Practicas Laboratorio Hematologia I

BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA
VICERRECTORA DE DOCENCIA
DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN SUPERIOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
LICENCIATURA EN QUMICO FARMACOBILOGO
AREA: ANLISIS CLNICOS
ASIGNATURA: LABORATORIO DE HEMATOLOGA I
CDIGO:
CRDITOS: 5
FECHA: ENERO 2015

NIVEL EDUCATIVO:
NOMBRE DEL PROGRAMA EDUCATIVO:
MODALIDAD ACADMICA:
NOMBRE DE LA ASIGNATURA:
UBICACIN:
Licenciatura
Licenciatura en Qumico Farmacobilogo
Presencial
LABORATORIO DE HEMATOLOGA I
Nivel Formativo
CORRELACIN:
ASIGNATURAS PRECEDENTES:
ASIGNATURAS CONSECUENTES:
CONOCIMIENTOS
HABILIDADES Y ACTITUDES
VALORES PREVIOS:
Fisiologa I
Hematologa II
Clulas, tejidos y rganos
Metabolismo celular
Anatoma y Fisiologa de rganos
hematopoyeticos
Mtodos analticos e
instrumentales
Tcnicas citoqumicas,
histolgicas, inmunolgicas e
inmunohistoqumicas
Anlisis,
sntesis,
uso adecuado de las TIC,
trabajo en equipo
toma de decisiones,
Responsabilidad,
compromiso,
puntualidad,
respeto a los semejantes y
medio ambiente,
solidaridad,
capacidad de convivencia

CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE
HORAS POR PERIODO
(PERIODO = 16
SEMANAS)
CONCEPTO
NMERO DE
CRDITOS
80
HORAS TEORIA Y PRCTICA.
HORAS DE PRCTICA PROFESIONAL CRTICA
(3 HT/Semana = 48
2 HP/Semana = 32)
0
80
HORAS DE TRABAJO INDEPENDIENTE

TOTAL
AUTORES:
M.C. Silvia Garca Gonzlez

M.C. Norma Elona Lara Rosano
M.C. Miguel ngel Villegas Gonzlez
FECHA DE DISEO:
NOVIEMBRE 2009
FECHA DE LA LTIMA ACTUALIZACIN:

REVISORES:
SINOPSIS DE LA REVISIN Y/O
ACTUALIZACIN
ENERO 2014
PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

DISCIPLINA PROFESIONAL:
Qumico Farmacobilogo
NIVEL ACADMICO:
Maestra en Laboratorio Clnico
EXPERIENCIA DOCENTE:
5 aos a nivel licenciatura
EXPERIENCIA PROFESIONAL:
5 aos en Laboratorio de Anlisis Clnicos rea de

hematologa

OBJETIVOS:
a. Educacional:
Con esta asignatura se contribuir a la formacin integral del profesionista capacitado para
desempearse en las reas qumico-clnico-biolgicas con compromiso social y cuidado del
medio ambiente. Organizar, dirigir y ejecutar actividades propias del laboratorio de anlisis
clnicos y podr se desempearse como asesor, consultor y gestor. Se fomentar en el alumno
actitudes de responsabilidad, trabajo en equipo, creatividad y liderazgo para la toma de
decisiones, as como valores bioticos y actitudes que le permitan actuar adecuadamente dentro
del campo laboral y social, que conlleven a un adecuado desempeo profesional en beneficio de
la sociedad.
Esta formacin le permitir incorporarse a instituciones educativas y de investigacin, as como
realizar estudios de posgrado en reas afines, colaborando al cumplimiento del perfil de egreso
de esta licenciatura, siendo capaz de desarrollarse en los mbitos nacional e internacional.
b. General:
El alumno aprender los conceptos generales sobre el origen y funcin de las clulas sanguneas,
para conocer su funcionamiento, comprensin e interpretacin de las
alteraciones
fisiopatolgicas del eritrocito, coadyuvando al diagnstico, pronstico, profilaxis y tratamiento
de las enfermedades hematolgicas.
c. Especficos:
o El alumno desarrollar la habilidad para el trato del paciente, la realizacin de la
flebotoma, el manejo del material y equipo del laboratorio de hematologa, as como
las variables que afectan el trabajo y los resultados del paciente.
o El alumno ser conocer las variables fisiolgicas que afectan al eritrocitos y podr
identificar los cambios morfolgicos de los eritrocitos en las alteraciones fisiopatolgicas
o El alumno ser capaz de interpretar los resultados de la citometra hemtica y
correlacionar con la morfologa que presentan los eritrocitos en el frotis, para coadyuvar
al diagnstico de las anemias.

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Elaborada en forma conjunta por la Secretaria de Salud y de Medio Ambiente y Recursos Naturales, la
norma oficial mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin Ambiental - Salud Ambiental Residuos Peligrosos Biolgico - Infecciosos Clasificacin y Especificaciones de Manejo, fue publicada en
el Diario Oficial de la Federacin el 17 de Febrero del 2003 y sustituye a la NOM-087-ECOL-1995.
Los RPBI se consideran como residuos peligrosos y como tal se debe establecer un plan integral para su
manejo, almacenamiento, transporte, tratamiento y disposicin final.
PRINCIPALES MODIFICACIONES EFECTUADAS EN LA NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002.
I.
Criterios para considerar un residuo como RPBI
II.
Nueva clasificacin de los RPBI
III.
Cantidad de sangre o fluido corporal en los RPBI
IV.
Niveles de los establecimientos generadores
V.
Periodo de almacenamiento temporal de los RPBI en los establecimientos generadores.
VI.
Atribucin a la Secretaria de Salud, para la vigilancia de la norma.
I.
Los lugares que ofrecen atencin mdica y los centros de investigacin, son considerados
establecimientos generadores de materiales contaminados por agentes biolgico-infecciosos.
Estos desechos se denominan Residuos Peligrosos Biolgico-Infecciosos (RPBIs), su manejo y
disposicin inadecuados, representa un riesgo para la salud del personal que labora en estos
sitios, as como para la salud de la poblacin aledaa, ocasionando adems, el deterioro del
medio ambiente. Los microorganismos patgenos, virus, parsitos y priones (estructuras
proteicas) son ejemplos de agentes biolgicos-infecciosos. Para que un microorganismo sea
capaz de producir enfermedad, es decir, que sea un Agente Biolgico-Infeccioso, debe ocurrir lo
siguiente: tener una concentracin suficiente (inculo), estar en un ambiente propicio
(supervivencia), en presencia de una va de entrada en un hospedero susceptible.
II.
En la Nueva clasificacin, los RPBIs son:

1. La sangre y sus componentes nicamente en estado lquido.
2. Los cultivos de agentes biolgico-infecciosos generados en:
a. Los procedimientos de diagnstico e investigacin.
b. La produccin y el control de agentes biolgico-infecciosos.
3. Los utensilios desechables usados para contener, transferir, inocular y mezclar cultivos
de agentes biolgico-infecciosos.

4. Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven durante las autopsias, las
cirugas o algn otro tipo de intervencin quirrgica que no estn conservados en
solucin de formol.
5. Las muestras biolgicas empleadas en los anlisis clnicos (excepto las muestras de orina
y de excremento), y aquellas usadas en los anlisis patolgicos.
6. En los centros de investigacin, los cadveres y las partes de los animales que fueron
inoculados con agentes entero patgenos.
7. Los residuos no anatmicos:
a. Los recipientes desechables que contengan sangre lquida.
b. Los materiales desechables que contengan fluidos y secreciones corporales,
provenientes de los pacientes de quienes se sospechen o exista un diagnstico
de una enfermedad infecto-contagiosa como la tuberculosis.
c. Los materiales de curacin empapados de sangre lquida o de cualquier otra
secrecin o lquido corporal.
d. Los materiales absorbentes utilizados en las jaulas de los animales que hayan
sido expuestos a agentes entero patgenos.
8. Los materiales punzo cortantes desechables como las hojas de bistur, las agujas de
sutura y los estriles de catter. El material de vidrio de laboratorio, que se haya roto al
momento de ser manipulado, se deber desinfectar o esterilizar y ya no se considerar
como RPBIs, por lo que se podr disponer posteriormente como residuo municipal.
La disposicin general para el desecho de RPBIs en el laboratorio queda de la siguiente manera:

TIPO DE RESIDUO
ESTADO FISICO
ENVASADO
COLOR
Sangre
Lquidos
Recipientes hermticos
Rojo
Cultivos y cepas de
agentes infecciosos
Slidos
Bolsas de polietileno
Rojo
Patolgicos
Slidos
Amarillo
Residuos no anatmicos
Slidos
Rojo
Objetos punzocortantes
Slidos
Recipientes rgidos
polipropileno
Rojo

III. Para que un material de curacin se considere como RPBIs, debe ser desechable y estar
goteando, chorreando o escurriendo sangre o cualquier lquido corporal contemplado en la
norma.
IV. Niveles de los Establecimientos Generadores
NIVEL I
Establecimientos de atencin mdica
hasta con 5 camas e instituciones de
investigacin con excepcin de los
sealados en el Nivel III.
Laboratorios clnicos y bancos de
sangre que realicen anlisis de 1 a 50
muestras al da.
Unidades hospitalarias psiquitricas.
Centros de toma de muestras para
anlisis clnicos.
V.
NIVEL II
NIVEL III
Unidades hospitalarias de 6 hasta 60

camas.
Unidades hospitalarias de ms de 60
camas.

sangre que realicen anlisis de 51 a
200 muestras al da.
Bioterios que se dediquen a la
investigacin con agentes biolgicoinfecciosos.
Centros de produccin e investigacin

experimental en enfermedades
infecciosas.
sangre que realicen anlisis a ms de
200 muestras al da.
Establecimientos que generen de 25 a

100 kilogramos al mes de RPBIs.
Establecimientos que generen ms de

100 kilogramos al mes de RPBIs
Perodo de almacenamiento temporal de los RPBIs en los establecimientos generadores.

NIVEL I
NIVEL II
NIVEL III
30 das mximos de almacenamiento

temporal.

temporal.

temporal.
No requiere de rea especfica para el

almacenamiento temporal.
Si requiere de rea especfica para el

Si requiere de rea especfica para el

Se podrn ubicar los contenedores

especficos para los RPBIs* en el
lugar ms apropiado dentro de sus
instalaciones, de manera tal que no
obstruyan las vas de acceso.
Deber
cumplir
con
las
especificaciones establecidas en la
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
para el rea de almacenamiento
temporal.
Deber
cumplir
con
las
especificaciones establecidas en la
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
para el rea de almacenamiento
temporal.
*Los contenedores pueden ser plsticos o metlicos, con sealamiento del smbolo universal de RPBIs y no mezclarlos con la basura municipal.
VI. Atribucin a la Secretaria de Salud. Corresponde a la Secretaria de salud regular y vigilar el

equipamiento, instalacin y funcionamiento de los servicios mdicos que son los principales
generadores de los RPBIs, por ello participa complementariamente con la SEMARNAT en la
regulacin y vigilancia de la norma, para lo cual se estableci en el cuerpo de la misma, la
disposicin de crear las Bases de Colaboracin que firmarn ambas dependencias y que sern
publicadas en el Diario Oficial de la Federacin, en las que se especificarn los puntos de la
norma que vigilarn cada una de ellas.

ENCUADRE DEL CURSO
PRCTICA 1
TOMA DE MUESTRAS SANGUNEAS Y SEGURIDAD EN EL LAB. CLNICO
11
PRCTICA 2
UTILIZACIN DE CONTROLES Y ESTNDARES EN EL CONTROL DE CALIDAD
20
PRCTICA 3
SEMINARIO DE CALCULO DE NDICES ERITROCITARIOS
25
PRCTICA 4
DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG, CUENTA DE

ERITROCITOS E NDICES ERITROCITARIOS (MANUAL Y AUTOMATIZADO)
30
PRCTICA 5
CITOMETRA HEMTICA AUTOMATIZADA Y CUENTA DE RETICULOCITOS
40
PRCTICA 6
CITOMETRA HEMTICA AUTOMATIZADA Y SU INTERPRETACIN EN

DIVERSAS PATOLOGAS
48
PRCTICA 7
OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DIVERSOS TIPOS DE ANEMIAS Y MDULA

SEA
53
PRCTICA 8
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA EL DIAGNSTICO DE LAS ANEMIAS (Fe

srico, TIBC, Electroforesis de Hb,, Deshidratacin de eritrocitos)
60
PRCTICA 9
CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIN DE EXTENDIDO SANGUNEO

(TINCIN DE WRIGHT Y GIEMSA) CON VALORES ABSOLUTOS Y RELATIVOS.
65
PRCTICA 10
MADURACIN DE LNEAS CELULARES EN MDULA SEA
77
PRCTICA 11
CONTEO PLAQUETARIO Y OBSERVACIN DE MORFOLOGA EN FROTIS

SANGUNEOS
86
PRCTICA 12
INTERPRETACIN INTEGRAL DE LA CH Y RESOLUCIN DE CUADROS CLNICOS.
90
PRCTICA 13
INTERPRETACION INTEGRAL DE LA CH Y RESOLUCION DE CUADROS CLINICOS
94
PRCTICA 14
EVALUACIN FINAL

ENCUADRE DEL CURSO.

OBJETIVOS
1. El alumno conocer el funcionamiento de un laboratorio de hematologa, as como las medidas
de precaucin para su proteccin personal en cuanto al manejo de las muestras de sangre, al ser
considerarlas potencialmente infecto-contagiosas.
2. El alumno conocer y aprender a manejar el material y equipo ms comn que se utiliza en la
realizacin de la citometra hemtica.
3. El alumno aprender a analizar y correlacionar el resultado de la citometra hemtica con las
manifestaciones clnicas que presente el paciente.
4. El alumno conocer las alteraciones morfolgicas ms frecuentes que se presentan en las
anemias.
INTRODUCCIN.
Siglos atrs la sangre fue considerada como el lquido esencial para la vida y se le atribua ser la fuente
que mantena el equilibrio en el organismo, sin embargo la composicin celular de la sangre no se
reconoci hasta la invencin del microscopio, siendo Leeuwenhoek el primero en observar los glbulos
rojos, no fue hasta aos despus cuando se logr realizar exploraciones de los elementos que
constituyen a la sangre, definindose sta como un rgano polisistemtico constituido por eritrocitos,
leucocitos, plaquetas y plasma.
La complicada composicin de la sangre provoc el inters para realizar estudios sobre las clulas que la
constituan, siendo K. Vierordt quin realiz los primeros anlisis cuantitativos de stas, pero fue hasta
los aos treinta que se intent relacionar el nmero de clulas sanguneas con algunas patologas,
mtodos cada vez mejores y conocimientos ms profundos sobre la fisiologa sangunea permiti una
relacin estrecha con el cuadro clnico presentado por diferentes pacientes.
En la actualidad se han desarrollado tcnicas cualitativas y cuantitativas de los componentes celulares,
que en conjunto constituyen la CITOMETRA HEMTICA: Determinacin de hemoglobina y hematocrito,
cuenta de eritrocitos, leucocitos, plaquetas, observacin del frotis sanguneo y clculos de los ndices
eritrocitarios.
La Citometra hemtica es sin lugar a dudas el primer paso para el diagnstico, dado que
numerosos trastornos se acompaan de alteraciones en las clulas por lo cual es importante
hacer la diferenciacin.

Las clulas pueden sufrir alteraciones no slo en su forma sino tambin en su cantidad y su funcin, que pueden ser
secundarias a algunas alteraciones fisiopatolgicas, enfermedades crnicas, terapias con medicamentos, dficit de
algn componente, neoplasias, etc., lo cual lleva a alterar las funciones que desempean como es: defensa contra
infecciones, aporte de oxgeno. etc.
Actualmente se cuenta con aparatos automatizados para la determinacin de la citometra

hemtica, da a da han sustituido a la forma manual, ya que los valores son ms precisos; sin
embargo el Qumico Farmacobilogo debe estar preparado para realizar esta prueba por ambos
mtodos.
10

PRCTICA No. 1
TOMA DE MUESTRA SANGUNEA Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO.
OBJETIVO: El alumno conocer y aprender a realizar una puncin venosa para obtener muestra
de sangre.
1. INTRODUCCIN
El Laboratorio Clnico es una herramienta primordial para el rea medica, ya que por medio de
este se diagnostican diferentes patologas y adems se realizan estudios para establecer el tipo
de tratamiento que se debe administrar al paciente, al igual que el seguimiento del mismo.
En este curso de Laboratorio Clnico, se pretende dar a conocer todas las reas manejadas en un
laboratorio, la lectura de los diferentes exmenes, el procesamiento y toma de las muestras, sin
olvidar la parte humana que definitivamente es tan importante como cualquier otra.
El paciente o usuario llega al Laboratorio para realizarse sus exmenes clnicos, del Bacterilogo
y del Auxiliar depende que este usuario reciba el servicio adecuado en todo sentido, ya sea
cientfico o humano, el profesional de la salud debe estar en condiciones de proporcionar una
ayuda integral.
Con la gua y ayuda del docente se pretende resolver a cabalidad las dudas que los alumnos
puedan presentar, se espera cumplir con las expectativas de fructificar y enriquecer el
conocimiento en el rea de la salud, para colocar en practica lo aprendido en cualquier situacin,
prestando una ayuda al paciente.
2.
SERVICIOS DEL LABORATORIO CLINICO

Cada examen de laboratorio clnico debe ser realizado a los pacientes de forma individual,
guindose siempre por los parmetros profesionales y ticos. Bsicamente, el trabajo en el
laboratorio clnico se clasifica en tres grandes grupos temticos:
1. Toma de muestras.
2. Anlisis de las muestras.
3. Entrega de resultados.
En cada uno de estos temas, se requiere de numerosas medidas de atencin y cuidado, con el fin
de minimizar al mximo los errores factibles de ser cometidos en la prctica diaria. Se debe
enfatizar que el trabajoen el laboratorio clnico, como cualquier tipo de trabajo, es realizado por
seres humanos y no se esta exento de cometer equivocaciones. Pero estas equivocaciones
11

pueden ser erradicadas de los laboratorios clnicos, si se mantienen eficientes actitudes ticas,
profesionales y de procedimiento.
RAZONES PARA UTILIZAR LOS SERVICIOS DEL LABORATORIO CLNICO
1. Descubrir enfermedades en etapas subclnicas

2. Ratificar un diagnostico sospechado clnicamente.
3. Obtener informacin sobre el pronstico de una enfermedad.
4. Establecer un diagnstico basado en una sospecha bien definida.
5. Vigilar un tratamiento o conocer una determinada respuesta teraputica.
6. Precisar factores de riesgo.
2.1 BIOSEGURIDAD
Son todos los procedimientos y acciones que garantizan una mejor calidad de vida, tanto del
profesional, del paciente y del medio ambiente.
METODOS DE BARRERA
2.2
Bata
Guantes
Tapabocas
Gorro
Gafas
Careta
Peto
CONSIDERACIONES PARA SU PROTECCIN PERSONAL
1. Todas las muestras de especimenes biolgicos deben considerarse
potencialmente infecciosas.
2. Vacunarse contra los principales agentes infecciosos.
3. Procurar no producir "salpicaduras" con la muestra obtenida. Debe limpiarse y
desinfectarse cualquier superficie contaminada por algn espcimen biolgico.
4. Lavarse las manos correctamente, despus de haber tenido contacto con cada
paciente y al concluir cualquier procedimiento.
5. No deben ingerirse comidas, bebidas, goma de mascar o fumar durante los
diferentes procedimientos en el Laboratorio.
6. Vigile que los elementos de trabajo estn en perfectas condiciones fsicas. Algn
elemento en mal estado, podra causarle una herida.
2.3 ESTERILIZACIN
Proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida de los microorganismos de un
objeto o de una sustancia para evitar su reproduccin.
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ASEPSIA: Libre de microorganismos.

