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I.

INTRODUCCION

Se denomina patgeno a todo agente biolgico externo que se aloja en un ente biolgico
determinado, daando de alguna manera su anatoma, a partir de enfermedades o daos
visibles o no. A este ente biolgico que aloja a un agente patgeno se lo denomina husped,
hospedador o tambin hospedante, en cuanto es quien recibe al ente patgeno y lo alberga en
su cuerpo. Sin embargo, cada uno de los tres componentes muestra una considerable
variabilidad y cuando alguno de ellos cambia, influye sobre el grado de severidad de la
enfermedad dentro de cada una de las plantas y dentro de toda una poblacin vegetal. Por
ejemplo, puede darse el caso de que las plantas hospedantes sean de alguna especie o
variedad ms o menos resistente al ataque del patgeno o bien que sean demasiado jvenes o
muy viejas, o bien que las plantas que existen en una gran rea muestren uniformidad
gentica, todo esto puede reducir o incrementar la tasa de desarrollo de la enfermedad que
produce un patgeno en particular.
Las interacciones entre hospedante y patgeno que resultan en sntomas visibles de
clorosis o necrosis, existen cambios en la morfologa y metabolismo del cloroplasto, lo cual trae
como consecuencia una reduccin en la tasa fotosinttica y posteriormente la disminucin del
crecimiento .En los virus ocasionan un deterioro de cloroplastos, reduccin celular nmero y
tamao de estos, por consiguiente se manifiesta la clorosis principalmente en forma de
mosaicos. Por otro lado un patgeno que no puede penetrar directamente a travs de las
aberturas naturales, siendo su nica va de entrada que tienen son las heridas o partes
muertas de la planta, a estos patgenos se les conoce como parsitos dbiles porque penetran
a las plantas slo por heridas. El proceso de abscisin que produce heridas en donde la capa
que sella la peridermis no se expende a travs del xilema. Ocasiona espacios por donde
pueden entrar los patgenos. A pesar de que muchos patgenos penetran principalmente por
las heridas y por tejidos muertos, existe una amplia variacin en la naturaleza de las heridas y
en la solidez de la asociacin entre el patgeno causante de stas, la inoculacin y la
penetracin del patgeno

Objetivos
Demostrar que ciertos patgenos necesitan de heridas recin producidas para penetrar en
tejidos vegetales.
Determinar el efecto de las infecciones en el contenido de clorofila (clorofila a y b) en las
plantas y su relacin en la fotosntesis.

II.

2.1.

REVISION DE LITERARTURA

Penetracin de patgenos a travs de heridas.


La penetracin del patgeno no siempre produce una infeccin. De hecho,

muchos organismos penetran a las clulas vegetales que no son susceptibles a esos
organismos y no les producen enfermedades; esos organismos no pueden seguir su
curso ms all de la etapa de penetracin y mueren sin que produzcan enfermedad.
Todas las bacterias, la mayora de los hongos, algunos virus y todos los viroides
penetran en las plantas a travs de varios tipos de heridas, y los virus, microplasmas y
bacterias fastidiosas vasculares entran en las plantas a travs de heridas producidas
por sus vectores. Las heridas utilizadas por los hongos y bacterias pueden ser viejas o
recientes y pueden constituir en tejidos antes de que lleguen a los tejidos sanos.

2.2.

Efecto de las infecciones en la clorofila


El patgeno requiere de algunas sustancias producidas por la planta para su

sobrevivencia, las cuales se hallan en el protoplasma de las clulas vegetales, de


manera que el patgeno debe penetrar a travs del tubo germinativo a la cutcula y
luego a nivel intracelular y a su paso neutralizar el efecto de reaccin de la planta
secretando sustancias qumicas que van afectando al hospedante, se adhieren a
travs de muclagos que contienen a nivel de las hifas o masas de filamentos para
que

el patgeno se fije fuertemente al tejido que est infectando y secrete adems

sustancias que le ayudan a diseminar rpidamente la enfermedad y a ablandar las


paredes celulares como polisacridos, toxinas, enzimas o molculas protenicas.
En clulas infectadas con virus, al igual que en las infecciones producidas por
hongos y bacterias, los cloroplastos se alteran y las mitocondrias presentan hipertrofia.
Tambin se observa cuerpos lipdicos en el citoplasma de las clulas del floema y de su
parnquima. Las paredes celulares presentan deposiciones adicionales de calosa y en
ocasiones engrosamientos de la misma, que fueron ms evidentes en muestras de
cucurbitceas.

2.3.

Fotosntesis e importancia de la clorofila.


