Corre Zola

INSTITUTO BIOLGICO
PS-GRADUAO
Frequncia de reaes sorolgicas para Mycoplasma gallisepticum em aves de

postura de granjas comerciais localizadas no Estado de So Paulo.
Luis de Macedo Correzola
Dissertao apresentada ao Instituto

Biolgico, da Agncia Paulista de
Tecnologia dos Agronegcios, para
obteno do ttulo de Mestre em
Sanidade, Segurana Alimentar e
Ambiental no Agronegcio.
rea de Concentrao: Sanidade
Animal, Segurana Alimentar e o
Ambiente
Orientadora: Profa. Dra. Claudia Del
Fava
Co-orientador: Dr. Marcos Roberto Buim
So Paulo
2010
DADOS DE CATALOGAO NA PUBLICAO (CIP)

Ncleo de Informao e Documentao - Biblioteca
Instituto Biolgico
Secretaria da Agricultura e Abastecimento do Estado de So Paulo
Correzola, Lus de Macedo

Freqncia de reaes sorolgicas para Mycoplasma gallisepticum em aves de postura de
granjas comercias localizadas no Estado de So Paulo / Lus de Macedo Correzola. -- So
Paulo, 2010.
Dissertao (Mestrado) Instituto Biolgico (So Paulo). Programa de Ps-Graduao.
rea de concentrao: Sanidade Animal, Segurana Alimentar e o Ambiente.
Linha de pesquisa: Gesto Sanitria e Ambiental na produo animal.
Orientador: Cludia Del Fava.
Co-Orientador: Marcos Roberto Buim.
Verso do ttulo para o ingls: Serologic response of commercial laying hens against Mycoplasma
gallisepticum at So Paulo State.
1. Micoplasmose 2. Mycoplasma gallisepticum 3. Soroaglutinao rpida 4. Aves de postura
comercial 5. ELISA (Tcnica imunolgica) I. Fava, Cludia Del II. Buim, Marcos Roberto III. Instituto
Biolgico (So Paulo). Programa de Ps-Graduao IV. Ttulo
IB/Bibl. /2010/011
SECRETARIA DE AGRICULTURA E ABASTECIMENTO

AGNCIA PAULISTA DE TECNOLOGIA DOS AGRONEGCIOS
INSTITUTO BIOLGICO
Ps-Graduao
Av. Cons. Rodrigues Alves 1252
CEP 04014-002 - So Paulo SP
pg@biologico.sp.gov.br
FOLHA DE APROVAO
Nome do candidato: Luis de Macedo Correzola

Ttulo: Frequncia de reaes sorolgicas para Mycoplasma gallisepticum em aves de
postura de granjas comerciais localizadas no Estado de So Paulo.
Orientadora: Profa. Dra Claudia Del Fava
Co-orientador: Dr. Marcos Roberto Buim
Dissertao apresentada ao Instituto
Biolgico da
Agncia
Paulista
de
Tecnologia
dos
Agronegcios
para
obteno do ttulo de Mestre em Sanidade,
Segurana Alimentar e Ambiental no
Agronegcio.
rea de Concentrao: Sanidade Animal,
Segurana Alimentar e o Ambiente
Aprovada em:
Banca Examinadora
Assinatura:
Profa. Dra.: CLAUDIA DEL FAVA
Instituio: INSTITUTO BIOLGICO/SP
Assinatura:
Prof. Dr. FERNANDO GOMES BUCHALA

Instituio: Coordenadoria de Defesa Agropecuria do Estado de So Paulo/SP
Assinatura:
Profa. Dra. SIMONE ALVES MENDES RIBEIRO

Instituio: LANAGRO So Paulo/SP
Dedicatria
Dedico aos meus pais,
Estevam e Syomara,
na tentativa de agradecer por tudo o que me fizeram, e ainda o fazem,
obrigado !
Agradecimentos
A Dra Vera Lucia Nascimento Gonalves, pelo convvio dirio e pela generosidade
em permitir a realizao deste trabalho. Muito obrigado!
Ao Dr. Fernando Gomes Buchala, pelo incentivo e por reconhecer a importncia da

realizao deste.
A Dra Claudia Del Fava, por me acompanhar em todas as fases da realizao desta
dissertao,
com
ensinamentos,
orientao,
entusiasmo,
incentivo,
principalmente, apoio e amizade!
Ao Dr. Ricardo S. Jordo, do Instituto Biolgico de So Paulo, pela confiana e

apoio;
Ao pessoal do Centro Avanado de Pesquisa Tecnolgica do Negcio Avcola, da

Unidade de Pesquisa e Desenvolvimento do Instituto Biolgico, Bastos, em especial
a Dra Nilce Soares, e ao Dr Marcos Buim, meu co-orientador, pela motivao, apoio
e por permitirem a realizao da parte prtica neste conceituado laboratrio.
Ao Sindicato Rural de Bastos e ao seus diretores, Shigeyuki Toyoshima e Yasuhiko

Yamanaka, pela ajuda e suporte prestados;
A empresa Biovet, pela doao dos antgenos para a realizao da prova de

soroaglutinao rpida.
A Associao Paulista de Avicultura, APA, aos Drs. Erico Pozzer e Jos Roberto
Bottura, e a Ligia Okamura pelo incentivo e doao dos kits para a realizao da
prova de Elisa.
Ao pessoal da APA /Coordenadoria de Defesa Agropecuria, em especial Dra.

Snia Maria Martins Vitagliano, por toda ajuda e coleguismo e tambm ao Onzio
Oliveira, Lcio Leite Filho, Kellen Trivelatto, Pedro Abreu e Souza, Daniela O. Souza
e Fernanda Barbosa pelo incentivo e compreenso, e ao mdico veterinrio Vagner
Watanabe, pela fundamental ajuda na colheita do material.
Ao pessoal do Escritrio de Defesa Agropecuria de Tup, e ao seu diretor, Dr.

Dorcelino Dezzan e, principalmente, ao Cristvo S. Altero, por todo apoio que
recebi quando estive em Bastos e regio.
A todos do Centro de Anlise e Diagnstico da Coordenadoria de Defesa

Agropecuria, em especial Ldia Berling, Simone Campos, Leandro Ferreira,
Marilza Silva Ramos e Lara B. Keid, pela ajuda, coleguismo e incentivo.
A todos os amigos que fiz durante este curso, hoje Mestres, Marcio Macedo, Diogo
Manzano, Talita Mikola, Priscilla Schoepps, Rana Rachid, Leandro Venditti e
Marcelo Nishi, pelos bons momentos nas aulas compartilhadas.
A Marianne Oliveira, por me acompanhar nesta jornada desde o inicio.
A Aline Diniz Cabral e Mariana Vaz Rodrigues, minhas irms Del Fava, pelos
divertidos momentos no Alojamento do Instituto Biolgico.
A Ana Carolina Goes (Carol) e Mariana Piccolomini, pela amizade, risadas e por
vocs serem muito bonitas.
A Patrcia Mattiazzi, para deixar registrada a sua importncia neste e em minha vida.
A Deus, por tudo!
vi
RESUMO
CORREZOLA, L. M. Frequncia de reaes sorolgicas para Mycoplasma gallisepticum

em aves de postura de granjas comerciais localizadas no Estado de So Paulo. 2009.
Dissertao (Mestrado em Sanidade Animal, Segurana Alimentar e o Ambiente)
Instituto Biolgico.
A micoplasmose aviria causa doena crnica respiratria, sendo considerada um dos

principais problemas da avicultura mundial. As perdas econmicas so devidas a queda
na produo e qualidade dos ovos, baixa eclodibilidade, alta taxa de pintos refugados,
queda na eficincia alimentar, condenao de carcaas, alto custo com medicao
(antibiticos), resistncia bacteriana e restries comerciais. Avaliou-se a freqncia de
reaes sorolgicas para Mycoplasma gallisepticum em aves de postura comercial no
Bolso de Bastos e municpio de Guatapar, importantes regies produtoras de ovos no
Estado de So Paulo no perodo de junho e julho de 2009. Utilizou-se a prova de triagem
soroaglutinao rpida (SAR) e o exame confirmatrio de ELISA. Os resultados da
triagem pela SAR no total de amostras do Bolso de Bastos revelaram 88,2% (566/642)
de reatividade, sendo para aves no vacinadas 85,5% (196/229) e vacinadas 89,5%
(370/413). Os resultados confirmatrios pelo ELISA no Bolso de Bastos revelaram que a
reatividade total foi 89,8% (577/642), para aves no vacinadas 97,40% (233/229) e aves
vacinadas 85,7% (354/413) contra M. gallisepticum. No municpio de Guatapar, em todas
as granjas amostradas as aves eram vacinadas contra M. gallisepticum e o ndice de aves
reagentes SAR foi 76,5% (108/141) e ao ELISA 97,20% (137/141). No Bolso de
Bastos, 84,30% (193/229) das aves no vacinadas apresentaram sororeatividade
simultaneamente SAR e ao ELISA, porm no foram observados casos clnicos da
infeco, podendo este elevado nvel de soroeatividade ser devido difuso de cepas
vacinais vivas, que possuem baixa patogenicidade e imunizam as aves contra as cepas
de campo. O grande percentual de aves imunizadas nas duas regies que foram
reagentes simultaneamente SAR e ELISA 84,00% (465/554) ou reagentes somente ao
ELISA 8,80% (49/554) e a ausncia de sinais clnicos indicam que houve pouca falha
vacinal. Os elevados nveis de sororeatividade nas granjas do Bolso de Bastos e
municpio de Guatapar, onde a avicultura comercial intensa indicam que o micoplasma
est difundido nas granjas, sendo favorecido pelo manejo, onde todas as fases da criao
so realizadas na mesma granja, pelo adensamento populacional e proximidade entre as
vii
propriedades, onde as aves mais velhas apresentaram maior taxa de sororeatividade,
sem sinais clnicos respiratrios. Somente por meio de estudo epidemiolgico utilizando
isolamento do M. gallisepticum e realizando sua caracterizao e diferenciao molecular
podero ser conhecidos os tipos de cepas que esto estimulando a resposta humoral das
aves.
Palavras-chave: micoplasmose; Mycoplasma gallisepticum; soroaglutinao rpida;

ELISA, aves de postura comercial.
viii
ABSTRACT
CORREZOLA, L. M. Serologic response of commercial laying hens against Mycoplasma
gallisepticum at So Paulo State. 2009. Dissertao (Mestrado em Sanidade Animal,
Segurana Alimentar e o Ambiente) Instituto Biolgico.
Avian mycoplamosis is considered one of the main problems of poultry worldwide, and it
causes chronic respiratory illness. Economic losses are due to decrease in production and
quality of eggs, low hatchability, high rates of culling day-old birds, decrease in feed
efficiency, poultry carcasses condemnation, high cost with medication (antibiotics),
bacterial resistance and commercial restrictions. It was valuated the seroreactivity of
commercial laying hens for Mycoplasma gallisepticum at Bastos region and Guatapar
city, two major egg producing areas at So Paulo State, Brazil, from June-July 2009.
Seroagglutination test in plate (SAR) was used as screening test, and the ELISA as
confirmatory test. The results by SAR in the total samples of Bastos region revealed
88.2% (566/642) of serorectivity, being for non vaccinated laying hens 85.5% (196/229)
and vaccinated 89.5% (370/413). The confirmatory results by ELISA test at Bastos region
revealed a total seroreactivity 89.8% (577/642), being for non vaccinated laying hens
97.40% (233/229) and vaccinated 85.7% (354/413). In Guatapar city, all the flocks were
vaccinated against M. gallisepticum, and the rate of seropositivity by SAR was 76.5%
(108/141) and by ELISA 97.20% (137/141). At Bastos region, 84.30% (193/229) non
vaccinated hens were simultaneously reactive to SAR and ELISA, however there were no
clinical cases of infection, and this high rate of seropositivity may be due to the diffusion of
live vaccine strain, which have low patogenicity and immunize hens against wild strains.
The high rate of vaccinated hens in both regions seroreactors simultaneously to SAR and
ELISA 84.00% (465/554) or reactors only to ELISA, 8.80% (49/554), and the absence of
clinical signs show that there was low vaccine failure. The high seroreactivity rates at
Bastos region and Guatapar city, where the commercial poultry is intense, shows that M.
gallisepticum is spread out in flocks, being favored by management, where all the stages
of breeding are done at the same flock, the high population density and proximity of farms.
The oldest hens present higher rates of seropositivity, without respiratory clinical signs.
Only by molecular analysis it will be possible to characterize and differentiate the M.
gallissepticum strains who are stimulating the immune response of the hens.
Key word: mycoplasmosis; Mycoplasma gallisepticum; seroagglutination test in plate;
ELISA test; commercial laying hens.
ix
SUMRIO
1.
INTRODUO .........................................................................................................
2.
REVISO DE LITERATURA ...................................................................................
MATERIAL E MTODOS ........................................................................................ 14
RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................... 17
CONCLUSES ........................................................................................................ 34
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................................................ 35
x
LISTAS DE TABELAS
Tabela 1 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum

pelo teste de SAR no Bolso de Bastos/SP, segundo o municpio, granja, lote,
idade das aves (semanas) e vacinao contra M. gallisepticum (So Paulo,
2009) ..............................................................................................................18
pelo teste de SAR no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So
Paulo, 2009) .................................................................................................19
pelo teste de ELISA no Bolso de Bastos/SP, segundo o municpio, granja,
lote, idade das aves (semanas), vacinao e valores estatsticos obtidos
pelo software xCheck verso 3.3 Idexx (So Paulo, 2009).......................20
pelo teste de ELISA no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So
Paulo, 2009) .................................................................................................21
Tabela 5 Sororeatividade das aves no vacinadas, simultaneamente SAR e ELISA
para o diagnstico de M. gallisepticum no Bolso de Bastos (So Paulo,
2009) ............................................................................................................22
pelo teste de SAR no municpio de Guatapar/SP segundo a granja, lote,
idade das aves (semanas) e vacinao (So Paulo, 2009) .........................23
pelo teste de SAR no municpio de Guatapar/SP, segundo a vacinao
(So Paulo, 2009) ........................................................................................24
pelo teste de ELISA no municpio de Guatapar segundo a granja, lote, idade
das aves (semanas), vacinao e valores estatsticos obtidos pelo software
xCheck verso 3.3 Idexx (So Paulo, 2009)............................................25
pelo teste de ELISA no municpio de Guatapar/SP, segundo a vacinao
(So Paulo, 2009) ......................................................................................26
Tabela 10 Sororeatividade das aves vacinadas, simultaneamente SAR e ELISA para
o diagnstico de M. gallisepticum no Bolso de Bastos e Municpio de
Guatapar (So Paulo, 2009) ......................................................................27
Tabela 11 Clculo do qui-quadrado para a sororeatividade de aves vacinadas contra
M. gallisepticum SAR segundo a fase de produo e faixa etria, no
Bolso de Bastos e Guatapar, SP (So Paulo, 2009) ...............................29
Tabela 12 Clculo do qui-quadrado para a sororeatividade de aves vacinadas contra
xi
M. gallisepticum ao ELISA segundo a fase de produo e faixa etria, no
Bolso de Bastos e Guatapar, SP (So Paulo, 2009) ................................30
Tabela 13 Sororeatividade de aves no vacinadas contra M. gallisepticum SAR
segundo a fase de produo e faixa etria, no Bolso de Bastos, SP (So
Paulo, 2009) .................................................................................................31
Tabela 14 Sororeatividade de aves no vacinadas contra M. gallisepticum ao ELISA
segundo a fase de produo e faixa etria, no Bolso de Bastos, SP (So
Paulo, 2009) .................................................................................................31
Tabela 15 Comparao dos valores GMT de aves vacinadas obtidos na prova de
ELISA para M. gallisepticum segundo a fase de produo e faixa etria, no
Bolso de Bastos, SP, segundo o teste de Tukey (So Paulo, 2009)..........32
xii
LISTAS DE GRFICOS
Grfico 01 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum

pelo teste de SAR no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So
Paulo, 2009) ................................................................................................19
Grfico 2 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum
pelo teste de ELISA no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So
Paulo, 2009) ..................................................................................................21
Grfico 3 - Sororeatividade pelo teste de SAR em galinhas de postura comercial
vacinadas contra o M. gallisepticum no municpio de Guatapar/SP (So
Paulo, 2009) ................................................................................................24
Grfico 4 - Sororeatividade pelo teste de ELISA em galinhas de postura comercial
vacinadas contra o M. gallisepticum no municpio de Guatapar/SP (So
Paulo, 2009) ................................................................................................26
xiii
LISTA DE FIGURAS
Figura 01 - Localizao dos Municpios de Bastos e Guatapar, no Estado de So

Paulo/SP (fonte: CEASP, 2009) ..................................................................14
Figura 02 Conteno de ave para colheita de sangue por meio da puno da veia
umeral ..........................................................................................................16
xiv
ANEXOS
Anexo I: Teste de Soroaglutinao Rpida em placa (SAR) (OIE, 2004).....................40
Anexo II: Teste de ELISA...............................................................................................41
Anexo III: Certificado Comit de tica em Experimentao Animal do Instituto

Biolgico.........................................................................................................................43
xv
ABREVIATURAS E SIGLAS
AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism
APA
Associao Paulista de Avicultura
Graus Celsius
CDA-SP
Coordenadoria de Defesa Agropecuria do Estado de So Paulo
CETEA-IB Comit de tica em Experimentao Animal do Instituto Biolgico

CV
Coeficiente de variao
DP
Desvio padro
DRC
Doena Respiratria Crnica
ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay

GMT
Mdia geomtrica de ttulos
HA
Hemaglutinao
HI
Inibio da hemaglutinao
IgG
Imunoglobulina G
IgM
Imunoglobulina M
km
quilmetros quadrados
Kpb
103 pares de bases
mL
mililitro
nm
nanmetro
OIE
Organizao Mundial de Sade Animal
PCR
Reao em Cadeia pela Polimerase
PNSA Programa Nacional de Sanidade Avcola

PPLO pleuro pneumonia-like organisms
marca registrada
SAR
Reao de Soroaglutinao Rpida
tonelada
UBA
Unio Brasileira de Avicultura
micrmetro
1. INTRODUO
Micoplasma a denominao trivial para os microorganismos da diviso Tenericutes e da

ordem Mollicutes, que so caracterizados pela ausncia de parede celular, sendo o Mycoplasma
gallisepticum
(M.
gallisepticum)
um
dos
patgenos
mais
importantes
na
avicultura
(TIMENETSKY, 2009).
A micoplasmose aviria considerada um dos principais problemas da avicultura
mundial, por causar doena crnica respiratria (DCR) e aerossaculite, e ser transmitida
verticalmente pelo ovo. As perdas econmicas so devidas a queda na produo e qualidade
dos ovos (NOORMOHAMMADI et al., 2002), baixa eclodibilidade, alta taxa de pintos refugados,
queda na eficincia alimentar, condenao de carcaas, alto custo com medicao (antibiticos),
resistncia bacteriana e restries comerciais (METTIFOGO; BUIM, 2009).
Frequentemente perdas econmicas associadas infeco por M. gallisepticum so o
resultado da interao do patgeno com outras bactrias, controle deficiente de sade e
condies ambientais inadequadas (MUOZ et al., 2009).
Aves doentes e portadoras so as modalidades mais importantes de fonte de infeco,
sendo a eliminao do micoplasma atravs do ovo, com evidncias da presena do agente no
oviduto das galinhas e smen dos galos, alm do contato direto e indireto (fmites), alimentos e
gua contendo fezes e penas contaminadas, enquanto que na transmisso aergena esto
envolvidos aerossis e gotculas (METTIFOGO; FERREIRA, 2007).
Ao ser introduzido em um plantel o patgeno rapidamente disseminado para quase
todas as aves, com diferentes graus de severidade e durao. Nos meses frios, a doena
respiratria mais frequente e severa em aves jovens, enquanto que nas adultas est
relacionada com queda da postura. O reservatrio natural do micoplasma so as membranas
mucosas do trato respiratrio superior e genital de galinhas. Uma vez introduzido em uma
granja, o micoplasma patognico de difcil eliminao, requerendo na maioria das vezes a
eliminao de todas as aves para o sucesso da erradicao do agente. O tratamento com
antibiticos caro e muitas vezes ineficaz, deixando resduos na carne e nos ovos e
selecionando bactrias resistentes. Por este motivo a biosseguridade a principal forma de se
evitar a entrada e disseminao deste patgeno nas granjas avcolas (METTIFOGO;
FERREIRA, 2007).
No Brasil, os estudos soroepidemiolgicos referem-se a monitoramento oficial de
agncias de defesa sanitria em granjas de reprodutores (matrizeiro) para verificar a presena
de anticorpos nessas aves, uma vez que a legislao brasileira exige que esta categoria de
plantis seja livre do M. gallisepticum (BRASIL, 1994). Existem algumas publicaes que
avaliaram o risco que as aves de fundo de quintal representam para granjas de reprodutores,
que so a base gentica de todo o plantel avcola brasileiro (BUCHALA et al., 2006; NUNES,
2008). Embora esta enfermidade no seja controlada oficialmente nas granjas produtoras de
ovos e frangos de corte, causa prejuzos econmicos: queda da postura e baixa converso
alimentar e menor peso ao abate. Por este motivo, estudos soroepidemiolgicos para avaliar o
grau de disseminao da micoplasmose nos plantis de aves so importantes para avaliar a
disseminao e o impacto do M. gallisepticum na avicultura (DANELLI et al., 1999; MENDONA
et al., 2003; RAUBER et al., 2004; SANTOS; MARN-GMEZ; PAULA, 2007; SIMAS et al.,
2008).
O mtodo sorolgico empregado como triagem do M. gallisepticum a Soroaglutinao
Rpida (SAR), prova simples para monitorar o estado de sade de plantis avcolas, dotada de
grande sensibilidade para deteco de anticorpos, porm requer especificidade para um
diagnstico mais preciso de identificao do agente, sendo o teste confirmatrio a Inibio da
Hemaglutinao (HI) (BRASIL, 1994) e o ELISA (MUOZ et al., 2009).
Existem vacinas comerciais inativadas ou vivas para micoplasmas avirios As vacinas
inativadas ou bacterinas so recomendadas por nunca apresentarem problemas de reverso
de patogenicidade. A vacina viva recomendada para galinhas poedeiras comerciais para
reduzir as perdas produtivas e prevenir a transmisso da infeco (NASCIMENTO, 2000).
Tendo em vista a importncia econmica da doena e ao fato da avicultura ser um dos
pilares do agronegcio brasileiro, ser fonte de protena barata (ovo e carne de frango), fixar o
homem no campo e gerar empregos diretos e indiretos e as exigncias do mercado quanto aos
produtos de origem animal sem resduos, torna-se necessria a obteno de plantis livres da
doena e sem tratamento com antibitico, para obteno de um produto diferenciado e com livre
aceitao no mercado, inclusive o internacional (APA, 2007).
O Brasil ocupa o terceiro lugar na produo mundial de frangos, com 10.350.000
toneladas de carne produzida, enquanto que o consumo per capita de ovos no Brasil cerca de
140 ovos, bem abaixo da mdia japonesa, de 347 ovos e tambm da americana, em cerca de
260 ovos/ano, o que indica um enorme potencial de crescimento deste segmento. A
industrializao do ovo tambm um mercado que importante e praticamente desconhecido
ainda do consumidor brasileiro, como o ovo vendido em p ou caixas tipo longa vida (APA,
2007).
Tendo em vista a representatividade econmica da avicultura de postura comercial em
duas regies: Bolso de Bastos e municpio de Guatapar Estado de So Paulo, bem como a
escassez de dados relativos presena do M. gallisepticum nesta atividade, o presente trabalho

teve como objetivos:
Avaliar a ocorrncia de reaes sorolgicas para este patgeno utilizando dois

testes diagnsticos, a SAR como prova de triagem e o ELISA confirmatrio.
Estudar fatores que possam estar interferindo na resposta humoral das aves
contra o M. gallisepticum, tais como vacinao, fase da produo e faixa etria.
2. REVISO DE LITERATURA
Microorganismos do gnero Mycoplasma causam doenas em plantas, animais e no
homem. Foram cultivados pela primeira vez em 1898 por Nocard e Roux, que isolaram pela
primeira vez os microrganismos da pleuropneumonia bovina. Durante dcadas os micoplasmas
foram isolados de animais e humanos, doentes ou no, tendo sido designados como pleuro
pneumonia-like organisms (PPLO). Atualmente, os micoplasmas pertencem ordem dos
Mollicutes por no apresentarem normalmente a parede celular e, portanto, evidenciam
plasticidade em sua morfologia, dependendo de seu estgio fisiolgico (TIMENETSKY, 2009).
Os micoplasmas so as menores bactrias conhecidas, assemelham-se em tamanho aos
grandes vrus (cerca de 300 nm), so desprovidos de parede celular e por muito tempo vinham
sendo considerados parasitos extracelulares exclusivos. Atualmente, admite-se a existncia de
espcies com dimenses reduzidas que vo de 0,2 a 0,4 m de dimetro e um genoma de 580 a
2,2 kpb, sendo que as espcies de micoplasmas avirios tm em torno de 1,1 kpb
(METTIFOGO; FERREIRA, 2007).
Segundo Danelli et al. (1999) e Buim (2007), os micoplasmas avirios possuem
particularidades tais como:
1
Colnias em forma de ovo-frito ou mamilar, que variam de 0,01 a 0,50 mm de dimetro,

quando cultivados em meio slido;
Crescimento para o interior do gar, iniciando na parte central da colnia;
Filtrabilidade, em presena de filtros de 300-450 nm;
Neutralizao em cultivo por anticorpos especficos, o que permite a sua identificao por
soroneutralizao, cujo teste pode ser denominado de Inibio de Crescimento ou
Inibio de Metabolismo;
Incapacidade de reverso forma tpica de bactria com parede celular;
Necessidade de lipdios, principalmente colesterol, para o crescimento.