2.3.1 MTODOS DE ESTERILIZACIN
Comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y preferentemente qumicos, que se
emplean para destruir grmenes patgenos. A travs de esta, los materiales quirrgicos y la piel
del enfermo alcanzan un estado de desinfeccin que evita la contaminacin operatoria. Hay varias
formas de esterilizar como:
a) MTODOS QUMICOS
Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.
Hipoclorito de Sodio: Es el mas utilizado por su fcil adquisicin y por su efectividad en la
desinfeccin.
Vida
media
20
minutos.
Oxido de etileno: Destruye todos los microorganismos incluso virus.
Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas. Estos compuestos destruyen
las esporas. Glutaraldehdo: Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante
efectivo fro. Formaldehdo: Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36
horas. Gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual
consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma.
Alcohol: Esteriliza superficies, pero se evapora fcilmente.
b) MTODOS FSICOS
Calor: La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y
la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del
calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas
y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.
Calor Hmedo: El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas.
Autoclave
Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de
Chamberland. Esteriliza a 121 C, 15Lb de presin, por 20 minutos.
Calor seco: El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txico por niveles elevados de
electrolitos, fusin de membranas.
Estufas
-Hornos
Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el
espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y a 140 C
para el contenido de los tambores.
Radiaciones: Su accin depende de:
13

El tipo de radiacin
El tiempo de exposicin
La dosis
Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente
penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos. Rayos
Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Filtracin: Se
usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro
depender del uso al que se va a someter la muestra.
3. SANGRE
Sangre, sustancia lquida que circula por las arterias y las venas del organismo. La sangre es roja
brillante o escarlata cuando ha sido oxigenada en los pulmones y pasa a las arterias; adquiere
una tonalidad ms azulada cuando ha cedido su oxgeno para nutrir los tejidos del organismo y
regresa a los pulmones a travs de las venas y de los pequeos vasos denominados capilares. En
los pulmones, la sangre cede el dixido de carbono que ha captado procedente de los tejidos,
recibe un nuevo aporte de oxgeno e inicia un nuevo ciclo. Este movimiento circulatorio de
sangre tiene lugar gracias a la actividad coordinada del corazn, los pulmones y las paredes de los
vasos sanguneos. El cuerpo humano posee cinco litros de sangre en su totalidad.
COMPOSICIN DE LA SANGRE: En una persona normal sana, el 45% del volumen de su sangre son
clulas, glbulos rojos (la mayora), glbulos blancos y plaquetas. Un fluido claro y amarillento,
llamado plasma, constituye el resto de la sangre. El plasma, del cual el 95% es agua, contiene
tambin nutrientes como glucosa, grasas, protenas, vitaminas, minerales y los aminocidos
necesarios para la sntesis de protenas.
3.1 ANTICOAGULANTES
Existen mltiples factores involucrados en el proceso de coagulacin de la sangre. Los
anticoagulantes son sustancias que previenen la formacin de cogulos. Existen diferentes tipos
de ellos en polvo o lquidos. Deben seleccionarse siempre el anticoagulante apropiado segn el
estudio que se quiera realizar.
Los anticoagulantes mas comunes son:
EDTA: (ETILEN-DIAMINO-TETRA-ACETATO) Este tipo de anticoagulante

principalmente cuando se realizan estudios en donde se cuentan clulas.
es
utilizado
14

CITRATO DE SODIO: Generalmente en concentraciones al 3.8 % y ser utiliza comnmente en

estudios de coagulacin.
HEPARINA: Se utiliza tanto en algunos estudios de rutina como especializados. Su presentacin

puede incluir heparina con concentraciones de sodio o litio. En general, la heparina con tilio es
utilizada para estudios de qumica y la heparina sdica se utiliza para estudios de linfocitos.
OXALATOS: Son anticoagulantes menos comunes, utilizados ocasionalmente en las

determinaciones de glucosa.
Los tubos deben mezclarse inmediatamente, una vez que la sangre ha entrado en ellos. Invertir
suavemente (10 15 veces) o colocarlos en rotores especiales, para as obtener mezclas
homogneas.
Existen cdigos de colores internacionalmente conocidos, para las diferentes presentaciones de
tubos colectores de nuestras sanguneas.
Tapa roja.. Sin anticoagulante (Tubo seco ).
Tapa violeta. Con EDTA.
Tapa azul Con CITRATO DE SODIO
Tapa verde o blanca.. Con HEPARINA.
3.2 RECOLECCION DE MUESTRAS DE SANGRE

Para una gran cantidad de estudios que requieren muestras sanguneas, en algunos casos se
debe conservar condiciones de ayuno, el cual puede prolongarse como mnimo seis (6) horas y
en ocasiones durante doce (12) horas. En cualquiera de los casos, deben seguirse las siguientes
indicaciones generales, a saber:
La sangre debe recolectarse en tubos de vidrio o plstico estriles ( preferiblemente tubos al
vaco). En caso de recolectar la sangre con jeringa y agujas estriles, deben llenarse los tubos
con precisin y agilidad, evitando en todo momento realizar procedimientos bruscos que
puedan producir rompimiento de las clulas sanguneas (hemlisis). En otro tipo de estudios, la
sangre no se deposita en tubos, sino en otro tipo de recipientes (frascos de hemocultivo ).
Al recolectar la sangre, debe permitirse que se coagule, si es el caso, o someter los tubos con la
muestra a ciertas maniobras recomendadas para evitar su coagulacin.
En otras ocasiones, tan solo se colocan unas pequeas gotas de sangre en lminas portaobjetos
de vidrio, (extendidos de sangre perifrica), en capilares de vidrio o en placas de vidrio o plstico
de origen comercial para la realizacin de algunos estudios.
15

3.2.1 SELECCIN DEL SITIO DE PUNCIN

Asegrese que el paciente se ubique en una posicin segura y cmoda.
Nunca practique una puncin sangunea en un paciente que se encuentre de pie ( La
posicin de pie es inestable y en caso que el paciente pierda el conocimiento o se
desmaye, ser mas difcil evitar que se lesione ).
No elija una extremidad en donde est colocada algn tipo de venoclisis.
Inspecciones la vena que se va a puncionar.
Coloque el torniquete con suficiente tensin. No se exceda (Un torniquete muy apretado
produce hemlisis, colapso venoso, dolor, etc.)
Si la vena no es muy visible ni palpable, realice un suave masaje en el antebrazo (si es el
caso), con movimientos desde la mueca hacia el codo.
Observe siempre las dos extremidades superiores (brazos), para elegir el mejor sitio de
puncin.
Al finalizar el procedimiento, indquele al paciente que debe hacer presin en el sitio
punzado por lo menos durante cinco (5) minutos. Coloque finalmente una banda
adhesiva sobre la herida de la puncin.
Si el sangrado no se detiene, aplique presin constante sobre la herida durante 10
minutos ms. Si el problema an no se soluciona, comunquese con sus superior
inmediato o directamente con el medico tratante.
Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes diseados para este
propsito.
Asegrese de que los recipientes que contengan las muestras del paciente estn
debidamente rotulados, marcados o identificados antes de atender a un nuevo paciente
o realizar cualquier tarea.
3.3 QUE HACER SI UN PACIENTE PIERDE EL CONOCIMIENTO DURANTE EL PROCEDIMIENTO?

Retire inmediatamente la aguja del lugar de la puncin.
Sostenga al apaciente con fuerza para evitar que caiga y se golpee. Solicite ayuda.
Coloque sobre la herida de la puncin, un apsito, algodn o gasa con sostenida presin,
para evitar que siga sangrando.
Puede acostarse al paciente en el suelo o en una camilla y deben levantarse sus piernas
(Posicin de Trendelemburg).
Coloque un algodn impregnado con alcohol frente a la nariz del paciente.
Permita que el paciente tenga buena ventilacin. Abra el cuello de su camisa y desajuste
la corbata si es el caso.
El paciente por si solo sabr cuando podr incorporarse.
Si las circunstancias lo permiten, haga medicin de la presin sangunea.
16

3.4 OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE EN NIOS

Seguir correctamente las indicaciones propuestas anteriormente.
Realizar el procedimiento valindose de ayuda de compaeros (as) de trabajo.
Sujetar firmemente el brazo del nio, aun cuando el pequeo paciente no oponga
resistencia al procedimiento, usualmente los nios tienden a reaccionar bruscamente al
someterlos a procedimientos de extraccin de sangre. Esta reaccin puede producir una
herida mayor en el nio, como el rompimiento de la aguja dentro de la vena.
3.5 OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE EN BEBS
Si la puncin de la vena del antebrazo del beb no es viable, se pueden recolectar muestras de
sangre en la puncin del taln de uno de los pies. Debe sujetarse firmemente el pie del
paciente, aplicar algo de presin en el taln del mismo y esperar a que haya congestin venosa
evidente. Realizar la puncin con la lanceta estril desechable y recolectar las gotas de sangre
en tubo, en capilar o simplemente colocarlas en una lamina portaobjetos, segn sean las
necesidades.
Es recomendable, en la medida que sea posible, que la madre del beb no presencie el
procedimiento.
4. MATERIAL A UTILIZAR POR EQUIPO.
1 Torniquete por equipo
1 Frasco con torundas con alcohol etlico al 70 %, como antisptico.
2 Tubos de ensayo de 13x75 mm con tapn de color lila.
1 Frasco con 10 ml con solucin de etilen-diamino-tetra-acetato de sodio al 10 %
(EDTA).
5. PROCEDIMIENTO.
1) En un tubo de ensayo de 13x75 mm se coloca una gota del anticoagulante, en la etiqueta
se escribe en el nombre del paciente, fecha y anlisis deseado.
2) El paciente cmodamente sentado, coloca el brazo en posicin horizontal, se palpan las
venas, (venas ceflica media y baslica) al mismo tiempo se le solicita que abra y cierre el
puo con la finalidad de hacerlas ms evidentes.
3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuar la puncin, se sujeta el brazo del
paciente tensando la piel, se limpia la zona en forma circular y de dentro hacia afuera,
con el antisptico, se deja secar, sin soplar.
4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba del pliegue del codo, no
apretndolo demasiado y slo el tiempo necesario, para evitar la hemoconcentracin.
5) Se toma la jeringa de manera que el bisel de la aguja se encuentre hacia arriba, se coloca
paralela al trayecto de la vena, se introduce a la piel y vena con una puncin directa y
nica.
6) Cuando la aguja ha penetrado en la vena, se ve el flujo de la sangre en la jeringa.
17

7) Jalar suavemente el mbolo de la jeringa para obtener la cantidad de sangre deseada,

hacer esta operacin despacio para evitar la hemlisis.
8) Se suelta el torniquete y se retira la aguja suavemente aplicando la torunda sobre el sitio
de la puncin, indicndole al paciente que flexione el codo suavemente con el puo
abierto, con la finalidad de evitar hemorragias o hematomas.
9) Se quita con mucho cuidado la aguja de la jeringa con la ayuda de su funda, con
movimiento de torsin, y la sangre se vaca lentamente por las paredes del tubo que
contiene el anticoagulante, se tapa y se mezcla suavemente, durante un minuto.
6. OBTENCIN DE SANGRE CON SISTEMA VACUTAINER.
El fundamento es la aspiracin directa de la sangre en tubos al vaco que contienen el tipo y
cantidad apropiada de anticoagulante.
6.1 MATERIAL A UTILIZAR POR EQUIPO.
1 Torniquete
1 Soporte Vacuntainer
2 Agujas Vacuntainer de calibre 20x25mm (Bisel corto) y/o 20x32mm (bisel largo)
2 Tubos al vaco con EDTA (Tapn color lila)
1 frasco con Torundas con alcohol al 70 % por seccin
1 par de guantes de ltex desechables por persona
6.2 PROCEDIMIENTO (Presentacin de video)
1) Preparar el sistema: La aguja se gira para romper el sello de esterilidad, se atornilla al
soporte, se quita la capucha, quedando lista para la puncin, el tubo debe estar rotulado
con el nombre del paciente, estudio y fecha de realizacin.
2) El paciente cmodamente sentado coloca el brazo en posicin horizontal, se palpan las
venas, (venas ceflica media y baslica) al mismo tiempo se le solicita que abra y cierre el
puo con la finalidad de hacerlas ms evidentes.
3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuar la puncin, se sujeta el brazo del
paciente tensando la piel, se limpia la zona en forma circular y de dentro hacia afuera,
con el antisptico, se deja secar, sin soplar.
4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba del pliegue del codo, no
apretndolo demasiado y slo el tiempo necesario, para evitar la hemoconcentracin.
5) Sujetar firmemente el soporte con la mano derecha e introducir la aguja con el bisel hacia
arriba en la vena elegida, se sujetar el brazo del paciente con la mano izquierda, y con
el pulgar se sostendr el soporte vacuntainer para evitar que se mueva la aguja.
6) Empuje el tubo Vacutainer hasta el final del soporte, perforando completamente el
tapn.
7) Dejar fluir libremente la sangre hasta que se acabe el vaco.
8) Retire el torniquete suavemente.
18

9) Jalar el tubo Vacuntainer hacia afuera del soporte y sin quitar el tapn mezcle
suavemente la sangre con el anticoagulante lentamente sin sacudir. (aprox. 60 veces)
10) A continuacin retire la aguja colocando la torunda en el sitio de la puncin, indicndole
al paciente que flexione el brazo suavemente.
6.3 PRECAUCIONES:
1. Verificar que el material sea estril, para evitar la transmisin de VIH y HEPATITIS, entre
otras, se debe utilizar guantes durante la extraccin sangunea para proteccin personal.
2. Debe evitarse una mala puncin o exceso de presin ya que puede provocar
hemorragias, hematomas y dolor en la zona de puncin.
3. Evitar la permanencia prolongada de agujas dentro de las venas, ya que en ocasiones
puede provocar flebitis.
4. En el momento de la puncin asegurarse que la aguja penetre en la luz del vaso, para
evitar la formacin de hematomas.
5. Si por algn motivo la extraccin de sangre se realiza en vena femoral, se debe tener la
precaucin que la aguja no penetre demasiado para evitar lesin vascular.
6.4 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE AMBOS MTODOS.
El mtodo de extraccin por sistema Vacutainer no requiere tanta preparacin.
Se pueden obtener varias muestras en una sola puncin, en cambio con jeringa slo se
obtiene el volumen indicando en sta.
En el sistema Vacutainer existe una gran variedad de tubos tanto en volumen como en el
tipo de anticoagulante que contienen, adems slo se extrae la cantidad exacta de
sangre con relacin a la cantidad de anticoagulante.
TIPO DE TUBO
ANTICUAGULANTE
Tapn morado
Tapn verde
Tapn gris
Tapn azul
Tapn rojo
EDTA
Heparina
Oxalato de litio, de potasio y sodio.
Citrato de sodio.
Sin anticoagulante.
19

BIBLIOGRAFA
1.
Bick L. Roger, M.D. (1993) Hematology Clinical and Laboratory Practice Tomo I y II
Editorial Mosby USA.
2.
Carrillo, F.A. (1992), Hematologa Casos Clnicos 2. Edicin Editorial Interamericana
MckGraw Hill. Mxico.
3.
Rapaport I. Samuel (1988) Introduccin a la Hematologa, 2. Edicin. Mxico Salvat
Editores.
4.
Hoffbrand A.V. Pettit J.E. (1987), Hematologa Bsica I, Editorial Limusa Mxico.
5.
Mckenzie. S.B. (1991) Hematologa Clnica. Editorial Manual Moderno Mxico.
6.
Kaplan. L.A. Pesce. A.J. (1986). Tcnicas de Laboratorio, Fisiopatologa, Mtodos de
Anlisis. Editorial Panamericana Espaa.
7.
Sans J. Sabafen J. (1988): Hematologa Clnica 2. Edicin. Eitorial Doyma S.A. Espaa.
8.
Shirlyn B. MacKenzie: Hematologa Clnica. 2 Ed. Manual Moderno. Mexico 2003
9.
Ruiz A. G.J. Fundamentos de Hematologa: 3 Edicin. Edit. Panamericana. Mexico 2003.
10. Rodak B.F. Hematologa 2 Edicin, Edit. Panamericana. Mxico 2005.
20

PRCTICA No. 2
EL CONTROL DE CALIDAD DE LOS CONTADORES HEMATOLOGICOS MEDIANTE LA UTILIZACION DE
SANGRE CONTROL.
1. OBJETIVO: El alumno aprender la utilizacin de las sangres control que se utilizan en el

laboratorio hematolgico para garantizar al paciente resultados precisos y exactos.
2. INTRODUCCION. El Laboratorio Clnico proporciona datos cualitativos y cuantitativos sobre
especmenes biolgicos como ayuda a la prevencin, diagnstico y tratamiento de
enfermedades humanas. El aseguramiento de la calidad de las investigaciones del laboratorio
implica todo un conjunto de medidas encaminadas a lograr una adecuada confiabilidad de los
resultados.
Todos los laboratorios clnicos deben disponer de un sistema para el aseguramiento de la
calidad. El Sistema para el control de la calidad interna de los laboratorios clnicos, refleja
objetivamente las variaciones en los resultados de las determinaciones, permite conocer
realmente como est funcionando el laboratorio y posibilita tomar decisiones oportunas.
2.1 CARACTERISTICAS PRINCIPALES
Contribuir a aumentar la calidad de las determinaciones realizadas.
Aplicar criterios de calidad en cada seccin para que satisfagan la demanda de la
calidad de los procedimientos.
Facilitar la toma de decisiones mediante la aplicacin de las multi-reglas de Westgard
para el control interno de la calidad.
Posibilita el procesamiento del control de calidad interno en todas las secciones o
dependencias de su laboratorio, aplicando controles de repetibilidad y/o
reproducibilidad en cada una de las determinaciones.
Permite procesar varios controladores para cada una de las determinaciones,
decidiendo el usuario que procesamiento grfico realizar (Levey-Jennings, CUSUM,
etc.), adems le alerta de acuerdo a las Multireglas de Westgard durante la captura de
los datos.
El control de calidad se divide en: control de calidad interno y control de calidad externo.
2.2. CONTROL INTERNO (intralaboratorio). Actuaciones encaminadas a evaluar
diariamente la fiabilidad de las determinaciones analticas rutinarias.
Tres fases:
2.2.1 Fase preanaltica
21

Correcto mantenimiento de los aparatos.

Mtodos analticos adecuados (revisin y puesta al da).
Protocolos Normalizados de Trabajo:
Buena gestin: Planificacin y establecimiento de normas de decisin.
2.2.2 Fase analtica
Uso de lquidos de referencia
1) Pool de sueros o plasmas elaborados por el propio laboratorio:

Valores de analitos dentro de la normalidad, pero de concentracin desconocida.
tiles para valorar la precisin de los resultados
2) Controles comerciales: Tratados de forma que se conocen sus concentraciones (ej.
Seriscan).
Pueden ser normales o patolgicos.

Se intercalan diariamente con las muestras
Sirven para verificar la precisin y la exactitud.
Realizacin de grficas de control
3) Calibradores
Sueros o plasmas o lquidos de viscosidad y caractersticas similares al plasma con
concentracin conocida de algn/os analitos.
Se usan para realizar curvas de calibracin o para calibrar aparatos de medida.
4) Patrones o Estndares
Un analito disuelto en agua o tampn, en concentracin conocida.
Uso por ejemplo en espectrofotometra de punto final (uno para cada tcnica).
2.2.3 Fase postanaltica
Evaluacin de los resultados
Correccin y archivo de los resultados.
2.3
CONTROL EXTERNO (interlaboratorios)
2.3.1 Participacin en pruebas de intercomparacin.
22

Contrastar los valores obtenidos en un laboratorio con los de otros laboratorios o un

de referencia.
Una entidad proporciona un control igual a todos los laboratorios participantes
(pruebas ciegas) y contrasta luego los resultados mediante procesamiento
estadstico.
2.3.2 Certificacin y acreditacin.

