Seminario 9: Mutacin por

CFTR
27s
Cardenas Kawasaki
Yarixa
Yemiko

1. A qu se deben las infecciones respiratorias

repetidas?
A las infecciones respiratorias que afectan las vas areas de la nariz,
odos y garganta. Pueden ser causadas por virus, bacterias y otros
organismos microscpicos.
En el caso de la fibrosis qustica la sintomatologa se presenta
principalmente en dos sistemas, el respiratorio y el digestivo,
manifestado como infecciones respiratorias repetidas y signos de
mala absorcin.
El sistema ms afectado es el respiratorio. Ello se debe a la
obstruccin de los bronquiolos por un moco espeso que favorece el
crecimiento de microorganismos. Este hecho explica las infecciones
respiratorias repetidas por grmenes oportunistas.

La fibrosis
qustica (abreviatura FQ)
es
una enfermedad
gentica de
herencia autosmica
recesiva que afecta principalmente a
los pulmones. La principal causa de
morbilidad
y
mortalidad
es
la
afectacin pulmonar, causante del
95% de los fallecimientos, sobre todo
por infecciones repetidas originadas
por obstruccin bronquial debida a la
secrecin
de
mucosidad
muy
espesa. Los pulmones de las personas con Fibrosis Qustica son
colonizados e infectados por bacterias desde edades tempranas. Los
microorganismos que se propagan en estos pacientes, prosperan en
el moco anmalo acumulado en las vas respiratorias ms estrechas.
El moco glutinoso estimula el desarrollo de microambientes
bacterianos (biofilms) que resultan difciles de penetrar para las
clulas inmunes y los antibiticos. Por su parte, los pulmones
responden al dao continuo, infligido por las secreciones espesas y
las infecciones crnicas, remodelando gradualmente las vas
respiratorias inferiores, lo que vuelve a la infeccin an ms difcil de
erradicar.
En 1986 se demostr que las clulas de las glndulas sudorparas y
del epitelio respiratorio de los pacientes con FQ eran relativamente
impermeables al cloro y tenan una absorcin de sodio aumentada.
Estas dos anormalidades conducen a las concentraciones altas de
cloro y sodio en sudor caractersticas de esta enfermedad. Por otro
lado, se logr identificar la protena producida por el gen anormal,
denominndola Regulador Transmembrana de Fibrosis Qustica o CFTR
por sus siglas en ingls. La estructura de esta protena es similar a la
de las que participan en el futuro transporte epitelial activo. Estudios
posteriores a nivel del epitelio respiratorio sugieren que el CFTR es un
canal de cloro defectuoso que impide el pasaje de este electrolito
aumentando su concentracin intracelular es necesaria una mayor
absorcin de sodio y por consiguiente de agua. Es muy probable que
este fenmeno se repita en todo epitelio secretor del organismo.
Debido al proceso mencionado, a nivel pulmonar, una reduccin en el
contenido de agua del lquido periciliar y un aumento de la viscosidad
del moco bronquial que resulta en la obstruccin de las vas areas y
acumulo de secreciones.

2. A qu se debe la elevacin del cloro en el

sudor?
La disfuncin de la protena CFTR puede ser documentada por la
elevacin del cloro en el sudor. La principal funcin del CFTR consiste
en facilitar el transporte activo de iones de cloro hacia el exterior de
la membrana celular.
En la enfermedad gentica conocida

como fibrosis qustica la concentracin de cloro y sodio en las

secreciones corporales
est aumentada.
En el tbulo de la
glndula sudorpara se
produce un bloqueo
del reingreso de cloro
a la clula, lo que
induce
una
mayor
cantidad
de
ste
electrolito y de sodio
en
el
sudor,
manteniendo
el
volumen
de
agua
inalterado. El mayor
contenido de sodio y
cloro en el sudor hace que en momentos de gran sudoracin, se
produzca deshidratacin hipotnica con riesgo de vida si no se corrige
rpidamente. La prevencin debe ir dirigida especialmente a
momentos de fiebre y a deportistas en pocas de calor.

3. A qu se debe las heces voluminosas y ftidas

del paciente?
En 85% de los pacientes con fibrosis qustica se puede observar como
alteracin digestiva una insuficiencia pancretica exocrina (con
defecto en la produccin de enzimas) que conduce a una obstruccin
de los canales pancreticos y mala absorcin de protenas.
Compromiso pancretico
Comienza durante el periodo de gestacin con el espesamiento de las
secreciones pancreticas y el aumento de la presin retrograda hacia
el parnquima que comienza a autodigerirse, induciendo a la
aparicin de quistes y fibrosis progresiva, con lo cual se produce
insuficiente produccin y llegada al intestino de enzimas
pancreticas.
Es tambin frecuente la asociacin de FQ con protrusin de las
membranas rectales internas (prolapso rectal), debida al mayor
volumen fecal, a la malnutricin, y a la elevacin de la presin
intraabdominal por tos crnica. El moco glutinoso observado en el
pulmn tiene su correlato en las secreciones espesas del Pncreas,
rgano responsable de proveer jugos digestivos que facilitan

