadas
10 amostras de plantas de pinha e graviola,
aparentemente sadias, coletadas em Pernambuco
(Tab. 1) e separadas em folhas, caules e razes, lavadas
com sabo em gua corrente, desinfestadas em alcool
70% por 30 segundos e hipoclorito de sdio a 1,5%
(produto comercial com 2%) por quatro minutos,
lavadas em gua destilada esterilizada e colocadas para
secar em papel de filtro esterilizado. Aps
desinfestao, foram retirados discos foliares (5 mm
dimetro) e fragmentos do caule e raiz (5 mm
comprimento), transferidos para placas de Petri
contendo o meio batata-dextrose-gar (BDA)
suplementado com o antibitico cloranfenicol
(100 mg L-1) e incubados temperatura ambiente
(252 C). Aps sete dias, foi determinada a taxa de
colonizao (TC) (Petrini et al. 1992), onde
TC = nmero total de segmemtos com um ou mais
isolados/total de segmentos da amostra, expressa em
percentagem. As colnias fngicas que se
apresentavam distintas umas das outras, de acordo
com observaes macroscpicas (colorao e
caractersticas de crescimento em meio de cultura),
foram purificadas em meio BDA, preservadas pelo
mtodo da subcultura e armazenadas a 4 C. Para
identificao, ao nvel de gnero, dos 29 isolados
selecionados, foram feitas microculturas utilizando
bloco de gar (Menezes & Silva-Hanlin 1997).
O experimento foi conduzido em delineamento
inteiramente casualizado (DIC) em arranjo fatorial de
5 3, correspondendo a cinco amostras de pinha ou
graviola trs partes da planta (folha, caule e raiz),
com cinco repeties, sendo a unidade experimental
constituda por uma placa com oito discos de folha ou
fragmentos de caule ou raiz.
651
Tabela 1. Taxa de colonizao de fungos endofticos em diferentes tecidos de pinha (Annona squamosa L.) e graviola (Annona muricata L.).
Amostra
Origem
I
II
III
IV
V
Viveiro - Recife
Viveiro/UFRPE - Recife
Pomar residencial - Olinda
Pomar residencial - Olinda
Plantio comercial - Moreno
C.V. (%)
Amostra
Caule
87,50 aA1
82,20 aA
74,80 aA
100,00 aA
100,00 aA
21,66
Local
Viveiro - Recife
Viveiro/UFRPE - Recife
Pomar residencial - Olinda
Viveiro/UFRPE - Recife
Plantio comercial - Moreno
C.V. (%)
97,40 aA
100,00 aA
87,20 aA
52,40 bB
100,00 aA
17,39
27,09
I
II
III
IV
V
100,00 aA
92,40 aA
100,00 aA
67,20 bB
100,00 aA
Raiz
100,0 aA1
92,4 aA
54,8 bA
87,4 aA
100,0 aA
22,5
Caule
100,00 aA
79,80 aA
85,00 aA
72,40 aA
95,00 aA
27,14
Raiz
94,80 aA
87,20 aA
77,20 aA
97,40 aA
79,80 aA
21,29
Mdia de cinco repeties. Mdias seguidas da mesma letra minscula na vertical e maiscula na horizontal no diferem entre si pelo teste de
Duncan (P = 0,05).
Resultados e discusso
Foram obtidos 110 isolados de fungos endofticos
de plantas de pinha e 90 de graviola. As taxas de
colonizao variaram de 74,8 a 100% (folha), de 67,2
a 100% (caule) e de 52,4 a 100% (razes) de plantas
de pinha; em graviola, essas taxas foram de 54,8 a
100%, 72,4 a 100% e 77,2 a 97,4% em folhas, caules e
razes, respectivamente (Tab. 2). Diferenas
significativas (P = 0,05) na taxa de colonizao em
cada parte da planta foram observadas em uma das
amostras de pinha que apresentou menores taxas no
652
Silva, Luz, Silveira & Cavalcante: Fungos endofticos em Annona spp.: isolamento, caracterizao enzimtica...
Tabela 2. Atividade enzimtica de 29 isolados de fungos endofticos de pinha (Annona squamosa L.) e graviola (Annona muricata L.).
Cdigo do Isolado
GFR6
GFR4
GFR19
GFR3
GFR1
PFR4
PFR3
GCR5
GCR8
GCR4
GRR14
GRR5
GRR4
GRR7
GRR11
GRR2
GRR85
GRR8
GRR6
GRR1
GRR9
GRR10
GRR93
PRR1
PRR6
PRR3
PRR5
PRR18
PRR37
Hospedeiro
Graviola (F)1
Graviola (F)
Graviola (F)
Graviola (F)
Graviola (F)
Pinha (F)
Pinha (F)
Graviola (C)
Graviola (C)
Graviola (C)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Graviola (R)
Pinha (R)
Pinha (R)
Pinha (R)
Pinha (R)
Pinha (R)
Pinha (R)
Fungo
Acremonium sp.