Una organizacin independiente garantiza por escrito que un laboratorio posee un
sistema interno de gestin de calidad.
Reconocimiento por escrito de que un laboratorio es competente para realizar
determinados tipos de anlisis.
Es temporal y se debe renovar peridicamente.
En Espaa la entidad de acreditacin es la ENAC (Entidad Nacional de Acreditacin).
3. HEMATOLOGIA.
3.1. CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Mantenimiento Diario: Al inicio del turno de la maana, se realiza el mantenimiento diario
correspondiente (ver instrucciones en Manual de Hematologa).
Corrida de Controles: Una vez, realizado el mantenimiento diario, se procede a pasar los
controles internos, que consisten en controles ensayados de sangre completa que vienen listos
para su uso. El uso diario de estos controles de sangre completa aporta datos de control de
calidad para confirmar la precisin del instrumento. Cuando se maneja como una muestra de
un paciente y se ensaya en el instrumento debidamente calibrado y en buen estado de
funcionamiento, arrojara valores dentro del rango previsto indicado en la hoja de ensayo.
Antes de correr cualquier control es importante verificar a que lote corresponden, pues de no
estar ingresados, se deben configurar en el archivo de control de calidad del equipo. (Ver
instrucciones del fabricante).
Instrucciones de uso:
Sacar los frascos del refrigerador, y dejarlos a temperatura ambiente (18-30 C)
durante 15 minutos antes de usarlos.
Inmediatamente despus de que se han atemperado, se deben mezclar (No mezclar
mecnicamente). Para ello, se debe sostener el frasco horizontalmente entre las
palmas de las manos y rodarlo hacia adelante y hacia atrs durante 20 a 30
segundos, luego invirtalos rpidamente para mezclarlos a fin de garantizar la
23

suspensin de los eritrocitos. Por ltimo invierta suavemente los viales de 8 a 10

veces inmediatamente antes del muestreo.
Se manejan tres niveles de controles NORMAL. ANORMAL I Y ANORMAL II, los cuales se pueden
procesar de dos maneras: Modo Cerrado: cuando el nivel de los viales se ajusta a los
requerimientos del equipo, en este caso se colocaran en un cassette, de tal manera que el
cdigo de barras de cada tubo quede visible y el monitor del instrumento debe quedar en la
funcin CONTROL, y se envan igual que una muestra. Modo Abierto: este modo se utiliza
cuando el nivel de los viales est demasiado bajo y por el modo cerrado no son aceptados. En
este caso desde la pantalla Control, seleccione Control Run, luego F2 y all ubique el lote de
cada control, cuando lo halle ubicado, seleccinelo con ENTER y estando ya, en la pantalla del
control correspondiente se procede a pasar el control de igual manera como se hace con una
muestra, pero es este caso la identificacin corresponder al lote del control que se va a pasar.
Despus del muestreo, regresar los controles al refrigerador para lograr la mxima estabilidad
del vial abierto. Si se opera en modo abierto, limpiar los roscados del vial y de la tapa antes de
volver a colocar la tapa y ponerlo nuevamente en el refrigerador.
A diario se guardan las impresiones de los tres niveles de control, en la carpeta registrada como
Controles STKS.
3.2 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
Este se adquiere comercialmente. Al laboratorio llega el pedido semestral, junto con una
planificacin establecida por el mismo fabricante, en donde especifican los das exactos, en que
se debe realizar la corrida del control, para el envi via fax de los resultados obtenidos. Los
viales constan de sangre completa, que vienen listos para su uso. Se dejan almacenados, segn
especificaciones propias de la casa comercial y se van procesando de acuerdo con el
cronograma establecido.
Procesamiento
El da en que corresponda la corrida del control, se debe sacar el vial, del
refrigerador y dejarlo a temperatura ambiente durante 15 minutos, luego se debe
colocar a mezclar por 10 minutos en el agitador de serologas a no ms de 100 rpm.
Posteriormente se procede a pasarlo por el equipo, por el modo abierto, debido a
las caractersticas de empaque del vial y se debe correr sin diferencial. Se debe
tratar de no tocar el fondo del vial con el fin de evitar resultados errneos. (Revise el
inserto de cada paquete recibido con el fin de aclarar y confirmar dudas.)
Los resultados se transcribe en el formato correspondiente, que se encuentra en la
carpeta de CONTROL RIQAS e inmediatamente debe ser enviado via fax a los
nmeros telefnicos previamente establecidos. Es necesario confirmar via
telefnica, que efectivamente el fax fue recibido y apuntar el cdigo de
confirmacin del mismo.
El cronograma est ubicado en un lugar visible del laboratorio durante todo el ao.
24

BIBLIOGRAFA
1.
Bick L. Roger, M.D. (1993) Hematology Clinical and Laboratory Practice Tomo I y II Editorial
Mosby USA.
2. Carrillo, F.A. (1992), Hematologa Casos Clnicos 2. Edicin Editorial Interamericana
3. Rapaport I. Samuel (1988) Introduccin a la Hematologa, 2. Edicin. Mxico Salvat
Editores.
4. Hoffbrand A.V. Pettit J.E. (1987), Hematologa Bsica I, Editorial Limusa Mxico.
5. Mckenzie. S.B. (1991) Hematologa Clnica. Editorial Manual Moderno Mxico.
6. Kaplan. L.A. Pesce. A.J. (1986). Tcnicas de Laboratorio, Fisiopatologa, Mtodos de Anlisis.
Editorial Panamericana Espaa.
7. Sans J. Sabafen J. (1988): Hematologa Clnica 2. Edicin. Eitorial Doyma S.A. Espaa.
8. Shirlyn B. MacKenzie: Hematologa Clnica. 2 Ed. Manual Moderno. Mexico 2003
9. Ruiz A. G.J. Fundamentos de Hematologa: 3 Edicin. Edit. Panamericana. Mexico 2003.
25

PRCTICA No. 3
SEMINARIO DE CALCULOS DE INDICES EITROCITARIOS.
1. OBJETIVO. Que el alumno aprenda a calcular los ndices eritrocitarios as como su aplicacin
en la clasificacin morfolgica de las anemias.
2. INTRODUCCION. La anemia es una enfermedad hemtica que es debida a una alteracin de
la composicin sangunea y determinada por una disminucin de la masa eritrocitaria que
condiciona una concentracin baja de hemoglobina (ver los parmetros estndares). Rara vez se
registra en forma independiente una deficiencia de uno solo de estos factores. La anemia es una
definicin de laboratorio que entraa un recuento bajo de eritrocitos y un nivel de hemoglobina o
hematocrito menor de lo normal.
La definicin de la Anemia comprende varias situaciones de las siguientes que se deben reunir:
La enfermedad se refiere a una situacin patolgica que genera signos y sntomas, los cuales
determinan el sndrome anmico (ver ms adelante).
La alteracin de la sangre referida a las anemias, recae estrictamente sobre los
eritrocitos y/o la hemoglobina.
En la sangre, lo que se halla alterado es la masa total de los eritrocitos: esto comprende
una disminucin de la magnitud de su conteo (cantidad) y/o constitucin (calidad) que
hacen a sus dimensiones y peso tanto en sentido individual (cada hemate) como en
sentido colectivo (hematocrito).
La hemoglobina es el mayor componente proteico del eritrocito, y es la sustancia que
hace a su masa y volumen, lo que inevitablemente afecta la concentracin total de
hemoglobina en la sangre.
Todos los factores y condiciones deben ser tomados en relacin con los parmetros y
rangos considerados como normales y estndares.
La anemia se considera crnica si dura ms de seis meses.

Los rangos de normalidad son muy variables en cada poblacin, dependiendo de factores
ambientales (nivel sobre el mar) y geogr
26

ficas. A nivel del mar encontraremos valores normales mnimos, y a gran altura los valores
normales debern ser ms altos (la menor presin parcial de oxgeno (O2) obliga al organismo a
optimizar su transporte). Adems, hay variaciones de sexo, observando valores menores en las
mujeres (posiblemente por la prdida de eritrocitos y contenido sanguneo en cada ciclo menstrual).
27

Sexo
Nmero de Eritrocitos Hematocrito Hemoglobina
Hombres 4,2-5,4 x 106/mm3
42-52 %
13-17 g/dl
Mujeres 3,6-5,0 x 106/mm3
36-48 %
1216 g/dl
MCV:
80-100 fl.
MCHC:
31-37 g/dl.
MCH:
27-31 pg/clula.
RDW:
11,5-14,5
En general, se establece como normal para un varn un hematocrito entre 41% y 53%,
hemoglobina entre 13 y 17 g/dl, y para una mujer: hematocrito entre 37% y 47%, y hemoglobina
entre 12 y 16 g/dl.
Estos niveles son algo arbitrarios, pues existen lmites en los valores normales. Por ejemplo, un
sujeto puede tener una disminucin de 1 a 2 g/dl en su hemoglobina, y aun as estar dentro de
los lmites normales.
Los sntomas y signos de la anemia se correlacionan con su intensidad, su rapidez de instalacin y
el sitio donde se produce. Otros factores influyentes en el cuadro sintomtico son la edad, el
estado nutritivo, cardiovascular y respiratorio.
Los sntomas que se observan en la anemia aguda se denominan sndrome anmico, e incluyen:
debilidad (astenia), palpitaciones y falta de aire (disnea) con el esfuerzo. Frecuentemente y sobre
todo en las anemias severas se observa esplenomegalia, hepatomegalia, petequias, equimosis, y/o
ictericia. Tambin puede incluir sntomas propios de otros sistemas, como cardiovascular
(taquicardia, disnea de esfuerzo marcada, angor, claudicacin intermitente), digestivo (dispepsia, disfagia,
anorexia, diarrea) o neuropsiquitrico , depresin, cambios de carcter como irritabilidad, En la
prdida sbita de sangre (hemorragia aguda) y en particular si es voluminosa (aprox. 2 L o 40% del
volumen sanguneo), predominan los sntomas de inestabilidad vascular por hipotensin,
contraccin vascular, aparecen los signos del shock hipovolmico, tales como confusin, respiracin
de Kussmaul, sudoracin, y taquicardia.1
Es fcil diagnosticar un estado de anemia, pero la labor mdica debe orientarse a caracterizarla,
para as establecer su causa (etiologa). Para ello se deben estudiar a fondo las caractersticas de
los glbulos rojos, de los reticulocitos, leucocitos y plaquetas que circulan en la sangre mediante un
hemograma o citometra hemtica, verificando el hematocrito, y las caractersticas de las series
hematopoyticas mediante un mielograma. Generalmente salen moretones en la cadera, tambin
conocida como peltre.
28

3. INDICES ERITROCITARIOS.
3.1 VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO.
Este parmetro nos indica el tamao promedio de los eritrocitos en un paciente y se calcula de
la siguiente manera.
Hematocrito (Hto)
VCM =
________________________________
x 10 = u3
de eritrocitos / ul
La obtencin de un VCM inferior a los valores de referencia, indicar la presencia de eritrocitos
pequeos o microcticos.
La obtencin de un VCM que cae entre los valores de referencia, indicar que se tienen
eritrocitos de tamao normal o normocitos.
La obtencin de un VCM mayor a los valores de referencia, indicar la presencia de eritrocitos
grandes o macrocitos.
VALORES DE REFERENCIA.
HOMBRES
MUJERES
u3
84 a 95
79 a 103 u3
En el S. I.
84 a 95 f1
78 a 103 f1
3.2 CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR.

Este ndice eritrocitario da una idea de la coloracin de los eritrocitos en base a su contenido de
hemoglobina, ya que determina la concentracin promedio de hemoglobina en todos lo
eritrocitos. Su determinacin se realiza de la siguiente manera:
Hemoglobina ( g/100 ml)
CMHC =
___________________________________________
x 100 = g/dl
Hematocrito (%)
La obtencin de una concentracin media de hemoglobina corpuscular (CMHC) menor a los
valores de referencia indicar la presencia de eritrocitos con un bajo contenido de hemoglobina
o hipocrmicos.
La obtencin de un valor mayor o menor a los valores de referencia, indicar la presencia de
eritrocitos hipercrmicos. Sin embargo debe de usarse rara vez este trmino, ya que el nico
eritrocito hipercrmico es el esferocito.
29

Un valor de CMHC que cae entre los valores de referencia indicar la presencia de eritrocitos
con contenido normal de hemoglobina o normocrmicos.
HOMBRES.
MUJERES.
En el S. I.
9.85 a 21.10 m mol/1
18.61 a 21.10 m mol/1
32 a 34 g/dl
30 a 32 g/dl
3.3 HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA ( CMH ).

Este ltimo ndice eritrocitario nos indica el promedio de hemoglobina en cada eritrocito y se
calcula de la manera siguiente.
Hemoglobina ( g/dl )
CMH =
_______________________________________
x 10 = pg
de eritrocitos / ul
Es importante comprender que las clulas microcticas no son hipocrmicas en forma
obligada, y los macrocitos no son por lo general hipercrmicos, esto hace que la hemoglobina
corpuscular media (CMH) sea demasiado intil, ya que no toma en cuenta el tamao de la
clula-
EN HOMBRES Y MUJERES
28 a 31 pg (tambin en el S.I)
3.4 FORMA DE REPORTAR LOS RESULTADOS.

El diagnstico de una anemia est basado en el historial clnico del paciente, el examen fsico y
la investigacin por parte del laboratorio. El mdico examinar el informe de los resultados
proporcionados por el laboratorio, aqu el Qumico toma una gran importancia, ya que en l cae
la responsabilidad de ayudar a diagnosticar trastornos hematolgicos en un paciente.
30

Los datos ms importantes que debe reportar el laboratorio en la biometra hemtica son los
siguientes:
FECHA:___________________
PACIENTE:_______________________________________________________________
DOCTOR(A):______________________________________________________________
EXAMEN:________________________________________________________________
VALORES DE REFERENCIA
RESULTADO
ERITROCITOS (millones) m/ml
HEMOGLOBINA (g/dL)
HEMATOCRITO (%)
HCM (pg)
CmHb (%)
VCM mm 3 VGM (fl)
VSG (mm/hr)
RETICULOCITOS (%)
PLAQUETAS (x mm 3 ) ml
LEUCOCITOS (x mm 3 ) ml
HOMBRES
5.5 - 6.3
15 - 20
46 - 56
27 - 34
32- 34
84- 95
0- 7
MUJERES.
4.1 - 5.7
12.5 - 16.5
39 - 50
27 - 34
30 - 34
78 -103
0 - 13
RESULTADO
HOMBRES
MUJERES.
0.5 - 1.5
0.5- 1.5
150,000 - 450,000
4,000 - 12000
BIBLIOGRAFA
1. Bick L. Roger, M.D. (1993) Hematology Clinical and Laboratory Practice Tomo I y II Editorial
Mosby USA.
3. Rapaport I. Samuel (1988) Introduccin a la Hematologa, 2. Edicin. Mxico Salvat Editores.
31

PRACTICA No. 4
DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG, CUENTA DE ERITROCITOS E NDICES
ERITROCITARIOS
OBJETIVO: El alumno conocer y realizar los mtodos bsicos para la medicin de la frmula
roja para su aplicacin en la caracterizacin de las diferentes anemias.
1. DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA
1.1 EL MTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA.
En la Citometra hemtica una de las determinaciones es la hemoglobina la cual se expresa en
g/dl.
El mtodo de la Cianometahemoglobina es el ms empleado, debido a que es colorimtrico, es
barato y permite medir todas las hemoglobinas presentes en la sangre
(Hb-O2, Hb-CO2, Hb-H a excepcin de la Hb-S).
FUNDAMENTO.
Para convertir la Hb-O2 en Hb-CN se utiliza el Reactivo de Drabkin, el cual contiene ferricianuro
de potasio K3Fe(CN)6 que convierte el Fe++ en Fe+++ convirtindose en metahemoglobina.
Luego el KCN del mismo reactivo se combina para formar la Cianometahemoglobina, cuyo pico
mximo de absorcin es de 540nm con un rango de 530 a 550 nm.
MATERIAL
2 Tubos de ensayo de 13x100 mm por equipo
1 Pipeta de Salh por equipo
2 Pipeta de 5 ml por equipo
1 Micropipeteador o boquilla por equipo.
1 Perilla por equipo.
1 Espectrofotmetro por seccin.
REACTIVOS:
10ml de reactivo de Drabkin por equipo
PROCEDIMIENTO:
1) Se marcan 2 tubos de ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y se
colocan 5 ml. del Reactivo de Drabkin en cada uno.
2) Con la pipeta de Shali, se toma 0.02 ml (20 l) de sangre limpiando perfectamente la
pipeta por fuera con un segmento de papel desechable humedecido con solucin
32

salina, se pasan al tubo, lavando la pipeta 2 o 3 veces, por aspiracin y expulsin del
reactivo dentro de la misma.
3) Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar la mezcla por 5 minutos. Pasar a
las celdas.
4) Ajustar el espectrofotmetro a cero de absorbancia con el blanco de reactivo (B) a
540 nm. y se lee la absorbancia del tubo problema.
5) Calcular la concentracin de la Hemoglobina, a partir de la Ley de Beer o bien
extrapolando en la Curva de calibracin.
Ley de Beer
A= a.b.c.
[m] = Abs m [St]

Abs St
[m] = concentracin de la muestra

Abs m = Absorbancia de la muestra
c St = concentracin del estandard
Abs St = Absorbancia del estndar
CURVA DE CALIBRACIN.
La curva de calibracin se realiza de la siguiente manera:
a) Marca 5 tubos de ensaye de 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10, 15, 20 g/dl
b) Pipetear con precisin, de la solucin valorada de cianometahemoglobina (St)
de concentracin de 20 g/dl y del Reactivo de Drabkin, en cada uno de los tubos
correspondientes y mezclar bien.
CONCENTRACIN
HEMOGLOBINA
10
15
20 g/dl
Cianometahemoglobina
0.0 ml
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5.0 ml
Reactivo de Drabkin
5.0 ml
3.75 ml
2,5 ml
1.25 ml
0.0 ml
Estndar de
c) Medir la absorbancia de cada dilucin en el espectrofotmetro a 540 nm, contra

el blanco (B).
d) Graficar en papel milimtrico, en las ordenadas (Y) las absorbancias y en las
abscisas (X) las concentraciones.
e) Trazar una lnea perpendicular que parta del vrtice (O) y toque el mayor nmero
de puntos.
33

f) Extrapola las absorbancias de las muestras problema.

PRECAUCIONES.
1. Se debe de utilizar guantes para la proteccin del estudiante.
2. El reactivo de Drabkin contiene cianuro, es necesario emplear la perilla auxiliar,
prohibido pipetear con la boca.
3. Es muy importante que las mediciones de las soluciones sean exactas, eso favorecer
que la lnea perpendicular pase por todos los puntos de interseccin.
4. Verificar antes de iniciar, que el espectrofotmetro est prendido, se encuentre ajustado
a CERO de absorbancia en la longitud de onda de 540 nm.
VENTAJAS.
1. El mtodo de Cianometahemoglobina posee ciertas ventajas, ya que la mayora de las
formas de hemoglobina que se puedan encontrar en la sangre (a excepcin de Hb S) se
convierten a cianometahemoglobina con la adicin del reactivo de Drabkin.
2. La mxima absorcin de la cianometahemoglobina a 540 nm, permite la utilizacin de
fotmetros con rangos de lectura cortos.
DESVENTAJAS.
1. La nica desventaja es que se trabaja con pequeos volmenes de sangre (20
l) por lo que aumenta la probabilidad de error.
HOMBRES
15 a 20 g/dl
MUJERES
12.5 a 16.5 g/dl
9.3 a 12.4 mmol/l

7.5 a 10.33 mmol/l
2. MTODO DE WINTROBE PARA SEDIMENTACIN GLOBULAR

Esta sencilla prueba se emplea universalmente como un indicador de la presencia de
enfermedades activas, ya que permite conocer las caractersticas fsicas del ambiente en el que
se encuentran los eritrocitos.
FUNDAMENTO:
Consiste en dejar que la sangre sedimente por la accin de la gravedad formando un paquete
ms o menos compacto separado del plasma, ello depende de varios factores como son:
a. Factores plasmticos: En donde los niveles elevados en la concentracin de fibringeno
y/o de globulinas originan la disminucin del potencial Z de los eritrocitos, favoreciendo
la formacin del fenmeno de Rouleaux.
34

b. Factores eritrocitarios: Cuando aumenta tamao de los eritrocitos (macrocitos), se

sedimentan ms rpido que los de tamao normal (normocitos) o los de menor tamao
(microcitos).
c. En los pacientes con anemia se disminuye la relacin eritrocitos/plasma, lo que
favorece el apilamiento de los eritrocitos y el aumento de la VSG.
MATERIAL.
1 Pipeta Pasteur por equipo
1 Tubo de Wintrobe por equipo
1 Soporte para tubos de Wintrobe por seccin
PROCEDIMIENTO.
1. Mezclar bien el tubo que contiene la sangre.
2. Llenar la pipeta Pasteur de sangre, despus introducir la punta hasta el fondo del tubo
de Wintrobe e ir vistiendo lentamente evitando la formacin de burbujas, hasta llegar a
la marca de 0.
3. Colocar el tubo verticalmente en la gradilla (fijarse que este nivelada) durante una hora.
4. Leer la altura de la columna de plasma que aparece en la parte superior, en la escala que
va del 0 al 10 cada raya equivale a un mm y se reporta en mm/hora.
PRECAUCIONES.
a) El tubo de Wintrobe deber llenarse desde el fondo hasta la marca cero, evitando la
formacin de burbujas.
b) Durante el proceso de reposo deber verificarse que se encuentre exactamente vertical,
de lo contrario el valor determinado ser errneo.
c) Verificar que el reposo del tubo de Wintrobe este exento de vibraciones.
d) La sangre debe de estar perfectamente mezclada para evitar un cambio en la relacin,
eritrocitos-plasma.
VENTAJAS.
a) Pequea cantidad de muestra.
b) Es sencillo.
c) Puede calcularse el valor del hematocrito con la misma preparacin despus de haber
determinado la velocidad de sedimentacin globular. (VSG).
DESVENTAJAS.
Se altera fcilmente con movimientos, vibraciones y sangres hemolizadas.
HOMBRES
0 a 7 mm/hr.
MUJERES
0 a 15 mm/hr.
3. DETERMINACION DE HEMATOCRITO.
35

