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Introduccin.
El raquitismo y la osteomalacia son enfermedades seas poco frecuente que afectan a
los seres humanos y animales
Materiales y mtodos
Muestras de seleccin y de casos y controles 51 tumores fijados Incluidos
en parafina y formol
Los tumores mesenquimales seleccionados fueron diversamente
diagnosticados.
Especial atencin en la seleccin de casos, se le dio a los rasgos histricos o
clnicos sugerentes de los tumores que causan TIO (por ejemplo, ubicacin
dentro de un msculo). Ninguno se asoci con un diagnstico de
osteomalacia.
Para establecer la distribucin en el tejido normal de la expresin de
FGF23 en los perros, y controlar los tejidos blandos, fueron tomadas
muestras de tres hembras mestizas clnicamente sanas
La extraccin de RNA
ARN fue extrado de los huesos de control utilizando el siguiente protocolo:
1- EL Hueso congelado fue mantenido en nitrgeno lquido, para despus
transformarlo en un polvo fino, por medio de un mortero.
2- El polvo fino y congelado fue transferido a un tubo de 15 mL que contiene
bolas de acero inoxidable y el TRI reactivo.
3- Los tubos fueron introducidos al vrtex durante 4-15 min
4- El homogeneizado se transfiere a un tubo de 15 ml y se centrifug a 12.000 g
durante 5-10 min.
5- El sobrenadante claro (que contiene ARN) se transfiri a un tubo de 15 ml
fresca y luego se dej reposar durante 5 min a temperatura ambiente y luego se
dej reposar durante 5 min a temperatura ambiente.
6- el ARN total fue extrado de acuerdo a las instrucciones del fabricante.
Los cebadores o partidores fueron diseados para que coincidan con las
secuencias de nucletidos de ARN canino.
La prueba se realiz utilizando la secuencia de sper comandos de One-Step
RT-PCR con Platinum Taq kit (Invitrogen)
Las muestras se mezclaron suavemente y se sometieron a las siguientes
condiciones de PCR: 55 C durante 30 min, 94 C durante 2 min, 40 ciclos de
95C durante 30 s, 58 C durante 30 s, 72 C durante 1 min y finalmente 72C
durante 10 min
Los productos de PCR fueron analizados en un bromuro de etidio marcado
1,33% (w / v) en gel de agarosa ultra puro y se visualizaron bajo luz
transiluminador UV
Resultados
De las 49 muestras obtenidas 15 fueron positivas para la expresin de FGF23
Diez eran subcutneos
Tres eran intramuscular
Uno fue encontrado dentro de una vaina nerviosa y otro en la submucosa
farngea.