A ausncia de parede celular nos micoplasmas os torna naturalmente resistentes aos
antibiticos que atuam impedindo a sntese da parede celular das bactrias, a exemplo das
penicilinas (DANELLI et al., 1999; BUIM, 2007).
As micoplasmoses avirias so enfermidades infecto-contagiosas de distribuio
mundial, sendo que para os galinceos o agente etiolgico mais importante o M. gallisepticum,
que est associado a doenas respiratrias crnicas e diminuio na produo de ovos
(NASCIMENTO, 2000; KLEVEN, 1998), sendo considerada enfermidade de maior impacto
econmico em todos os nveis da atividade avcola (METTIFOGO; BUIM, 2009).
A micoplasmose aviria foi descrita pela primeira vez em 1905 na Inglaterra em perus,
sob a denominao de pneumoenterite epizotica. Na dcada seguinte recebeu a denominao

de sinusite infecciosa dos perus e doena respiratria crnica (DRC) das galinhas, ambas
causada por M. gallisepticum (METTIFOGO; FERREIRA, 2007).
No Brasil, o primeiro diagnstico publicado foi no Estado de So Paulo, onde se verificou
que a DRC ocupava o dcimo lugar entre as doenas diagnosticadas no Instituto Biolgico e
observou-se no perodo de 1961 a 1967 sua prevalncia havia aumentado, chegando ao quinto
lugar das doenas avirias diagnosticadas (NASCIMENTO, 2000).
Os dados publicados sobre reaes sorolgicas ao M. gallisepticum no Brasil so
referentes a aves de postura comercial, reprodutoras, aves de fundo de quintal (galinhas
caipiras) e aves selvagens, mas so em pequena quantidade.
Em poedeiras de postura comercial, Danelli et al. (1999), no Estado do Rio de Janeiro,
realizaram em algumas granjas o teste de soroaglutinao rpida (SAR) para M. gallisepticum e
encontraram 17% (11/64) aves sororeagentes no vacinadas. Mendona et al. (2003)
observaram um grau significativo para a presena de M. gallisepticum em um plantel de galinhas
poedeiras 41,7% de sororeatividade em diluio do soro igual ou superior a 1:10 na SAR.
Rauber et al. (2004) relataram a ocorrncia de M. gallisepticum em trs granjas (A, B e C) no Rio
Grande do Sul, utilizando o teste de SAR; nas amostras coletadas, foram sororeagente nas
granjas A - 26% (7/27), B - 56,6% (34/60) e C - 18,1% (27/149). Santos, Marn-Gomez e Paula
(2007) realizaram levantamento da frequncia em frangas de postura comercial no vacinadas
em Minas Gerais e encontraram 2% (6/300) animais sororeagentes SAR. Simas et al. (2008)
realizaram estudo sorolgico no municpio de So Jos do Vale do Rio Preto, Estado do Rio de
Janeiro e encontraram 94% (47/50) poedeiras comerciais soroeagentes ao antgeno M.
gallisepticum para SAR.
Em galinhas de granjas reprodutoras, Cardoso et al. (2006) avaliaram sorologicamente
952 lotes com idade entre seis e 65 semanas, de diversas regies do Brasil, durante os anos de
2003 e 2004, tendo sido analisadas 139.096 amostras de soro para M. gallisepticum pela SAR,
tendo sido todas negativas na diluio do soro 1:10. Orsi et al. (2004) realizaram estudo
soroepidemiolgico do M. gallisepticum em plantis de aves reprodutoras de diversas regies do
Brasil e no foram detectadas reaes sorolgicas positivas em 4212 aves pela prova de SAR.
Em aves de fundo de quintal, Buchala et al. (2006) no Estado de So Paulo relataram a
ocorrncia de M. gallisepticum em 30,3 % (123/406) das aves amostradas, sendo que 73%
(11/15) dos criatrios avaliados apresentaram pelo menos uma ave sororeagente prova de
SAR. Nunes (2008) determinou a sororeatividade de galinhas de dez propriedades no Municpio
de So Jos do Egito, Estado de Pernambuco e 100% (124) das amostras de soro foram
reagentes SAR. Simas et al. (2008) realizaram estudo sorolgico no Estado do Rio de Janeiro,
nos municpios de Carapebus, Quissam e Mag e encontraram 34% (13/38) galinhas caipiras
sororeagentes para SAR.
Em aves selvagens, Souza (2007) pesquisou em 82 indivduos a presena de anticorpo
contra M. gallisepticum pela SAR e 2 (2,43%) foram positivas. As amostras foram posteriormente
submetidas tcnica de HI e/ou PCR, sendo todas negativas. Apesar de aves selvagens
representarem risco sanitrio avicultura industrial, a autora concluiu ser necessrio envolver
um nmero maior de aves e locais para elucidar o real potencial de transmisso e portador das
aves selvagens para o M. gallisepticum.
A capacidade do M. gallisepticum causar doena influenciada por vrios fatores, dentre
os quais virulncia da cepa envolvida, nmero de organismos presentes, via de infeco e por
caractersticas inerentes ao hospedeiro, como espcie e idade. Os perus so mais suscetveis e,
via de regra, a doena aparece de forma aguda e intensa nessa espcie do que nas galinhas.
Com relao idade, os animais jovens so mais suscetveis que os adultos (BUIM, 2007).
A morbidade em lotes de frangos em geral alta, considerando as caractersticas de
transmissibilidade do M. gallisepticum (UBA, 2008). Por outro lado, a mortalidade, em geral,
restringe-se a um ou 5% em poedeiras, podendo alcanar 30% em lotes de frangos ou de aves
jovens suscetveis, principalmente se a infeco for causada por cepas de maior virulncia, ou
se houver condies ambientais que favoream a exacerbao dos sinais clnicos (DANELLI et
al., 1999; BUIM, 2007).
De modo geral, os micoplasmas so organismos frgeis fora do hospedeiro e a sua
sobrevivncia pode ser limitada a poucos dias ou horas, sob condies usuais das granjas. Em
condies experimentais, o M. gallisepticum sobrevive entre dois a quatro dias nas penas das
aves e trs dias no cabelo das pessoas. Em materiais orgnicos inertes como tecido, borracha,
rao e cepilho, os micoplasmas podem permanecer viveis por at dois dias. Entretanto, se
esses materiais estiverem protegidos por exsudatos ou em ambiente com temperatura baixa,
possvel que esses organismos sobrevivam por perodos mais longos. Os desinfetantes
qumicos comumente utilizados para a desinfeco de instalaes na granja ou nos incubatrios
so efetivos contra o M. gallisepticum (amnia quaternria, compostos iodados, fenlicos, lcool)
(NASCIMENTO, 2000).
A transmisso de M. gallisepticum ocorre mais comumente na forma horizontal,
diretamente de ave para ave, principalmente por meio de aerossis, ou indiretamente, por
materiais ou substncias do meio ambiente. A transmisso tambm ocorre por meio de pssaros
silvestres e de roedores. Alm da forma horizontal, verifica-se a transmisso vertical por meio de
ovos infectados (transmisso transovariana), perpetuando a infeco nos plantis, requerendo

na maioria das vezes a depopulao do ambiente para o sucesso da erradicao do agente.
Esse patgeno infecta o trato reprodutivo de matrizes, sendo detectado em ovidutos de galinhas
e no smen de galos. Ao serem incubados, os ovos provenientes dessas aves iro gerar pintos
infectados e, desse modo, a infeco por M. gallisepticum poder se disseminar potencialmente
para vrios lotes em diferentes granjas (LEY; BERKHOFF; LEVISOHN, 1997).
O perodo de incubao pode variar de seis a 21 dias em condies experimentais. Sob
condies naturais difcil determinar o tempo exato de exposio (NASCIMENTO, 2000).
As doenas classicamente conhecidas como DRC das galinhas e aerossaculite so
causadas por M. gallisepticum. A DRC afeta o trato respiratrio superior das aves, as quais
passam a emitir um estertor respiratrio, conhecido como ronqueira entre criadores e
observada principalmente nas horas mais quentes do dia. Os sinais clnicos mais comuns so
coriza, espirros, estertores midos e a respirao pelo bico aberto, em casos crnicos. Quando
os sacos areos so tambm atingidos e apresentam depsitos de fibrina, mesmo pelo
envolvimento de outros agentes, como vrus respiratrios e/ou Escherichia coli, tem-se usado a
denominao de DRC Complicada (COELHO, 2006). Entretanto, as infeces inaparentes so
as mais comuns e mais preocupantes, devido aos prejuzos que causam. As doenas causadas
por micoplasmas podem ser agudas, mas elas so normalmente crnicas, sendo comum a
infeco inaparente, somente evidenciada por teste diagnstico (METTIFOGO; BUIM, 2009).
Macroscopicamente so encontradas inflamaes catarrais nas fossas e seios nasais,
faringe, traquia e brnquios, exsudato caseoso ou fibrino-caseoso nos sacos areos; os sacos
areos apresentam-se espessados, opacos e podem conter depsitos de fibrina, alm de reas
de reao linfofoliculares em suas paredes. Nos casos em que h complicao com outros
patgenos, como a Escherichia coli e viroses, as leses so mais graves e pode resultar em
septicemias, com pericardite, peri-hepatite e doena do trato respiratrio, incluindo aerossaculite.
Pneumonias e leses do oviduto (salpingite) tambm podem ser observadas (NASCIMENTO,
2000; COELHO, 2006; METTIFOGO; FERREIRA, 2007; METTIFOGO; BUIM, 2009). Alm das
complicaes respiratrias, o M. gallisepticum pode provocar leses no sistema articular. Nas
salpingites associadas ao M. gallisepticum observa-se a presena de exsudato caseoso no
oviduto (BUIM, 2007).
Nas alteraes citopatolgicas por M. gallisepticum, no epitlio traqueal de galinhas,
observa-se muco seguido de descamao do epitlio ciliado, alm de perda de clios
(METTIFOGO; BUIM, 2009). Podem ser observados infiltrados de clulas mononucleares,
hiperplasia das glndulas mucosas do trato respiratrio superior e as alteraes mais evidentes
so as reaes linfo-foliculares (COELHO, 2006). No pulmo so observadas reas de
pneumonia intersticial, alteraes linfo-foliculares e granulomas, em menor freqncia Os sacos