El hematocrito es un parmetro indispensable para poder calcular los ndices eritrocitarios y se

define como el volumen que representa el paquete globular en el total del volumen
sanguneo.
El hematocrito en porcentaje (%) representa aproximadamente tres veces el valor de la
concentracin de hemoglobina y su valor ser siempre fraccionario, es decir menor a uno (en el
sistema internacional de unidades).
Para reportar dicho valor se har como porcentaje o como fraccin celular, para su
determinacin se utiliza el mtodo Wintrobe (macro mtodo) o bien el micro mtodo (en un
tubo capilar) que posee menos errores inherentes.
3.1 MACROHEMATOCRITO.
MATERIAL.
1 Pipeta Pasteur por equipo
1 Tubo de Wintrobe por equipo
1 Centrifuga por seccin
PROCEDIMIENTO.
Despus de haber determinado la VSG con el tubo Wintrobe.
a) Calcule el hematocrito, centrifugando el tubo a 3500 r.p.m. durante 30 minutos. En caso de
no contar con esta preparacin efectuar el procedimiento (2).
Procedimiento (2).
b) Con una pipeta Pasteur llnese de sangre el tubo Wintrobe hasta la marca de 0
cero.
c) Centrifguese el tubo A 3500 r.p.m. durante 30 minutos.
LECTURA:
En la graduacin en la que el 0 cero est en el fondo del tubo, lase a que nivel est el lmite
superior de la columna roja (la sangre se ha separado en cuatro capas: roja formada por los
eritrocitos, blanca griscea por leucocitos, amarillenta cremoso por plaquetas y la ltima lquida
formada por plasma habitualmente de color amarillento.).
3.1 MICROHEMATOCRITO.
MATERIAL.
2 Capilares por equipo
1 Mechero de Buncen por seccin
1 Lector para hematocrito por seccin
1 Micro centrfuga por seccin
PROCEDIMIENTO.
36

a) Llenar con sangre capilar o venosa un tubo capilar aproximadamente tres cuartas partes del
total de su longitud.
b) Cierre el extremo del tubo capilar distante de la sangre acercndolo a la flama del mechero y
rotndolo, tambin se puede sellar con plastilina (cercirese de que el cierre de dicho extremo
haya sido completo).
c) Centrifguese en la centrfuga para microhematocrito durante 5 min.
d) Leer en el lector del microhematocrito.
PRECAUCIONES.
a) En ambos mtodos se debe de evitar la hemoconcentracin de la muestra durante la
obtencin. Si el hematocrito excede de 50 % centrifugar nuevamente el capilar o tubo utilizado
Para la determinacin, durante 5 minutos.
b) En el caso del micro mtodo si el sellado es con mechero cudese que la sangre no llegue al
extremo calentado del tubo ni quede al nivel de la flama.
c) En el caso del macro mtodo el tubo de Wintrobe se debe aforar exactamente a cero y no
deben de quedar burbujas de aire entre columna de sangre o en el fondo.
e) se debe de mezclar la sangre perfectamente antes de llenar los tubos de Wintrobe o
capilares.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS.
a) El micro mtodo es el ms empleado debido a que requiere menos tiempo de centrifugacin,
y cantidad de muestra, se puede utilizar sangre capilar o venosa en comparacin con el macro
mtodo.
b) Se prefiere el micro mtodo debido a que existen diferentes marcar comerciales de tubos de
Wintrobe para el macro mtodo con lo que se obtienen diferentes resultados del hematocrito.
c) La cantidad de plasma atrapado es mayor en el macro mtodo dando valores ms elevados.
VALOR DE REFERENCIA.
HOMBRES
46 a 56 %
MUJERES
39 a 50 %
100%
0%
37

Lector de microhematocrito
4. RECUENTO CELULAR ERITROCITARIO

INTRODUCCIN. El recuento de glbulos en la sangre es una prctica habitual en el laboratorio
clnico, en el cual se determina el nmero de eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm 3 de
sangre, con la ayuda de la cmara de Neubauer o hemocitmetro.
La cmara de Neubauer o hemocitmetro es un grueso portaobjetos de vidrio, en el centro de
su superficie se encuentra un cuadrado de 3 mm de lado dividido en 9 cuadros grandes cada
uno de 1 mm, los cuadros marcados con la letra L son utilizados para el recuento de leucocitos y
se encuentran divididos por 16 cuadros ms pequeos. El cuadro central esta dividido en 25
cuadros los marcados con la letra E son utilizados para el recuento de eritrocitos y los marcados
con P para plaquetas. Fig. (1)
Cada uno de estos cuadros se divide en 16 cuadros ms pequeos dando un total de 400 en el
cuadro central. Fig.(2)
rea total = 9 mm2.
rea de cada cuadro marcado como L = 1 mm2.
rea de cada cuadro marcado como e y P = 0.04 mm2
rea total de los cinco cuadros centrales E= 0.2 mm2.
rea de cada cuadrito marcado como e 0 0.0025 mm2.
L
E
P
1 mm
E
P
38

8 mm
E
P
E
P
E
L
e
0.05mm.
2mm
Fig. (2) Amplificacin de un cuadro de eritrocitos.

CUIDADOS DE LA CMARA.
a. Debern utilizarse cubreobjetos especiales ya que los convencionales poseen superficie
irregular.
a. Se debe lavar la cmara con agua tibia o un pao suave empapado en alcohol.
b. No se deber tocar el rayado de la cmara con los dedos ya que manchan la cmara y puede
provocar errores de apreciacin
c. Evitar usar lienzos rgidos que puedan araar el rayado sensible de la cmara. Tomarla
nicamente por sus bordes
MTODO DE CONTEO.
39

El conteo se inicia por la parte superior de izquierda a derecha y luego de derecha a izquierda
sucesivamente, teniendo la precaucin de contar las clulas que tocan una de cualquiera de las
tres lneas como si estuvieran en los cuadros y teniendo la precaucin de no contar una clula
dos veces. Figura (3)
0.05 mm
.2 mm
Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de eritrocitos.

MATERIAL.
1 Pipeta de Thoma para glbulos rojos por equipo
1 Cmara de Neubauer o Hemacitmetro por equipo
1 Boquilla o micropipeteador por equipo
Reactivos:
1 frasco con 100ml. de Lquido diluyente de Gower para eritrocitos por seccin
PROCEDIMIENTO.
a) Con la ayuda de la boquilla o el micropipeteador, se aspira sangre homogeneizada con
la pipeta de Thoma para eritrocitos hasta la marca de 0.5
b) Aspirar luego el lquido diluyente de eritrocitos hasta la marca 101.
c) Se debe de evitar la formacin de burbujas. Agitar la pipeta suavemente para mezclar
o bien mezcle por medio de agitador electrnico si es que cuenta con l.
d) Eliminar de 4-5 gotas de la pipeta y con la siguiente llenar por capilaridad la cmara de
Neubauer previamente preparada.
e) Dejarla reposar por dos minutos, colocarla bajo el objetivo seco fuerte (40x) y contar
los eritrocitos presentes en los cinco cuadros marcados con la letra E, utilizando el mtodo
sealado.
f) Una vez concluido el conteo, lavar la cmara con el agua de la llave, agua destilada y
finalmente con alcohol. Secar con un pao limpio, suavemente y utilizar jabn si es necesario.
40

NOTA: Llenar ambos lados de la cmara de Neubauer, sacar un promedio de los conteos
y calcular el nmero de eritrocitos 7 mm3 multiplicando por el factor de 10000 mm3 Reportar
el nmero de eritrocitos por milmetro cbico de sangre.
CLCULOS:
El factor 10,000 esta dado por:
- 1.5 que corresponde a la fraccin de la cmara en la que se cuentan los eritrocitos (los 25
cuadros centrales).
- 1/10 es la profundidad de la cmara de Neubauer. 1/200 es la dilucin realizada a la sangre
con la pipeta de Thoma.
( 1/5 ) ( 1/10 ) ! 1/200 ) = ( 1/19,000 mm3 )
Esto ser valido en el caso de que la dilucin inicial haya sido 1:200 y se cuenten los cinco
cuadros marcados con la letra E.
CONCENTRACIONES.
El lquido diluyente de Gower para eritrocitos es isotnico y acta como fijador para
preservar la forma celular.
mm3
HOMBRES: 5.5 a 6.3 Millones /

MUJERES: 4.1 a 5.7 Millones / mm3
1 mm3 = 1 l
o
o
l
l
EN EL S.I
5.5 a 6.3 x 1012 /1
4.1 a 5.7 x 1012 /1
BIBLIOGRAFA
Mosby USA.
Editores.
41

PRCTICA No. 5
CUENTA DE RETICUILOCITOS, CITOMETRIA HEMATICA AUTOMATIZADA Y SU INTERPRETACION EN
DIVERSAS PATOLOGIAS.
OBJETIVO. Que el alumno aprenda a realizar el conteo de reticulocitos y su aplicacin junto con la
citometria hematica en el diagnostico de los diferentes tipos de anemias.
1. INTRODUCCION:
1.1. Mientras estaba bajo contrato con la Armada de los Estados Unidos en la dcada de 1940,
Wallace H. Coulter desarrollado una tecnologa de contar y de tamao de partculas. La
tecnologa fue desarrollada principalmente para contar las clulas de la sangre rpidamente. En
la actualidad ms del 98% de los contadores automticos de clulas incorporar el principio de
Coulter. En los ltimos cincuenta aos, la tecnologa tambin ha sido utilizada para caracterizar
a miles de diferentes ramas industriales, as como materiales de partculas. Cualquier
instrumento que utiliza este principio se denomina un Coulter. Coulter Counter es tambin una
marca registrada. Las drogas, pigmentos, excipientes, toners, alimentos, productos abrasivos,
explosivos, arcilla, minerales, materiales de construccin, materiales de recubrimiento, metales,
materiales de filtracin, y muchos otros han sido analizados por el principio de Coulter. Se
puede usar para medir cualquier material en partculas, que pueden ser suspendidos en un
electrlito. Partculas tan pequeas como 0,4 micras y tan grandes como 1200 micra de
dimetro se puede medir de forma rutinaria. Con los aos, contador Coulter se ha convertido
en sinnimo de tecnologa de la caracterizacin de partculas en muchos campos. Ms de 8000
referencias
a
los
usos
de
esta
tecnologa
han
sido
documentados.
En un contador Coulter, un tubo con una pequea abertura en la pared se encuentra inmersa
en un vaso que contiene partculas en suspensin en un electrolito de baja concentracin. Dos
electrodos, uno en el interior del tubo de abertura y otro fuera del tubo de abertura, pero en el
interior del vaso, se colocan y una ruta de acceso actual es proporcionada por el electrolito
cuando un campo elctrico se aplica (Figura 1). La impedancia de entre los electrodos se mide.
La apertura crea lo que se denomina una "zona de deteccin." Partculas en baja concentracin,
suspendidos en el electrolito, se puede contar al pasar a travs de la apertura. Cuando una
partcula pasa a travs de la abertura, un volumen equivalente de electrolitos para volumen
sumergido del la partcula se desplaza desde la zona de deteccin. Esto causa un cambio a corto
plazo en la impedancia a travs de la abertura. Este cambio puede ser medido como un pulso de
tensin o de un pulso de corriente. La altura del pulso es proporcional al volumen de lo sentido
de partculas. Si se supone que la densidad de partculas constante, la altura del pulso es
tambin proporcional a la masa de las partculas. Esta tecnologa tambin se llama as la
tecnologa
de
apertura.
Uso de recuento y la altura del pulso analizador de circuitos, el nmero de partculas y el
42

volumen de cada partcula que pasa por la zona de deteccin puede ser medida. Si el volumen
de lquido que pasa a travs de la abertura puede ser controlado con precisin y medida, la
concentracin de la muestra puede ser determinado. En los modernos contadores Coulter,
como MS Beckman Coulter 3 instrumentos, se digitalizan los pulsos y se guarda con varios
parmetros clave que describen cada pulso como la altura del pulso, ancho de pulso, marca de
tiempo, el rea de pulso, etc Estos parmetros permitirn un mejor instrumento para
discriminar entre el ruido y las legumbres real y entre los pulsos normales y legumbres
distorsionado debido a diversas razones, cuando las partculas de trnsito a travs de la
abertura. Los pulsos ahorrado puede ser utilizado tambin para controlar los cambios de la
muestra durante el perodo de tiempo de medicin, si los pulsos estn dispuestos en secuencia
de tiempo. En la prctica, el volumen de las partculas se representa a menudo en trminos de
dimetro esfrico equivalente. El volumen medido de partculas (o tamao) puede ser entonces
utilizada para obtener una distribucin de tamao de partcula.
43

Figura 1. Esquema de un contador Coulter.

Una medicin tpica utilizando Coulter Counter toma menos de un minuto como el recuento y tamao de
las tasas de hasta 10.000 partculas por segundo son posibles. La precisin de las mediciones de tamao
puede ser superior al 1%. Tamao de la abertura normalmente oscila entre 15 micras hasta 2000 micras.
Cada abertura puede ser utilizado para medir las partculas dentro de un rango de tamao de 2% a 60%
de su dimetro nominal. Por lo tanto, la gama global de tamao de partculas de 0.4 micras hasta 1200
micras es posible. La capacidad de la tecnologa para analizar las partculas se limita a las partculas que
pueden estar convenientemente suspendidas en una solucin electroltica. El lmite superior por tanto,
puede ser de 500 micras de arena, pero slo 75 micras de partculas de carburo de tungsteno. El lmite
inferior de tamao est limitado por el ruido electrnico generado principalmente en la apertura en s.
La seleccin del tamao de la abertura ms adecuado depende de las partculas a medir. Si la muestra a
analizar se compone de partculas en gran medida dentro de un rango de dimetro de 30:1 tamao, la
apertura ms adecuado puede ser elegido. Por ejemplo, una apertura de 30 micras pueden medir las
partculas de alrededor de 0,6 a 18 micras de dimetro. A 140 micras de apertura puede medir las
partculas de alrededor de 2,8 a 84 micras. Si las partculas que se medirn cubrir una gama ms amplia
de una sola abertura puede medir, dos o ms aberturas tienen que ser utilizados y los resultados pueden
ser superpuestos para ofrecer un completo servicio de distribucin de tamao de partcula.
Los sistemas COULTER poseen 2 baos, uno de eritrocitos y otro de leucocitos, en el bao de
eritrocitos se encuentra una apertura de 50m y en el de los leucocitos otra de 100m
En cada apertura se realizan 3 recuentos de 4 segundos y se obtiene el promedio (en el caso de
STKS y GEN-S, estos poseen 3 aperturas de eritrocitos y 3 de leucocitos por lo que la lectura slo
dura 4 segundos y se obtiene el promedio de las 3 aperturas)
En el bao de los eritrocitos el sistema identifica los eritrocitos como aquellas partculas que
poseen un volumen igual o mayor que 36 fL (femtolitro), en este mismo bao se realiza el
recuento de plaquetas las cuales tienen un volumen entre 2 y 20 fL, en los contadores COULTER
44

si existe un recuento pequeo de plaquetas, el tiempo de recuento se extiende por 4 segundos

ms, a fin de tener un mayor valor estadstico.
En el bao de leucocitos posterior a la dilucin con diluyente isotnico, se aplica agente lisante,
el cual destruye la membrana citoplasmtica de eritrocitos y leucocitos, permaneciendo los
ncleos intactos. Es as que las partculas que midan 35 fL o ms son contadas como leucocitos.
Hay que hacer notar que los ncleos de eritroblastos si existiesen tambin son contados, por lo
que si el instrumento seala sospecha de su presencia se deben buscar en el frotis y de tener un
nmero considerable, se debe corregir el recuento de leucocitos.
Posterior al recuento de leucocitos y utilizando la reaccin qumica del lisante con la
hemoglobina libre en la mezcla, se mide un complejo qumico estable a 525 nm, el cual
dependiendo del instrumento, puede ser realizado en el mismo bao o en una cubeta de flujo
especialmente diseada.
Consecuentemente los parmetros medidos son: Eritrocitos (RBC), Leucocitos (WBC), Plaquetas
(PLT) y Hemoglobina (Hgb)
Los parmetros derivados de las mediciones de volumen: Volumen corpuscular medio (VCM),
Ancho de distribucin eritrocitaria (ADE) y Volumen plaquetario medio (VPM)
45

Los parmetros calculados son: Hematocrito (Hct), Hemoglobina corpuscular media (HCM) y
concentracin
corpuscular
media
(CHCM
46

1.2. CUENTA DE RETICULOCITOS.

Los eritrocitos anucleados que contienen organelos y un sistema ribosmico extenso para
sintetizar hemoglobina, se conocen como reticulocitos, los cuales son retenidos de dos a tres
das en mdula sea y despus permanecen otro da en la circulacin perifrica, indicando la
actividad eficaz de la mdula sea para producir eritrocitos.
MATERIAL.
2 Tubos de ensayo por equipo
1 Bao mara por equipo
1 Termmetro por equipo
Aceite de inmersin.
1 Microscopio por equipo
REACTIVOS:
Azul cresil brillante
PROCEDIMIENTO:
1. En el tubo de ensaye colocar 2 gotas de azul de cresil brillante con dos gotas de sangre
homogenizada y mezclar nuevamente.
2. Incubar la mezcla por 10 min. en el bao Mara a 37 C
3. Transcurrido el tiempo preparar una extensin por el mtodo transversal de la siguiente
manera:
Coloque una gota de la siguiente preparacin de 2 a 3 mm de dimetro en el borde
de un portaobjetos.
Coloque el otro portaobjetos sobre la gota en un ngulo de 45 y deje que se
distribuya por capilaridad.
Extienda la sangre en forma transversal hacia el otro extremo de portaobjetos.
Una ambos portaobjetos para que la sangre se extienda homogneamente a lo
ancho de la superficie.
Deslice el portaobjetos de arriba para retirar el exceso de sangre quedando una
pelcula delgada.
Secar y observar a inmersin.
4. Los reticulocitos s observarn de color azul, con material reticular citoplasmtico de
color azul intenso.
5. Contar 1000 eritrocitos y los reticulocitos que se encuentran entre ellos, o bien, contar el
nmero de reticulocitos que hay en 10 campos
47

CALCULOS.
Nmero de reticulocitos contados
% de reticulocitos =
________________________________________________
x 100
Nmero de clulas contadas.
Nmero de reticulocitos contados

% de reticulocitos =
_________________________________________________
Nmero de campos recorridos (10)

% de reticulocitos.
No. absoluto de restis. =
________________________
( Nmero de eritrocitos / mm3 ).
100
PRECAUCIONES:
Agregar la cantidad de sangre y colorante indicadas para evitar dificultad al examinar las
preparaciones.
Asegurarse que las clulas en el frotis se encuentran distribuidas homogneamente para
evitar que los campos tengan un nmero confuso de eritrocitos.
No se debe de contar dos veces la misma clula.
La sangre a utilizar debe mezclarse perfectamente para no alterar el resultado.
VENTAJAS:
Es un mtodo econmico.
La preparacin del complejo RNA-colorante no requiere temperatura estrictamente
controlada.
El mtodo utilizado para la realizacin del frotis asegura una distribucin ms uniforme
que cualquier otro mtodo.
DESVENTAJAS:
Debido a nmero de eritrocitos que se deben de contar el error es relativamente grande.
Si no se eligen adecuadamente los campos se pueden contar un mayor o menor nmero
de reticulocitos.
48

VALOR DE REFERENCIA.
VALOR RELATIVO.
0.5 a 1.5 %
HOMBRES Y MUJERES
EN EL S.I.
0.005 a 0.015
REPORTE DE RESULTADOS:
FECHA: ___________________
PACIENTE: ______________________________________________________________
DOCTOR(A): _____________________________________________________________
EXAMEN: _______________________________________________________________
RESULTADO
Eritrocitos (millones) m/ml
Hemoglobina (g/dL)
Hematcrito (%)
HCM (pg)
CmHb (%)
VCM mm 3 VGM (fl)
VSG (mm/hr)
HOMBRES
5.5 - 6.3
15 - 20
46 - 56
27 - 34
32- 34
84- 95
0- 7
MUJERES.
4.1 - 5.7
12.5 - 16.5
39 - 50
27 - 34
30 - 34
78 - 103
0 - 13
RESULTADO
Reticulocitos (%)
Plaquetas (x mm 3 ) ml
Leucocitos (x mm 3 ) ml
FORMULA DIFERENCIAL
MIELOCITOS
METAMIELOCITOS
EN BAMDA
SEGMENTADOS
NEUTROFILLOS
EOSINOFILOS
BASOFILOS
LINFOCITOS
MONOCITOS
HOMBRES
MUJERES
0.5 - 1.5
0.5- 1.5
150,000 - 450,000
4,000 - 12000
RESULTADOS CIFRAS RELATIVAS
(%)
(%)
0
02
0 11
40 74
40 85
07
03
12 46
1 13
49