Colletotrichum sp.
Glomerella sp.
Penicillium sp.
Phomopsis sp.
Colletotrichum sp.
Phomopsis sp.
Nigrospora sp.
Nigrospora sp.
Phomopsis sp.
Fusarium sp.
Fusarium sp.
Cylindrocladium sp.
Chaetomium sp.
Cylindrocladium sp.
Acremonium sp.
Penicillium sp.
Fusarium sp.
Cylindrocladium sp.
Acremonium sp.
Fusarium sp.
Cylindrocladium sp.
Aspergillus sp.
Fusarium sp.
Fusarium sp.
Fusarium sp.
Fusarium sp.
Fusarium sp.
Colletotrichum sp.
Atividade enzimtica
Lipoltica
Proteoltica
Amiloltica
Celuloltica
+2
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
-
1
F= folha, C = caule e R = raiz; 2Presena (+) e ausncia (-) de halo de degradao 2Mdia de 3 repeties. Mdias seguidas pela mesma letra na
coluna no diferem significativamente entre si pelo teste Scott-Knott (P=0,05).
653
envolvendo a utilizao de fungos endofticos na
promoo de crescimento de plantas, a literatura
escassa. Dos poucos relatos existentes, pode ser citada
a utilizao do fungo endoftico Piriformospora
indica, que indicado para aplicao na floricultura,
horticultura e agroflorestal, visando aumentar a
produo comercial (Varma et al. 1999). Estudos da
interao desse fungo com milho e fumo mostraram
que a hifa coloniza o crtex da raiz com diferenciao
intracelular, sendo a base para o efeito da promoo
de crescimento uma maior absoro de fsforo pelas
plantas (Franken et al. 1998).
Embora no estejam totalmente elucidados os
mecanismos envolvendo a promoo de crescimento
vegetal pelos fungos endofticos, existe a possibilidade
de que esses fungos promovam o crescimento mais
rpido da planta devido produo de fitohormnios
(Azevedo 1998), aumento da capacidade de absoro
de minerais como nitrognio e fsforo (Gasoni &
Gurfinkel 1997; Franken et al. 1998) e outras
substncias (Mucciarelli et al. 2003).
Todos os isolados que promoveram o crescimento
das mudas de pinha (GFR6, GFR4, GRR7, GRR4,
PFR3, GCR4, PRR1, PRR6, PFR4, GRR5, GRR1)
apresentaram atividade lipoltica. Esses isolados no
foram patognicos a essa cultura, indicando que as
lipases, neste caso, no tm funo relacionada a
patogenicidade.
No foi verificada eficincia dos fungos endofticos
na promoo de crescimento das mudas de pinha
quando analisada a varivel biomassa seca da raiz
(Tab. 2). Destaca-se tambm que 20 isolados (PRR18,
GRR7, PRR6, GRR2, GRR8, GRR85, GCR8, GCR4,
PRR37, GRR1, GCR5, GRR6, GRR9, GRR10, GFR1,
GRR14, GFR3, PRR3, PRR5, PRR1) apresentaram
efeito deletrio significativo (P = 0,05) em relao
testemunha, reduzindo a biomassa seca da raiz, o que
pode ter acontecido devido competio por nutrientes
do solo entre o fungo endoftico e a planta. Kloepper
(1996) tambm verificou efeito deletrio de
rizobactrias associadas a plantas. Segundo esse autor,
na interao entre os microrganismos endofticos e a
planta hospedeira podem ocorrer reaes do tipo
benficas, neutras ou prejudiciais.
As plantas tratadas com os isolados de fungos
endofticos no diferiram significativamente do controle
em relao s variveis altura da planta e nmero de
folhas.
Dos 11 isolados que beneficiaram a parte area
das mudas de pinha, cinco (GCR4, GRR7, GRR1,
PRR1 e PRR6) reduziram o peso da biomassa seca
Silva, Luz, Silveira & Cavalcante: Fungos endofticos em Annona spp.: isolamento, caracterizao enzimtica...