areos so os pontos mais afetados (NASCIMENTO, 2000; COELHO, 2006).
Considerando-se as dificuldades em se isolar micoplasmas avirios, a prova de
soroaglutinao rpida (SAR) usada como procedimento sorolgico de triagem para
diagnosticar plantis de aves livres de micoplasmoses, por ser um teste de grande sensibilidade,
rpido, pouco dispendioso e simples, mas que se caracteriza pela baixa especificidade devido ao
aparecimento de falsos positivos, que devem ser confirmados pela inibio da hemaglutinao
(HI) (CARDOSO et al., 2006; MENDONA et al., 2003; BRASIL, 1994; MENDONA et al., 2004;
BUCHALA et al., 2006), porm, a ausncia do antgeno de HI no mercado faz com que muitos
laboratrios adotem o ELISA como teste complementar (BUTCHER, 2009). A baixa
especificidade da SAR tem contribudo para a falta de segurana no diagnstico das
micoplasmoses, principalmente quando ela empregada isoladamente (MENDONA et al.,
2003). Ahmad et al. (1988) relatam que as reaes falso positivas podem ser atribudas a
presena de globulinas ou outro componente do soro no meio de crescimento usado na cultura
de micoplasma para produo de antgeno para o teste SAR em placas, ou pode estar
relacionado ao aumento do uso de vacinas inativadas (GLISSON; DAWE; KLEVEN, 1988).
Butcher (2009) relata que falsos positivos tambm podem ser atribudos administrao de
vacinas oleosas contra a doena de Gumboro e Coriza Aviria, soros turvos ou contaminados,
soros congelados e depois descongelados e reaes cruzadas com outros micoplasmas.
Existem ainda diferenas significativas na sensibilidade e na especificidade de antgenos
(ROSALES, 1999) e deve-se considerar que h variabilidade entre as partidas dos antgenos e
entre os procedimentos dos testes, alm de haver possibilidade de reao positiva em soros
contaminados (METTIFOGO; BUIM, 2009).
Conforme preconizado para SAR, se o soro proveniente de uma ave apresentar reao
de formao de grumos (aglutininas) diluio igual ou superior a 1:10, o resultado
considerado positivo; diluio de 1:5, deve ser considerado suspeito; e se a reao somente
ocorrer em soro no diludo, o resultado deve ser considerado negativo. Entretanto, tem-se
verificado na prtica que no h confiabilidade nos resultados negativos SAR e que qualquer
aglutinao, mesmo em soro no diludo, deve ser considerada como resultado suspeito.
Recentemente, foi comprovado que galinhas reprodutoras negativas SAR para M.
gallisepticum, mesmo na ausncia de aglutinao em soros no diludos, estavam positivas no
HI, isolamento e PCR. A SAR detecta principalmente anticorpos do tipo IgM, que aparecem de
trs a cinco dias aps o inicio da infeco e que persistem por 70 a 80 dias (NASCIMENTO,
2000). Enquanto o HI e o ELISA detectam IgG, a SAR pode detectar soroconverses dias antes
dos outros testes, indicando infeces recentes, enquanto que altos ttulos no HI e ELISA
indicam infeces crnicas (BUTCHER, 2009). O HI e ELISA teste so usados como

confirmatrio para dvidas na SAR. Eles so mais especficos e podem no detectar cepas
heterlogas. Atualmente, o teste HI no tem sido muito utilizado devido ao fato de que o
antgeno no disponvel comercialmente, por este motivo muitos laboratrios no usam mais o
HI e sim o ELISA, porque se podem obter os kits padronizados no mercado (BUTCHER, 2009).
O ELISA um diagnstico sensvel e especfico, muito utilizado em avicultura para
monitorar populaes e deve ser realizado em lotes de aves de vrias idades. necessrio um
plano de amostragem que permita a anlise dos dados para concluses apuradas no que diz
respeito ao controle de sade do lote e defina estratgias relacionadas a programas de
vacinaes, como a idade de aplicao, via e tipo de vacina utilizada (MUOZ et al., 2009).
Em lotes que foram vacinados com duas vacinas inativadas, uma resposta imune pode
ser detectada por ELISA no perodo de trs a quatro semanas depois da segunda aplicao.
Esta resposta no deveria ser maior que grupos de ttulos de dois a quatro (2,0-4,0) e se os
ttulos atingem um nvel maior, a correlao com infeco de campo precisa ser verificada.
(MUOZ et al., 2009).
O uso de vacina viva contra o M. gallisepticum acarreta, tipicamente, uma resposta imune
fraca. A presena de ttulos de anticorpos elevados no ELISA indica que os grupos vacinados
esto enfrentando um desafio de campo, sendo necessrio verificar a presena de sinais clnicos
(BUTCHER, 2009; MUOZ et al., 2009).
Aps a vacinao com a cepa ts-11, o ELISA o teste mais sensvel que a SAR para
detectar anticorpos contra esta cepa vacinal (NOORMOHAMMADI et al., 2002).
Para o isolamento, coletam-se fragmentos de tecidos lesados, exudato sinovial e ocular,
alm de swabs da traquia, sacos areos, liquido sinovial, exudato dos seios nasais. Swabs
da traquia ou da fenda palatina, imersos em cerca de 1,5 mL em meio lquido constituem
excelentes espcimes, principalmente quando usados em cultivo e/ou PCR para auxiliar os
testes de SAR e HI no monitoramento da infeco por M. gallisepticum (NASCIMENTO, 2000).
O isolamento em meio especifico de Frey o mtodo mais seguro para o diagnstico. Em
gar, as colnias de micoplasmas apresentam-se sob a forma tpica de ovo frito, com dimetro
de 0,2 a 0,3mm (METTIFOGO; FERREIRA, 2007). Alguns micoplasmas so capazes de formar
colnias em 24 horas e outros demoram at trs semanas. Geralmente, o cultivo obtido entre
trs a 15 dias. Apesar de serem microrganismos facultativos, algumas espcies preferem a
aerobiose e outras a microaerofilia para o primo-isolamento (NASCIMENTO, 2000;
METTIFOGO; FERREIRA, 2007; METTIFOGO; BUIM, 2009). Os testes que confirmam a
espcie isolada so a inibio de crescimento, imunofluorescncia direta ou indireta e a
imunoperoxidase indireta (NASCIMENTO, 2000).
10
Wellehan et al. (2001) e Ikuta et al. (2001) demonstraram que a PCR para diagnstico do
M. gallisepticum um mtodo mais efetivo quando comparado com a cultura, onde em 67% dos
casos foi detectado M. gallisepticum pela PCR e apenas 33% foram positivos na cultura.
Feberwee et al. (2005) compararam os testes de diagnsticos usando cultura, PCR e sorologias
(SAR, ELISA, HI) e obtiveram resultados falso-positivos nos testes sorolgicos, recomendando a
utilizao de vrias tcnicas diagnstica concomitantes.
Nos ltimos anos, surgiram os mtodos de diagnstico biomoleculares como a
hibridizao com sondas de DNA, a PCR e o Polimorfismo de Comprimento de Fragmento de
Restrio (RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism), uma variao da PCR que
utiliza primers comuns a todos os micoplasmas avirios, para, a seguir, clivar o segmento
amplificado com diferentes enzimas de restrio, obtendo assim padres definidos para cada
espcie. Dentre as tcnicas, a PCR tem se mostrado atraente aos laboratrios por ser mais
rpida, sensvel e especfica, atendendo demanda e s exigncias do Plano Nacional de
Sanidade Avcola (PNSA) que j a considera um teste confirmatrio. Atualmente encontra-se
disponvel na literatura a descrio de primers para deteco de trs espcies de micoplasma
(M. gallisepticum; M. synoviae; M. meleagridis), que diferenciam cepas vacinais de cepas de
campo (METTIFOGO; FERREIRA, 2007).
Existem outras tcnicas utilizadas para a diferenciao de cepas de campo com a
finalidade de estudos epidemiolgicos. A tcnica de DNA polimrfico (RAPD - Random
Amplification of Polimorphic DNA) utiliza primers aleatrios para amplificar segmentos ao longo
do DNA, enquanto que a tcnica de polimorfismo de comprimento de fragmento amplificado
(AFLP - Amplified Fragment Length Polymorphic) utiliza uma ou duas enzimas de restrio, alm
de primers desenhados com seqncias que se ligam s enzimas e iro amplificar os segmentos
clivados. Ambas as tcnicas geram padres que podem caracterizar uma cepa ou definir um
marcador polimrfico (METTIFOGO; FERREIRA, 2007).
Os micoplasmas so sensveis aos antimicrobianos que interferem na sntese dos
aminocidos, cidos nuclicos e metabolismo dos lipdios. O tratamento realizado quando
economicamente vivel e os antibiticos utilizados so os macroldeos (tilosina, espiramicina,
quintamicina), gentamicina, tetraciclinas, tiamulina, tilmicosina (desmicosina), avilosin (3-acetil,
4isovaleril tartataro) e as fluorquinolonas, tais como enrofloxacina e danofloxacina. O tratamento
com antibiticos uma forma de controle da micoplasmose, mas a sua erradicao dificilmente
ocorre. No caso de suspenso desses tratamentos, h uma reverso do quadro, pois somente a
medicao no elimina as infeces por micoplasmas em uma granja (NASCIMENTO, 2000;
COELHO, 2006; METTIFOGO; FERREIRA, 2007; METTIFOGO; BUIM, 2009).
O tratamento de aves com antimicrobianos, apesar de diminuir o ndice de manifestao
11
clinica, e consequentemente, a taxa de transmisso transovariana a um nvel que pode chegar a

ser inferior a 0,1%, no erradica os micoplasmas do plantel. Entretanto, um procedimento
recomendado para poedeiras e frangos de corte, principalmente oriundos de plantis
contaminados. A terapia com antimicrobianos, principalmente aqueles que se acumulam em
altas concentraes nas membranas mucosas do trato respiratrio, como tiamulin e
enrofloxacina, afetam o diagnstico etiolgico da micoplasmose aviria por inibir ou reduzir a
resposta imune e por indisponibilizarem os micoplasmas do trato respiratrio superior, chegando
em muitos casos a nveis zero de anticorpos e isolamento tanto em frango de corte quanto em
aves de reproduo ou postura. Porm, h reverso desse quadro com a suspenso do
tratamento. O declnio ou ausncia da reao sorolgica e da taxa de isolamento pode ser
devido localizao intracelular do micoplasma, por presso antimicrobiana, onde no h
reconhecimento do sistema imunolgico do hospedeiro, conforme preconizado (NASCIMENTO,
2000).
As medidas gerais de biosseguridade, adotadas em granjas comerciais ou reprodutoras
so consideradas imprescindveis em qualquer esquema de controle e erradicao de uma
doena infecciosa. Os tratamentos com antibiticos com metade ou um tero da dose podem ser
considerados uma forma de preveno. Por outro lado, a vacinao realizada com o objetivo
de reduzir os altos custos dos tratamentos com antibiticos, sejam eles curativos ou preventivos
e, ao longo do tempo, minimizar as novas infeces (METTIFOGO; FERREIRA, 2007).
Existem no mercado dois grupos de vacinas, as inativadas e as atenuadas. As vacinas
inativadas so as mais seguras por no causarem a doena nas galinhas e em espcies mais
suscetveis, como os perus e possibilitam a ao conjunta com antibioticos. No entanto,
apresentam limitaes, como alto custo de produo, aplicao individual nas aves, baixa
antigenicidade e persistncia de anticorpos vacinais (METTIFOGO; FERREIRA, 2007).
Existem trs vacinas vivas contra o M. gallisepticum disponveis no mercado: as cepas
Conn-F (M. gallisepticum-F), ts-11 e 6/85. A M. gallisepticum-F pode eventualmente reverter
para a forma virulenta e induzir leses nos sacos areos de galinhas, em plantis de postura,
confere bons nveis de proteo, deslocando as cepas de campo de M. gallisepticum ou
diminuindo o nmero destas no trato respiratrio. A cepa ts-11 termossensvel, se multiplica
bem no trato respiratrio superior, no causa leses nos pulmes e sacos areos, sendo capaz
de induzir nveis bons de proteo. A cepa 6/85, quando aplicada por pulverizao, no coloniza
a traquia de aves por um longo perodo, sua transmissibilidade baixa, alm de no interferir
nos testes sorolgicos (METTIFOGO; BUIM, 2009).
Somente o conjunto de medidas adotadas a mdio e longo prazo, tais como os descartes
de lotes infectados, os tratamentos, vacinaes e normas de biosseguridade podero controlar
12
ou at erradicar a micoplasmose nos plantis (METTIFOGO; FERREIRA, 2007). Em virtude dos