FORMULA DIFERENCIAL
MIELOCITOS
METAMIELOCITOS
EN BAMDA
SEGMENTADOS
NEUTROFILLOS
EOSINOFILOS
BASOFILOS
LINFOCITOS
MONOCITOS
RESULTADOS CIFRAS ABSOLUTAS

(Clulas/ L)
(Clulas/ L)
0
10-500
100-800
2 000-6 000
1 500-7 000
100 -200
10-20
1 000 -4 200
100-800
OBSERVACIONES:
Anormalidades de eritrocitos:
Anormalidades de leucocitos:
Anormalidades de plaquetas:
ATENTAMENTE
_________________________________
BIBLIOGRAFA
Mosby USA.
3. Rapaport I. Samuel (1988) Introduccin a la Hematologa, 2. Edicin. Mxico Salvat Editores.
50

PRACTICA No. 6
DETERMINACION DE HIERRO SERICO E INDICE DE SATURACION DE HIERRO (TIBC) COMO
APOYO AL DIAGNOSTICO DE LA ANEMIA FERROPENICA.
DETERMINACION DE HIERRO SERICO
OBJETIVO.
Las determinaciones de hierro no saturado en suero (UIBC), combinada con el hierro srico, es
una herramienta diagnstica til para la determinacin de varios trastornos relacionados con el
hierro. El valor combinado de UIBC con el hierro en suero da un valor para la capacidad de
fijacin del hierro total (TIBC). Esto representa la concentracin mxima de hierro que las
protenas del suero pueden fijar. Los niveles sricos de UIBC varan en los trastornos del
metabolismo del hierro, donde las capacidades de fijacin de hierro con frecuencia aumentan
en una deficiencia del mismo, y disminuyen en trastornos de inflamacin crnica o tumores
malignos.
INTRODUCCION.
El factor causal es la deplecin de los depsitos de hierro por una discrepancia entre los
requerimientos y la ingesta.
En adultos, la prdida crnica de sangre es la causa ms frecuente de anemia ferropnica; sta
puede ser fisiolgica, por ejemplo, la menstruacin o los embarazos mltiples, o patolgica
como las prdidas gastrointestinales por ulceraciones, parsitos o neoplasias.
Las alteraciones del tracto gastrointestinal como la aclorhidria o la diarrea crnica, pueden
tambin producir anemia ferropnica por una alteracin en el mecanismo de absorcin del
hierro. As mismo, durante el embarazo existe un cierto grado de anemia hipocrmica causado
por una aumento de la demanda por parte el feto acompaado de un incremento del vlumen
sanguneo circulatorio.
Los nios, a menudo, presentan anemia ferropnica en los periodos de rpido desarrollo por un
aumento de las demandas debido al constante crecimiento de los tejidos
La anemia ferropnica por deficiencia nutricional pura puede observarse en nios y adultos que
siguen una dieta exclusivamente lctea, con rechazo de otro tipo de alimentos ricos en hierro.
51

Los sntomas de la anemia ferropnica son similares a los de los otros tipos de anemias. Existe
debilidad, cansancio, palidez, disnea de esfuerzo, sntomas vagos gastrointestinales e incluso
malabsorcin. El comienzo suele ser insidioso. La piel, las mucosas y las uas estn plidas por la
disminucin de la hemoglobina circulante. Si la anemia es de larga duracin puede encontrarse
la atrofia de las papilas linguales. Habitualmente se busca una deficiencia de hierro en presencia
de anemia, aunque la evidencia de los depsitos disminuidos sea previa a la anemia. El mejor
ndice de screeninges la ferritinemia, ya que la nica causa de su disminucin es el dficit de
hierro
Hemoglobina: La hemoglobina contiene el 65% del hierro corporal total, un 45 % se encuentra

en la mioglobina, un 10% en enzimas que contienen hierro no hmico y un 30% en depsito
(ferririna, hemosiderina). Unicamente en pequeas cantidades se encuentra en forma circulante
(trransferrina).
Ferritina: La ferritina constituye la principal forma de depsito del hierro en el hgado, bazo y
mdula sea. La procedencia de la ferritina srica es desconocida, pero parece que proviene del
sistema reticuloendotelial. Los niveles sricos de ferritina son proporcionales al hierro medular
e inversamente proporcionales a la transferrina. En el hombre adulto una ferritinemia por
debajo de 12-15 ng/mL se asocia a deficiencia de hierro y depsitos disminuidos, lo mismo
ocurre en la mujer por debajo de 10 ng/mL.
Hierro srico y capacidad de fijacin de hierro: El hierro srico se encuentra ampliamente
nido a la transferrina a razn de dos molculas de hierro por molcula de protena. El
coeficiente de variacin del hierro srico a lo largo del da es del 30 %. Las cifras matinales son
un 30 % superiores a las vespertinas y los niveles disminuyen as mismo antes del ciclo
menstrual. La concentracin srica de hierro es de 150-250 } ug/dL oscilando los niveles
normales en adultos entre 60 y 200 ug/dL, con cifras ligeramente superiores en hombres que en
mujeres.
52

Transferrina: La transferrina procede de la sntesis heptica y tiene una vida media plasmtica
de 8 das. Su coeficiente de variacin es del 8 % . Los niveles medios para el hombre son de 350
50 pg/dL y para la mujer de 380 70 n g/dL. La mayor parte del hierro no incorporado a la
hemoglobina va unido a la transferrina.
FUNDAMENTO
El hierro srico est ligado a la transferrina, pero slo un tercio de su capacidad est saturada.
La capacidad de fijacin no saturada de la transferrina o capacidad de fijacin residual (CFR) es
indicativa de la disponibilidad de los receptores de fijacin sricos. La cantidad de hierro que la
transferrina srica puede fijar cuando se halla completamente saturada con un exceso de Fe3+
es la capacidad de fijacin total (CFT). El mtodo1,2 mide la CFT saturando primero la
transferrina con un exceso de Fe3+. El hierro sobrante es adsorbido con carbonato magnsico y
una vez el proceso de fijacin se ha completado se elimina ste por centrifugacin y se procede
a determinar el hierro en el sobrenadante. La cifra hallada corresponde a la CFT.
Cuando la determinacin del hierro srico se efecta al mismo tiempo que la CFT y el resultado
se resta del valor de la CFT, la diferencia da la capacidad de fijacin libre (CFL), o transferrina
srica no fijada al hierro.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS
R1 Solucin de hierro. 500 g/dL Fe3+ ( 89,5 mol/L)
R2 Carbonato magnsico. Carbonato de hidrxido magnsico.
Polvo.
Kit auxiliar Hierro FerroZine 1135005.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS

Los reactivos estn listos para su uso.
MUESTRAS
Suero o plasma heparinizado libre de hemlisis. Centrifugar la muestra a la mayor brevedad
posible. El ensayo debe efectuarse a partir de una muestra matinal y tras la abstencin con
varios das de anterioridad de medicamentos con un contenido de hierro, as como de
anticonceptivos. La capacidad de fijacin de hierro srica es estable 7 das a 2-8C.
INTERFERENCIAS
Lipemia y hemlisis pueden afectar los resultados.
Bilirrubina (< 20 mg/dL) no interfiere.
Otros medicamentos y sustancias pueden interferir3.
53

EQUIPO ADICIONAL
. Adsorcin
Pipetas con puntas de plstico desechables.
Tubos de centrfuga, libres de hierro.
Agitador vortex.
Centrfuga de sobremesa.
II. Colorimetria
Kit para la medicin de HierroTotal.
Fotmetro o colormetro para mediciones a 560 20 nm.
TECNICA
I. Adsorcin
1. Pipetear en tubos de centrfuga desechables:
2. Mezclar y dejar reposar 5-20 minutos a temperatura ambiente.

3. Aadir a cada tubo una cucharilla (aprox. 100 mg) de R2 y dejar reposar 30 minutos,
mezclando vigorosamente a intervalos de 5 minutos.
4. Centrifugar 10 min a 3000 r.p.m.
5. Decantar el sobrenadante claro.
II. Colorimetra
1. Equilibrar los reactivos del kit de hierro a temperatura
ambiente y proceder a determinar la concentracin de hierro a
partir de una alcuota del sobrenadante.
CALCULOS
Efectuado el ensayo de hierro srico (HS) siguiendo la descripcin del folleto tcnico del kit se
calculan los resultados como sigue:
Capacidad de fijacin total (CFT)
CFT = g/dL sobrenadante x 3 (Factor Dilucin).
Capacidad de fijacin residual (CFR) CFT-HS
54

REFERENCIAS
1. Zak, B. y Epstein, E. Clin. Chem. 11 : 641 (1965).
2. International Committee for Standardization in Hematology.
3. The measurement of total and unsaturated iron binding capacity in serum. Br. J. Haematol.
38 : 281-290, 291-294 (1978).
4. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 5 th ed. AACC Press, 2000.
5. Tietz. N.W. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd Edition.
6. W.B. Saunders Co. Philadelphia, PA. (1995).
7. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., p. 1578 (1986).
8. Stookey, L.L., Ferrozine-A New Spectrophotometric Reagent for Iron, Anal. Chem. 42, 779
(1970).
9. Artiss, J.D., Vinogradov, S., Zak, B., Spectrophotometric Study of Several Sensitive Reagents
for Serum
10. Iron, Clin. Biochem. 14, 31-315 (1981).
11. Higgins, T., Novel Chromogen for Iron Determinations, Clin. Chem. 27, 1619 (1981).
12. Artiss, J.D., Strandbergh, D.R., Zak, B., Study of Continuous Flow Automation for Serum Iron
on
13. Comparing Several Sensitive Reagents, Microchemical Journal, 28, 275-284 (1983).
14. Duffy, J.R., Gaudin, J., Copper Interference in the Determination of Iron in Serum using
Ferrozine, Clin.
15. Biochem. 10, 122-123 (1977).
16. Young, D.S., Effects
55

PRACTICA No. 7
HEMOGLOBINA LIBRE EN PLASMA Y FRAGILIDAD ERITROCITARIA A SOLUCIONES HIPOTNICAS.
OBJETIVO.
Que alumno aprenda a determinar la presencia de hemoglobina libre en suero o plasma y as
como la fragilidad eritrocitaria a soluciones hipotonicas y su utilidad para el diagnostico de
hemlisis intravascular
1. INTRODUCCION.
1.1. FRAGILIDAD ERITROCITARIA A SOLUCIONES HIPOTNICAS. Las anemias hemolticas se
caracterizan por:
1) el acortamiento de la supervivencia normal de los hemates, es decir, la destruccin
prematura de los hemates;
2) la acumulacin de los productos del catabolismo de la hemoglobina,
3) un notable aumento de la eritropoyesis en la mdula sea, en un intento de compensar la
prdida de hemates que se manifiesta clnicamente por aumento del ndice de formacin de
reticulocitos a ms del triple de lo normal. Los hemates viven normalmente de 90 a 120 das en
la sangre circulante.
La hemlisis intravascular se manifiesta por:
1) hemoglobinemia;
2) hemoglobinuria;
3) metahemalbuminemia;
4) ictericia,
5) hemosiderinuria.
Las pruebas de laboratorio se pueden emplear para demostrar la existencia de hemlisis y para
comprobar su causa. El aumento del nmero de reticulocitos en un paciente anmico es el
indicador ms til de la hemlisis, pues refleja la hiperplasia eritroide de la mdula sea. (Los
reticulocitos se elevan tambin en los pacientes que estn perdiendo sangre rpidamente, en
los que tienen mieloptisis y en los que se estn recuperando de una depresin de la
eritropoyesis). Los frotis de sangre perifrica suelen anormales y puede aportar signos tanto de
la propia hemlisis como de su causa. Aunque un frotis de sangre perifrica casi nunca permite
descubrir datos verdaderamente patognomnicos, es un recurso de bajo coste que muchas
veces proporciona pistas importantes para sospechar la presencia de hemlisis y para el
diagnstico.
56

Los hemates pueden ser eliminados prematuramente de la circulacin por los macrfagos
(bazo e hgado) lisis extravascular siempre que los hemates resultan lesionados, se convierten
extraos o se vuelven menos deformables o, con menos frecuencia, al romperse su
membrana durante su trnsito por la sangre hemlisis intravascular. Ambos mecanismos
producen aumento del catabolismo del hemo y mayor formacin de bilirrubina no conjugada lo
bastante alta como para producir ictericia fcil de observar. La concentracin de bilirrubina no
conjugada (indirecta) puede elevarse todava ms si existe un defecto del transporte de la
bilirrubina (sndrome de Gilbert). En los pacientes con hemlisis, la bilirrubina no conjugada
nunca supera el nivel de 4 a 5 mg/dL, salvo que haya deterioro de la funcin heptica.
La haptoglobina es una alfa-globulina que se eleva mucho (aproximadamente 1.0 g/L) en el
plasma (y el suero) y que se fija a la protena de la hemoglobina (la globina). El complejo
hemoglobina-haptoglobina es depurado en cuestin de minutos por el sistema mononuclearfagoctico. En los pacientes con hemlisis significativa, sea intravascular o extravascular es
caracterstico un descenso de la haptoglobina srica. La sntesis de haptoglobina est
disminuida en los pacientes con enfermedades hepatocelulares, y aumentada en los procesos
inflamatorios. La hemlisis intravascular provoca la suelta de hemoglobina en el plasma; la
hemoglobinemia aumenta paralelamente a la intensidad de la hemlisis. Si la cantidad de
hemoglobina liberada supera la capacidad de fijacin de la haptoglobina del plasma, la
hemoglobina libre restante atraviesa los glomrulos. Una vez filtrada, la hemoglobina se
reabsorbe en el tbulo proximal y es catabolizada por las clulas tubulares; el hierro del hemo
resultante se incorpora a las protenas de depsito (ferritina y hemosiderina). La presencia de
hemosiderina en la orina, que se descubre tiendo el sedimento urinario con azul de Prusia,
indica que existe una considerable cantidad de hemoglobina libre circulante que se ha filtrado
en el rin. La hemosiderina aparece 3 a 4 das despus de comenzar la hemoglobinuria y puede
persistir durante semanas despus de haber cesado aqulla. Cuando se supera la capacidad de
absorcin de las clulas tubulares aparece hemoglobinuria. La existencia de hemoglobinuria es
un signo de hemlisis intravascular intensa.
FUNDAMENTO.
La prueba se basa en la actividad tipo peroxidasa de las hemoprotenas tales como la
hemoglobina. Esta puede ser detectada por medio de una reaccin en la que toman parte el
perxido de hidrgeno y un indicador como la ortotoluidina o la bencidina.
MATERIAL BIOLGICO.
1 mL de suero, plasma u orina.
REACTIVOS.
1. Bencidina al 1% (el reactivo es estable por dos semanas en refrigeracin y frasco
obscuro.
- Bencidina base.1g
57

- Ac. Actico Glacial.90mL

- Agua Destilada..100mL
2. Agua oxigenada al 1%
- Agua oxigenada al 30%.....1mL
- Agua destilada cbp.. 29mL
3. Estndar de hemoglobina de concentracin conocida.
4. Solucin diluyente
- cido Actico Glacial..10mL
- Agua Destilada cbp100mL
MATERIAL.
- Recolectar sangre coagulada o sin anticoagulante para obtener 1ml del producto
biolgico, centrifugar a 3000rpm durante 10 minutos, separar el plasma o suero.
- En caso de que el producto biolgico presente coloracin diluir 1:10, 1:20 hasta
que el color no interfiera en la lectura.
Proceda de acuerdo al siguiente esquema.
-
Mezclar los tubos despus de aadir la bencidina
TUBO
Paciente
Estndar Hg
Blanco
-
SUERO
10uL
0
0
ESTANDAR
0
10uL
0
BENCIDINA
500uL
500uL
500uL
H2O2 AL 1%
500uL
500uL
500uL
Mezclar nuevamente los tubos despus de aadir el perxido de hidrgeno y dejar reposar a
temperatura ambiente 20 minutos.
Agregar a cada tubo 5 mL de solucin diluyente, mezclar por inversin y dejar reposar 10 minutos.
Leer en fotmetro a 492nm, frente al blanco.
CLCULOS.
HEMOGLOBINA LIBRE EN mg/dL= (Abs. Problema/ Abs. Estndar) X Conc. Estndar
NOTA: SI SE REALIZ ALGUNA DILUCIN TOMARLA EN CUENTA PARA EL CLCULO.
LMITES BIOLGICOS DE REFERENCIA.
Suero o plasma: hasta 5mg/dL
Orina: 0mg/Dl
58

1.2. FRAGILIDAD A LAS SOLUCIONES HIPOTNICAS

FUNDAMENTO: Al estar los eritrocitos a concentraciones cada vez menores de sal, estos se van
llenando con agua y se lisan. Eritrocitos que tengan una estructura defectuosa de su membrana,
se lisaran primero o antes del testigo que tiene una estructura normal. ste anlisis es parte de
un estudio para anemias hemolticas hereditarias.
ESPECMEN.
De 4 a 5ml de sangre con EDTA con anticoagulante al 7.5%. Debe tomarse un testigo para la
buena interpretacin de los resultados.
REACTIVOS Y EQUIPO:
Solucin salina (cloruro de sodio) al 0.85% y 0.9%, espectrofotmetro, tubos y pipetas.
TCNICA:
1. En una gradilla poner 15 tubos de 15 x 100mm. En el primero pipetear 2ml de solucin
salina, en el segundo 2.5ml, aumentar 0.5ml en cada tubo, en el tubo 14 poner 8.5ml de
solucin salina solamente, en el tubo 15 poner 8.5ml de solucin salina al 9.0%.
2. Completar a 8.5ml. el volumen de cada tubo con agua destilada desionizada. La
concentracin final de NaCl y los volmenes se ven en la siguiente tabla:
TUBO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
SOL. SALINA (ml)

2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
7.0
7.5
8.0
8.5
8.5
H2O
6.5
6.0
5.5
5.0
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
0,0
CONC. NaCl (%)

0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
0.65
0.70
0.75
0.80
0.85
0.90
59

3. Colocar en la misma gradilla y por delante de los tubos anteriores, dos series de tubos de
15 x 100mm. Numerar los tubos del 1 al 12 y marcar T para el testigo y P para el
problema.
4. Pasar de la serie de tubos de la mezcla con agua y solucin salina, 3ml al tubo
correspondiente.
5. Con una pipeta Pasteur, poner una gota de sangre en cada tubo, la sangre deber estar
mezclndose continuamente antes de agregar la gota (T para testigo, P para problema).
6. Agitar cada tubo con las manos, con golpes laterales. Dejar los tubos en reposo a
temperatura ambiente durante 30-60min.
7. Centrifugar los tubos a 1500rpm, durante 3 minutos, cuidando de no darle a los tubos
movimientos bruscos despus de centrifugar.
8. Leer tanto en la serie testigo y en la problema, en que tubo se inicia la hemlisis
(hemlisis inicial) y en cual ya no existe el botn de eritrocitos (hemlisis completa). Ver
en el cuadro anterior a que concentracin de NaCl pertenece, tanto la hemlisis inicial
como la completa.
Ejemplo:
HEMLISIS INICIAL
0.50%
0.60%
TESTIGO
PROBLEMA
VALORES DE REFERENCIA: 0.45% - 0.50%
HEMLISIS FINAL
0.30%
0.45%
0.30% - 0.40%
Si se requiere ser ms preciso, puede leerse en el espectrofotmetro a 420nm. La absorbancia y

graficar la hemlisis como en las graficas anexas. Usar solucin salina como blanco. Grfica de
preferencia el porcentaje de hemlisis contra la concentracin en gramos (% de NaCl).
120
100
80
60
40
20
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
60