La fotosntesis es un conjunto de reacciones que realizan todas las plantas

verdes (que poseen clorofila), las cianofceas y algunas bacterias, y a travs de las
cuales se sintetizan glcidos o hidratos de carbono por accin de la luz en presencia de
la citada clorofila y otros pigmentos, y con el concurso del dixido de carbono
atmosfrico y el agua.

En resumen, la fotosntesis es la transformacin de la energa luminosa en


energa qumica. Su importancia no es de ndole menor, pues prcticamente toda la
energa consumida por la vida de la biosfera terrestre procede de la fotosntesis. Los
patgenos pueden inferir en el proceso a travs de las clulas protoplasmticas
afectando los cloroplastos y por supuesto la produccin de clorofila. La actividad
fotosinttica se reduce en presencia de patgenas con disminucin en la produccin de
flores y frutos, marchites e inhiben la accin de las enzimas que ayudan en los
procesos de produccin de clorofila.
La clorofila es un componente bsico de las plantas y algas, dado que es el
pigmento verde que interviene en la fotosntesis. La clorofila se localiza en los
cloroplastos de las clulas vegetales de las plantas. Los cloroplastos son pequeos
grnulos diminutos y aplanados que, generalmente, aparecen en el citoplasma, cerca
de la pared celular. En el interior de los cloroplastos estn los pigmentos fotosintticos,
rodeados por una substancia base incolora. La molcula de clorofila est formada
principalmente por carbono e hidrgeno. En el centro de esta molcula se encuentra un
solitario tomo de magnesio, rodeado por un anillo de porfirinas de 4 nitrgenos. El
contacto de las partculas luminosas (fotones) con la clorofila produce una excitacin de
la misma desencadenando una serie de reacciones fotoqumicas que se encargaran de
transformar la energa luminosa en energa qumica (fotosntesis). Desde un punto de
vista de la medicina natural, la clorofila resulta muy importante por sus propiedades
anticancergenas, antibacterianas, antioxidantes y energizantes.

III.

MATERIALES Y METODOS

A. Importancia de las heridas en la penetracin de algunos patgenos


Materiales:
-

12 ctricos (naranja valencia, tangelos, mandarina y limn sutil, tres de c/u).

Alcohol al 70%.

Hipoclorito de sodio al 3%.

Agua destilada estril.

Cmaras hmedas (taper).

Placas de vidrio (pequeas).

Muestras: se utilizran cultivos de Penicillium digitatum, desarrollados en agar papa


dextrosa (PDA).

Procedimiento:
-

Lavar los ctricos en agua corriente, luego utilizando una pizeta debern ser
lavados con alcohol al 70%, dejar secar y seguidamente sumergir los ctricos en
una solucin de hipoclorito de sodio al 3% por dos minutos y luego enjuagar con
agua estril, seguidamente sacar los frutos con papel toalla.

Inocular los ctricos con penicillium, transfiriendo pequeas cantidades de


material de cultivo a:
a. Superficies intactas
b. Cortes en V en la cascara hecho con escalpelo, pero sin llegar a los gajos
(naranja) o mesocarpio (manzana, chirimoya y papas).
c. Cortes en V, pero llegando a los gajos o mesocarpios.

colocar los ctricos en un taper de plstico, con el apoyo de pequeas placas


Petri de vidrio y seguidamente tapar el taper.

A los tres das empezar a observar y anotar la presencia o ausencia de


sntomas, y el tiempo de desarrollo de la pudricin en cada tratamiento.

B. Efecto de la infeccin en el contenido de la clorofila


Materiales:
Hojas jvenes de papaya

03 pizetas

infectadas con virus

03 probetas

Morteros y piln

06 tubos de prueba

03 estilete

Etanol al 90%

03 pinzas

Carbonato de calcio

06

Espectrofotmetro

respectivo piln

Agua destilada

03 vasos precipitados

Microondas

morteros

con

su

Muestra: se utilizan muestras de hojas jvenes infectadas con el virus de la mancha


anillada de la papaya (PRSV) en papaya.
Procedimiento:
-

De las hojas enfermas separar las partes clorticas de

las partes sanas,

utilizando una navaja.


-

Pesar 5 gramos de tejido sano e infectado, poner en un vaso de vidrio con agua
destilada, agregar una pequea cantidad de carbonato de calcio y hervir por un
minuto.

Poner el tejido en un mortero, agregar un poco de etanol al 96% y moler bien


hasta que el tejido quede convertido en una pasta. (para evitar variaciones es
necesario que una misma persona procese tanto la muestra con sntoma como
testigo).

Luego transferir el extracto a una probeta y enrazar a un volumen de 5 ml con el


mismo solvente.

Agitar y dejar en reposo por 10 min. Seguidamente centrifugar a 3000 rpm por 5
min.

Hacer lectura de absorbancia del extracto diluido a longitudes de onda de 649


nm. Antes de cada lectura, ajustar el espectrofotmetro usando solvente puro
(etanol al 96%).