prejuzos decorrentes da convivncia com as infeces micoplsmicas, algumas estratgias de
controle so sugeridas, como a aquisio de pintos de um dia, ou mesmo ovos frteis livres de
M. gallisepticum para os sistemas de frango de engorda, postura e reproduo (matrizes e avs).
Em se tratando dos estoques genticos, a condio de ave livre de micoplasma foi e continua
sendo obtida por meio do tratamento dos ovos frteis com solues de antibitico por ovoinjeo e/ou ovo-imerso, ou por aquecimento (METTIFOGO; BUIM, 2009)
De acordo com Ito et al. (2002) a principal e nica medida preventiva que pode ser
adotada para evitar a introduo do M. gallisepticum em plantis de galinhas a adoo de
medidas de biosseguridade. Entre elas, evitar o contato com outras espcies avirias (aves de
vida livre, galinhas caipiras, lotes vacinados com M. gallisepticum vivo e trnsito de pessoas e
equipamentos que possam representar meios de transporte do agente etiolgico. Conforme
Mettifogo; Buim (2009), devido ao fato do M. gallisepticum ser transmitido verticalmente, a forma
mais efetiva de controle e preveno a eliminao dos lotes positivos, efetuando a repopulao
da granja com aves livres da doena.
Dentre as principais falhas de biosseguridade, Nascimento (2000) destaca a
multiplicidade de lotes de diferentes idades numa mesma granja, isto facilita o aparecimento de
doenas intercorrentes e a disseminao de patgenos entre as aves do mesmo lote e entre os
lotes. Tambm o manejo correto dos procedimentos de limpeza, desinfeco, vazio sanitrio e
vacinao so primordiais para o adequado controle profiltico e assim reduzir a freqncia dos
desafios e preparar o sistema imunolgico das aves para proteg-las de infeces.
Em sistemas de produo de frango de corte, onde as aves de reposio so livres de
micoplasma, resta ao criador a utilizao e o cumprimento das medidas de biossegurana
preconizadas para a Avicultura e fazer uso da antibioticoterapia, caso surjam lotes com
micoplasmose. O tratamento de frangos de corte com antibitico, quando economicamente
vivel feito sob forma preventiva, isto , a administrao de antibitico realizada a partir dos
primeiros dias de vida nas aves oriundas de matrizes ou avs infectadas com M. gallisepticum
(NASCIMENTO, 2000).
O Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA), em conformidade com o
PNSA publicou a Instruo Normativa/SDA n 44, de 23 de agosto 2001 (BRASIL, 2001),
estabelecendo as normas tcnicas para o controle e a certificao de ncleos e
estabelecimentos avcolas para a micoplasmose aviria (M. gallisepticum; M. synoviae; M.
meleagridis). Estas normas definem as medidas de monitoramento da micoplasmose em
estabelecimentos avcolas de controles permanentes e eventuais exceto postura comercial,
frango de corte e ratitas, que realizam o comrcio ou a transferncia nacional e internacional de
13
seus produtos, destinados reproduo e produo de aves e de ovos frteis, ficando os

mesmos obrigados a realizarem o monitoramento de seus plantis, obedecendo s diretrizes do
PNSA. Constatando-se positividade para M. gallisepticum ou M. synoviae em aves ou ovos
frteis de linhas puras, bisavs e avs importadas ou nascidas no Brasil, devem ser procedidos
o sacrifcio/abate do ncleo. No caso de matrizes, quando da positividade para M. gallisepticum
em galinhas, deve ser realizado o sacrifcio/abate do ncleo.
O PNSA prev que as aves reprodutoras (matrizes, avs e ncleos genticos) devem ser
acompanhadas por monitorizao sorolgica e/ou micoplasmolgica para M. gallisepticum, M.
synoviae e/ou M. meleagridis seguindo procedimentos epidemiolgicos de amostragem e
periodicidade. Os testes diagnsticos utilizados no monitoramento oficial so SAR, HI e ELISA,
alm de diagnstico microbiolgico que envolve isolamento e tipificao e/ou PCR. A
periodicidade dos testes normalmente feita da seguinte forma: no 1 dia de vida, ou em ovos
frteis para aves de reproduo e postura e em frangos de corte, onde se verifica a presena de
anticorpo maternal (IgG) para M. gallisepticum , M. synoviae e/ou M. meleagridis, com a
utilizao de teste imunolgicos (em soro ou gema) efetivos para IgG (HI e/ou ELISA), alm do
cultivo de traquia e sacos areos de um nmero de 10 a 20 aves recm-nascidas ou cultivo de
igual quantidade de ovos. Para aves reprodutoras, alm do diagnstico no 1 dia de vida,
continua-se testando a intervalos no superiores a 90 dias. Adicionalmente, podem-se testar
frangos de corte antes e durante o abate, e aves de postura comercial (BRASIL, 1994).
Monitorizando-se as aves reprodutoras possvel detectar a infeco micoplsmica de
forma precoce e tomar as devidas providncias antes que o problema se alastre e prejudique a
comercializao de pintos de um dia (NASCIMENTO, 2000).
Uma vez introduzido em uma granja, o micoplasma patognico de difcil eliminao,
requerendo na maioria das vezes a depopulao do ambiente para o sucesso da erradicao do
agente (METTIFOGO; BUIM, 2009).
O diagnstico clnico diferencial deve investigar outros agentes que causam sinais
respiratrios, dentre os quais o Haemophylus paragallinarum (coriza infecciosa), Pasteurella
multocida, P. heamolytica, E. coli, Staphylococus spp., Stretpcoccus spp., Mycoplasma synoviae,
doena de Newcastle, bronquite infecciosa, Influenza aviria, laringotraquete infecciosa e
Aspergillus spp. (METTIFOGO; BUIM, 2009).
14
3. MATERIAL E MTODOS
A colheita das amostras contou com a participao dos mdicos veterinrios da CDA e
do convnio da Associao Paulista de Avicultura (APA). Todos trabalharam paramentados com
equipamentos de proteo individual, como mscaras, luvas e macaco descartveis, que eram
trocados a cada granja.
Foram colhidas amostras de sangue de postura comercial de duas regies
representativas do Estado de So Paulo: Bastos e Guatapar.
Figura 01 - Localizao dos Municpios de Bastos e Guatapar, no Estado de So Paulo/SP

(fonte: CDA, 2009)
A regio de Bastos est localizada na regio Nova Alta Paulista, entre a latitude 2155'19"
sul e longitude 5044'02" oeste, com altitude de 445 metros, possui rea de 170.454 km (Figura
1) (CDA, 2009). Este municpio possui o maior plantel de galinhas de postura do pas e a maior
produo de ovos do Brasil (CDA, 2009). Segundo a Associao Comercial e Industrial, 74% de
sua economia gira em torno do comrcio de ovos, principal atividade local desde a dcada de
1950. O Bolso de Bastos uma regio criada pela Resoluo SAA-27 de 30/09/2003 (SO
15
PAULO, 2003), que compreende outros 16 municpios alm de Bastos, dentre os quais Iacri,
Osvaldo Cruz e Tup, que se caracterizam por terem na avicultura de postura sua maior fonte de
renda. O bolso corresponde por 15% do plantel nacional de aves de postura, conta com 15
milhes de aves e produz mais de 8,6 milhes de ovos por dia (SO PAULO, 2003). Utilizou-se
o banco de dados do Sindicato Rural de Bastos/SP para a seleo das granjas, considerando-se
como principal critrio a presena ou ausncia de vacinao contra micoplasmose.
O municpio de Guatapar localiza-se na regio de Ribeiro Preto, nordeste do Estado de
So Paulo, a uma latitude 2129'48" sul e a uma longitude 4802'16" oeste, possui uma rea de
412.637 km (Figura 1) (CDA, 2009). A atividade principal a produo de ovos, em mdia 21
mil dzias por dia e classifica-se como a 18. cidade brasileira em produo de ovos, segundo o
Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica (IBGE, 2009). Utilizou-se o banco de dados da
Cooperativa Agrcola Mombuca para selecionar as granjas neste municpio.
Para o monitoramento sorolgico de doenas respiratrias, da CDA em Guatapar foram
colhidas cerca de 160 amostras em 10 granjas. No Bolso de Bastos foram amostradas dez
granjas, quatro lotes por granja, em mdia 16 aves por lote, identificando a idade das aves em
semanas, caracterizando indivduos em incio, pico e fim de produo de ovos.
A colheita do sangue foi realizada por puno da veia umeral, utilizando seringa
descartvel de trs mL e agulha descartvel de 21 x 0,7mm tendo sido colhido cerca de trs mL
de sangue de cada ave (Figura 2). Cada amostra foi identificada com o nmero do lote e nome
da granja a qual pertencia. Estes procedimentos foram aprovados pelo Comit de tica em
Experimentao Animal do Instituto Biolgico (CETEA-IB), registrado sob o nmero do protocolo
CETEA 77/09, aprovado em 18 de maro de 2009 (ANEXO III).
Figura 02 Conteno de ave para colheita de sangue por meio da puno da veia umeral.
16
Aps a coagulao do sangue e separao do soro do cogulo sanguneo foi realizado o

teste de SAR. Uma alquota de cada soro foi armazenada individualmente em frascos do tipo
Eppendorf e congelada em freezer -20C para a realizao da prova de ELISA.
A metodologia utilizada para as provas de SAR e ELISA foram as preconizadas pelo
MAPA (BRASIL, 1994) conforme anexo I. O antgeno de SAR utilizado foi o Myco-Galli Teste
da empresa BIOVET, composto por uma suspenso inativada de M. gallisepticum cepa S-6.
Todos os frascos eram pertencentes partida 869/08.
O ELISA teste foi realizado utilizando kit de teste para deteco de anticorpos contra M.
gallisepticum Flock Chek Idexx segundo fabricante (ANEXO II).
O clculo do ponto de corte do ELISA para considerar amostras reagentes e no
reagentes e o clculo da mdia geomtrica dos ttulos (GMT) e as demais variveis estatsticas:
coeficiente de variao (CV), desvio padro (DP), valores mximos e mnimos foram realizados
pelo software xCheck verso 3.3 da Idexx.
17
4. RESULTADOS E DISCUSSO
A Tabela 1 apresenta a sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M.

gallisepticum pelo teste de SAR, no Bolso de Bastos/SP. Constatou-se que na maioria das
granjas vacinadas ou no havia elevada proporo de aves reagentes pela SAR 88,20%
(566/642) (Tabela 1) e pelo ELISA 89,8% (577/642) (Tabela 3). Os lotes vacinados
apresentaram 89,50% (370/413) de sororeatividade SAR (Tabela 2), enquanto que 97,40%
(223/229) dos no vacinados foram reagentes ao ELISA (Tabela 4).
importante avaliar ainda no Bolso de Bastos a resposta de cada ave considerando
conjuntamente a SAR (triagem) e ELISA (confirmatria), pois a SAR detecta IgM e indica
soroconverso, enquanto que o ELISA detecta IgG e infeco crnica (NASCIMENTO, 2000;
BUTCHER, 2009). Na Tabela 5 observa-se que 84,30% (193/229) das aves no vacinadas
apresentaram sororeatividade simultaneamente SAR e ao ELISA, indicando que a grande
maioria dos animais estava em estgio agudo da infeco. Durante o perodo da colheita das
amostras no foram identificadas aves com sinais clnicos de doenas respiratrias. A
positividade e a presena de anticorpos no so, portanto indicativos de micoplasmose clnica,
podendo ser indicativo de resposta vacinal nos lotes vacinados. Nos lotes no vacinados e
positivos, uma hiptese a difuso de cepas vacinais dos lotes vacinados, devido ao fato das
cepas vacinais F e ts-11 serem vivas, possurem baixa patogenicidade e colonizarem as vias
areas superiores das aves, impedindo que as cepas patognicas de campo ocupem os
receptores presentes no epitlio traqueal e venham assim causar a doena (METTIFOGO;
BUIM, 2009). Na regio de Bastos e no municpio de Guatapar h uma grande concentrao de
aves, as granjas so muito prximas e no existem barreiras fsicas que as separem. Outro fator
que pode contribuir para a difuso das cepas vacinais nestas duas regies a criao de lotes
de aves com idades mltiplas, sendo a fase de cria, recria e produo realizadas na mesma
propriedade ou ento muito prximas, corroborando com Nascimento (2000), que descreve a
multiplicidade de lotes de diferentes idades numa mesma granja como agente facilitador do
aparecimento de doenas intercorrentes e a disseminao de patgenos entre as aves do
mesmo lote e entre lotes. Outra hiptese para explicar a positividade dos lotes no vacinados
que tenham se infectado com cepas de campo com baixa virulncia.
Tabela 1 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum pelo
18
teste de SAR no Bolso de Bastos/SP, segundo o municpio, granja, lote, idade das aves
(semanas) e vacinao contra M. gallisepticum (So Paulo, 2009).
Municpio Granja
Bastos
Iacri
O. Cruz
Tup
Lote
28
32
42
48
41
35
24
12
07
10
20
15
23
26
09
24
01
02
03
04
01
02
03
04
10
11
12
18
01
02
03
04
01
19
21
23
01
11
08
02
Idade
(semanas)
75
54
57
82
57
23
61
27
57
27
61
63
46
74
38
22
52
60
94
76
49
21,5
66
36
90
72
54
34
40
84
28
32
60
94
48
76
72
23
41
29
TOTAL
* Viva F = vacina viva liofilizada cepa F
Tipo e cepa reagente

