BIOQUMICA CLNICA

2 Aula Terica
25-02-15

Sumrio
mbito e objectivos da Bioqumica Clnica
Fases pr-analtica e analtica
Factores fisiolgicos que afectam a composio dos
fluidos biolgicos
Amostra biolgica obteno e conservao
Metodologias
Mtodos fsicos e fsico-qumicos
Seleco e avaliao dos mtodos
Padres primrios e secundrios
Interpretao de resultados
Conceito de valores de referncia
Controlo de qualidade

mbito
Muitas das doenas humanas resultam:
- de um metabolismo anormal
- de uma perturbao na actividade celular normal
Dessa situao podero advir modificaes caractersticas
e significativas do perfil bioqumico dos fluidos corporais
A aplicao da anlise bioqumica a diversas espcies
qumicas (ies inorgnicos/molculas orgnicas), presentes
nos fluidos biolgicos constitui o
mbito da Bioqumica Clnica

Objectivos
Definir as concentraes normais dos analitos presentes
nos vrios fluidos biolgicos, estudando
- a sua origem
- metabolismo

- estabelecer as alteraes na doena,

Tendo em vista..

Objectivos
Tendo em vista
- o diagnstico - confirmar ou rejeitar
- o prognstico seguir o doente na evoluo da doena e no

caminho para a cura

- o acompanhamento teraputico monitorizao e deteco de

efeitos colaterais ao tratamento

- a preveno da doena deteco da doena antes que ela se

manifeste (rastreio de diabetes, hipercolesterolmia)

A Bioqumica Clnica um ramo do conhecimento

multidisciplinar e altamente dinmico que assenta em
duas vertentes:
- analtica - quantitativa

- interpretativa avaliando (aceitando ou no) os

resultados obtidos

Mas a determinao da concentrao de um determinado

analito, num indivduo saudvel a qualquer altura no
tempo, depende de muitos factores que podem ser
agrupados em trs categorias:
- Caractersticas qumicas do componente (algumas
molculas podero ser instveis fora do seu envolvimento
celular)

Factores endgenos do indivduo (idade, gnero,

obesidade)

- Factores exgenos (hora, exerccio, alimentao)

A influncia dos factores exgenos condiciona a
variabilidade intraindividual

E muitos clnicos consideram a doena a NICA causa

possvel de obteno de resultados anormais. No
entanto, muitos factores para alm da doena podem
afectar a composio dos fluidos biolgicos
Ou seja, os testes bioqumicos esto dependentes de
factores
- pr-analticos
- analticos
Pr-analticos
controlveis
no controlveis

Factores pr-analticos
Factores controlveis
- postura e imobilizao
- exerccio e treino fsico
- variao circadiana
- influncia dos alimentos

- administrao de medicamentos
A estandartizao das condies de colheita:
- a preparao do doente
- obteno e conservao da amostra,
tende a minimizar as variveis que podem alterar os
resultados
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Factores pr-analticos
Factores no controlveis, como influncias biolgicas,
ambientais e alteraes cclicas de grande durao,
incluem:
- gnero

- idade (RN, criana, adulto, idoso)

- factores genticos (origem tnica, grupo de sangue)
- doena (febre, trauma cirrgico)
- medicamentos (diurticos, anticonvulsivantes)
- factores de risco (obesidade)
INQURITO

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Assim, haver

Fase pr-analtica
- preparao do doente antes e durante a colheita
- colheita

- conservao da amostra

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Por outro lado,

os resultados obtidos sero utilizados pelo mdico no

diagnstico e tratamento. Os mtodos analticos
devem ser, por isso, realizados com grande preciso
e sensibilidade
Ser necessrio o uso de mtodos analticos
apropriados, bem como de instrumentao e
equipamento adequados

O Laboratrio
- qualidade assegurada
- metodologias especficas e precisas
- capacidade de dar resultados seguros em tempo til
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Fase analtica
A funo do laboratrio consiste na execuo de
anlises qualitativas e quantitativas aos fludos do
organismo:
sangue,
urina,

LCR,
bem como a fezes, tecidos, clculos e outros materiais

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Fase analtica
Ou seja, para se analisar os metabolitos nos fluidos ou
tecidos ser necessrio conhecer os princpios e
fundamentos bsicos que afectam o processo
analtico, incluindo:
- soluto e solvente
- unidades de medida
- tcnicas bsicas de laboratrio
- higiene e segurana no laboratrio clnico

- metodologias adequadas
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Fase analtica
A garantia de um elevado nvel de qualidade no laboratrio baseia-se no
compromisso entre todos os elementos do sistema: factores pr-analticos,
analticos e ps-analticos
Assim, a fidedignidade de um valor analtico obtido depende, em relao fase
analtica, da verificao da linearidade do mtodo, sua preciso,
reprodutibilidade, o uso e qualidade dos calibradores e dos procedimentos de
calibrao usados
Mtodos (NRSCL) National Reference System Clinical Laboratory
-