61

BIBLIOGRAFA
1. Bick L. Roger, M.D. (1993) Hematology Clinical and Laboratory Practice Tomo I y
II Editorial Mosby USA.
2. Carrillo, F.A. (1992), Hematologa Casos Clnicos 2. Edicin Editorial
Interamericana MckGraw Hill. Mxico.
3. Rapaport I. Samuel (1988) Introduccin a la Hematologa, 2. Edicin. Mxico
Salvat Editores.
6. Kaplan. L.A. Pesce. A.J. (1986). Tcnicas de Laboratorio, Fisiopatologa, Mtodos
de Anlisis. Editorial Panamericana Espaa.
7. Sans J. Sabafen J. (1988): Hematologa Clnica 2. Edicin. Eitorial Doyma S.A.
Espaa.
9. Ruiz A. G.J. Fundamentos de Hematologa: 3 Edicin. Edit. Panamericana.
Mexico 2003.
11. Crosby WH, Furth FW. A modification of the benzidine method for the
measurement of hemoglobin in plasma and urine. Blood 1956; 11:380.
12. Hanks GE, Cassell MRN, Chaplin JR. further modification of the Benzidine method
for measurement of hemoglobin in plasma. J Lab Clin Med1960; 56:486.
62

PRACTICA No. 8
ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA E INDUCCION DE DREPANOCITOS EN EL DIAGNOSTICO DE LAS
HEMOGLOBINOPATIAS.
OBJETIVO. Que el alumno aprenda a realizar e interpretar la electroforesis de hemoglobina y la

induccin de drepanocitos y su aplicacin como pruebas auxiliares en el diagnostico de las
hemoglobinopatas.
1. INTRODUCCION:
1.1. ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA
Esta protena hemtica forma cuatro cadenas polipeptdicas (globina) a cada una de ellas se les
adhiere un grupo hemo, cuyo tomo de hierro se une reversiblemente al oxgeno. Su misin es
la del transporte de oxigeno, que previamente llegaron a los alvolos y desde alli a los capilares
sanguneos para su difusin a favor de las clulas; asimismo, la hemoglobina tambin
transportar el dixido de carbono, que es resultado y desecho del proceso productivo de
energa, que por gradiente de presin, va llevado desde las clulas hasta el alvolo, donde se
expulsa en cada espiracin.
El anlisis de hemoglobina se realiza normalmente como parte en un estudio hematimtrico
completo, donde constar el recuento de hemates. Esta prueba analtica, en la que se mide la
cantidad total de hemoglobina en la sangre, hace parte, con frecuencia, de un conteo sanguneo
completo (CSC), donde se incluye el nmero de hemates, el nmero de leucocitos, la cantidad
total de hemoglobina en la sangre, la fraccin de la sangre compuesta de glbulos rojos (
hematocrito) y el tamao de los hemates (volumen corpuscular medio, VCM); incluyndose,
igualmente, en este CSC informacin analticas referente a los como es la de la HCM
(hemoglobina corpuscular media) y la CHCM (concentracin de hemoglobina corpuscular
media)
El mdico suele pedir esta informacin analtica, en cuanto a los niveles de hemoglobina, en
patologas como de anemia hemoltica u otra condicin que precise de su conteo y observacin.
Los valores normales de la Hb La hemoglobina vara segn la altitud en la que se encuentra un
individuo; no obstante, podemos usar como referencia los siguientes intervalos:
Hombre: de 13,8 a 17,2 mg/dl
Mujer: de 12,1 a 15,1 mg/dl
63

Resultados anormales de la Hb
Cuando el nivel de hemoglobina se encuentra por debajo de los niveles normales se
observa una anemia por diferentes causas:
Anemias primarias Cncer Embarazo Enfermedades renales Enfermedades autoinmunes
Hemorragias Linfomas Problemas de alimentacin
Asimismo, un nivel bajo de hemoglobina va acompaado de un nivel bajo de
hematocrito.
Sin embargo, cuando el nivel de hemoglobina es alto la causa es debida a:
Cardiopatas Deshidratacin Enfermedades pulmonares crnicas Estancias en lugares de
mucha altitud
La electroforesis de hemoglobina
La electroforesis de hemoglobina es un examen en el que se mide los distintos tipos de
hemoglobina en la sangre. La razones por las que se realiza este examen es cundo existe
sospecha de un problema asociado con formas anormales de hemoglobina, lo que se conoce
como hemoglobinopata.
A pesar de haberse descrito muchas molculas desiguales de hemoglobina, las ms frecuentes
son HbA, HbA2, HbF, HbS, HbC, Hgb H y Hgb M. En el caso de los adultos normales, slo la HbA y
la HbA2, se puede decir que estn presentes en niveles significativos. Se pueden dar pequeas
cantidades de HbF, la Hb de mayor presencia en el feto, pero no causan efectos, a no ser que
sus valores superen al 2% del total.
La HbS es una forma anormal que se da en presencia de anemia de clulas falciformes. Esta
forma grupos en presencia de bajas concentraciones de oxgeno, con lo que los hemates
adquieren formas falciformes, llegando a destruir y taponar pequeos vasos sanguneos.
La HbC es una forma anormal de hemoglobina que se suele dar ante las anemias hemolticas,
siendo la sintomatologa ms leve que en los casos de anemia de clulas falciformes.
Por ltimo, decir, que las otras molculas de hemoglobinas anormales, menos comunes, estn
relacionadas a las anemias con grados diversos en cuanto a gravedad se trata.
64

En los adultos estas molculas de Hb hacen el total hemoglobina:

Hgb A1: 95% a 98%
Hgb A2: 2% a 3%
Hgb F: 0,8% a 2%
Hgb S: 0%
Hgb C: 0%
Sin embargo, en los nios estas molculas de hemoglobina hacen el total de hemoglobina:
En el recin nacido:
Hgb F ....50% a 80%
En un nio de 6 meses:
Hgb F ..... 8%
En el nio de ms de 6 meses:
Hgb F: 1% a 2%
Interpretacin de los resultados anormales
La presencia significativa de Hb anormales pueden deberse a una enfermedad por hemoglobina
C, una anemia de clulas falciformes o a hemoglobinopatas raras.
1.2. INDUCCIN DE DREPANOCITOS.
La enfermedad de clulas falciformes o drepanocitosis constituye la forma ms frecuente y
mejor conocida de hemoglobinopata estructural. Es muy frecuente en la raza negra y afecta
aproximadamente al 10% de la poblacin americana y a ms del 40% de algunas poblaciones del
continente africano. Clnicamente se caracteriza por anemia, dolores seos y articulares, lceras
en piernas y crisis dolorosas. Genticamente se transmite como un rasgo autosmico
dominante incompleto. La hemoglobina S (HbS) resulta de la sustitucin de un aminocido con
carga (c. glutamico), situado en la sexta posicin de la cadena , por otro neutro (valina). Esta
modificacin de la carga superficial de la hemoglobina disminuye la solubilidad de la Hb,
especialmente en su estado reducido (deoxi-Hb), y facilita la formacin de agregados fibrilares o
polmero de molcula de Hb que alteran profundamente la morfologa eritrocitaria y aumentan
su rigidez. Los hemates deformados por este mecanismo, reciben el nombre de drepanocitos y,
debido a su elevada rigidez, no pueden atravesar normalmente la microcirculacin de los
tejidos, siendo hemolizados y eliminados de la misma por los macrfagos del sistema
mononuclear fagoctico. Igualmente, la escasa deformabilidad de los drepanocitos produce
aumento de la viscosidad sangunea, facilita la formacin de microtrombos y oclusin de los
pequeos vasos (isquemia y microinfartos). La hemoglobinopata S puede existir bajo 4 formas
diferentes:
-
Forma heterocigota o rasgo falciforme (HbAS). Aparece cuando la mutacin afecta a

uno solo de los alelos que codifican la cadena (A/ S). En este caso, el paciente
tiene un 30-40% de HbS y no presenta manifestaciones clnicas.
65

Forma homocigota o anemia falciforme (HbSS). Aparece cuando la mutacin afecta

a los 2 alelos del gen correspondiente a la cadena ( S/ S). En estos casos
prcticamente todos la Hb (75- 95%) es Hb S, siendo el resto (5-15%) F. Presenta
graves sntomas clnicos.
Forma doble heterocigota HbS-talasemia (HbS-Tal). Aparece cuando en el mismo
paciente coexisten 2 alelos anormales, uno para la HbS y otra la -talasemia
(S/tal). Si la sntesis a nivel del gen talasemico es nula (0-tal), la cantidad de HbS
ser prcticamente la misma que en el estado homocigoto (70-90%). Si, por el
contrario, slo presenta una disminucin en el gen talasmico (+- tal), se observa la
coexistencia de HbA (10-30%), HbS (60-85%), y una pequea proporcin de HbF (5%).
No son tan graves como las formas homocigotas HbSS y predominan en el rea
mediterrnea ms que en la raza negra.
Forma doble heterocigota HbS-HbC (HbSC). Se debe a la coexistencia de 2 alelos
anormales. Un alelo codifica la sntesis de HbS y el otro, la sntesis de HbC (S/C).
No existe HbA y presencia de cantidades similares de HbS y HbC (50%). La expresin
clnica suele ser menos severa.
Otras formas de asociacin de HbS con distintas hemoglobinopatas pueden tener
una variabilidad clnica diversa. La deteccin al nacimiento, educacin, profilaxis con
penicilina, vacunas, etc., deben disminuir la morbi-mortalidad.
FUNDAMENTO.
Por el sellado de parafina del tubo que contiene los eritrocitos y la accin reductora del
metasulfito de sodio, se produce un descenso de la tensin de oxgeno en dichas clulas. Como
consecuencia de esto los eritrocitos que contienen HbS y los que contienen HbH (Harlem), HbG
(Georgetum), Hb Bart^s Alexandra y Hb Memphis, adoptan la forma semicircular o de
drepanocitos.
MATERIAL BIOLOGICO.
1. 3mL de sangre con anticoagulante EDTA, del paciente.
2. 3mL de sangre con anticoagulante EDTA, del testigo.
REACTIVOS.
1. Metasulfito de Sodio al 2% recin preparado, (disolver 0.2g de Metasulfito de Sodio en
10ml de agua destilada).
66

TECNICA.
- Sobre un portaobjetos depositar una gota de sangre problema y una o dos gotas de
metasulfito de Sodio al 2%
- Mezclar con aplicador de madera y colocar un cubreobjetos. Con varilla de vidrio,
calentada previamente, sellar los bordes del cubreobjetos con parafina fundida.
- Hacer lo mismo con un testigo normal.
- Examinar al microscopio a las 2 y a las 24 horas para investigar la presencia de
drepanocitos. Informar negativa o positiva.
INTERPRETACION.
Positivo: presencia de clulas en forma semicircular o de drepanocitos.
BIBLIOGRAFIA.
Mosby USA.
Editores.
11. Daland, GA, Castle WB. A simple and rapid method for demostrating sickling of red blood
cells: the case of reducind asents. J. Lab. Clin. Med. 33:1085, 1948.
67

PRACTICA No. 9
OBSERVACION DE LAMINILLLAS DE SANGRE PERIFERICA Y MEDULA OSEA CON DISTINTOS TIPOS DE
ANEMIAS.
OBJETIVO: Que el alumno aprenda a diferenciar las diferentes alteraciones morfolgicas que se
presentan en las diferentes anemias para su posterior aplicacin en el diagnostico de las
mismas.
INTRODUCCION. Las anormalidades morfolgicas de los eritrocitos se presentan en tres
categoras: Anormalidades en el tamao, anormalidades en la forma y anormalidades
citoplasmticas.
68

ANORMALIDADES EN EL TAMAO.
Como se anot anteriormente el dimetro de la clula roja oscila entre 6.2 - 8.2 micras con un
tamao promedio de 7.2 micras.
Cuando patolgicamente se aumenta o disminuye dicho dimetro el resultado ser:
Macrocitos: Son eritrocitos con dimetro superior a 8.5 micras. La macrocitosis est usualmente
acompaada de un PVC por encima de 100 fL. Su aparicin puede estar asociada a: Deficiencia
de vitamina B12 y/o cido flico. Estrs medular cuando hay eritropoyesis acelerada. Trastornos
hepticos. Es importante anotar que normalmente los extendidos de sangre perifrica de
neonatos se caracterizan por presentar una macrocitosis significativa.
MACROCIT
NORMOCIT
MICROCIT
O
O
O
Microcitos: Recibe este nombre el glbulo rojo que presenta un dimetro inferior a 6.0 micras,
la microcitosis est usualmente acompaada de un PVC por debajo de 75 fL. Se observan
microcitos en entidades que cursan con alteraciones cuantitativas de la hemoglobina como son
las anemias por deficiencia de hierro y las talasemias. Generalmente los microcitos se
acompaan de bajo contenido de hemoglobina por lo cual se denominan microcitos
hipocrmicos.
Megalocitos: Son los grandes macrocitos ovales, clulas donde se combina una alteracin del
tamao y de la forma, pueden llegar hasta tener 12 micras de dimetro. Caractersticamente se
observan
en
anemias
megaloblsticas.
MEGALOCI
TO
NORMOCIT
O
69

ANORMALIDADES EN FORMA
Equinocito : Caractersticamente aparece como una clula dentada que presenta sobre su
superficie pequeas progresiones redondeadas a manera de bombas o vesculas de tamao

uniforme y simtricamente distribuidas que con el MEB, semejan un erizo de mar.
La transformacin discocito-equinocito se puede producir in vitro por exposicin de las clulas
rojas a diversos agentes inductores tales como: suspensin de eritrocitos en salina, interaccin
con superficies de vidrio o agentes lticos (lisolecitina, saponinas, entre otros.); estos cambios
son reversibles si se elimina el agente inductor antes de que ocurra prdida del material de
membrana. Cuando son inducidos experimentalmente ocurren en fracciones de segundos, sin
compromisos del contenido hdrico ni prdida de fragmentos de membrana. Como se ha dicho,
el ATP se requiere, entre otras cosas, para el control de las bombas de transporte activo de
cationes; en particular, la carencia de ATP altera la salida de Ca++, incrementando as su
contenido intracelular, lo que a su vez acarrea una prdida selectiva de K+, salida de agua y
deshidratacin celular llamado Fenmeno Gardos.
El bombeo activo de Ca++ es crtico para la clula roja porque concentraciones elevadas de este
catin, se asocian con efectos fisiolgicos adversos as: a niveles micromolares ocurre formacin
de equinocitos como consecuenci del Fenmeno Gardos. A niveles milimolares la alteracin
compromete protenas contrctiles (espectrina y ankirina) y fosfolpidos de membrana,
generando clulas equinocticas con rigidez de membrana descritas como esfero-equinocitos
que representan el estadio terminal de la clula sobrecargada de Ca++. En resumen la carencia
de ATP y la acumulacin intracelular de Ca++ son equinocitognicos. Los equinocitos se
observan en pacientes con: Uremia, defectos del metabolismo glicoltico (deficiencia de
Piruvato Kinasa) y en algunos pacientes con anemia microangioptica.
70

Acantocito. Al microscopio electrnico esta clula se observa como una estructura densa e
irregularmente contrada. Bajo el microscopio de luz es un hemate con escasas proyecciones
espiculadas que no presentan una distribucin homognea y varan en longitud y nmero. Los
acantocitos se generan cuando las clulas rojas normales se exponen a condiciones que
modifican el contenido lipdico de su membrana, alterando la relacin colesterol libre /
fosfolpidos en ciertas zonas de membrana. Una vez producida esta forma, es irreversible. La abeta-lipoproteinemia es el paradigma de los desordenes asociados con acantocitosis, lo
contrario generalmente no es verdad. Los acantocitos tambin puede observarse en cirrosis
alcohlica con anemia hemoltica, en algunos casos de deficiencias de Piruvato Kinasa, en
hepatitis del recin nacido y despus de la esplenectoma.
Estomatocito. En los individuos normales el 3% o menos de las clulas rojas en el extendido de

sangre perifrica son estomatociticas. El estomatocito se define como una clula unicncava
que en los extendidos coloreados con Wright presenta una depresin central e longada con
apariencia de boca o estoma (de all su nombre) que sustituye el rea de palidez central
redondeada de los discos bicncavos. Es un estado transicional en la transformacin discocitoesferocito.El estomatocito de la estomatocitosis hereditaria se genera por una falla en la bomba
de Na+ - K+. Cuando la entrada de Na+ excede la perdida de K+, la clula roja progresivamente
gana cationes, agua y se hincha. De all el sinnimo de HIDROCITO, fenmeno opuesto a la
formacin de crenocitos o xerocitos acompaados de deshidratacin.
71

Esferocito
.
Cuando el discocito adopta configuracin esferoidal se llama esferocito. Clsicamente se
caracteriza como la clula que presenta una reduccin de la relacin superficie / volumen. Su
gnesis est relacionada con desrdenes hemolticos de carcter heredado o adquirido. As
dentro del grupo de los hemates esfricos se distinguen los siguientes subtipos:
Esferocitos de la Esferocitosis Hereditaria (SH):

Su formacin se asocia con dos defectos moleculares diferentes: deficiencia parcial de
espectrina (SH [Sp+]) y unin defectuosa de espectrina a la protena 4.1 (SH [Sp-4.1]). Este
desorden genera un esqueleto de membrana inadecuado que perturba la conservacin de la
biconcavidad y deformabilidad del glbulo rojo. Los esferocitos hereditarios son selectivamente
retenidos en la pulpa esplnica y despus de sufrir un nmero determinado de estos episodios
de manipulacin esplnica experimentan lisis o fagocitosis en la pulpa roja.
Esferocitos con aumento de volumen: Hidrocitos
Se presentan por una lesin bioqumica de membrana que permite un exceso de difusin
intracelular de sodio y agua. La clula para eliminar el exceso, estimula el bombeo activo del
catin, con un incremento concomitante de la gliclisis anaerobia y del ATP. El agotamiento
energtico provoca finalmente la destruccin celular por el mecanismo conocido como LISIS
OSMOTICA COLOIDAL, que caracteriza la lisis mediada por el complemento y algunas toxinas y
venenos.
Microesferocitos
Constituyen en realidad, formas preliticas que se originan por recorte simtrico o parcial de la
membrana de hemate. Son clulas con una disminucin significativa de la relacin superficie /
volumen y un aumento de la concentracin media de la hemoglobina corpuscular (PCHC),
factores que como se ha dicho determinan la deformabilidad del hemate. Los microesferocitos,
se observan en anemias hemolticas heredadas como en la SH. Se asocia tambin, con
desordenes que cursan con formacin de Cuerpos de Heinz.
72

Dianocito-codocito-Target cell.
La verdadera forma circulante es la de campana, en las extensiones convencionales sufre una
redistribucin anmala de la hemoglobina asumiendo la forma de clula blanco en diana (target
cell).
El codocito es la expresin morfolgica resultante del incremento de la relacin superficie /
volumen que bien puede darse por: Expansin de la superficie, por aumento de los lpidos de
membrana, sin cambio en el volumen, asociado a la enfermedad heptica obstructiva,
deficiencia de L.C.A.T. (Lecitin-Colesterol-Acy 1-Transferasa) y post-esplenectoma. Disminucin
de volumen por reduccin cuantitativa de la hemoglobina intracelular en entidades como
talasemia y anemia por deficiencia de hierro. Prdida selectiva de K+ y agua por defecto de
permeabilidad o carencia de ATP (Efecto Gardos). Presencia de hemoglobinas anormales tales
como S, C, D, E.
Eliptocito u ovalocito.
Es bsicamente un disco bicncavo oval con extremos redondeados, su forma vara desde una
simple distorsin ligeramente oval hasta casi cilndrica elongada con polarizacin de la
hemoglobina. En los extendidos de sangre de individuos normales, las clulas elpticas u ovales
usualmente constituyen menos del 1% de los eritrocitos. Proporciones un poco ms altas se
observan en pacientes con anemias, particularmente megaloblsticas y microcticas
hipocrmicas. La presencia de un nmero significativo de clulas elpticas (20% - 75%) en sangre
perifrica se asocia con un desorden clnico y genticamente heterogneo conocido como
ELIPTOCITOSIS HEREDITARIA (EH). El defecto bioqumico de los eliptocitos hereditarios involucra
las protenas de esqueleto de membrana.
73

Clula
falciforme
o
drepanocito.
Es una clula elongada con extremos puntiagudos o espiculados que semejan una hoz o media
luna. La patologa bsica de la transformacin falciforme est directamente ligada con la
concentracin de hemoglobina S (B6 Glu Val), que tiene la propiedad de polimerizarse en
condiciones de hipoxemia, acidosis, altos niveles de 2-3 DPG y deshidratacin del glbulo rojo.
Dacriocito
clula
en
gotera.
Se refiere este trmino a la clula roja caracterizada por una elongacin nica asumiendo una
forma periforme o gotera rasgada. Su gnesis permanece oscura. Constituye un hallazgo
ocasional en anemias megaloblsticas, talasemias y mielofibrosis.
74