vacinal
SAR
*Viva, F
12
Viva, F
12
Viva, F
14
Viva, F
16
Viva, F
16
No vacinado
0
Viva, F
16
No vacinado
03
**V ts-11
16
V ts-11
13
V ts-11
13
V ts-11
16
V ts-11
13
V ts-11
16
V ts-11
16
V ts-11
12
V ts-11
16
V ts-11
16
V ts-11
12
V ts-11
17
No vacinado
16
No vacinado
15
No vacinado
16
No vacinado
16
No vacinado
16
No vacinado
18
No vacinado
16
No vacinado
16
Viva, F
16
Viva, F
08
Viva, F
16
Viva, F
12
No vacinado
16
16
No vacinado
No vacinado
16
No vacinado
16
V ts-11
16
V ts-11
14
V ts-11
16
V ts-11
10
566
%
75
75
87
100
100
0
100
18,75
100
81,25
81,25
100
81,25
100
100
75
100
100
100
100
100
79
100
100
100
100
100
100
100
50
100
75
100
100
100
100
100
87,50
100
62,50
88,20
No reagente
SAR
04
04
02
0
0
16
0
13
0
03
03
0
03
0
0
04
0
0
0
0
0
4
0
0
0
0
0
0
0
08
0
04
0
0
0
0
0
02
0
06
76
%
25
25
12,50
0
0
100
0
81,25
0
18,75
18,75
0
18,75
0
0
25
0
0
0
0
0
21
0
0
0
0
0
0
0
50
0
25
0
0
0
0
0
12,50
0
37,50
11,80
TOTAL
amostras
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
12
17
16
19
16
16
16
18
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
16
642
** V ts-11 = vacina viva liofilizada cepa ts-11
19
teste de SAR no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So Paulo, 2009).
SAR
Vacinado
No vacinado
% (subtotal)
% (subtotal)
Reagente
89,50 (370/413)
85,50 (196/229)
566
No reagente
10,50 (43/413)
14,50 (33/229)
76
TOTAL
413
229
642
Aves vacinadas
TOTAL
Aves no vacinadas
100%
90%
80%
70%
60%
89,5%
85,5%
10,5%
14,5%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
No reagentes
Reagentes
Grfico 01 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum pelo

teste de SAR no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So Paulo, 2009).
20
Tabela 3 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum pelo teste

de ELISA no Bolso de Bastos/SP, segundo o municpio, granja, lote, idade das aves (semanas),
vacinao e valores estatsticos obtidos pelo software xCheck verso 3.3 Idexx (So Paulo, 2009).
Municpio
Granja
Lote
Idade
sem.
Bastos
28
75
Iacri
O. Cruz
Tup
Tipo e
cepa
vacinal
*Viva, F
GMT
DP
CV
%
valor
Min
valor
Mx.
16
986
1684
87
5868
POS
NEG
Total
10
62,50
37,50
32
54
Viva, F
56,25
43,75
16
1305
2455
118,1
375
10778
42
57
Viva, F
16
100
16
4634
4085
65,1
594
16062
48
82
Viva, F
16
100
16
8636
6374
60,8
1870
27355
41
57
Viva, F
16
100
16
9561
2490
25,2
5427
15065
35
23
No vac.
16
100
16
195
63
30,7
120
321
24
61
Viva, F
16
100
16
9665
3659
34,3
1769
15834
12
27
No vac.
15
93,75
6,25
16
189
487
25,2
2206
07
57
**V ts-11
16
100
16
6217
3312
47,6
2233
14018
10
27
V ts-11
13
81,25
18,75
16
2513
2033
60,4
324
7697
20
61
V ts-11
15
93,75
6,25
16
3213
2643
67,1
714
11600
15
63
V ts-11
16
100
16
8724
2348
25,8
3912
12517
23
46
V ts-11
16
100
16
7685
2804
33,9
2149
13508
26
74
V ts-11
16
100
16
5186
3372
53,8
1382
11663
09
38
V ts-11
31,25
11
68,75
16
741
560
63
311
2537
24
22
V ts-11
13
81,25
18,75
16
3146
2434
57,5
431
8515
01
52
V ts-11
16
100
16
15682
6985
39,3
2617
31353
02
60
V ts-11
16
1000
16
19359
3416
17,4
13419
24585
03
94
V ts-11
58,33
41,67
12
2258
3073
81,2
512
9244
04
76
V ts-11
16
94,12
5,88
17
9305
5535
34,7
24045
20071
01
49
No vac.
16
100
16
10033
5326
45,4
1519
02
21,5
No vac.
15
78,95
21,05
19
3482
4965
69,6
93
16391
03
66
No vac.
16
100
16
9941
4963
41,9
648
20807
04
36
No vac.
15
93,75
6,25
16
5864
3000
44
736
13812
10
90
No vac.
16
100
16
13637
3147
22,4
7535
18443
11
72
No vac.
18
100
18
10220
3227
30,2
5394
18627
12
54
No vac.
16
100
16
13024
3918
28,9
7482
21756
18
34
No vac.
16
100
16
7477
4715
50,3
425
18345
01
40
Viva, F
16
100
16
5098
3011
52,3
2516
14485
02
84
Viva, F
11
68,75
31,25
16
1639
872
47,3
707
3512
03
28
Viva, F
11
68,75
31,25
16
1417
1362
69,3
101
4914
04
32
Viva, F
11
68,75
31,25
16
1666
3097
92,3
215
11255
01
60
No vac.
16
100
16
11821
7296
52,1
3832
24937
19
94
No vac.
16
100
16
5843
4880
70
1750
23587
21
48
No vac.
16
100
16
4519
2916
55,8
1953
12891
23
76
No vac.
16
100
16
7361
3322
42
4221
17839
01
72
V ts-11
16
100
16
8792
4555
45
1192
22493
11
23
V ts-11
12
75
25
16
2098
2909
80,3
93
9112
08
41
V ts-11
16
100
16
9387
4903
46,2
3766
20729
02
29
V ts-11
13
81,25
18,75
16
2361
1942
60,5
132
6895
577
89,8
65
10,2
642
TOTAL
*Viva F= vacina viva liofilizada cepa F

** V ts-11= vacina viva liofilizada cepa ts-11
21

teste de ELISA no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So Paulo, 2009).
ELISA
Vacinado
No vacinado
% (subtotal)
% (subtotal)
Reagente
85,70 (354/413)
97,40 (223/229)
577
No reagente
14,30 (59/413)
2,60 (6/229)
65
TOTAL
413
229
642
Aves vacinadas
TOTAL
Aves no vacinadas
100%
90%
80%
70%
60%
85,70%
97,40%
50%
40%
30%
20%
10%
14,30%
2,60%
0%
No reagente
Reagente
Grfico 2 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum pelo

teste de ELISA no Bolso de Bastos/SP, segundo a vacinao (So Paulo, 2009).
22
Tabela 5 Sororeatividade das aves no vacinadas, simultaneamente SAR e ELISA para o

diagnstico de M. gallisepticum no Bolso de Bastos (So Paulo, 2009).
SAR no vacinadas
ELISA
TOTAL
Reagente
No reagente
% (subtotal/total)
% (subtotal/total)
Reagente
84,30 (193/229)
193
No reagente
1,70 (4/229)
14,00 (32/229)
36
Total
197
32
229
No municpio de Guatapar constatou-se que todas as granjas eram vacinadas e que

havia elevada proporo de aves reagentes pela SAR 76,50% (108/141) (Tabelas 6 e 7) e pelo
ELISA 97,20% (137/141) (Tabelas 8 e 9).
Tabela 6 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum pelo teste

de SAR no municpio de Guatapar/SP segundo a granja, lote, idade das aves (semanas) e
vacinao (So Paulo, 2009).
Granja
lote
Idade
(semanas)
Tipo e cepa
vacinal
reagente
SAR
No
reagente
SAR
TOTAL
SAR
07
58
*V ts-11
15
93,75
01
6,25
16
12
50
V ts-11
13
81,25
03
18,75
16
14
68
V ts-11
07
50
07
50
14
25
35
V ts-11
11
84,62
02
15,38
13
45
27
V ts-11
10
76,92
03
23,08
13
04
60
V ts-11
07
50
07
50
14
162
45
V ts-11
13
100
13
15
47
V ts-11
09
64,29
05
35,71
14
11
40
V ts-11
12
80
03
20
15
5A
101
V ts-11
11
84,62
02
15,38
13
108
76,50
33
23,50
141
TOTAL
*V ts-11 = vacina viva liofilizada cepa ts-11
23

teste de SAR no municpio de Guatapar/SP, segundo a vacinao (So Paulo, 2009).
Vacinado
No vacinado
SAR
% (subtotal)
% (subtotal)
Reagente
76,50 (108/141)
108
No reagente
23,50 (33/141)
33
TOTAL
141
141
TOTAL
Aves vacinadas
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
76,5%
23,5%
No reagentes
Reagentes
Grfico 3 - Sororeatividade pelo teste de SAR em galinhas de postura comercial vacinadas

contra o M. gallisepticum no municpio de Guatapar/SP (So Paulo, 2009).
24

teste de ELISA no municpio de Guatapar segundo a granja, lote, idade das aves (semanas),
vacinao e valores estatsticos obtidos pelo software xCheck verso 3.3 Idexx (So Paulo,
2009).
Granja
lote
Idade
(semanas)
Tipo e
cepa
vacinal
POS
NEG
TOTAL
GMT
DP
CV %
Min.
Mx.
07
58
*V ts-11
16
100
16
6880
3166
41,6
3260
13595
12
50
V ts-11
16
100
16
10660
4240
37,3
5405
23294
14
68
V ts-11
14
100
14
6161
2443
36,4
2079
10395
25
35
V ts-11
13
100
13
8413
3454
38,2
4688
16912
45
27
V ts-11
13
100
13
7546
3609
43,3
3430
15901
04
60
V ts-11
14
100
14
6630
4791
59,4
2119
17750
162
45
V ts-11
13
100
13
15438
3496
22,1
11600
22270
15
47
V ts-11
14
100
14
6184
2162
33,2
3316
11438
11
40
V ts-11
12
80
20
15
3206
3391
68,7
188
10426
5A
101
V ts-11
12
92,30
7,70
13
6395
3451
42,8
288
12856
137
97,20
2,80
141
Total
*V ts-11 = vacina viva liofilizada cepa ts-11
25

teste de ELISA no municpio de Guatapar/SP, segundo a vacinao (So Paulo, 2009).
ELISA
Vacinado
No vacinado
TOTAL
% (subtotal)
% (subtotal)
Reagente
97,20 (137/141)
137
No reagente
2,80 (4/141)
TOTAL
141
141
Aves vacinadas
100%
90%
80%
70%
60%
97,20%
50%
40%
30%
20%
10%
2,80%
0%
No reagentes
Reagentes
Grfico 4 - Sororeatividade pelo teste de ELISA em galinhas de postura comercial vacinadas

contra o M. gallisepticum no municpio de Guatapar/SP (So Paulo, 2009).
26
Considerando o elevado nmero de granjas que vacinam aves tanto no Bolso de Bastos
quanto no municpio de Guatapar, avaliou-se a resposta das aves vacinadas considerando
conjuntamente a SAR e ELISA (Tabela 10). Os dados indicam resposta humoral esperada em
uma populao que submetida vacinao em massa com vacina viva atenuada, pelo grande
percentual de aves imunizadas reagentes simultaneamente SAR e ELISA 84,00% (465/554)
demonstrando que as aves possuem IgM e IgG, ou reagentes somente ao ELISA 8,80%
(49/554), com anticorpos da classe IgG. Como no foram observados sinais clnicos respiratrios
nas aves vacinadas, pode-se supor que houve difuso da cepa vacinal atenuada, que protegeu a
populao contra a cepa de campo virulenta, ou infeco por cepa de campo de baixa virulncia,
conforme exposto por Mettifogo e Buim (2008). Tambm se observou baixo percentual de aves
vacinadas no reagentes simultaneamente ao ELISA e SAR 3,60% (20/554), o que indica que
houve pouca falha vacinal (Tabela 10).
Tabela 10 Sororeatividade das aves vacinadas, simultaneamente SAR e ELISA para o

diagnstico de M. gallisepticum no Bolso de Bastos e Municpio de Guatapar (So Paulo,
2009).
SAR vacinadas
ELISA
No reagente
% (subtotal/total geral)
Total
84,00 (465/554)
8,80 (49/554)
514
No reagente
3,60 (20/554)
3,60 (20/554)
40
Total
485
69
554
Reagente
Reagente
% (subtotal/total geral)
Foi possvel observar nas granjas visitadas no Bolso de Bastos e municpio de