Definitivos (utiliza instrumentao muito sofisticada)

Referncia (usados por qualquer laboratrio)

Rotina (de uso comum)

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Fase analtica

Mtodos (NRSCL)

National Reference System Clinical

Laboratory

Mtodos definitivos - so os mtodos com parmetros de

qualidade mais elevados
- so usados para validar os mtodos de referncia e os
materiais de referncia primrios

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Fase analtica
Mtodos (NRSCL)

National Reference System Clinical

Laboratory

O que so mtodos de referncia e materiais de

referncia primrios?
Mtodos de referncia so usados para validar os mtodos
de rotina
Os materiais de referncia primrios so:

- substncias com uma gama de pureza de 99,98% que

podem ser directamente pesados ou medidos para originar
uma soluo de concentrao rigorosamente conhecida
(IUPAC - International Union of Pure and Applied
Chemistry)
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Fase analtica
Mtodos (NRSCL)

National Reference System Clinical

Laboratory

Os materiais de referncia primrios so usados:

-

no desenvolvimento e validao dos mtodos de referncia

na calibrao dos mtodos definitivos e de referncia

na produo de materiais de referncia secundrios

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Fase analtica
Mtodos (NRSCL)

National Reference System Clinical

Laboratory

Os materiais de referncia secundrios

so compostos cuja concentrao determinada por anlise

de uma sua alquota atravs de um mtodo de referncia
(IUPAC
- International Union of Pure and Applied
Chemistry)

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Fase analtica
Mtodos (NRSCL)

National Reference System Clinical

Laboratory

Os materiais de referncia secundrios so usados:

-

na produo de calibradores a usar nos mtodos de rotina

Padres de referncia certificados (calibradores) - podem ser usados
como padres de estabilidade reconhecida (primrios)

- e para fixar valores para os materiais de controlo

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Fase analtica
Mtodos (NRSCL)

National Reference System Clinical

Laboratory

Os materiais de controlo ou soros controlo so usados para

monitorizar os mtodos de rotina - intervalo de valores

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Fase analtica

Mtodos
Definitivos

VALIDAO

Referncia

VALIDAO

Rotina

CALIBRAO

CALIBRAO
DESENVOLVIMENTO
E VALIDAO

PRODUO
CALIBRADORES

MONITORIZAO

VALIDAO

Primrios

PRODUO

Secundrios

DEFINIR
VALORES

Materiais de
controlo ou
soros
controlo

Materiais de referncia

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Fase analtica
Padres Primrios ou materiais de referncia
primrios
- composio qumica bem definida
- elevado grau de pureza preferencialmente em estado
cristalino
- MM elevada
- estveis
- termoestabilidade - para poderem ser levados, na estufa, a
peso constante
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Fase analtica

Padres Primrios
Para fins analticos:
- glucose

- ureia
- c. rico
- creatinina
Ex Bilirrubina, protenas, colesterol, triacilgliceris (no so
considerados padres primrios)
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Fase analtica

Seleco e avaliao do mtodo

Tanto a metodologia como a instrumentao associada esto
envolvidos na produo de um resultado analtico; desse
modo, na escolha da componente instrumental
necessrio ter em conta:
- amostra (tipo e quantidade)
- facilidade de execuo
- testes executados/unidade de tempo

- custo/amostra
- frequncia da calibrao
- espao que ocupa
- preo e assistncia tcnica

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Fase analtica

Metodologia
Mtodos fsicos:

densidade (urina)

espectometria directa (Bilirrubina)

potenciometria

Mtodos fsico-qumicos os mais numerosos e em que para

alm de uma reaco qumica, a deteco feita por
mtodos fsicos:
-

absorvncia

fluorescncia

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Fase analtica

Metodologia
As metodologias mais utilizadas so:
- espectrofotomtricas (90%)
- cromatogrficas
- electroforticas
- imunoqumicas

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Fase analtica
Depende:
- correcta manipulao do equipamento
- reagentes especficos
- qualidade dos reagentes (pr-anlise)
- qualidade da gua (I, II e III)
- escolha do mtodo
simples
exacto (capacidade de det. o valor real)
sensvel (limite de deteco)
preciso (reprodutibilidade)
especfico
linear

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Fase analtica

Os testes laboratoriais so usados

- deteco da doena
- orientao e monitorizao do tratamento
- monitorizao da progresso da doena

No entanto, h falhas, nomeadamente, na identificao de

alteraes presentes (falsos negativos) ou na identificao
de alteraes no presentes (falsos positivos)
Assim, h conceitos importantes como avaliadores de
qualidade de um mtodo, ou mesmo de um laboratrio
controlo de qualidade

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Fase analtica/Vertente interpretativa