Knizocito.
Deriva su nombre de loa similitud con una canasta, presenta una distribucin de la hemoglobina
a manera de banda central que deja espacios no coloreados a ambos lados. Se observa asociado
a anemias hemolticas. Su gnesis no es clara.
Queratocito
clula
mordida.
Son los hemates parcialmente fragmentados, producto de la funcin pitting del bazo, en la
que la clula pierde una porcin de la membrana sin alterar el contenido intracelular de la
hemoglobina. Al observarlos coloreados con Wright, en los extendidos de sangre perifrica,
presentan proyecciones que semejan cuernos, resultantes de la ruptura de la vacuola que se
forma alrededor del cuerpo de inclusin. Aparecen en entidades que cursan con la formacin de
cuerpos de Heinz, particularmente en la deficiencia de glucosa 6 fosfato deshidrogenasa y
talasemias.
Esquizocitos
o
esquistocitos.
Se utiliza para designar las estructuras resultantes de la fragmentacin total de la clula roja que
origina pequeos fragmentos hemoglobinizados que asumen formas raras, caprichosas,
bizarras.
Son
los
llamados
eritrocitos
contrados
irregularmente.
75

Los esquistocitos son signos de hemlisis intravascular asociados con anemias hemolticas que
ocurren por trauma fsico directo de la clula roja, estos desordenes se agrupan como anemias
micro y macroangiopticas (defecto de pequeos y grandes vasos y defectos estructurales del
corazn). Ejemplos de anemias asociadas a defectos de la microcirculacin son: la coagulacin
intravascular diseminada, sndrome hemoltico urmico, prpura trombocitopnico trombtico,
entre otros. Entre la macroangiopticas se citan las producidas por la insercin quirrgica de
prtesis valvulares, que son los ejemplos ms notables de fragmentacin celular.
INCLUSIONES CITOPLASMTICAS.
Anormalidades citoplasmticas.
Punteado basfilo: Agregados anormales de ribosomas. En sndromes talasmicos, intoxicacin
por plomo, deficiencia de hierro, sndromes que se acompaen de eritropoysis ineficaz.
Coloracin Wright.
Cuerpos de Howell Jolly. Remanentes nucleares. En asplenia y estados hipoesplnicos, anemia

perniciosa y anemias severas por dficit de hierro. Coloracin Wright.
76

Anillos de Cabot: Remanentes nucleares en forma de anillos circulares doblados sobre si

mismos o en figura de ocho. En intoxicacin por plomo, anemia perniciosa y anemias
hemolticas. Coloracin Wright.
Cuerpos de Heinz. Hemoglobina agregada o desnaturalizada. En pacientes con sndromes

talasmicos o de hemoglobinas inestables, en el estrs oxidante cuando hay deficiencias
enzimticas de la va de pentosas principalmente y pacientes con asplenia. Coloracin azul de
cresil brillante.
Siderocitos: Representan hierro no hemoglobnico dentro de los eritrocitos. Se observan

aumentados en pacientes esplenectomizados y en pacientes con infecciones crnicas, anemia
77

aplstica
en
anemias
hemolticas.
VALORACIONES EN EL CONTENIDO DE HEMOGLOBINA (COLOR)

Los eritrocitos normales tienen un PCH de aproximadamente 30 pg. En frotis teidos, el
eritrocito tiene un rea central de palidez de ms o menos la tercera parte del dimetro de la
clula. En ciertos trastornos las clulas llegan a contener menos hemoglobina de lo normal. El
nico eritrocito que dispone de ms hemoglobina de lo normal en relacin con su volumen es el
esferocito, el que carece de un rea central de palidez y se tie en forma uniformemente densa.
Normocroma: Trmino utilizado para indicar que el eritrocito contiene una cantidad de
hemoglobina igual al nivel normal determinado por la concentracin de hemoglobina
corpuscular media (PCHC).
Hipocroma: Se origina por una sntesis anormal de hemoglobina, asociada a deficiencia de

hierro, anemia sideroblstica, talasemia y anemia de las enfermedades crnicas. Se observa el
eritrocito con una mayor palidez central.
78

Hipercroma: Trmino que no representa una situacin real y que por lo tanto no se acoge.
Policromatoflia: Los eritrocitos policromatfilos (reticulocitos), suelen ser ms grandes que las
clulas normales en los frotis de sangre teidos con Romanowsky. El tinte azuloso es producido
por la presencia de RNA residual en el citoplasma. Cantidades abundantes de estas clulas se
presentan cuando hay disminucin en la supervivencia del eritrocito o hemorragia, y una
mdula sea hiperplsica eritroide.
BIBLIOGRAFIA.
Mosby USA.
Editores.
79

11. Daland, GA, Castle WB. A simple and rapid method for demostrating sickling of red blood
cells: the case of reducind asents. J. Lab. Clin. Med. 33:1085, 1948.
80

PRACTICA No. 10
CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIN DE EXTENDIDO SANGUNEO (TINCIN DE WRIGHT Y GIEMSA)
CON VALORES ABSOLUTOS Y RELATIVOS.
OBJETIVO: El alumno realizar la cuenta de leucocitos y un extendido de sangre

perifrica para identificar la morfologa de cada una de las clulas y aprender los
fundamentos de las tinciones y a obtener valores absolutos de cada uno d los
leucocitos.
1. CUENTA DE LEUCOCITOS
INTRODUCCIN.
El recuento de glbulos en la sangre es una prctica habitual en el laboratorio clnico, en el cual
se determina el nmero de eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm 3 de sangre, con la ayuda
de la cmara de Neubauer o hemacitmetro.
La cmara de Neubauer o hemacitmetro es un grueso portaobjetos de vidrio, en el centro de
su superficie se encuentra un cuadrado de 3 mm de lado dividido en 9 cuadros grandes cada
uno de 1 mm, los cuadros marcados con la letra L son utilizados para el recuento de leucocitos y
se encuentran divididos por 16 cuadros ms pequeos. El cuadro central esta dividido en 25
cuadros los marcados con la letra E son utilizados para el recuento de eritrocitos y los marcados
con P para plaquetas. Fig. (1)
Cada uno de estos cuadros se divide en 16 cuadros ms pequeos dando un total de 400 en el
cuadro central. Fig.(2)
rea total = 9 mm2.
rea de cada cuadro marcado como L = 1 mm2.
rea de cada cuadro marcado como e y P = 0.04 mm2
rea total de los cinco cuadros centrales E= 0.2 mm2.
rea de cada cuadrito marcado como e 0 0.0025 mm2.
CUIDADOS DE LA CMARA.
2.1. Debern utilizarse cubreobjetos especiales ya que los convencionales poseen superficie
irregular.
2.2 Se debe lavar la cmara con agua tibia o un pao suave empapado en alcohol.
2.3 No se deber tocar el rayado de la cmara con los dedos ya que manchan la cmara y puede
provocar errores de apreciacin
2.4 Evitar usar lienzos rgidos que puedan araar el rayado sensible de la cmara. Tomarla
nicamente por sus bordes
81

MTODO DE CONTEO.
El conteo se inicia por la parte superior de izquierda a derecha y luego de derecha a izquierda
sucesivamente, teniendo la precaucin de contar las clulas que tocan una de cualquiera de las
tres lnea como si estuvieran en los cuadros y teniendo la precaucin de no contar una clula
dos veces. Figura (3)
L
E
E
P
P
8 mm
1 mm
E
P
E
P
E
L
0.05 mm
82

.2 mm
Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de leucocitos

MATERIAL:
1 Pipeta de Thoma para glbulos blancos por equipo
1 Cmara de Neubauer o hemacitmetro por equipo
1 Boquilla o micropipeteador por equipo
Reactivos:
Diluyente para leucocitos (TURK)
PROCEDIMIENTO.
1. Llenar de sangre homogenizada la pipeta de leucocitos hasta la marca 0.5 aforando
exactamente.
2. Limpiar con papel absorbente el exterior de la pipeta.
3. Aspirar lquido diluyente de leucocitos hasta la marca 11.
4. Tapar los extremos de la pipeta y agitar manualmente. La agitacin podr hacerse con el
agitador mecnico de pipetas si se cuenta con el.
5. Limpiar la cmara, el cubreobjetos y colocar ste sobre aquella.
6. Eliminar las cinco gotas de la pipeta y con la siguiente llenar por capilaridad la cmara.
7. Despus de dos minutos observar a seco dbil, 1/10x) localizar el rea correspondiente
para contar leucocitos (cuadros L ) , y proceder a contarlos.
8. El nmero de leucocitos contados en los cuadros grandes se multiplican por el factor 50,
donde el nmero de leucocitos por milmetro cbico de sangre.
9. Si existe leucopenia es decir un nmero de leucocitos inferior a 2000, repetir la cuenta de
acuerdo con las siguientes indicaciones.
10. Llenar la pipeta con sangre hasta la marca 1 y aforar hasta 11 con el diluyente, llenar la
cmara y contar nueve cuadros, el resultado se multiplica por 11.1; si las cifras son de 2000
a 4000 se hace una dilucin 1:20, se cuentan nueve cuadros y se multiplica por 22.2
83

11. Si hay leucocitosis (ms de 50000 leucocitos/ mm3 ) se emplean pipetas de Thoma para
eritrocitos, las diluciones son de 1/100 a 1:200.
12. Con dilucin 1:100, los factores de multiplicacin seran 1000, 500, 333, 250 y 111, si se
cuentan 1,2,3,4,y 9 cuadros de la cmara.
13. Con dilucin 1:200, los factores de multiplicacin sern 2000, 1000,500, 222 si se cuentan
1,2,4, y 9 cuadros.
CLCULOS.
Para conocer el nmero de leucocitos por mm3 de sangre se aplica la siguiente frmula.
Nmero de leucocitos / mm3 =
______________________________________________
Volumen
Volumen = Dilucin x profundidad de la cmara x el rea contada.
Las diluciones para leucocitos son 1:10, 1:20
La profundidad de la cmara es de 1/10 mm
El rea contada en leucocitos es: 4 mm2 ( 4 cuadrados contados )
Por ejemplo:
Leucocitos contados 500
Cuadros L utilizados 4
Dilucin
1:20
Sustituyendo la formula:
V = ( 1/20 ) ( 1:10 ) ( 4 ) = 4/200 = 1/50 mm3
Leucocitos /
mm3

= ___________________________________ =
Volumen
500
_______
1
_______
50 mm3
=
=
En leucocitosis:
Dilucin realizada
Profundidad de la cmara
Cuadros utilizados
Leucocitos contados
500 x 50 mm3
25,000 / mm3
1/100
1/10
2
80
84

Volumen = Dilucin x profundidad x rea contada.

Volumen = ( 1/100 ) ( 1/10) ( 2 ) = 2/1000
Nmero de clulas contadas
Nmero de
Leucocitos/mm3
_________________________________
Volumen
80
80 x 1000
______
_______________
2
____
1000
80000
=
___________
= 40000/ mm3
2
CONSIDERACIONES.
El lquido diluyente de leucocitos lisa eritrocitos y es isotnica para los leucocitos.
EN HOMBRES Y MUJERES:
EN EL SISTEMA INTERNACIONAL:
4000 - 12000 Leucocitos/ mm3

4 - 12 X 109 leucocitos/L.
2. TINCIONES HEMATOLGICAS
2.1. TINCION DE WRIGHT. El recuento diferencial es una parte importante de la valoracin
hematolgica y consiste en reconocer las distintas variedades de glbulos blancos y las posibles
anormalidades celulares en un frotis de sangre teido con el colorante de Wright. Debido a que
el colorante de Wright se trata de una solucin de eosina y una mezcla de tiacinas que incluyen
el azul de metileno, el citoplasma de las clulas se tien con el colorante cido (eosina) ya que
en l, se encuentran los componentes bsicos de la clula, por otro lado, el ncleo de la clula
se tie con los colorantes bsicos (azul de metileno) ya que en el se encuentran los
componentes cidos de la clula.
MATERIAL.
1Puente de tincin por seccin
2 Portaobjetos por equipo
1 Contador de clulas por seccin
85

Agua destilada.
Aceite de inmersin.
REACTIVOS.
Colorante de Wright
Buffer pH = 7.0
Para el recuento diferencial el frotis no deber ser tan fino no tan grueso de tal manera
que las clulas estn juntas pero no apiladas. La extensin que se prepare deber secarse
inmediatamente.
MTODOS PARA PREPARAR EXTENDIONES SANGUINEAS.
1.- Mtodo de los dos portaobjetos o de la cua.
a) Colocar la gota de sangre de un tamao regular (2 a 3 mm de dimetro)
aproximadamente a un centmetro del extremo de un portaobjetos.
b) Tomar otro portaobjetos con el dedo ndice y pulgar de la mano derecha.
c) Colocar el borde libre sobre la gota de sangre y dejar que esta se extienda a lo largo
del borde libre. El segundo portaobjetos deber hacer un ngulo de 30 a 45 con el
primer portaobjetos.
Con movimiento suave pero firme y a velocidad constante desplazar el segundo portaobjetos a
lo largo del primer portaobjetos.
Es una buena extensin, los leucocitos no estn demasiado juntos y los eritrocitos no
estn apilados. El secado de la extensin debe de hacerse con movimientos laterales y verticales
repetidos al aire o con un ventilador. Marcar los frotis con lpiz graso o de plomo para su
correcta identificacin.
2.- Mtodo de los dos cubreobjetos. Es un mtodo que requiere mayor prctica y no es
tan usual.
3.- Mtodo de centrifugacin. Es un mtodo casi automatizado, brinda mejores
resultados pero debido a lo anterior no es tan utilizado comnmente.
4.- Mtodo transversal. Es el ms empleado en la actualidad y su tcnica es la siguiente:
86

Se coloca una gota de sangre en el borde del portaobjetos colocado horizontalmente, y se llena
por capilaridad en su borde inferior el otro portaobjetos colocado a 45 , la sangre se extiende
en forma transversal hacia el otro extremo del portaobjetos, en el paso siguiente se unen
ambos para que la sangre se extienda homogneamente a lo ancho de la superficie del fondo,
despus se desliza el portaobjetos de arriba para retirar el exceso de sangre, quedando una
pelcula delgada que se secar con movimientos vigorosos de arriba hacia abajo quedando la
preparacin lista para ser teida; se contarn de 100 a 200 clulas si el nmero de leucocitos es
de 2 000 - 10 000 leucocitos/mm3 , y de 200 - 400 clulas si la cifra de leucocitos/ mm3 es
superior a 10 000.
87

La lectura se har con un microscopio de luz, realizando una observacin primera a 40x para
tener una panormica de la distribucin de las clulas, despus a 100x para estudiara fondo la
morfologa de las clulas.
FIJACIN.
Es necesaria una fijacin de la extensin sangunea para evitar la prdida de muestra en
el portaobjetos. Existen dos tipos de fijacin.
Qumica.- sta se hace cubriendo la extensin sangunea por uno a dos minutos con
metanol puro o alcohol absoluto, o bien, quince minutos en alcohol absoluto-ter 1:1,
tambin se puede usar una solucin de HgCl2 al 1 % o solucin al 1 % de formalina en
alcohol.
Calor.- Casi no se usa debido a las alteraciones que causa en la muestra.
Algunos colorantes fijan y tien a la vez como por ejemplo el colorante de Wright que
contiene metanol como fijador, y existen as mismo otras soluciones fijadoras especiales.
PROCEDIMIENTO
o
o
o
o
o
o
o
o
Realice un frotis sanguneo por el mtodo transversal y se deja secar al aire sobre el
puente de tincin.
Cubra la extensin con un exceso de colorante de Wright durante 2 minutos, esto tiene
como finalidad evitar la evaporacin del colorante y la formacin de precipitados.
Transcurrido el tiempo, aada una cantidad igual de solucin amortiguadora.
Soplar suavemente sobre la superficie de la mezcla con la finalidad de homogenizar.
Se deja reposar exactamente 4 minutos.
Sin tirar la mezcla, lave con agua destilada hasta que el agua que escurra no lleve colorante.
Secar al aire y aadir una gota de aceite de inmersin para observar en el microscopio a
inmersin.
Para la frmula diferencial debe de contarse 100 clulas y deber hacerse la diferenciacin
entre monocitos, linfocitos, basfilos, eosinfilos, neutrfilos, y simultneamente, ver el
nmero de mielocitos, bandas, metamielocitos, y segmentados que existen entre
neutrfilos, si hay otro tipo de clulas como por ejemplo blastos, debern incluirse en el
total.
CONCLUSIONES:
Se deben obtener extensiones de sangre bien niveladas para un trabajo exacto.
Los portaobjetos deben estar perfectamente limpios y sin grasa para que no se
deformen las clulas.
Si el frotis se realiza del pulpejo del dedo, su elaboracin debe ser rpida antes de que
inicie la coagulacin y sin exprimir el dedo para evitar la hemodilucin.
En casos graves de anemia hay que preparar extensiones delgadas y secarlas al
momento.
88

El borde del portaobjetos extensor debe de ser liso para evitar zonas con abundantes
leucocitos.
METODO DE CONTEO:
El recuento diferencial se realiza recorriendo el largo de la preparacin de izquierda a derecha
hasta contar 100 clulas, identificando cada una de ellas, si no basta un solo recorrido, se elige
un nuevo campo y se hace completar el nmero de clulas. (Fig. 12)
Fig. ( 12 )
2.2 TINCION MAY GRNWALD-GIEMSA:

Es una tincin que tambin se usa de rutina en muchos laboratorios, pero es un poco ms
tardada, sin embargo mediante esta tincin se pueden diferenciar mucho mejor las estructuras
intercelulares. Contiene azur II-eosina y eosinato azul de metileno aunque actualmente el
colorante se vende por separado el mercado por lo que seguiremos la siguiente tcnica.
PROCEDIMIENTO:
a) Cubrir la extensin con 10 gotas a 15 gotas de May Grnwald tres minutos.
b) Aadir la misma cantidad de agua destilada procurando que se mezclen por un
minuto.
c) Escurrir el lquido y " sin previo lavado " aadir la solucin diluida de Giemsa
recin preparada dejndola actuar por 30 min.
d) Lavar, secar y observar a inmersin.
2. 5 FORMA DE REPORTAR.
MIELOCITOS
METAMIELOCITOS.
EN BANDA.
SEGEMTNADO.
VALOR OBTENIDO
________________
________________
________________
________________
* VALOR DEW REF. (%)

0
0
0 - 11
40 - 74
89

NEUTROFILOS.
EOSINOFILOS
BASOFILOS.
LINFOCITOS.
MONOCITOS.
________________
________________
________________
________________
________________
40 85
0 -7
0 -3
12 - 46
1 - 13
BIBLIOGRAFA
Mosby USA.
Editores.
90

PRCTICA No. 11
OBSERVACION DE LA MADURACION DE LA LINEAS CELULARES SANGUINEAS EN EXTENDIDOS DE
MEDULA OSEA.
OBJETIVO: El alumno revisar extensiones de mdula sea de morfologa normal para

familiarizarse con los precursores de cada una de las clulas de la sangre.
INTRODUCCIN:
Solo por experiencia se consigue interpretar bien la citologa de mdula, que debe considerarse
como un mtodo. Por eso el examinador debe informarse con respecto a la naturaleza clnica de
la enfermedad del paciente.
En general hay dos mtodos de examinar una extensin de mdula. El primero consistente en
observar varios portaobjetos a poco aumento, luego a gran aumento en seco y, finalmente, con
el objetivo de inmersin en aceite; y, a base de una experiencia previa, es posible lograr una
impresin respecto al nmero y la distribucin de las clulas, de modo muy similar a como el
patlogo analiza sus cortes de tejido. El segundo consiste en efectuar un recuento diferencial de
un gran nmero de clulas (300-1000) y calcular el porcentaje de cada tipo de clula.
Finalmente se puede emplear una combinacin de los dos mtodos.
El segundo mtodo, un laborioso recuento diferencial, constituye una parte esencial del
adiestramiento en este trabajo, sin el cual no es posible llegar a realizar el primero con
exactitud. El recuento diferencial proporciona, adems, un registro objetivo y til como
referencia para medir ulteriores cambios. El reconocimiento de los tipos celulares, y en
particular de la fase de maduracin dentro de cualquier serie dada, tiende a variar de un
laboratorio en otro, a pesar de los numerosos esfuerzos realizados para unificar nomenclatura,
con descripciones, fotografas y dibujos. No pueden aceptarse como universales ningn
promedio ni mrgenes normales. La lnea de base ms vlida es la que determina cada
laboratorio particular y aun entonces, de no emplear un adiestramiento en grupo, puede haber
variaciones notables de un examinador a otro. Por fortuna estas limitaciones del mtodo slo
son graves cuando no se tienen en cuenta. Con prctica y experiencia, los investigadores de
laboratorio pueden obtener resultados provechosos y conseguir un alto grado de
reproducibilidad en sus recuentos diferenciales de la mdula. Es recomendable el siguiente
procedimiento para examinar preparaciones de esta clase:
1- Inspeccin a simple vista de los portaobjetos, para escoger la extensin que
contenga partculas.
91