Guatapar o grande adensamento populacional e a proximidade entre elas. O levantamento de
banco de dados realizado no Sindicato Rural de Bastos e na Cooperativa de Guatapar, bem
como durante a visitao das granjas para colheita de amostras mostrou que o controle da
micoplasmose se d principalmente pela vacinao e no por medidas de biosseguridade, o
que justifica a elevada sororeatividade total observada, que foi pela SAR 86,1% (674/783) e
pelo ELISA 91,2% (714/783). Ito et al. (2002) reforam que a biosseguridade a principal e
nica medida preventiva para evitar a introduo do M. gallisepticum em plantis de aves.
No Bolso de Bastos, a maior parte das granjas amostradas utilizava vacinas vivas e a
sororeatividade de cada lote vacinado variou de 50-100% na SAR (Tab. 6) e 31,25-100% no
ELISA (Tabela 08). No municpio de Guatapar todas as granjas amostradas utilizavam vacinas
27
vivas e a sororeatividade de cada lote vacinado variou de 50-100% na SAR e 80-100% no

ELISA. As aves vacinadas no sororeagentes podem estar apresentando falha vacinal ou baixa
imunidade devido ao manejo complicado de sua aplicao (individual), baixa antigenicidade de
algumas cepas que resulta resposta imunolgica que no protege contra a colonizao do trato
respiratrio e o alto custo da vacina, que pode levar a uma no constante vacinao nos prazos
devidos (METTIFOGO; BUIM, 2009). Inicialmente, a vacina inativada de M. gallisepticum induz
uma acentuada resposta de anticorpos, porm o alto nvel desses anticorpos no se correlaciona
com proteo efetiva e os anticorpos aglutinantes persistem aproximadamente por 12 semanas
e interferem nos testes sorolgicos de rotina (GLISSON; DAWE; KLEVEN, 1988; METTIFOGO;
BUIM, 2009). importante realizar a prova de ELISA para verificar o ttulo residual de anticorpos
vacinais, bem como haverem falso-positivos na SAR e infeco crnica.
A SAR uma prova com baixa especificidade, motivo pelo qual resultados falsopositivos podem ocorrer, o que tem contribudo para a falta de segurana no diagnstico das
micoplasmoses, principalmente quando ela empregada isoladamente (CARDOSO et al.,
2006; MENDONA et al., 2003; BRASIL, 1994; MENDONA et al., 2004; BUCHALA et al.,
2006). As reaes falso-positivas tambm podem ser atribudas presena de globulinas ou
outro componente do soro no meio de crescimento usado na cultura de micoplasma para
produo de antgeno para o teste SAR (AHMAD et al., 1988). Apesar de existirem diferenas
significativas na sensibilidade e na especificidade de antgenos de SAR (ROSALES, 1999) e
variabilidade entre as partidas do mesmo fabricante e entre os laboratrios executores de
diagnstico (METTIFOGO; BUIM, 2009) utilizou-se antgenos do mesmo fabricante e mesma
partida para a SAR em todos os soros testados, o que diminuiu a possibilidade de resultados
divergentes. Tambm foi excluda a possibilidade de haver reaes falso-positivas por soros
contaminados (METTIFOGO; BUIM, 2009), porque foram utilizadas seringas e agulhas estreis
para cada ave e a sorologia foi realizada to logo quando dessorado o sangue.
Independente do sistema de produo de aves de postura comercial, a fase de
produo de ovos possui a mesma durao, com incio na 17. e final na 72. semana (ALVES,
2006; GARCIA, 2008). Para que pudesse ser avaliada uma provvel interferncia da fase da
produo na sororeatividade dos lotes vacinados do Bolso de Bastos e municpio de
Guatapar, subdividiu-se o perodo de postura em incio (17-35 semanas), meio (36 a 53
semanas) e final, a partir da 54. semana. Houve efeito estatisticamente significativo da idade
das aves vacinadas na sororeatividade ao M. gallisepticum, onde menos aves com idade > 54
semanas possuem IgM (Tabela 11) e mais aves possuem IgG (Tabela 12), demonstrando
cronicidade de infeco ou vacinao (METTIFOGO; BUIM, 2009).
28
Tabela 11 Clculo do qui-quadrado para a sororeatividade de aves vacinadas contra M.

gallisepticum SAR segundo a fase de produo e faixa etria, no Bolso de Bastos e
Guatapar, SP (So Paulo, 2009).
Fase de produo e faixa

etria
SAR vacinadas
Reagente
% (subtotal)
No reagente
% (subtotal)
total
Incio (17 a 35 semanas)
80,30 (98/122)
19,70 (24/122)
122
Meio (36 a 53 semanas)
91 (111/122)
9 (11/122)
122
Final > 54 (semanas)
69,70 (269/310)
30,30 (41/310)
310
Total
86,3 (478/554)
13,7 (76/554)
554
p = 0,0499 (alfa 5%) diferena estatisticamente significativa
Tabela 12 Clculo do qui-quadrado para a sororeatividade de aves vacinadas contra M.

gallisepticum ao ELISA segundo a fase de produo e faixa etria, no Bolso de Bastos e
Guatapar, SP (So Paulo, 2009).

etria
ELISA vacinadas
Reagente
% (subtotal)
No reagente
% (subtotal)
total
81,15 (99/122)
18,85 (23/122)
122
89,85 (124/138)
10,15 (14/138)
138
Final > 54 semanas
90,80 (267/294)
9,20 (27/294)
294
Total
88,40 (490/554)
11,60 (64/554)
554
p = 0,0162 (alfa 5%) diferena estatisticamente significativa
29
Houve efeito estatisticamente significativo da idade das aves no vacinadas na

sororeatividade ao M. gallisepticum, onde mais aves com idade > 54 semanas possuem IgM
(Tabela 13), demonstrando infeco recente, e tambm cronicidade de infeco pela IgG
(Tabela 14), porm como no haviam aves com sinais clnicos respiratrios, pode-se supor que
houve difuso de cepa vacinal ou de campo de baixa virulncia estimulando o sistema
imunolgico (METTIFOGO; BUIM, 2009).
Tabela 13 Clculo do qui-quadrado para a sororeatividade de aves no vacinadas contra M.

gallisepticum SAR segundo a fase de produo e faixa etria, no Bolso de Bastos, SP (So
Paulo, 2009).
SAR no vacinadas

etria
total
Reagente
% (subtotal)
No reagente
% (subtotal)
50,75 (34/67)
49,25 (33/67)
67
100,00 (48/48)
48
Final > 54 semanas
100,00 (114/114)
114
Total
85,50 (196/229)
14,50 (33/229)
229
p < 0,0001 (alfa 5%) diferena estatisticamente significativa
Tabela 14 Clculo do qui-quadrado para a sororeatividade de aves no vacinadas contra M.

gallisepticum ao ELISA segundo a fase de produo e faixa etria, no Bolso de Bastos, SP
(So Paulo, 2009).
ELISA no vacinadas

etria
total
Reagente
% (subtotal)
No reagente
% (subtotal)
92,50 (62/67)
7,50 (5/67)
67
97,90 (47/48)
2,10 (1/48)
48
Final >54 semanas
100 (114/114)
114
Total
97,40 (223/229)
2,60 (6/229)
229
p < 0,0001 (alfa 5%) diferena estatisticamente significativa
30
Quanto mdia geomtrica dos ttulos (GMT) obtidos no ELISA para aves vacinadas,
houve uma grande variao de valores dentro de um mesmo lote e granja no Bolso de Bastos
(Tabela 3) e Guatapar (Tabela 8), com elevados valores dos desvios padro (DP), coeficientes
de variao (CV) e valores mnimos e mximos. A aplicao do teste de Tukey a um nvel de
significncia de 5% entre os valores da GMT do ELISA dos lotes de aves vacinadas no Bolso
de Bastos e municpio de Guatapar no comprovou diferena estatstica das aves com relao
sua fase de produo e faixa etria (p> 0,05) (Tabela 15). Considerando que aves de postura
so vacinadas quando jovens, as reaes sorolgicas aps o uso de vacina viva no
apresentam elevados ttulos frente ao ELISA, e a presena de ttulos elevados indica que est
ocorrendo desafio de campo, porm como no foram observados sinais clnicos de DCR, podese levantar a hiptese de que esta resposta imunolgica humoral deve-se a infeco por cepa
vacinal atenuada ou de campo de baixa virulncia (BUTCHER, 2009; MUOZ et al., 2009).
Tabela 15 Comparao dos valores da GMT de aves vacinadas obtidos na prova de ELISA
para M. gallisepticum segundo a fase de produo e faixa etria, no Bolso de Bastos e
municpio de Guatapar, SP, segundo o teste de Tukey (So Paulo, 2009).
Fase de
produo e
faixa etria
No.
de
lotes
Mdia
das
Desvio
padro
Valor
mnimo
Valor
mximo
Intervalo de
confiana 95%
(alfa 5%)
2736,1
1417
8413
1357,2 a 5932,8
> 0,05
Valor p
GMT
3645,0
Incio (17 a
35 semanas)
Meio (36 a
53 semanas)
7927,6
5394,6
741
15682
3416,9 a 12438
> 0,05
Final >54
semanas
20
6810,3
4218,7
986
19359
4835,9 a 8784,7
> 0,05
Devido ao pequeno nmero de lotes de aves no vacinadas, no foi possvel aplicar