Para qualquer parmetro bioqumico, os valores observados em
pessoas distintas podem ser diferentes
Para o mesmo indivduo, tambm se podem observar
diferentes valores em perodos diferentes da sua vida
Este fenmeno denomina-se de variabilidade e quantifica-se
mediante o desvio padro (SD) e o coeficiente de variao
(CV) dos valores que um parmetro bioqumico apresenta
num indivduo ou numa populao
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Fase analtica/Vertente interpretativa

variaes fisiolgicas

biolgica
variabilidade

doena

variaes patolgicas
metrolgica
iatrognica

Metrolgica causas relativas ao processo de medio de

grandezas e causas pr-analticas, relacionadas com obteno e
manipulao das amostras biolgicas

A variabilidade biolgica , com independncia da variabilidade

analtica ou metrolgica, a responsvel por que numa pessoa no
se observe o mesmo valor em funo do tempo (variabilidade
biolgica intraindividual)
e/ou que os valores mdios dessa grandeza possam ser
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diferentes entre as pessoas duma populao (variabilidade
biolgica interindividual)

Fase analtica/Vertente interpretativa

O conhecimento de todas as causas de variabilidade

fundamental para a correcta interpretao dos resultados
observados nos doentes e para a definio de intervalos de
referncia

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Fase analtica/Vertente interpretativa

A variabilidade analtica ou metrolgica a responsvel pelos
resultados
diferentes
obtidos
ao
determinar
repetidamente um parmetro bioqumico na mesma
amostra
A variabilidade analtica vai depender:
- flutuaes aleatrias (impreciso)
- alteraes sistemticas (inexactido)
que constituem as duas principais caractersticas que definem
a qualidade de um sistema de medio
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Fase analtica/Vertente interpretativa

Impreciso
define-se como o CV dum conjunto de resultados obtidos em
medies repetidas

Impreciso mxima admissvel - impreciso de um sistema

analtico que pode admitir-se sem invalidar a utilidade
mdica dos resultados obtidos com esse sistema
- deve ser inferior ou igual a metade do CV biolgico
intraindividual

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Fase analtica/Vertente interpretativa

Inexactido quantificao da variabilidade analtica devida a variaes
sistemticas

e define-se como a diferena numrica entre a mdia de um

conjunto de resultados de medies repetidas e o valor
verdadeiro da grandeza medida
Como o valor verdadeiro da grandeza medida geralmente
desconhecido, os estudos de inexactido fazem-se em
relao a outro valor tomado convencionalmente como
verdadeiro (referncia)
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Vertente interpretativa
Os conceitos de Sade e Doena so relativos
Numa condio individual a interpretao de um resultado
analtico de laboratrio, feita por comparao

Valor normal termo obsoleto por ambiguidade, visto que

pode ser expresso:
- no sentido estatstico (cuja distribuio segue a normal
distribuio gaussiana)

- no sentido epidemiolgico (ex. normal que conc. srica dos TAG

se situe entre 70 e 170 mg/dl e ser anormal se a conc. se

apresentar fora desses limites comum, frequente, usual, tpico)

- no sentido clnico (indicando valores associados a ausncia de doena

ou risco de a desenvolver, em que valor normal considerado um
sinal de sade no patolgicos, incuos)
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Vertente interpretativa
Conceito de Valor de referncia/intervalo de referncia
Implantado em 1980, este conceito estabeleceu as bases
cientficas para a interpretao dos dados de laboratrio
- resulta de anlises quantitativas do analito em referncia,
obtido a partir de um grupo de indivduos, seleccionados
de acordo com critrios definidos
definido um critrio de seleco que determina quem pode
ser includo e quem deve ser excludo de um grupo de
indivduos de referncia
Exs de critrios de excluso: factores de risco, estados
fisiolgicos
especficos,
uso
de
substncias
farmacologicamente activas
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Vertente interpretativa
Conceito de Valor de referncia/intervalo de referncia
Os limites superiores e inferiores no so absolutos (no
implicam uma noo de normal/patolgico) mas indicam
os valores a partir dos quais a probabilidade de
significado clnico comear a aumentar
Valor crtico refere-se a um resultado afastado o bastante
dos limites de intervalo de referncia que indica
morbilidade iminente

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Vertente interpretativa
O resultado de uma anlise provm de uma medio da
concentrao de um analito numa amostra biolgica
colhida ao doente.
O aspecto semiolgico ocupa-se do significado clnico dos
valores (sinais) assim obtidos, com a medio do analito.
Estes
sinais
(resultados)
revelam
directa
ou
indirectamente
as
alteraes
dos
processos
fisiopatolgicos que tm lugar durante uma doena.

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Vertente interpretativa
Valor semiolgico:
A utilidade mdica de um analito est directamente
relacionado com o seu valor semiolgico que :
a quantidade ou grau de informao que se infere da
medio do analito, em benefcio da preveno, diagnstico,
prognstico ou controlo das doenas.
Pode ser decomposto em:
- valor diagnstico ou capacidade discriminante
- valor prognstico
- valor preditivo (calcula a probabilidade de um indivduo
apresentar ou no uma doena em funo do resultado obtido num
determinado teste)
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