IV.

RESULTADOS Y DISCUSION

Cuadro 1. Demostracin de la necesidad de ciertos patgenos de heridas recin producidas


para la penetracin en el tejido vegetal.
Muestra A: Limn sutil.

T1: Superficial

T2: corteza

T3: Profundo

Muestra B: Naranja.

T1: Superficial

T2: corteza

T3: Profundo

Muestra C: Mandarina.

T1: Superficial

T2: corteza

T3: Profundo

Muestra B: Tangelo.

T1: Superficial

T2: corteza

T3: Profundo

Observaciones: Se observ en que las muestras en las cuales se realiz un corte ms


profundo los daos aparecan ms rpido que en la que solo se aplic un corte
superficial, tambin se observ que las muestras de variedades de ctricos que
contienen ms azcar (tangelo y mandarina) el dao es mucho mayor comparado al
resto.

Cuadro 2. Absorbancia mxima de clorofila a 665 nm y de clorofila b 649 nm del tejido sano e
infectado con PRSV en papaya.

Enfermedad viral

Tejido

hoja enferma (parte clortica)


PRSV en papaya (grupo A) hoja enferma(parte sana)
hoja sana
hoja enferma (parte clortica)
PRSV en papaya (grupo B) hoja enferma(parte sana)
hoja sana

Absorbancia
650 nm
665 nm
0.09
0.231
0.12
0.215
0.084
0.244
0.112
0.274

clorofila (ug/5ml)
a
b
a+b
11.23
2.83
14.06
11.275
7.31
18.585
1.565
14.295
15.86
15.52
4.035
19.555

0.136

0.27

14.58

7.285

21.865

0.148

0.264

13.825

9.06

22.885

Cuadro 3. Cantidad total de clorofila en mg/g de tejido sano e infectado con PRSV en papaya.

Enfermedad viral

Tejido

hoja enferma (parte clortica)


PRSV en papaya (grupo A) hoja enferma(parte sana)
hoja sana
hoja enferma (parte clortica)
PRSV en papaya (grupo B) hoja enferma(parte sana)
hoja sana

Absorbancia
650 nm
665 nm
0.09
0.231
0.12
0.215
0.084
0.244
0.112
0.274

clorofila (mg/g)
a
b
a+b
0.0022
0.0006
0.0028
0.0023
0.0015
0.0038
0.0003
0.0029
0.0032
0.0031
0.0008
0.0039

0.136

0.27

0.0029

0.0015

0.0044

0.148

0.264

0.0028

0.0018

0.0046

V.

DISCUSION.

La mayora de patgenos (bacterias, hongos, virus, etc) conocidos no tienen la


capacidad de penetrar directamente el tejido vegetal sim embargo se ha descubierto
que algunas especies del genero Phytophtora sp. , Pestalotia sp. y algunas otras ms
pueden penetrar el tejido sin necesidad de heridas.
El PRSV (virus de la mancha anillada de la papaya) daa directamente a los
cloroplastos reduciendo su contenido de clorofila por consiguiente la actividad
fotosinttica se ve severamente perjudicada, esto hace que la planta reduzca
considerablemente su produccin as como su vigor en general.

VI.

CONCLUSION.

Se concluy que el gnero Penicillium sp. necesita de heridas para penetrar el


fruto y que mientras ms profundas sean stas el dao producido ser mayor en un
menor tiempo.
Se lleg a la conclusin de que el virus PRSV reduce el contenido de clorofila
dentro de la hoja lo cual se vio reflejado en los datos obtenidos. En el grupo A el
contenido de clorofila del tejido sano fue de 0.0032 mg mientras que el contenido de
clorofila del tejido clortico (enfermo) fue de 0.0028 mg; en el grupo B el contenido de
clorofila del tejido sano fue de 0.0046 mg mientras el contenido de clorofila del tejido
enfermo fue de 0.0039 mg.

VII.

BIBLIOGRAFIA.

1. EGOAVIL JUMP G. Protocolo de prcticas de Fitopatologa General. Universidad


Nacional Agraria De La selva. 2014

2. http://www.magrama.gob.es/ministerio/pags/biblioteca/plagas/bsvp-26-03-439-443.pdf
3. AGRIOS, G. N. 2002. Fitopatologa. Departamento fitopatologa de la universidad de
Massachusetts. 2da edicin. 7ma reimpresin. Editorial Limusa. 635p.
4. http://www.fomesa.net/Calidad/Factores/F_02_07_3.htm
5. FERNNDEZ, M. 1975. Introduccin a la Fitopatologa. 3* Edicin. Volumen II. Talleres
Grficos. Buenos Aires. 821 p