la descomposicin qumica de los alimentos. Estas secreciones

impiden el movimiento de las enzimas pancreticas hacia el intestino
y producen dao irreversible en el pncreas, a menudo acompaado
de dolorosa inflamacin (pancreatitis). La deficiencia de enzimas
digestivas se traduce en un impedimento para absorber los
nutrientes, con la subsiguiente excrecin de stos en las heces: este
trastorno es conocido como malabsorcin. La malabsorcin conduce a
la desnutricin y al retardo en el crecimiento y desarrollo, ambos
debidos a la baja biodisponibilidad calrica. Las personas con FQ
tienen, en particular, problemas para absorber las vitaminas A, D, E,
y K. Adems de la afeccin pancretica, suelen experimentar acidez
crnica, xerostoma, obstruccin intestinal por intususcepcin,
y constipacin.15 Los pacientes mayores desarrollan tambin el
sndrome de obstruccin intestinal distal causado por las heces
glutinosas.

4. En
qu
consiste
la
tcnica
(polimorfismo
longitudinal
de
restrictivos)?.

del
PLFR
fragmentos

Caracterstica de un segmento de ADN de un cromosoma asociado a

una enfermedad hereditaria. Los PLFR se utilizan para la deteccin de
las variaciones de secuencia en segmentos de ADN del genoma
humano.
El ADN de un individuo se extrae y se purifica. El ADN purificado
puede ser amplificado usando la tcnica molecular Reaccin en
cadena de la polimerasa o PCR (del ingls Polymerase Chain
Reaction), luego tratado con enzimas de restriccin especficas para
producir fragmentos de ADN de diferentes longitudes. Estas enzimas
de restriccin hacen un proceso de digestin restrictiva en el cual
reconocen cortas secuencias especficas en el ADN donde cortan
formando fragmentos de distintas longitudes. Los fragmentos de
restriccin se separan mediante electroforesis en geles de agarosa a
travs del cual corren debido a un campo elctrico y su disociacin
obedece a la masa o a la carga elctrica de las muestras segn la
tcnica utilizada. Esto proporciona un patrn de bandas que es nico
para un ADN en particular debido a la diferencia en las secuencias del
ADN en los individuos donde los sitios de restriccin varan. Las
bandas pueden ser transferidas por Southern Blot a una membrana
donde se hibridan con una sonda que permite determinar la longitud
y la separacin de los fragmentos. En este paso las cadenas de ADN
tienen que ser desnaturalizadas y estar en cadena sencilla para

permitir la hibridacin con las sondas. Las endonucleasas de

restriccin cortan el ADN de cadena doble en secuencias especficas y
cada enzima reconoce un sitio en particular. Un ejemplo es la EcoRI:
corta solamente cuando encuentra la secuencia 5`GAATTC3` en la
doble hlice. Suponiendo que este sitio de restriccin se encuentra en
un cromosoma especfico lo va a cortar formando dos fragmentos de
ADN. Si una persona tiene una mutacin en el sitio reconocido por la
enzima no va a poder cortar y solo habr un fragmento.

5. Cules son las caractersticas de la protena

CFTR?.

El CFTR (Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) o

regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qustica es
una molcula cuya principal funcin est relacionada con el
transporte de iones de cloro. El CFTR es una protena transmembrana
multipaso que pertenece a la familia de los ABC (ATP Binding
Cassetes) transportadores. El gen que codifica el CFTR est mutado
en la fibrosis qustica.

6. Qu papel tendra esta protena?

La protena CFTR es una glucoprotena transportadora de membrana
dependiente del AMPc, responsable de
una de las
vas de transporte de iones cloro en
las
clulas epiteliales , que tambin
puede controlar la funcin
de
otras
protenas
de
membrana como los canales
auxiliares de cloro y los canales de sodio.
Esta protena se localiza en la membrana
apical de muchos tipos de clulas
clulas epiteliales de las vas
areas,
glndulas
submucosas
del
tracto
gastrointestinal, hgado, vescula a biliar y pncreas.

epiteliales:

La alteracin de la proteina a CFTR impide que pueda realizar su

accin de transporte y la imposibilidad de transportar cloruro. Esto
explica la historia natural de la enfermedad en las glndulas
sudorparas aparato respiratorio, pncreas, aparato o genital
masculino y sistema hepatobiliar.
El CFTR codifica una protena que forma un canal de cloro
dependiente de la protein-quinasa A que se expresa en tejidos con
secrecin exocrina como glndulas sudorparas, pncreas, intestino y
rin. Las caractersticas del moco secretado en distintos tejidos se
altera. Los principales problemas que sufren los pacientes con fibrosis
qustica son las infecciones respiratorias y los problemas de absorcin
intestinal debidos a la alteracin de la funcin del pncreas exocrino
provocada por la obstruccin que causa el moco alterado.