Biomassa seca
parte area (g)
0,57 a1
0,57 a
0,45 b
0,40 b
0,48 b
0,53 a
0,54 a
0,40 b
0,40 b
0,50 a
0,40 b
0,55 a
0,57 a
0,57 a
0,40 b
0,44 b
0,43 b
0,49 b
0,45 b
0,51 a
0,44 b
0,46 b
0,40 b
0,50 a
0,52 a
0,39 b
0,42 b
0,38 b
0,42 b
0,43 b
0,62 a
0,60 a
0,53 a
0,33 b
0,35 b
0,57 a
0,52 a
0,33 b
0,34 b
0,41 b
0,38 b
0,51 a
0,51 a
0,41 b
0,52 a
0,37 b
0,45 b
0,38 b
0,43 b
0,47 b
0,33 b
0,37 b
0,45 a
0,36 b
0,48 b
0,39 b
0,36 b
0,31 b
0,36 b
0,49 a
17,42
21,88
654
35
30
25
20
15
10
5
0
GFR6
GFR4
PFR4
PFR3
GRR5
GRR4
Isolados
Figura 1. Aumento do ndice de biomassa seca da parte area de
mudas de pinha com 90 dias, em casa de vegetao, pelos isolados
fngicos endofticos obtidos de plantas de pinha (Annona squamosa
L.) e graviola (Annona muricata L.) sadias. (GFR6 - Acremonium,
GFR4 - Colletotrichum, PFR4 - Colletotrichum, PFR3 - Phomopsis,
GRR5 - Fusarium, GRR4 - Cylindrocladium).
Agradecimentos
Ao CNPq e FACEPE pela concesso das bolsas
de Iniciao Cientfica.
Referncias bibliogrficas
Annis, S.L. & Goodwin, P.H. 1997. Recent advances in the
molecular genetics of plant cell wall degrading enzymes
produced by plant pathogenic fungi. European Journal
of Plant Pathology 103: 1-14.
Arajo, W.L.; Saridakis H.O.; Barroso, P.A.V.; AguilarVildoso, C.I. & Azevedo J.L. 2001. Variability and
interactions between endophytic bacteria and fungi
isolated from leaf tissues of citrus rootstocks. Canadian
Journal of Microbiology 47: 229-236.
Azevedo, J.L. 1998. Microrganismos endofticos.
Pp. 117-137. In: I.S. Melo & J.L. Azevedo (eds.). Ecologia
Microbiana. Jaguarina, Embrapa-CNPMA.
Bateman, D.F. & Basham, H.G. 1976. Degradation of plantcell walls and membranes by microbial enzymes.
Physiological and molecular plant pathology 4: 316-355.
Carroll, G.C. 1988. Fungal endophytes in stem and leaves:
from latent pathogen to mutualistic symbiont. Ecology
69: 2-9.
655
Mucciarelli, M.; Scannerini, S.; Bertea, C. & Maffei, M. 2003.
In vitro and in vivo peppermint (Mentha piperita)
growth promotion by nonmycorrhizal fungal
colonization. New Phytologist 158: 579-591.
Neirotii, E. & Azevedo, I.L. 1988. Tcnicas semiquantitativas
de avaliao de produo de celulase em Humicola sp.
Revista de Microbiologia 19: 78-81.
Pereira, J.O.; Carneiro-Vieira, M.L. & Azevedo, J.L. 1999.
Endophytic fungi from Musa acuminata and their
reintroduction into axenic plants. World Journal of
Microbiology and Biotechnology 15: 37-40.
Petrini, O.; Stone, J. & Carroll, F.E. 1992. Endophytic fungi
in evergreen shrubs in western Oregon: a preliminary
study. Canadian Journal of Botany 60: 789-796.
Photita, W.; Lumyong, S.; Lumyong, P. & Hyde, K.D. 2001.
Endophytic fungi of wild banana (Musa acuminata) at
Doi Suthep Pui National Park, Thailand. Mycological
Rasearch 105(12): 1508-1513.
Rodrigues, K.F. 1994. The foliar endophytes of the
Amazonian palm Euterpe oleracea. Mycologia 86(3):
376-385.
Rodrigues, K.F. & Samuels, G.J. 1999. Fungal endophytes of
Spondias mombin leaves in Brazil. Journal of Basic
Microbiology 39(2): 131-135.
Rollof, S.; Hedstrom, S.A. & Nilsson-Ehle, P. 1987.
Purification and characterization of a lipase from
Staphylococcus aureus. Bioquimica et Biophysica Acta
921: 363-369.
Sarath, G.; De La Motte, R.S. & Wagner, F.W. 1989. Protease
assay methods. Pp. 25-54. In: R.J. Beynon & J.S. Bonde
(eds.). Proteolytics enzymes: an pratical approach.
Oxford, Oxford University Press.
Silveira, E.B. 2001. Bactrias promotoras de crescimento de
plantas e biocontrole de doenas. Pp. 71-100. In: R.
Barros & S.J. Michereff. Proteo de plantas na
agricultura sustentvel. Recife, Imprensa Universitria
da UFRPE.
Silveira, E.B.; Gomes, A.M.A.; Mariano, R.L.R. & Silva Neto,
E.B. 2004. Bacterizao de sementes e desenvolvimento
de mudas de pepino. Horticultura Brasileira 22(2):
217-221.
Varma, A.; Verma, S.; Sudah, S.N. & Franken, P. 1999.
Piriformospora indica, a cultivable plant-growthpromoting root endophyte. Applied and Environmental
Microbiology 65(6): 2741-2744.