teste estatstico pata avaliar se houve diferena estatstica entre a GMT dos lotes de diferentes
granjas no Bolso de Bastos pelo teste de Tukey.
A elevada freqncia de ocorrncia de sororeatividade das aves de postura comercial
31
para M. gallisepticum pela SAR vacinadas ou no, encontradas tanto no Bolso de Bastos 88,2% (566/642) quanto no municpio de Guatapar - 76,50% (108/141) se assemelha ao
encontrado por Simas et al. (2008), no municpio de So Jos do Vale do Rio Preto, no Estado
do Rio de Janeiro, que encontraram 94,0% (47/50) de sororeagentes SAR. Mendona et al.
(2003) tambm observaram um grau significativo, 41,7% de sororeatividade SAR bem como
Rauber et al. (2004), no Rio Grande do Sul, nas granjas A 26,00% (7/27), B 56,60% (34/60) e C
18,10% (27/149) SAR. Por outro lado, alguns autores encontraram baixa freqncia de
ocorrncia pela SAR em outras localidades, como Danelli et al. (1999), no Estado do Rio de
Janeiro - 17,00% (11/64) das aves sororeagentes no vacinadas, e Santos, Marn-Gomez e
Paula (2007) encontraram 2,00% (6/300).
Pode-se comparar o nvel de disseminao das granjas de postura comercial no
vacinadas com as aves de fundo de quintal. Buchala et al. (2006) no Estado de So Paulo
relataram ocorrncia de 30,30 % (123/406) de aves sororeagentes ao SAR e 73,00% (11/15) dos
criatrios apresentam pelo menos uma ave de fundo de quintal sororeagente ao SAR. Nunes
(2008) verificou em dez propriedades no Municpio de So Jos do Egito, Estado de
Pernambuco 100,00% (124) eram reagentes. Simas et al. (2008), nos municpios do Estado do
Rio de Janeiro: Carapebus, Quissam e Mag encontraram 34,0% (13/38).
Em regies onde a avicultura comercial intensa, como no Bolso de Bastos e
Guatapar e a vacinao com cepa viva de baixa patogenicidade contra micoplasmose
realizada, pode ocorrer grande difuso por aerossis do agente vacinal entre lotes e at entre
granjas e acabar infectando as aves no vacinadas com cepa atenuada.
Observa-se na tabela 1 que foram empregadas as cepas vacinais vivas ts-11 e F no
Bolso de Bastos, enquanto que em Guatapar foi utilizada somente a cepa ts-11 (Tabela 6).
Uma maneira de diferenciar a infeco causada por cepas de campo destas duas cepas
vacinais realizar a multiplex PCR, que auxilia o diagnstico diferencial dos isolados e os
estudos epidemiolgicos (METTIFOGO; BUIM, 2009).
32
5. CONCLUSES
Os elevados nveis de sororeatividade na SAR e ELISA associados ausncia de sinais
clnicos nas aves das granjas do Bolso de Bastos e municpio de Guatapar supem que pode
estar ocorrendo infeco por cepas vacinais atenuadas ou de campo de baixa virulncia.
Somente por meio de estudo epidemiolgico utilizando isolamento do M. gallisepticum e
realizando sua caracterizao e diferenciao molecular podero ser conhecidos os tipos de
cepas que esto estimulando a resposta humoral das aves.
33
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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37
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(Medicina Veterinria - Patologia Animal). Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias
UNESP,
Jaboticabal,
So
Paulo].
Disponvel
em
<
http://www.fcav.unesp.br/download/pgtrabs/pan/m/2952.pdf> Acesso em: set. 2009.
TIMENETSKY, J. Micoplasmoses - conceitos gerais. In: REVOLLEDO, L.; FERREIRA, A. J. P.

(Orgs.). Patologia Aviria. So Paulo: Editora Manole Ltda., 2009. p. 82-85.
WELLEHAN, J. F. X.; ZENS, M. S.; CALSAMIGLIA, M.; FUSCO, P. J.; AMONSIN, A.; KAPUR, V.
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Minnesota. Journal of Wildlife Diseases, v. 37, n. 2, p. 245-251, 2001.
38
ANEXO I
TESTE DE SOROAGLUTINAO RPIDA EM PLACA (SAR) (OIE, 2004)

MATERIAL:
- Placa de vidro para reao de soroaglutinao
- Basto de vidro
- Pipeta monocanal de 5-50 L
- Ponteira universal
- Cronmetro
PROCEDIMENTO:
- Retirar o antgeno, o soro a ser testado e os soros de controle positivo e negativo do
refrigerador e mant-los temperatura ambiente por 30 minutos; no acelerar o processo de
aquecimento.
- Inativar o soro a ser testado em banho-maria a 56C por 30 minutos.
- Pipetar uma gota de 30L do soro a ser testado, bem como os soros de controle positivo e
negativo e colocar sobre a placa de vidro.
- Agitar o frasco de antgeno, pipetar e colocar 30L ao lado de cada amostra de soro.
- Homogeneizar as gotas de soro e do antgeno com o basto formando um crculo de
aproximadamente 1,5 cm de dimetro.
- Girar a placa suavemente e aguardar. No fim do primeiro minuto girar novamente a placa,
observar e anotar o resultado em dois minutos.
INTERPRETAO DO TESTE:
As reaes positivas so visveis dentro de um intervalo de dois minutos e se
caracterizam pela presena de grumos. O tamanho desses grumos varivel na dependncia
da concentrao de anticorpos no soro. Uma reao s pode ser considerada negativa depois
de um perodo de observao de dois minutos.
OBS: O teste deve ser realizado entre 20C e 25C. Em temperaturas superiores podem
ocorrer falsas reaes positivas de auto-aglutinao. A diluio das amostras de soro pode
indicar se a reao deve ser considerada falsa positiva ou no. Reaes realmente positivas
aparecem em diluies 1:10. Esta prova deve ser realizada com soro fresco, no sendo indicado
congel-los, pois favorecer reaes inespecficas.
39
ANEXO II
Kit de ELISA Teste para Deteco de Anticorpo Contra Mycoplasma gallisepticum
Nome e Indicaes
FlockChek M. gallisepticum um imunoenzimtico da IDEXX para deteco de anticorpos
contra o M. gallisepticum em soro de galinha e peru.
Preparo das Amostras

Diluir amostras em proporo 1:500 com Diluente de Amostra antes de ser ensaiada (por
exemplo, diluindo-se 1L de amostra com 500 L de Diluente de Amostra). NOTA: NO DILUIR
CONTROLES. Certifique-se de trocar ponteiras para cada amostra. Amostras devem ser
totalmente misturadas antes de ser distribudas nas placas revestidas.
Procedimento de Teste
Reagentes devem ser deixados a alcanar a temperatura ambiente, ento misturados atravs de
inverso e movimentos circulares suaves.
1. Obter placa revestida de antgeno e registra a posio da amostra em uma folha de
trabalho FlockChek.
2. Distribuir 100 L de Controle Negativo NO DILUIDO nas cavidades A1 e A2.
3. Distribuir 100 L de Controle Positivo NO DILUIDO nas cavidades A3 e A4.
4. Distribuir 100 L de amostra diluda nas cavidades apropriadas. Todas as amostras
devem ser testadas em duplicatas.
5. Incubar por 30 minutos temperatura ambiente.
6. Lavar cada cavidade com aproximadamente 350 L de gua destilada ou deionizada 3-5
vezes.
7. Distribuir 100 L de Conjugado HRPO: (cabra) Anti-Galinha/(cabra) Anti-Peru em
cavidade.
8. Incubar por 30 minutos em temperatura ambiente.
9. Repetir passo 6.
10. Distribuir 100 L de substrato TMB em cada cavidade.
11. Incubar por 15 minutos temperatura ambiente.
12. Distribuir 100 L de Soluo de Interrupo em cada cavidade para parar a reao.
13. Zerar leitor com ar.
14. Medir e registrar valores de absorbncia a 650 nm, A(650).
40
Resultados
Para o ensaio ser vlido, a diferena entre a mdia do Controle Positivo e a mdia do
Controle Negativo (PCx NCx) deve ser maior que 0,075.
A absorbncia media do Controle Negativo deve ser menor ou igual a 0,150. A presena ou
ausncia de anticorpo contra M. gallisepticum determinada relacionando-se o valor A(650)
do no conhecido com a media do Controle Positivo. O Controle Positivo padronizado e
representa nveis significantes de anticorpo contra M. gallisepticum em soro de galinha e
peru. O nvel relativo de anticorpo no no conhecido determinado calculando-se o
coeficiente de amostra por positivo (S/P). Titulaes limites So calculadas usando a
equao descrita na seo de clculos.
Interpretao de Resultados
Amostras de soro com coeficiente S/P menores ou iguais a 0,5 devem ser consideradas
negativas. Coeficientes maiores que 0,5 (titulaes maiores que 1076) devem ser
considerados positivos e indicam vacinao ou outra exposio M. gallisepticum. Cada
laboratrio deve estabelecer seus prprios critrios para imunidade com respeito titulao
de anticorpo baseado em correlao de FlockChek: M. gallisepticum com metodologias
atuais de teste de laboratrio, e em histricos de respostas de anticorpo.
Clculos
1. Mdia do Controle Negativo (NCx)
Cavidade A1 A(650) + Cavidade A2 A(650) = NCx
2
2. Calculo da mdia do Controle Positivo (PCx)
Cavidade A3 A(650) + Cavidade A4 A(650) = PCx
2
3. Calculo do coeficiente S/P

Media da Amostra NCx = S/P
PCx-NCx
4. Titulao Relaciona S/P em uma diluio 1:500 com uma titulao limite:
Log10 Titulao = 1,09 x (Log10 S/P) + 3,36
41
ANEXO III

Corre Zola

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INSTITUTO BIOLGICO

Frequncia de reaes sorolgicas para Mycoplasma gallisepticum em aves de

Luis de Macedo Correzola

Dissertao apresentada ao Instituto

DADOS DE CATALOGAO NA PUBLICAO (CIP)

Correzola, Lus de Macedo

SECRETARIA DE AGRICULTURA E ABASTECIMENTO

Nome do candidato: Luis de Macedo Correzola

Prof. Dr. FERNANDO GOMES BUCHALA

Profa. Dra. SIMONE ALVES MENDES RIBEIRO

Dedico aos meus pais,

na tentativa de agradecer por tudo o que me fizeram, e ainda o fazem,

Ao Dr. Fernando Gomes Buchala, pelo incentivo e por reconhecer a importncia da

principalmente, apoio e amizade!

Ao Dr. Ricardo S. Jordo, do Instituto Biolgico de So Paulo, pela confiana e

Ao pessoal do Centro Avanado de Pesquisa Tecnolgica do Negcio Avcola, da

Ao Sindicato Rural de Bastos e ao seus diretores, Shigeyuki Toyoshima e Yasuhiko

A empresa Biovet, pela doao dos antgenos para a realizao da prova de

Ao pessoal da APA /Coordenadoria de Defesa Agropecuria, em especial Dra.

Ao pessoal do Escritrio de Defesa Agropecuria de Tup, e ao seu diretor, Dr.

A todos do Centro de Anlise e Diagnstico da Coordenadoria de Defesa

A Marianne Oliveira, por me acompanhar nesta jornada desde o inicio.

A Deus, por tudo!

CORREZOLA, L. M. Frequncia de reaes sorolgicas para Mycoplasma gallisepticum

A micoplasmose aviria causa doena crnica respiratria, sendo considerada um dos

Palavras-chave: micoplasmose; Mycoplasma gallisepticum; soroaglutinao rpida;

REVISO DE LITERATURA ...................................................................................

MATERIAL E MTODOS ........................................................................................ 14

RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................... 17

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................................................ 35

Tabela 1 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum

Grfico 01 Sororeatividade de galinhas de postura comercial frente ao M. gallisepticum

Figura 01 - Localizao dos Municpios de Bastos e Guatapar, no Estado de So

Anexo I: Teste de Soroaglutinao Rpida em placa (SAR) (OIE, 2004).....................40

Anexo II: Teste de ELISA...............................................................................................41

Anexo III: Certificado Comit de tica em Experimentao Animal do Instituto

Associao Paulista de Avicultura

Coordenadoria de Defesa Agropecuria do Estado de So Paulo

CETEA-IB Comit de tica em Experimentao Animal do Instituto Biolgico

Doena Respiratria Crnica

ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay

Mdia geomtrica de ttulos

103 pares de bases

Organizao Mundial de Sade Animal

Reao em Cadeia pela Polimerase

PNSA Programa Nacional de Sanidade Avcola

Reao de Soroaglutinao Rpida

Unio Brasileira de Avicultura

Micoplasma a denominao trivial para os microorganismos da diviso Tenericutes e da

escassez de dados relativos presena do M. gallisepticum nesta atividade, o presente trabalho

Avaliar a ocorrncia de reaes sorolgicas para este patgeno utilizando dois

Colnias em forma de ovo-frito ou mamilar, que variam de 0,01 a 0,50 mm de dimetro,

Crescimento para o interior do gar, iniciando na parte central da colnia;

Filtrabilidade, em presena de filtros de 300-450 nm;

Incapacidade de reverso forma tpica de bactria com parede celular;

Necessidade de lipdios, principalmente colesterol, para o crescimento.

sob a denominao de pneumoenterite epizotica. Na dcada seguinte recebeu a denominao

ovos infectados (transmisso transovariana), perpetuando a infeco nos plantis, requerendo

pneumonia intersticial, alteraes linfo-foliculares e granulomas, em menor freqncia Os sacos

indicam infeces crnicas (BUTCHER, 2009). O HI e ELISA teste so usados como

clinica, e consequentemente, a taxa de transmisso transovariana a um nvel que pode chegar a

ou at erradicar a micoplasmose nos plantis (METTIFOGO; FERREIRA, 2007). Em virtude dos

seus produtos, destinados reproduo e produo de aves e de ovos frteis, ficando os

Figura 01 - Localizao dos Municpios de Bastos e Guatapar, no Estado de So Paulo/SP