2- Examen a poco aumento (16mm) de las partculas a fin de determinar

previamente si la mdula es normoplsica, hipoplsica o hiperplsica.
3- Seleccionar de una zona celular, generalmente en la porcin caudal de la pelcula,
alrededor de las partculas, a la que sigue un estudio minucioso de los detalles
citolgicos a gran aumento y con objetivo de inmersin en aceite
CELULARIDAD: El grado de celularidad, si el conjunto de la medula es hiperplsica o hipoplsica,
es un aspecto difcil de determinar por el examen de un material aspirado. Si este dato es
esencial, solo podemos asegurarnos estudiando cortes histolgicos de partculas aspiradas o del
material obtenido por biopsia por trocar o por biopsia quirrgica. Si la aspiracin se efecta de
una manera uniforme y si retiran solo cantidades mnimas de material, es posible poder obtener
estimaciones tiles, aunque solamente aproximadas, de la celularidad.
La celularidad (expresada como relacin entre el volumen de clulas hematopoyticas en la
medula y el volumen total de clulas ms grasa) varia normalmente con la edad del individuo y
la zona medular examinada. Por ejemplo a la edad media de 50 aos, la celularidad en las
vrtebras es de un 75%; en el esternn de un 60%; en la cresta iliaca de un 50%, y en las costillas
de un 30%. La celularidad normal del hueso iliaco en diferentes edades ha sido muy bien
descrita por Hartsock y cols. en 1965.
El informe debe comprender los aspectos siguientes: descripcin de la celularidad en general,
tipo de eritropoyesis, madurez general de las clulas eritropoyticas, y clculo de los cocientes
mieloide-eritroide o leucocito idee-eritroide, basados en un recuento de 500-1000 clulas.
Un recuento diferencial es til, especialmente en casos seleccionados, como, por ejemplo, en
una leucemia para seguir el efecto de la teraputica. Pero se suelen conseguir mejores
resultados examinando un nmero mayor de preparaciones en el mismo tiempo que se invierte
en los recuentos diferenciales.
RELACIN MIELOIDE-ERITROIDE (M:E) En el adulto normal, la relacin M:E viene a ser de 3:1
4:1. ste trmino muy, difundido, se refiere a los recuentos diferenciales en que no se han
excluido, los granulocitos maduros.
La relacin M:E al nacer es de 1.85:1 aumenta con rapidez poco despus y alcanza el nivel
normal mximo de 11:1 en las dos primeras semanas de vida, para descender luego
gradualmente hasta un promedio de 3:1 en los primeros 20 aos.
INTERPRETACIN: Una relacin M:E aumentada, por ejemplo, de 6:1 puede significar la
respuesta a una infeccin o a una leucemia, una reaccin leucemoide o una hipoplasia eritroide.
Cuando esta disminuida, esto es, menor de 2:1 puede significar una reduccin de leucopoyesis
o una hiperplasia eritropoytica. La hiperplasia eritroide normoblstica puede provenir de una
de las muchas formas de anemia, de afecciones hepticas o de una pilicitemia, mientras que la
92

megaloblstica puede ser causada por una deficiencia de cido flico o de vitamina B12 como
en la anemia perniciosa. Una relacin M:E normal no significa necesariamente una medula
normal.
Por ser irregular la distribucin de los diversos tipos de clulas, los recuentos diferenciales de las
clulas nucleadas de la medula no son ms que aproximaciones. Las irregularidades se deben en
parte a que los normoblastos, los granulocitos neutrfilos maduros
RECUENTO DIFERENCIAL DE LA MDULA: Los datos publicados respecto a los recuentos
normales de las clulas medulares varan segn los autores y se echan de menos las cifras
normales generalmente aceptadas para la sangre perifrica. Esta diversidad refleja la tcnica de
cada uno de los investigadores, tanto al realizar los recuentos como en la interpretacin. Por
consiguiente, es mejor que cada uno de establezca sus propios valores normales; de las
observaciones nuestras se relacionan en la tabla 1:
RECUENTOS DIFERENCIALES DE LA MDULA SEA EN PORCENTAJES DEL TOTAL DE CLULAS

NUCLEADAS
ROSSE
MAUER
JANDI
(1977)
(1969)
(1987)
TIPOS CELULARES
NORMOBLASTOS TOTALES
PRONORMOBLASTOS
BASFILOS n.
POLICROMTICOS n.
ORTOCROMTICOS n.
NEUTRFILOS TOTALES
MIELOBLASTOS
PROMIELOCITOS
MIELOCITOS
METAMIELOCITOS
BANDA
SEGMENTADOS
EOSINFILOS
BASFILOS
LINFOCITOS TOTALES
DE TRANSICIN
PEQUEOS
CLULAS PLASMTICAS
MONOCITOS
MEGACARIOCITOS
CLULAS RETICULARES
RELACIN M:E
ALNACER
MEDIA, DE
14.48+-7.24
0.02+-0.06
0.24+-0.25
13.06+-6.78
0.69+-0.73
60.37-+-8.66
0.31+-0.31
0.79+-0.91
3.95+-2.93
19.37+-4.84
28.89+-7.56
7.37+-4.64
2.70+-1.27
0.12+-0.20
15.6
1.18+-1.13
14.42+-5.54
0.00+-0.02
0.88+-0.85
0.06+-0.15
4:2
1 MES
MEDIA, DE
8.04+-5.00
0.10+-0.14
0.34+-0.33
6.90+-4.45
0.54+-1.88
32.35+-7.68
0.62+-0.50
0.76+-0.65
2.50+-1.48
11.30+-3.59
14.10+-4.63
3.64+-2.97
2.61+-1.40
0.07+-0.16
49.0
1.95+-0.94
47.05+-9.24
0.02+-0.06
1.01+-0.89
0.05+-0.09
18 MESE
MEDIA, DE
8.21+-3.71
0.08+-0.13
0.50+-0.34
6.97+-3.56
0.44+-0.49
36.08+-7.40
0.06+-0.08
0.64+-0.59
2.49+-1.39
12.42+-4.15
14.20+-5.23
6.31+-3.91
2.70+-2.16
0.10+-0.12
45.5
1.99+-1.00
43.55+-8.56
0.06+-0.08
2.12+-1.59
0.07+-0.12
4:0
4:4
INFANCIA
MEDIA, MITES
23.1
0.5(0.0-1.5)
1.7(0.2-4.8)
18.2(4.8-34)
2.7(0-7.8)
57.1
1.2(0-3.2)
1.4(0-4.0)
18.3((8.5-29.7)
23.3(14-34.2)
12.9(4.5-29.0)
3.6(1.0-9.0)
0.06(0-0.8)
16(4.8-35.8)
0.4(0.2-0.6)
2:9(1.2-5.2)
EDAD ADULTA
MEDIA, LMITES
21.5(14.2-30.4)
0.6(0.2-1.4)
2.0)0.7-3.7)
12.4(12.2-24.2)
6.6(2-22.7)
56(45.1-66.5)
1.0(0.5-1.8)
3.4(2.6-4.6)
11.9((8.1-16.9)
18(9.8-25.3)
11(8.5-20.8)
10.7(8.0-16.0)
3.2(1.2-6.2)
<0.1(0.0-0.2)
15.8(10.8-22.7)
1.8(0.2-2.2)
1.8(0.2-2.8)
<0.1(0.0-0.2)
0.3(0.0-0.5)
2:5(1.2_5.0)
INTERPRETACIN DE LOS HALLAZGOS CITOLGICOS:

93

1. Las clulas normalmente presentes pueden aumentar en nmero. Esto ocasiona un paro
en la maduracin con aparicin de las clulas ms jvenes en cantidades anormalmente
grandes.
2. Un recuento de eosinfilos de ms de 5%, uno de los linfocitos de ms de 20% y uno de
clulas plasmticas de ms de 5% pueden ser significativos.
3. Clulas normalmente ausentes: clulas neoplsicas, metastsicas (cncer) o primarias (
mieloma mltiple, y las que se ven en las tesaurismosis (enfermedad de Gaucher).
4. Lesiones granulomatosas: tuberculosis, enfermedad de Hodgkin y sarcoidosis.
5. Parsitos: paludismo, histoplasmosis.
BIBLIOGRAFA
Mosby USA.
Editores.
94

PRACTICA No. 12
CONTEO PLAQUETARIO Y OBSERVACION DE LAMINILLAS CON ALTERACIONES PLAQUETARIAS.
OBJETIVO. Que el alumno aprenda a realizar el conteo plaquetario y su correlacion con las
alteraciones morfolgicas.
Cuenta plaquetaria
Fundamento:
Las plaquetas son fragmentos de una clula llamada megacariocito, se encuentran unas 250 mil
x mm3 , su vida media es de 9.5 das, sus funciones principales son: coagulacin y mantener la
integridad de las paredes de los vasos.
Miden de 3-4 micras de dimetro, son redondeadas, se pueden observar con una tincin azul de
crisil brillante, no tienen ncleo; el nmero de plaquetas es el resultado el equilibrio entre el
numero de plaquetas producidas en la mdula sea y las utilizadas, tambin de la prdida o
destruccin de la sangre perifrica.
Material:
sangre venosa con EDTA al 10%

tubo de ensayo de 13 x 100ml
pipeta de Thoma para glbulos rojos
cmara de Neubauer
caja de petri
gradilla
Reactivos:
Colorante de azul de cresil brillante

EDTA al 10 %
Procedimiento:
1.Asepsia
y
obtencin
de
la
muestra
Adultos
o
nios:
La sangre se extrae de una vena (puncin venosa), usualmente de la parte interior del codo o
del dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca un
torniquete.
95

-Bebs
o
nios
pequeos:
En los bebs o nios pequeos, el rea se limpia con un antisptico y se punza con una aguja o
lanceta para luego recoger la sangre en una pipeta.
2.-Descargar la pipeta en el lquido diluyente (oxalato de amonio)
3.-Enjuagar y llenar hasta la marca 1 y con la , muestra de sangre hasta 1.1
4.-Mezclar de 3-5 minutos
5.-Tirar las primeras 3-5 gotas
6.-cargar la cmara cuenta glbulos
L
E
E
P
P
8 mm
1 mm
E
P
E
P
E
L
96

0.05 mm
.2 mm
Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de leucocitos
7.- dejar reposar 5 minutos, en una caja petri con un papel filtro hmedo
8.- Dejar reposar la cmara
9.- observar por le objetivo 10x
10.- las plaquetas aparecen como cuerpos coloreados en todo el cuadro central.
Clculo:
Numero de plaquetas contadas x 1000
Valores de referencia:
150 mil- 450 mil /mm3
Cuidados durante el examen:
97

Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado,
mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Despus, puede haber
una sensacin pulstil.
El conteo plaquetario se puede ver afectado por muchos estados patolgicos. Igualmente, se
puede medir para evaluar la causa de un sangrado excesivo.
Entre los medicamentos que pueden disminuir el conteo de plaquetas estn: agentes
quimioteraputicos, cloranfenicol, colchicina, agentes bloqueadores H2, heparina, hidralacina,
indometacina, isoniacida, quinidina, estreptomicina, sulfonamida, diurticos tiazdicos y
tolbutamina.
BIBLIOGRAFA
Mosby USA.
Editores.
98

PRCTICA No. 13
INTERPRETACION INTEGRAL DE LA CITOMETRA HEMTICA Y RESOLUCION DE CUADROS CLINICOS.-
OBJETIVO: El alumno aprender a interpretar y correlacionar la alteracin de los parmetros

de la citometra hemtica con diversas patologas.
INTRODUCCIN
La anemia es una alteracin causada por disminucin del nmero de glbulos rojos y disminucin
de la hemoglobina bajo los parmetros estndares. Rara vez se registra en forma independiente
una deficiencia de uno solo de estos factores. Los rangos de normalidad son muy variables en
cada poblacin, dependiendo de factores ambientales (nivel sobre el mar) y geogrficas. A nivel
del mar encontraremos valores mnimos, y a gran altura los valores debern ser ms altos (la
menor presin parcial de O2 obliga al organismo a optimizar su transporte). Adems, vemos
variaciones de sexo, observando valores menores en mujeres (posiblemente por la prdida de
eritrocitos y contenido sanguneo en cada ciclo menstrual). En general puede establecerse como
normal para un hombre un hematocrito entre 40 y 50%, hemoglobina entre 13 y 18 g%, y para
una mujer: hematocrito entre 37 y 40%, y hemoglobina entre 12 y 16 g%. Los sntomas y signos de
la anemia se correlacionan con su intensidad, su rapidez de instalacin y el sitio donde se
produce. En cuanto a su rapidez de instalacin puede ser aguda o crnica, siendo la primera ms
dramtica, ya que la crnica permite una paulatina adaptacin. Otros factores influyentes en el
cuadro sintomtico son la edad, el estado nutritivo, cardiovascular y respiratorio.
Los sntomas que se observan en la anemia aguda se denominan sndrome anmico, e
incluyen: palidez, astenia, adinamia, palpitaciones y disnea de esfuerzo. Frecuentemente y sobre
todo en las anemias severas se observa esplenomegalia, hepatomegalia, petequias, equimosis, ictericia.
Tambin puede incluir sntomas propios de otros sistemas, como cardiovascular (taquicardia,
disnea de esfuerzo marcada, angor, claudicacin intermitente), digestivo (dispepsia, disfagia, anorexia,
diarrea) o neuropsiquitrico (parestesias, mareos, depresin, cambios de carcter como irritabilidad,
mal humor). Para ser capaz de tratar exitosamente un sndrome anmico, debe caracterizarse, y
establecerse su etiologa, y para ellos se bede estudiar a fondo las caractersticas de los glbulos
rojos, de los reticulocitos, leucocitos y plaquetas que circulan en la sangre mediante un hemograma, y
las caractersticas de las series hematopoyticas mediante un mielograma. ste no es
indispensable, generalmente un mdico capacitado logra clasificar una anemia slo con el
cuadro sindromtico y el hemograma. De acuerdo a todos los factores mencionados, las
anemias pueden clasificarse en diferentes grupos.
99

BIBLIOGRAFA
Mosby USA.
Editores.
100

PRCTICA No. 14 EVALUACION FINAL

OBJETIVO: El alumno resolver un problema hematolgico correlacionando la morfologa con
los datos de la Citometra hemtica.
101

CUESTIONARIO.
1) Mencione los mtodos que se utilizan para realizar la venopuncin.

2) Las precauciones que se deben de tener para realizar la venopuncin son:
a) Qu el material sea estril .
b) No es necesario la asepsia.
c) Ninguna de las anteriores.
3) Cules son las ventajas del sistema vacutainer.
4) El mtodo de la cianometahemoglobina permite medir las siguientes hemoglobinas.
a) Hb-F
b) Hb-S
c) Hb-O2 , Hb-CO2 , Hb-H
5) La cantidad de muestra que se obtiene con la pipeta de Sahli es:
a) 0.002 ml.
b) 0.2 ml.
c) 0.02 ml.
6) Al agregar la muestra al reactivo de Drabkin se debe agitar vigorosamente con el fin de:
a) Evitar la hemolisis.
b) Para lisar los eritrocitos y ser transformada la hemoglobina.
c) Para concentrar la muestra.
d) Ninguna de las anteriores.
7) Dibuje el tubo de Wintrobe.
8) Haga un esquema de flojo de la VSG y mencione como se expresa el resultado.
9) Indique el material empleado en:
a) Macrohematocrito.
b) Microhematocrito.
(
(
(
(
(
(
(
) Microcentrifuga.
) Tubo de Wintrobe.
) Lector.
) Capilares.
) Mechero o plastilina.
) Centrfuga.
) Pipeta pasteur.
102

10) Cuales son las capas obtenidas en el hematocrito.

11) Los factores que aumentan el valor del hematocrito son:
12) Dibuje la cuadrcula de la cmara de Neubauer, la pipeta de Thoma para glbulos rojos y
blancos.
13) Indique las diluciones que se obtienen con:
a) La pipeta de Thoma para glbulos rojos.
b) La pipeta de Thoma para glbulos blancos.
( ) 1:20
( ) 1:100
( ) 1:50
( ) 1:200
( ) 1:25
( ) 1:25
14) Relacione las siguientes columnas.

a) Leucocitosis.
b) Trombocitemia.
c) Oligocitemia.
d) Policitemia.
(
(
(
(
(
(
) Leucocitos disminuidos.
) Plaquetas aumentadas.
) Plaquetas disminuidas.
) Leucocitos incrementados.
) Eritrocitos disminuidos.
) Eritrocitos aumentados.
15) Calcule el factor que se emplea para conocer el nmero de plaquetas por mm 3 de sangre.
16) Si un paciente tiene un recuento de 500 eritrocitos en la cmara de Neubauer, Cuntos
eritrocitos por mm3 de sangre tendr ?.
17) El recuento de reticulocitos nos indica:
a) La eficacia de la hemostacia.
b) La identificacin de eritrocitos jvenes.
c) La eficacia de la eritropoyesis.
18) Dibuje un reticulocito.
19) Dibuje las siguientes clulas: Neutrfilos segmentado, monocito, linfocito, eosinfilo,
banda.
20) Porqu es importante realizar una buena tincin hematolgica.
103

21) En el recuento diferencial adems de la morfologa celular se puede observar:

a) Parsitos.
b) Cristales.
c) Bacterias.
d) Poiquilocitosis y anisocitosis.
e) Anormalidades de las plaquetas.
f) Todas las anteriores.
g) Ninguna de las anteiores.
22) Para qu sirven los ndices eritrocitarios?.
23) Calcule el VCM y CMHC de la mujer que tiene una hemoglobina = 10 g/dl, Hematocrito =
33, eritrocitos = 4.2 millones por mm3 e indique que alteracin presenta si los valores de
referencia son:
VCM = 78 - 103 Um3
CMHC = 30 - 34 g/dl.
24) El diagnostico de una anemia se basa en:
a) Examen fsico.
b) Historia clnica del paciente.
c) Todas las anteriores.
d) Ninguna de las anteriores.
25) Mencione las pruebas que constituyen a la Ciometra Hemtica.
26) Dibuje: macrocito, microcito, eritrocito normal, eritrocito hipocrmico, un campo que
muestre poiquilocitosis y anisocitosis.
27) La anemia macroctica megaloblstica es causada por la falta de Vitamina B12 y cido
flico. F o V.
28) Mencione las causas del deficid de cido flico y Vitamina B12 .
29) Las anemias normocticas se caracterizan por:
a) El VCM, CMHC disminuyen proporcionalmente.
b) Se presentan principalmente en anemias hemolticas y en el embarazo.
c) Ninguna de las anteriores.
30) Mencione la importancia de los programas de Control de Calidad en el laboratorio.
104

105

BIBLIOGRAFA:
1. ngel G.M., ngel M.A. Interpretacin clnica del Laboratorio 6 Edicin., Editorial
Panamericana. Mxico 2001.
2. Bick L. Roger, M.D. Hematology Clinical and Laboratory. Practice. Tomo I y II. 1. Edicin.,
Editorial Mosby. U.S.A.; 1993.
3. Borbolla E.J. Lpez H. M.A. Hematologa Algoritmos diagnsticos. 1 Edicin., Editorial McGraw
Hill. Mxico 2005.
4. Carrillo, F.A. Hematologa. Casos Clnicos. 2. Edicin., Editorial Interamericana McGraw-Hill.
Mxico. 1992.
5. Jaime P.J.C., Gmez A.D., Hematologa. La Sangre y sus enfermedades. 1. Edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Mxico 2004.
6. Mazza, J.J. Manual de Hematologa Clnica, 1. Edicin., Salvat Editores, S.A. Madrid, Espaa.
1990.
7. Mckenzie, S.B.
Mxico 2000.
Hematologa Clnica 2 Edicin. Editorial., Editorial El Manual Moderno
8. Rodak B.F.. Hematologa. Fundamentos y aplicacin clnica. 2. Edicin. Editorial Mdica

Panamericana, Buenos Aires, Argentina. 2004.
9. Ruiz Argelles G.J. Fundamentos de Hematologa 6 Edicin., Editorial Panamericana Mxico
2003.
10. Ruiz R.G. Fundamentos de interpretacin clnica de los exmenes de Laboratorio. 1 Edicin.,
Editorial Panamericana Mxico 2004.
11. Direccin electrnica en internet.
106

Practicas Laboratorio Hematologia I

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